学术投稿

甲状腺激素反应蛋白1的原核生物表达

许光武;贾秀娟;谢超;周文中;张迪;谢晓雁;罗敏

关键词:甲状腺激素反应蛋白1, 蛋白表达
摘要:目的应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1).方法应用RT-PCR方法,从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量.结果所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中.Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白,亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23 400的融合目的蛋白.结论应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白,为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能.
中华内分泌代谢杂志相关文献
  • 原发性甲状旁腺功能亢进症:45年间的发病变化

    分析45年间收治的原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)发病情况之变化.观察到至目前为止,国内PHPT患者仍以中青年为主,女性略多于男性.病程较长,临床症状严重.但近年来,绝经后妇女患者增加.

    作者:陈曦;蔡伟耀;杨卫平;李宏为 刊期: 2003年第05期

  • 雷洛昔芬、利维爱、依扑拉芬对去卵巢大鼠骨、子宫内膜及血脂的影响

    在去卵巢大鼠,以雷洛昔芬,利维爱和依扑拉芬处理60天后结果显示,3种药物均有减少骨丢失和改善血脂的作用.

    作者:黄德芳;陈高翔;高玉芬;朱明月;吴志兰;华文进;胡玲卿;张中军;何戎华 刊期: 2003年第05期

  • 垂体转录活化物-1基因在人垂体腺瘤中的表达

    目的用RT-PCR方法,定量研究垂体转录活化物(Pit)-1 mRNA在不同类型的垂体腺瘤中的表达.方法 35例垂体腺瘤患者根据血清激素水平和临床表现确定腺瘤类型,根据影像学和术中所见对肿瘤分级和分期.用RT-PCR方法检测垂体腺瘤组织中Pit-1 mRNA的表达.结果 35例垂体腺瘤患者有PRL腺瘤13例,GH腺瘤6例,GH/PRL腺瘤2例,无功能瘤11例以及ACTH腺瘤3例.Pit-1 mRNA在所有PRL瘤、GH/PRL瘤、GH瘤和81.8%(9/11)无功能腺瘤中有表达.在ACTH腺瘤组中无表达.Pit-1 mRNA在PRL、GH和GH/PRL 3组腺瘤中的表达量差异无显著性,均显著高于无功能瘤组(均P<0.05).Pit-1表达量与肿瘤分级分期无明显相关性.PRL瘤术前血清PRL值与腺瘤组织Pit-1表达量呈显著的正相关(r=0.92,P<0.01),GH腺瘤术前血清GH值与腺瘤组织Pit-1表达量呈显著的正相关(r=0.98,P<0.01).结论 Pit-1 mRNA在PRL、GH、GH/PRL瘤以及大部分无功能腺瘤中有表达,其中在PRL、GH以及GH/PRL瘤的表达量较高,Pit-1对垂体GH和PRL腺瘤的细胞特异分化以及分泌功能是否具有作用,尚待进一步研究.

    作者:徐春;李江源 刊期: 2003年第05期

  • 静脉输注维生素C影响血糖测定一例报告

    1例患者因输注大剂量维生素C引起实验室假性低血糖症.

    作者:谢可瓦;孙莎莎;谢可呐;张永生;赵丽丽;吴小雪;王宁 刊期: 2003年第05期

  • 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

    目的研究华东地区汉族人群中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK1)基因的单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病的相关性.方法采用直接测序法对PCK1基因作SNP筛查,并按病例-对照研究选用直接测序法对改变氨基酸编码的cSNP作进一步的基因分型.结果共检出11个SNPs,其中出现在启动子区3个(P/-1099G→A,P/-969G→A,P/-234G→C),内含子区2个(I3/379A→T,I5/85C→G),外显子区6个SNP(E2/69C→T,E4/47C→T,E4/56C→T,E4/83C→T,E4/144G→C,E7/179G→A),而改变氨基酸编码的cSNP只有E4/144G→C,即Leu184Val.进一步基因分型后显示,2型糖尿病组中GG:106,GC:77,CC:8,而正常对照组中GG:130,GC:58,CC:3,这两组间的基因型频率差异有显著性(P<0.05),而且两组间等位基因频率差异也有显著性(P<0.01).结论 PCK1基因的Leu184Val多态性与华东地区汉族人群2型糖尿病的发生可能存在一定相关性.

