黄民主；李登清；关岚；谢梅芝；刘浩；戴卫平
目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础.方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA 和ureB基因,分别克隆入pNEB193中.测序后,回收两种基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接插入原核表达载体pMAL-C2x进行融合表达.采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定.结果特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体中;重组质粒转化大肠杆菌TB1后,经IPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示在119 kDa处出现一条特异蛋白带,即麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合表达形式,约占细菌总体蛋白含量的31%;该融合蛋白与Hp免疫小鼠血清和Hp阳性病人血清的Western blot分析结果显示,在119 kDa处出现特异杂交带.结论成功地在大肠杆菌中实现了Hp融合蛋白HspA-UreB的高效表达,并证实其具有良好的免疫反应性.
作者：代丽萍；段广才；范清堂 刊期： 2004年第10期
探讨Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在形成肝包虫囊肿周围人体纤维囊壁中的作用及其临床意义.采用免疫组织化学方法检测Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在40例肝包虫囊肿周围纤维囊壁中表达.Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在肝包虫囊肿周围纤维囊壁中出现特异性分层表达.靠近虫体侧纤维囊壁中,Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原的表达阳性率分别为50.0%、37.5%和40.0%.靠近肝实质侧纤维囊壁中,Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原的表达阳性率分别为87.5%、82.5%和85.0%.Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原在两层中表达的差异均有显著意义(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01).肝包虫囊肿周围人体纤维囊壁分层,Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原与肝实质侧纤维囊壁的形成有密切关系.
作者：吴向未；陈雪玲；彭心宇；张示杰；牛建华；孙红 刊期： 2004年第10期
在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测方法,并用于现场采集血样检测.先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段.恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带.用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为96.09%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性.RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值.
作者：胡锡敏；林世干；陈冬燕；崔宜庆；童重锦；王善青 刊期： 2004年第10期
目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值.方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白,亲和层析纯化融合蛋白,应用ELISA以评价其免疫诊断价值.结果 pGEX-Sta56经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体,经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白,应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性,在小鼠血清检测中敏感性,特异性和准确性分别大于90%,70%和80%.结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白,为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础.
作者：赖延东；郑小英；李秀英；何蔼；吴瑜；李卓雅；詹希美 刊期： 2004年第10期
目的了解金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药机制.方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准,应用琼脂平板稀释法及MRSA特异性基因mecA的扩增鉴定MRSA,诱导产生万古霉素耐药株,然后以超声破碎法提取外膜蛋白(OMP),经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析OMP的成分,分光光度法扫描仪测定相关膜蛋白的相对含量.结果耐万古霉素金葡菌菌株中,分子量为45KD和14KD的膜蛋白的相对含量较金葡菌ATCC25923株和对万古霉素敏感的MRSA少.结论提示 45KD和14KD膜蛋白减少或缺失与金葡菌对万古霉素耐药可能有密切关系.
作者：陈仁；范学工；代洪；张艳；陈朝晖；唐祖胜 刊期： 2004年第10期
目的构建产志贺毒素大肠杆菌O138 stx2e基因重组质粒,并比较不同型Stx之间的区别.方法根据GenBank发表的stx2e序列设计了一对特异性引物,用PCR的方法扩增从临床分离到的产志贺毒素大肠杆菌O138的stx2e基因,将其克隆到pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切和PCR鉴定,而后进行测序.并利用DNASIS序列分析软件对GenBank报道的O22菌株和噬菌体P27的stx2e和O138菌株的stx2e基因序列进行了比较分析,并对O138的stx2e氨基酸残基序列与stx1、stx2和O22菌株stx2e序列进行比较.结果所克隆的O138的stx2e与O22菌株和噬菌体P27的stx2e在碱基序列上同源性达到99.6%,O138的Stx2e与O22的Stx2e在氨基酸水平上其序列完全相同.Stx2e与stx2的同源性在85%以上,而stx2e与stx1的同源性只有42%左右.结论克隆了stx2e基因,为研究stx2e的结构和功能奠定了基础.
