俞瑜；周联；王培训
为了解HLA-B27和B39分子对外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ和TNF-α的影响.我们将外源HLA-B*2704和B*39052基因分别表达在HLA I类分子缺陷的K562细胞表面,与PBMC作用12 h后,用ELISA法检测IFN-γ和TNF-α的含量.结果显示:HLA-B27分子能显著抑制PBMC分泌IFN-γ,而对TNF-α分泌的影响不显著;而HLA-B39表达于K562细胞后,均不能影响IFN-γ、TNF-α分泌.提示HLA-B27分子与HLA-B39分子影响PBMC分泌细胞因子的能力不同.
作者：龚卫娟；杨珏琴；姚芳娟；许玲娣；范丽安 刊期： 2004年第04期
吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是肝脏以外唯一可催化色氨酸沿犬尿酸途径分解代谢的限速酶,在哺乳动物的组织与细胞,尤其是淋巴组织和胎盘中广泛表达.它通过降解局部组织中的色氨酸,在诱发宿主免疫防御、抑制T细胞免疫和抗肿瘤免疫、诱导母胎免疫耐受和移植物免疫耐受中均发挥重要的代谢性免疫调节作用.
作者：朱晓勇；李大金 刊期： 2004年第04期
研究CD4+CD25+调节性T细胞在重症肌无力(MG)发病中的作用.本文采用三色流式细胞术对29例MG患者和23例健康对照者外周血中CD4+CD25+T细胞(CD3+CD4+CD25+)的百分率进行测定.结果显示病情未能很好控制的MG患者外周血CD4+CD25+T细胞比率略低于健康对照组(分别为3.79%±1.40%、4.53%±0.96%,P=0.12),病情稳定或缓解的MC患者CD4+CD25+T细胞比率(8.45%±1.96%)显著高于健康对照组(P=0.0001);胸腺切除的MC患者CD4+CD25+T细胞比率(8.44%±2.39%)显著高于非胸腺切除的MG患者(5.88%±2.89%,P=0.038)和健康对照组(4.53%±0.96%,P=0.003).提示MG患者外周血中存在异常比例的CD4+CD25+调节性T细胞,可能参与疾病的发生与发展.
作者：孙怡；乔健；吕传真；赵重波；朱新梅 刊期： 2004年第04期
应用基因芯片技术研究Graves病(GD)和正常成人甲状腺组织免疫相关基因的差异表达.分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将GD组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交.通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因.GD组和正常对照组之间共筛选出80条差异表达基因,其中表达增加的基因有31条(2.0倍以上),表达降低的基因有49条(0.5倍以下).基因表达谱芯片筛选GD与正常成人甲状腺组织差异表达基因具有样品用量少、高速度、高敏感、高通量等特性.通过筛选所得差异基因提示GD的发病涉及细胞因子、受体信号转导等多个方面,为进一步阐明GD的发病机制提供新线索.
作者：阮晔；刘志民；陈向芳 刊期： 2004年第04期
为寻找与异种移植细胞性排斥反应相关的新基因,在抑制消减杂交(SSH)基础上,对一个与人氧化应激反应1(OSR1)基因同源的猪内皮细胞上调表达基因片段CS3作进一步研究.半定量RT-PCR结果证实,在人PBMC作用后,该基因表达的确上调.应用快速cDNA末端扩增(RACE)方法,获得了猪OSR1(pOSR1)的全长cDNA序列.pOSR1 cDNA序列全长4 333个碱基,开读框架长1 590个碱基,编码529个氨基酸.与人OSR1(hOSR1)相比,编码区核酸一致性为92.8%,氨基酸一致性为95,5%.GenBank登录号为AY271356.其功能研究正在进行中.
作者：胡为民；李幼平；卢晓风；廖顺尧；曾令宇；李胜富；程惊秋 刊期： 2004年第04期
为了构建猪IL-10真核表达载体并在猪软骨细胞中表达.将目的基因酶切连入真核表达载体pcDNA3.1,以FuGENE 6介导转入猪软骨细胞中表达,RT-PCR检测IL-10在软骨细胞中mRNA表达水平,ELISA检测细胞培养上清中IL-10蛋白含量.观察其对效应细胞PBMC分泌IFN-γ和软骨细胞MHC Ⅱ类分子表达的影响.结果显示,成功构建了猪IL-10真核表达载体,并转入软骨细胞,检测到细胞内IL-10 mRNA转录,细胞培养24、48和72 h后,经ELISA检测上清中IL-10蛋白含量分别为1 961.9、2 925.9和2 953.4 pg/ml,能明显抑制经PHA刺激的PBMC分泌IFN-γ(抑制率达68.1%)和软骨细胞MHC Ⅱ类分子的表达.猪IL-10真核表达载体的成功构建并在软骨细胞中表达,发挥其免疫调节功能,为研究IL-10诱导软骨细胞体内同种异体移植耐受奠定了基础.