    作者:董艳;李果;骆天红;吴刚;黄薇;罗敏 刊期: 2003年第05期

  • 去卵巢、去松果体对大鼠扣带回细胞凋亡的影响

    探讨去卵巢(OVX)、去松果体(PX)对大鼠扣带回细胞凋亡的影响.结果提示OVX、PX可诱发扣带回细胞凋亡,OVX、PX和OVX+PX 3组细胞凋亡依次显著增高;这种影响与胶质细胞无关.

    作者:李岩;陈俊抛;沈君;孙荣;孔庆胜 刊期: 2003年第05期

  • 磺脲类药物受体1基因多态性与2型糖尿病相关性

    目的探讨中国南方人群2型糖尿病(DM)的发生与磺脲类药物受体1(SUR1)基因多态性的关系.方法抽提正常人51名及2型DM患者105例外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增SUR1基因4个多态性位点的区域,用限制性酶切片段长度多态性分析其基因型,并用测序证实不同酶切图形基因型的准确性.结果 SUR1基因16号外显子-3t→c的多态性在2型DM和正常人群之间差异无显著性.研究人群未发现SUR1基因18号外显子(ACC→ACT,T761T)和31号外显子(R1273R,AGA→AGG)的多态性变化.SUR1基因33号外显子1370位(TCC→GCC,S1370A)的多态性变化,在2型DM和正常人群之间差异有显著性(P<0.05).结论 SUR1基因可能是中国南方2型糖尿病发生的易感基因.

    作者:陈凤玲;史文静;张晓梅;李荣英;宋怀东;胡仁明;陈家伦 刊期: 2003年第05期

  • 甲状腺疾病患者直肠肛门生理功能异常研究

    25例甲状腺功能亢进(甲亢)伴腹泻和14例甲状腺功能减退(甲减)伴便秘患者的直肠肛门生理功能测定显示,甲亢患者肛管静息压和收缩压,排便初始感觉阈值和大直肠耐受容量明显低于21例正常对照组者.甲减患者这些测定值与对照组差异无显著性.

    作者:邢惠莉;刘清华;周惠清 刊期: 2003年第05期

  • 糖尿病患者动脉血压变异和压力反射敏感性的变化

    采用指动脉血压监测系统和心血管频谱分析系统测定糖尿病患者动脉收缩压和心搏间距的变异性以及压力反射敏感性.糖尿病性心自主神经病变患者存在明显的动脉收缩压和心搏间距变异性的改变和压力反射敏感性下降,而后者是较早出现改变的指标.

    作者:冯波;倪亚芳 刊期: 2003年第05期

  • 胰岛素口腔喷雾剂治疗糖尿病有效性和安全性的初步临床观察

    目的评价胰岛素口腔喷雾剂(华中科技大学药物研究所制备)治疗糖尿病的有效性及安全性.方法采用开放、多中心、随机、自身交叉、阳性对照研究,共入选61例糖尿病患者,随机分为两组,分别先用试验药胰岛素口腔喷雾剂或对照药短效胰岛素皮下注射剂,经4周观察(2周剂量调整期,2周维持期)后交换药物种类,分别于试验前、交叉改用试验或对照药前、试验结束时测空腹和餐后1 h、2 h血糖及安全性指标.结果经一个月的胰岛素口腔喷雾剂治疗,能有效地降低空腹血糖、餐后1、2 h血糖、固定餐试验血糖曲线下面积,治疗前、后值分别为(10.7±3.2到8.7±2.4,15.0±4.3到12.5±3.2、15.7±5.1到11.9±3.5)mmol/L及(28.24±7.91到22.74±5.74)mmol*L-1*h,其差异均有显著性(P=0.001);而与胰岛素皮下注射剂相比,治疗后空腹血糖差异无显著性[(8.66±2.42对8.55±2.36)mmol/L],而餐后1 h、2 h血糖差异有显著性[分别为(12.48±3.15对10.93±3.03)mmol/L,P<0.05;(11.87±3.48对9.87±3.28)mmol/L,P<0.01],口腔喷雾剂降糖效果不如皮下注射,胰岛素口腔喷雾剂和胰岛素皮下注射剂的药量比约为5.46:1.安全性指标治疗前后差异无显著性.两种药物治疗的低血糖反应发生率差异无显著性.结论胰岛素口腔喷雾剂治疗糖尿病安全有效,但餐后1 h、2 h血糖下降程度略低于皮下注射胰岛素.