作者：刘军；孙洋；冯书章；郭学军 刊期： 2004年第10期
目的探讨卡氏肺孢子虫感染大鼠后所致组织氧化损害与发病的关系及中药防治的实验研究.方法观察大鼠感染卡氏肺孢子虫后,经鸦胆子、补骨脂及两者合剂治疗前后,肺、脑组织感染虫数、病理以及GSH、MDA、XOD三项检测指标的变化.结果病鼠肺组织印片中有大量原虫,镜下观肺泡壁充血和炎性细胞浸润,肺泡腔内有大量炎性渗出液,一些病灶呈实变观.肺组织和脑组织中MDA和XOD升高,而GSH下降,经治疗后肺泡壁充血减轻,肺泡及肺泡间质中炎性渗出物和炎性细胞减少.鸦胆子及合剂治疗组清除氧自由基能力较强.结论卡氏肺孢子虫病鼠发病除与虫体本身所致肺组织的炎性损伤外,还可能与该虫体在宿主组织内引发多种氧化酶类产生严重的氧自由基损害有关,鸦胆子及补骨脂对大鼠肺孢子虫肺炎具有一定的防治效果.
作者：崔昱；秦元华；李琦；腾玉玺；龙迪；黄艳华；郭桂梅；陈凤义 刊期： 2004年第10期
目的探讨PCR技术检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值.方法 SD大鼠和Wistar大鼠均随机分成实验组和对照组,实验组每周两次皮下注射醋酸可的松,诱导产生卡氏肺孢子虫;8 week后,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),用PCR技术检测卡氏肺孢子虫DNA,并与Giemsa染色法比较.结果实验组两种大鼠肺组织卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为96.43%和100%,BALF阳性率亦分别为96.43%和100%,它们之间均无显著性差异(P＞0.05);BALF的PCR阳性检出率显著高于Giemsa病原染色法,肺组织的两种方法检出率无显著性差异.结论 PCR是一种检出率较高的方法,可作为早期诊断PCP的常规方法,特别适用于BALF检测卡氏肺孢子虫DNA.
作者：陈盛霞；姜旭淦；徐会娟；帅连云；仇锦波；唐学恒 刊期： 2004年第10期
P1363:台湾创伤弧菌(Vibrio vulnificus)台湾居民常因海洋食物和职业暴露接触海洋微生物.自1985年报道首例创伤弧菌患者以来,感染该菌的病例数有所增加.病例数的增加可能是因为疾病更为活跃,也可能是因为临床医生或实验室人员鉴别技术的提高.我们分析了1995-2002年的84例创伤弧菌病例的临床症状,描述这些病例中分离到的病原的分子流行病学特征.研究临床表现和结果特征,抗菌剂的治疗方案的选择以及毒力的代谢.该地区人和海洋环境中分离的创伤弧菌的分子分型结果有高度特异性.为预防该种新出现传染病应进行教育和检测.
作者：林春芳 刊期： 2004年第10期
隐孢子虫病是由隐孢子虫引起肠道感染的一种人兽共患传染病.其临床特征主要为腹泻.免疫功能低下和营养不良儿童可长期排出囊合子,在免疫缺陷者腹泻则可持续而严重,甚至死亡.对于隐孢子虫病的治疗,目前认为螺旋霉素和大蒜素治疗隐孢子虫病疗效尚可[1,2],但所观察的病例数均较少.进一步考核乙酰螺旋霉素及大蒜素对隐孢子虫感染者的治疗效果,以选择佳治疗药物和治疗方案,笔者选择高危人群(吸毒者)隐孢子虫感染者进行药物疗效考核,现将结果报道如下.
作者：黄民主；李登清；关岚；谢梅芝；刘浩；戴卫平 刊期： 2004年第10期
细胞凋亡(apoptosis)是机体在生长发育、细胞分化和病理过程中,细胞接受某种信号或受到某种因素刺激后为了维持内环境稳定而发生的一种由基因决定的自动结束生命的过程.由于细胞凋亡受到严格的程序性调控,所以又称程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD).可是在许多种疾病中,细胞程序性死亡会出现异常,如退行性疾病可能导致细胞过量凋亡(或为细胞过量凋亡的结果),而癌症则好似抑制了细胞死亡而导致细胞过量、失控地增殖.近年来,人们陆续发现一些病毒、细菌、真菌及其代谢产物可以诱导或抑制宿主细胞凋亡.本文对大肠杆菌感染与细胞凋亡的关系进行综述,以更好地理解大肠杆菌的致病机制,为治疗和预防提供新思路.