作者：王树军；赵阳；王颖；张惠珍；葛海良 刊期： 2004年第04期
研究Toll样受体4(TLR4)在MRL/MpJ小鼠脾细胞的表达状况和革兰阴性菌脂多糖(LPS)刺激后TLR4的表达变化以及对TNF-α产生的影响.MRL/MpJ小鼠经腹腔注射LPS后在不同时间取脾细胞,用三色荧光标记流式细胞仪技术检测小鼠脾T细胞TLR4的表达情况,并与BALB/c小鼠作对照;通过RT-PCR观察LPS刺激前后脾T细胞TNF-α mRNA的表达变化.结果表明TLR4在MRL/MpJ小鼠CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞中均有表达;但TLR4+/CD4+细胞表达仅BALB/c小鼠的33%,在受LPS刺激后,MRL/MpJ鼠CD4+T细胞TLR4升高时间较BALB/c小鼠延迟;CD8+T细胞TLR4在LPS刺激前后无明显变化;脾细胞TNF-α mRNA水平升高亦延迟.通过对干燥综合征样自身免疫病鼠模型MRL/MpJ小鼠脾T细胞TLR4的表达及功能研究,将有助于认识天然免疫和获得性免疫间的联系和感染在自身免疫病发病中的作用.
作者：沈小雁；薛峰；陈晓鸿；郑捷 刊期： 2004年第04期
应用rhIL-18在体外培养系统(coculture system in vitro,CCS)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxie T lymphocyte,CTL),探索不同细胞在IL-18起动和促进肿瘤特异性免疫应答方面的作用.采用StemSepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突细胞(DC),流式细胞仪分析细胞表型,125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性.结果表明,在肿瘤抗原存在的条件下,CCS中rhIL-18能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应;并且,在rhIL-18诱导肿瘤特异性CTL的过程中,rhIL-18、NK细胞、DC及T细胞均起着十分重要的作用,缺少任一组份,均对诱导肿瘤特异性CTL有明显差异(P＜0.01).提示在CCS中,rhIL-18诱导的NK细胞快速杀伤效应及DC的抗原提呈作用,在肿瘤特异性CTL产生过程中,均起着决定性的作用.
作者：谭岩；方艳秋；段秀梅；刘立华；张雪松；姜艳芳；时阳；刘桂英 刊期： 2004年第04期
据报道输血对受血者特异性和非特异性免疫系统均有明显抑制作用.由此导致患者术后感染率升高,且与输血量有关[1].另有研究表明,还可使恶性肿瘤复发及死亡率升高[2].
作者：高新谱；刘正敏；王玉芝；刘富然 刊期： 2004年第04期
为弄清高Leptin水平在不同免疫状态下对免疫系统的影响,选用8周龄的清洁级BALB/c雄性小鼠共40只,分成五组,分别用外源性鼠Leptin和Leptin抗体人为形成小鼠的不同Leptin水平状态,并利用CsA将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类,两种状态各设对照组,测定细胞增殖情况;用ELISA方法检测外周血和细胞培养液中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度.正常免疫状态下,Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异,细胞因子除IFN-γ升高外,IL-2、IL-4均无差异;Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降,各细胞因子测定示显示差异;免疫抑制状态下,Leptin组的细胞增殖活力较强,IL-2、IFN-γ水平上升,IL-4分泌降低,这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现.表明Leptin可以起免疫调节作用,增加IFN-γ、IL-2的合成,降低IL-4的产生,使免疫应答向Th1细胞方向偏离.在正常免疫状态下Leptin的调节作用不明显,而在免疫抑制情况下,这种调节作用可以得到体现.
作者：包尔敦；范昱；董维平；谢匡成；谭建明；唐孝达；乔伟伟 刊期： 2004年第04期
CpG寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)的免疫活性具有多态性,表现为种属特异性、细胞特异性以及不同类型的CpG ODN之间的相互拮抗性.对CpG ODN免疫活性多态性进行分析有助于如下实验研究:①根据细胞种类的不同,选择合适的CpG ODN及检测指标,以获得理想的实验结果;②选择适当的CpG ODN以达到治疗目的.