    作者:赵维纲;王姮;李玉秀;赵咏桔;郁忠勤;杨明功;王长江;何勇 刊期: 2003年第05期

  • 一例伴远处转移的恶性嗜铬细胞瘤随访15年

    恶性嗜铬细胞瘤临床上十分少见,经治疗、追踪15年以上者尤为罕见.现报告1例经过外科手术治疗、化学药物治疗、131I-间碘苄胍(MIBG)治疗存活已经达15年的患者,并对恶性嗜铬细胞瘤的诊断及治疗相关文献进行复习.

    作者:陈德才;庄华;梁荩忠;卢武胜;魏松全 刊期: 2003年第05期

  • 女性腰椎峰值骨量与骨骼大小的关系

    目的了解女性腰椎骨骼大小对峰值骨密度(BMD)的影响.方法采用QDR-4500A型扇形束DXA骨密度仪,测量527例年龄25~39岁健康女性前后位(正位AP)腰椎1~4椎体和侧位(Lat)腰椎2~4椎体的投射骨面积(BA)、骨矿含量(BMC)和面积BMD(aBMD)及AP/Lat相伴扫描测量腰椎的体积BMD(vBMD).用直线和多元线性回归分析骨量与BA、身高和体重之间的关系.按不同BA分组,了解各组之间骨量的差异.结果 BA与BMC(r=0.79和0.78,均P<0.01)和aBMD(r=0.40和0.38,均P<0.001)呈正相关,Lat-BA与vBMD相关有显著意义(r=0.14,P<0.01).AP-BA每变化1个标准差,AP-BMC和AP-aBMD在平均值的基础上分别相应变化13.1%和4.47%;Lat-BA每变化1个标准差,Lat-BMC、Lat-aBMD和vBMD在平均值的基础上分别相应变化13.3%、4.4%和1.5%;AP-BA的全距变化所致AP-BMC和AP-aBMD的变化分别约为78.6%和26.8%,Lat-BA的全距变化所致Lat-BMC、Lat-aBMD和vBMD的变化分别约为79.8%、26.3%和8.94%.不同BA组之间的身高、体重、BMC和aBMD均具有非常显著性意义(均P<0.001).影响BA、BMC和Lat-aBMD的主要因素为身高,影响AP-aBMD的主要因素为体重.结论 BMC除以BA不能完全消除骨骼大小对aBMD的影响,aBMD明显地随骨骼大小而变化.

    作者:伍贤平;廖二元;黄干;戴如春;张红;彭健 刊期: 2003年第05期

  • 苯那普利对糖尿病大鼠肾小管-间质损伤的保护作用及机制

    大鼠均进行单侧肾切除,部分大鼠再以链脲佐菌素制备糖尿病模型.这些大鼠分成单侧肾切除组、糖尿病组和糖尿病苯那普利治疗组,4周后观察肾小管-间质形态学变化及Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)及其mRNA表达,结果提示苯那普利对糖尿病大鼠肾小管-间质损害有明显保护作用,部分机制是抑制TGF-β1基因与蛋白表达.

    作者:吴永贵;林善锬;周江华;顾勇 刊期: 2003年第05期

  • 拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病率粗筛

    目的了解拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病情况及分布特点.方法采用在居民集中区普查的方法对4 851例藏族中老年人群进行饮食结构、体力活动问卷调查及空腹、餐后2 h血糖和(或)口服葡萄糖耐量检查.结果拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病率为6.8%,糖耐量低减为11.6%,他们的体重指数超标、体力活动少和血压高者其糖尿病、糖耐量异常的患病率明显高于正常人群.结论肥胖、高血压、过多脂肪和蛋白的摄入、运动量减少和低文化程度是拉萨市区藏族中老年人群糖尿病的危险因素.