作者：闻晓波；崔玉东；朴范泽 刊期： 2004年第10期
目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coli O157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性.方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coli O157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coli O157∶H7 O抗原的rfbE基因,对13株E.coli O157菌和10株非E.coli O157菌进行检测.结果应用两种icPCR检测,所有E.coli O157∶H7和E.coli O157:NM菌株均为阳性结果,而其它包括与O157抗血清能交叉凝集的菌株检测结果均为阴性;对于含有4.8×102cfu/ml 以上浓度的E.coli O157∶H7菌悬液,两种方法,所有试验管都能检测到特异性扩增;并证实了这两种方法可用于检测鲜牛奶中E.coli O157∶H7,样品中E.coli O157∶H7的含量只要不少于101cfu/ml,经过6小时增菌均能检测出来.结论 IMS-icPCR和mACT-icPCR用于检测E.coli O157∶H7,是快速、灵敏且高特异的方法.
作者：牛建军；黄建炜；李莉；彭宣宪 刊期： 2004年第10期
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)属假单胞菌属,是一种常见的人兽共患病病原菌,也是医院获得性感染的重要条件致病菌之一,在院内感染病原菌检出率高[1].该菌耐药性强,耐药谱广,故治疗其所致感染可供选择的有效抗菌药物甚少.目前临床上使用的抗Pa较为有效的药物为碳青霉烯类抗生素.近年来随着碳青霉烯类抗生素在临床上广泛大量使用,Pa对其耐药率有上升趋势.这给治疗带来极大的困难,因此研究Pa对碳青霉烯类抗生素的耐药机制,可以帮助临床医师制定合理给药方案,减少耐药菌的产生.本实验探讨主动外排系统MexAB-OprM中外膜蛋白OprM的结构基因oprm在临床分离Pa中的分布与表达,现报道如下.
作者：彭少华；金正江；李从荣；顾剑；詹燏 刊期： 2004年第10期
性传播疾病(STD)是一类以性行为传播为主的疾病,是国境卫生检疫部门传染病监测的重点对象.为了解福州口岸出入境人员的STD流行动态,并为在国境口岸开展性传播疾病防治工作提供依据,我们于2003年6月至9月对1025名福州口岸出入境人员血清样本进行了抗沙眼衣原体抗体、抗淋球菌抗体、HIV抗体、梅毒四个项目的检测,现将检测结果报告如下:
作者：黄金宝；欧阳钦芬；周艳；蔡怡珊；张柳 刊期： 2004年第10期
目的获得UPEC P菌毛粘附素PapG重组蛋白纯化产物,研究其诱导小鼠的免疫应答,为进一步的PapG疫苗及免疫学研究创造条件.方法 GST-PapG重组蛋白经诱导表达和亲和层析纯化后接种于BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠免疫血清的抗体效价,以血凝抑制试验测定其免疫反应性.结果重组蛋白纯化产物可诱导小鼠产生针对PapG粘附素的特异性免疫应答,免疫小鼠血清抗体的效价显著升高,而且具有较强的血凝抑制作用.结论 GST-PapG重组蛋白纯化产物具有良好的免疫原性,可用于UPEC抗粘附候选疫苗的筛选和进一步的免疫学研究.