作者：王良喜；周红 刊期： 2004年第04期
为获得纯化的重组SARS病毒S1蛋白C端,研究其刺激机体产生针对SARS病毒免疫应答的规律和机制,将编码SARS病毒S1蛋白C端311个氨基酸残基的基因克隆,并在原核表达系统中表达,纯化获得了的重组蛋白.利用SARS患者恢复期的血清,对纯化的重组S1蛋白进行血清学分析.结果表明,本研究中克隆表达的重组蛋白序列与公布的SARS病毒S1蛋白C端的序列相同,其编码的重组蛋白相对分子质量约为59 000 Mr.SARS患者恢复期的血清均与重组蛋白反应,在59 000 Mr处形成特异性的反应条带,而来自SARS流行前的正常人对照血清则不能与重组蛋白反应.在本研究中获得的重组蛋白可以为研究SARS病毒识别宿主细胞受体的过程及其机制提供条件.
作者：王月丹；李燕；杨小昂；董学员；冯珍如；Sin Wan Yee；徐国宾；谢雍；陈慰峰 刊期： 2004年第04期
构建腺病毒相关病毒增强型mIL-10质粒,并在心肌细胞内进行表达.利用分子克隆技术,将腺病毒相关病毒(AAV)中的末端重复序列(ITR)插在pORF5-mIL-10质粒启动子的上游,构建pORF-AAV-mIL-10质粒.在阳离子脂质体Lipofectin介导下,pORF5-mIL-10和pORF-AAV-mIL-10分别转染次代培养心肌细胞,TRIzol一步法提取总RNA,RT-PCR检测mIL-10的mRNA;ELISA检测培养细胞上清中mIL-10的表达.结果是用双酶切证实成功构建质粒,分别在转染24 h、48 h、72 h、96h、120 h后,用RT-PCR在心肌细胞中检测到相应的目的条带,ELISA检测各组mIL-10的表达量.证实在阳离子脂质体Lipo-fectin介导下,pORF-AAV-mlL-10能在一定时间内稳定的增加mIL-10在心肌细胞内的表达.
作者：何志锋；倪一鸣；邹煜；冯强 刊期： 2004年第04期
为探讨S-100b蛋白与多发性硬化(MS)临床的关系,采用ELISA方法检测60例急性活动期MS,26例对照组血清及脑脊液中S-100b含量,并进行比较分析.结果发现,血清及脑脊液中S-100b水平,急性活动期MS高于对照组(P均＜0.01).MS组血清和脑脊液中S-100b含量异常增高者分别为20%和96.6%;脑脊液S-100b水平MS急性活动7 d内高于急性活动7 d以上者(P＜0.05),两者又均高于对照组(P均＜0.01);血清S-100b水平MS急性活动7 d内高于急性活动7 d以上者及对照组(P均＜0.01),急性活动7 d后与对照组比较无差异(P＞0.05);脑脊液S-100b水平不同病残程度之间比较无显著性差异(P＞0.05),血清S-100b水平在中、重度病残者高于轻度病残者(P均＜0.01),重度病残者虽高于中度病残者,但差异无显著性意义(P＞0.05).提示S-100b蛋白可作为判断MS疾病活动性及病情严重程度的重要生化标志物之一.
作者：夏君慧；乔健 刊期： 2004年第04期
为了研究对EBV-LMP2基因按照真核密码子偏好进行密码子优化后,对其在真核细胞蛋白表达水平以及引发细胞免疫能力的影响,我们对EBV-LMP2基因进行了完全改造,并构建了改造前后的Psectag/LMP2重组质粒,通过瞬时转染COS-7细胞检测其蛋白表达并进行了小鼠的DNA疫苗实验.结果表明,改造后的LMP2基因在真核细胞中的表达未见大幅提高,同时引发细胞免疫的能力也没有明显上升.结果提示,我们单纯按照密码子的偏好来改造基因并不一定能使蛋白的表达量和引发免疫反应的能力提高.
作者：左建民；周玲；王琦；曾毅 刊期： 2004年第04期
利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响.将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞,Western blot鉴定Daxx的表达,荧光显微镜观察GFP-hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡,细胞用Giemsa染色后,观察细胞形态变化并计算巨噬细胞凋亡率.结果显示:GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中成功表达并定位于细胞核,且GFP-hDaxx融合蛋白不影响Daxx的特异性;地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异(P＞0.05),而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低(P＜0.01),即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡率.Daxx为调控蛋白,GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核,且hDaxx即时高表达可抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡.