    作者:杨丽辉;胡学军;赵玉华;黄贵文;刘晓琴;蒋磊;洛桑达娃;宋嘉;扎西平措;仓决吉巴;阿旺曲吉;李新武;杨华媛;杨亚;巴桑 刊期: 2003年第05期

  • 非ACTH依赖性肾上腺皮质大结节增生症

    目的探讨非ACTH依赖性双侧肾上腺皮质大结节增生症(AIMAH)的临床特点.方法分析4例AIMAH临床和实验室资料,结合有关文献进行讨论.结果 4例AIMAH均有库欣综合征的临床表现及生化异常,实验检查显示血浆ACTH水平低下,皮质醇分泌节律紊乱,小剂量、大剂量地塞米松抑制试验均不被抑制,CT检查示双侧肾上腺明显增大呈结节样改变.结论 AIMAH是库欣综合征中病因独特的临床亚型,有其特有的临床特点及病理改变.

    作者:李雅静;陆菊明;李明;邵迎红 刊期: 2003年第05期

  • 人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1 的检测

    目的检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体(MR)亚型mt1和其细胞内定位.方法分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞,应用RT-PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA,阳性产物用自动测序仪测序;同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片,应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布.结果 RT-PCR产物电泳显示:人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带,片段长度约370 bp,测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白,分布于细胞膜、细胞浆和细胞核,以细胞膜和细胞浆为主.结论人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官,提示褪黑素在生理及病理情况下可能对免疫系统有调节作用.

    作者:陈向芳;刘志民;邓安梅;仲人前;赵瑛;林炜栋;彭树勋 刊期: 2003年第05期

  • 糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶2活性和表达的影响

    目的研究糖基化终末产物(AGEs)对肾皮质基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性及其mRNA表达的影响.方法用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型.大鼠血清蛋白与0.5 mol/L葡萄糖孵育制备AGEs,分静脉注射AGEs(AGEs组)、静脉注射大鼠正常血清(阴性对照组)和未注射大鼠(对照组)3组进行观察.ELISA测定肾皮质和血清AGEs含量,RT-PCR检测MMP-2、金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)mRNA表达水平,酶谱法测定MMP-2活性.结果糖尿病大鼠肾皮质AGEs含量明显升高,MMP-2 mRNA表达下降,TIMP-2 mRNA表达上调(均P<0.01).AGEs 处理组大鼠肾皮质 AGEs含量明显升高(P<0.01),MMP-2活性也明显下降(均P<0.05).结论 AGEs通过降低大鼠肾皮质MMP-2的活性及其mRNA表达及增加TIMP-2 mRNA表达,由此减少肾小球细胞外基质(ECM)降解,可能是导致糖尿病肾病ECM积聚的原因之一.

    作者:于晓艳;李才;何泽;苗春生 刊期: 2003年第05期

  • 糖尿病与肥胖病现代概念及临床新技术提高班

    作者: 刊期: 2003年第05期

  • 甲状腺激素反应蛋白1的原核生物表达

    目的应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1).方法应用RT-PCR方法,从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量.结果所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中.Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白,亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23 400的融合目的蛋白.结论应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白,为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能.

    作者:许光武;贾秀娟;谢超;周文中;张迪;谢晓雁;罗敏 刊期: 2003年第05期

  • 胰岛素受体底物在2型糖尿病患者脂肪组织中的表达及意义

    用Western印迹技术检测2型糖尿病患者腹部皮下脂肪组织内胰岛素受体底物1与2(IRS-1和IRS-2)的蛋白表达.结果提示2型糖尿病患者脂肪组织IRS-1蛋白表达减少和IRS-2蛋白表达未变.IRS-2可能是主要的docking蛋白,并可能是引起2型糖尿病高胰岛素血症及胰岛素抵抗的因素之一.

    作者:彭定琼;陈宇;高妍;郭晓蕙 刊期: 2003年第05期

中华内分泌代谢杂志

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