作者：郑铃；洪新如；陈豪；郑秀芬；陈锦英 刊期： 2004年第10期
目的建立巨细胞病毒(MCMV)感染的动脉粥样硬化动物模型,观察CMV感染是否可促使动脉粥样硬化发生.方法 apoE基因敲除的C57BL/6雌性小鼠,随机分为四组,根据不同处理分为:对照组、高脂高胆固醇饮食组、注射MCMV组和联合高脂高胆固醇饮食并注射MCMV组,每组9只.分别于饲养8、12和16周时处死小鼠,分离主动脉,病理切片观察动脉粥样硬化改变.结果对照组8周开始有内膜增厚,炎症细胞浸润,至16周尚无明显斑块形成;CMV感染组各阶段的炎症细胞浸润及泡沫细胞形成均比对照组和高脂饮食组严重,16周有明显的粥样斑块形成.而CMV感染合并高脂饮食组的病变为严重.结论 MCMV感染ApoE-KO小鼠可导致动脉粥样硬化的发生,高脂饮食与CMV感染对促动脉粥样硬化有协同作用.
作者：牛玉宏；许从峰；史剑慧；葛均波 刊期： 2004年第10期
TORCH是一组围产期非细菌致畸性病原体感染,包括TOX、CMV、风疹病毒(RV)及单纯疱疹病毒(HSV)等,常导致胎儿或新生儿脑发育不良,脑瘫及智力低下[1].笔者搜集16例脑TORCH感染,分析其发病机制及CT表现特点,旨在早期诊断,提高对本病的认识,减少后遗证及死亡率.
作者：许崇永；赵雅萍；谢武军；程建敏 刊期： 2004年第10期
目的探讨胃肠引流液中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的检出率及患者VitC水平.方法用PCR技术、细菌培养、快速尿素酶试验检测胃肠引流液中的Hp,用反相液相色谱法检测患者胃肠引流液及血浆中VitC含量.结果 282例患者胃肠引流液中Hp检出率为41.1%(116/282),PCR、细菌培养及快速尿素酶试验阳性率分别为42.9%(121/282)、11.3%(32/282)、41.1%(116/282).胃溃疡、十二指肠溃疡、复合溃疡、胃癌、急性肠梗阻、急性胆囊炎及门静脉高压合并食管胃底静脉曲张患者Hp检出率分别为54.6% (30/55)、52.2% (24/46)、58.3% (7/12)、48.2% (27/56)、22.2% (8/36)、27.6% (16/58)、21.1% (4/19),差异具显著性(P＜0.01).胃溃疡、十二指肠溃疡、复合溃疡、胃癌Hp阳性患者与Hp阴性患者血浆及胃肠引流液VitC浓度相比,差异均具有显著性(P＜0.01).结论胃肠引流液中可检出Hp,且能分离培养出活菌;PCR技术是一种敏感、有效的检测胃引流液中Hp的方法.Hp感染人体后引起胃肠引流液及血浆中VitC含量的减少,可能与胃十二指肠疾病的发生有关.
作者：汪雪峰；王克霞；李朝品 刊期： 2004年第10期
湖北省是中国主要发生洪涝灾害的地区,近40年曾发生过5次规模较大的钩体病流行,均发生在内涝型洪涝灾害之年,多次因洪涝灾害造成钩体病暴发流行,给疫区人民生产生活带来了严重危害.
作者：程均福；秦进才；张险峰；林凤荣；伍佩仪 刊期： 2004年第10期
目的探讨从多房棘球绦虫续绦期幼虫制备RNA的佳方法,研究逆转录PCR扩增DNA长片段目的基因的方法.方法应用改良的琼脂糖核酸电泳方法和RT-PCR技术比较观察了5种商品化RNA/mRNA提取试剂/试剂盒用于提取多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的效果;用琼脂糖凝胶电泳方法观察比较了不同的DNA聚合酶用于RT-PCR扩增长片段EMⅡ/3(1.72kb)和EM10(1.76kb)的效果.结果总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)提取的多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA电泳显示出清晰的28 S、18 S rRNA条带和弥散于0.8kb至20kb之间未降解的mRNA,是唯一能逆转录扩增出单一目的条带的核酸提取物.Taq DNA聚合酶与高保真DNA聚合酶Pfu的混合制剂Taq Plus应用于RT-PCR可扩增出大量1720bp和1760bp单一目的基因.结论总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)对多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的提取效果好;Taq Plus适合用于RT-PCR扩增长片段目的基因.
作者：王昌源；张洪花；陈雅棠；刘杞 刊期： 2004年第10期
中国人兽共患病学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国微生物学会