作者：刘安元；万艳平；谭立志；吴移谋；余敏君 刊期： 2004年第04期
检测HLA-Cw在广东汉族人群中的基因频率,与其他人群进行比较,分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其特点.骨髓移植供者158例,抗凝血提取DNA,半量全自动PCR-RSSO分型检测Cw.结果显示,广东汉族人群HLA-Cw基因频率分布由高至低依次为:Cw*03(0.2580 ＞ Cw*07(0.1887) ＞ Cw*01(0.1732)＞Cw*08(0.1070)＞Cw*14(0.0654 )＞ Cw*04(0.0587 )＞ Cw*15(0.0453 )＞ Cw*12(0.0387 )＞ Cw*06(0.0322)＞ Cw*05(0.0127 )＞ Cw*16(0.0032).Hardy-Weinberg平衡检验x2=60.35,υ=54,P＞0.1.表明广东汉族群体Cw*03、07、01、08出现频率较高,该人群Cw等位基因处于遗传平衡状态,具有较为丰富的多态性及特点.
作者：马红京；肖露露；郭坤元；尹晓林；叶欣 刊期： 2004年第04期
过敏原表位的确认和定位是开展过敏症免疫干预治疗的基础,噬菌体展示技术已广泛应用于过敏原的研究及模拟表位肽筛选.近年来,利用这一技术已确认多种主要过敏原模拟表位,包括桦树花粉过敏原Bet v1的模拟位、尘螨过敏原Derp1的IgE构象模拟位、牛奶过敏原β-乳球蛋白(BLG)的线性表位及一种泛过敏原肌动抑制蛋白(profilin)的环9肽模拟位等.噬菌体展示模拟位的结构与功能分析显示一定的应用前景,将为过敏症诊断和免疫治疗提供新途径.
作者：黄峙；杨红宇；向军俭 刊期： 2004年第04期
为观察rhIL-11联合rhG-CSF动员小鼠外周造血干细胞时,外周血T细胞亚群的变化,使用rhIL-11联合rhG-CSF动员C57BL/6小鼠外周造血干细胞,观察用药不同时间小鼠外周血白细胞变化,同时通过流式细胞仪测定外周血T细胞亚群的变化.结果发现,小鼠注射rhIL-11后,外周血WBC明显升高(P=0.003);单独注射rhG-CSF或联用rhIL-11后,外周血WBC于第5天达峰值,分别由用药前的(7.53±1.65)×109/L、(7.27±1.48)×109/L上升至(27.12±1.84)×109/L、(28.98±3.13)× 109/L,均显著高于对照组(P值均为0.001),而rhC-CSF组与联合组之间无显著性差异(P＞0.05).CD3+细胞比例在用药组均高于正常对照组(P值均＜0.05),rhIL-11组CD3+细胞及CD4+细胞比例逐渐增高,于动员的第5天达峰值(P值均为0.001),CD8+细胞的比例没有明显变化(P＞0.05);在rhG-CSF组CD3+细胞也有明显增高,并于动员第五天达峰值(P=0.001),CD4+细胞的比例没有明显变化(P值均＞0.05),但CD8+细胞的比例明显升高(P=0.001);在联合组中CD3+、CD4+、CD8+细胞的比例变化均有明显升高.结果证明,rhIL-11联合rhG-CSF能明显提高外周血WBC,增加CD3+细胞比例,同时rhIL-11引起CD3+CD4+细胞比例明显增加,而rhG-CSF明显提高了CD3+CD8+细胞比例.两种细胞因子联合使用对T细胞的数量和功能均有一定的影响.
作者：蒋祖军；孟凡义 刊期： 2004年第04期
观察补体C3d对HBV基因免疫诱导的特异性体液免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径.将HBV-preS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有3拷贝C3d编码基因的TR421-C3d3质粒,构建重组质粒TR421-preS2/S和TR421-preS2/S-C3d3.采用肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫(100μg/100μl/只小鼠),以空质粒为对照,定期采集血清.ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗-HBs-IgG及其亚型,并采用NaSCN竞争ELISA法检测其亲合力.结果表明,TR421-preS2/S-C3d3重组质粒免疫组诱导的特异性抗-HBs-IgG水平明显高于TR421-preS2/S重组质粒免疫组(P＜0.05);而且TR421-preS2/S-C3d3重组质粒免疫组诱导的抗-HBs-IgG抗体的亲合力(ED50:1.375)显著高于TR421-preS2/S重组质粒组(ED50:0.875),但C3d并不改变基因免疫诱导的特异性抗HBs-IgG各亚型水平的格局,仍以IgG2b和IgG2a为主.提示C3d可增强基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答,并促进特异性抗体亲和力的成熟,这为提高HBV基因疫苗的免疫效果提供了新的途径.
作者：关庆东；王立新；汪晓华；郭强；郑秀娟；熊思东 刊期： 2004年第04期
现代免疫学杂志
主管:上海市教育委员会
主办：上海市免疫学研究所,上海市免疫学会
