学术投稿

甲状腺激素反应蛋白1的原核生物表达

许光武;贾秀娟;谢超;周文中;张迪;谢晓雁;罗敏

关键词:甲状腺激素反应蛋白1, 蛋白表达
摘要:目的应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1).方法应用RT-PCR方法,从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量.结果所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中.Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白,亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23 400的融合目的蛋白.结论应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白,为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能.
中华内分泌代谢杂志相关文献
  • 人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1 的检测

    目的检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体(MR)亚型mt1和其细胞内定位.方法分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞,应用RT-PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA,阳性产物用自动测序仪测序;同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片,应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布.结果 RT-PCR产物电泳显示:人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带,片段长度约370 bp,测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白,分布于细胞膜、细胞浆和细胞核,以细胞膜和细胞浆为主.结论人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官,提示褪黑素在生理及病理情况下可能对免疫系统有调节作用.

    作者:陈向芳;刘志民;邓安梅;仲人前;赵瑛;林炜栋;彭树勋 刊期: 2003年第05期

  • 雷洛昔芬、利维爱、依扑拉芬对去卵巢大鼠骨、子宫内膜及血脂的影响

    在去卵巢大鼠,以雷洛昔芬,利维爱和依扑拉芬处理60天后结果显示,3种药物均有减少骨丢失和改善血脂的作用.

    作者:黄德芳;陈高翔;高玉芬;朱明月;吴志兰;华文进;胡玲卿;张中军;何戎华 刊期: 2003年第05期

  • 拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病率粗筛

    目的了解拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病情况及分布特点.方法采用在居民集中区普查的方法对4 851例藏族中老年人群进行饮食结构、体力活动问卷调查及空腹、餐后2 h血糖和(或)口服葡萄糖耐量检查.结果拉萨市区藏族中老年人群糖尿病患病率为6.8%,糖耐量低减为11.6%,他们的体重指数超标、体力活动少和血压高者其糖尿病、糖耐量异常的患病率明显高于正常人群.结论肥胖、高血压、过多脂肪和蛋白的摄入、运动量减少和低文化程度是拉萨市区藏族中老年人群糖尿病的危险因素.

    作者:杨丽辉;胡学军;赵玉华;黄贵文;刘晓琴;蒋磊;洛桑达娃;宋嘉;扎西平措;仓决吉巴;阿旺曲吉;李新武;杨华媛;杨亚;巴桑 刊期: 2003年第05期

  • 尿TGF-β1、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原与2型糖尿病肾病的关系

    在182例2型糖尿病患者测定尿液转化生长因子β1(TGF-β1)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原排泄量,糖尿病患者的尿液TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原排泄量增加,并与糖尿病肾病(DN)的严重程度有较好的相关性.尿TGF-β1可能为早期DN的指标、尿LN、Ⅳ型胶原可能为DN严重程度的指标.

    作者:冯文焕;高鑫;叶真;汪大望;郑景晨;陶志华;吴建波;沈飞霞 刊期: 2003年第05期

  • 褪黑素对T淋巴细胞株免疫相关基因表达谱的作用

    目的利用基因表达谱芯片研究T淋巴细胞株(HUT78)在褪黑素作用后免疫相关基因表达的差异性.方法用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将干预组和对照组的HUT78细胞的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找经褪黑素作用后表达有差异的基因.结果 T淋巴细胞株受褪黑素作用24 h后,共筛选出42条差异表达基因,其中35条基因上调,7条基因下调.结论褪黑素激活的人淋巴细胞,是通过对一些基因的调控而发挥免疫调节作用.

    作者:陈向芳;刘志民;赵瑛;邓安梅;林炜栋;阮晔;彭树勋 刊期: 2003年第05期

  • 女性腰椎峰值骨量与骨骼大小的关系

    目的了解女性腰椎骨骼大小对峰值骨密度(BMD)的影响.方法采用QDR-4500A型扇形束DXA骨密度仪,测量527例年龄25~39岁健康女性前后位(正位AP)腰椎1~4椎体和侧位(Lat)腰椎2~4椎体的投射骨面积(BA)、骨矿含量(BMC)和面积BMD(aBMD)及AP/Lat相伴扫描测量腰椎的体积BMD(vBMD).用直线和多元线性回归分析骨量与BA、身高和体重之间的关系.按不同BA分组,了解各组之间骨量的差异.结果 BA与BMC(r=0.79和0.78,均P<0.01)和aBMD(r=0.40和0.38,均P<0.001)呈正相关,Lat-BA与vBMD相关有显著意义(r=0.14,P<0.01).AP-BA每变化1个标准差,AP-BMC和AP-aBMD在平均值的基础上分别相应变化13.1%和4.47%;Lat-BA每变化1个标准差,Lat-BMC、Lat-aBMD和vBMD在平均值的基础上分别相应变化13.3%、4.4%和1.5%;AP-BA的全距变化所致AP-BMC和AP-aBMD的变化分别约为78.6%和26.8%,Lat-BA的全距变化所致Lat-BMC、Lat-aBMD和vBMD的变化分别约为79.8%、26.3%和8.94%.不同BA组之间的身高、体重、BMC和aBMD均具有非常显著性意义(均P<0.001).影响BA、BMC和Lat-aBMD的主要因素为身高,影响AP-aBMD的主要因素为体重.结论 BMC除以BA不能完全消除骨骼大小对aBMD的影响,aBMD明显地随骨骼大小而变化.

    作者:伍贤平;廖二元;黄干;戴如春;张红;彭健 刊期: 2003年第05期

  • 胰岛素受体底物在2型糖尿病患者脂肪组织中的表达及意义

    用Western印迹技术检测2型糖尿病患者腹部皮下脂肪组织内胰岛素受体底物1与2(IRS-1和IRS-2)的蛋白表达.结果提示2型糖尿病患者脂肪组织IRS-1蛋白表达减少和IRS-2蛋白表达未变.IRS-2可能是主要的docking蛋白,并可能是引起2型糖尿病高胰岛素血症及胰岛素抵抗的因素之一.

    作者:彭定琼;陈宇;高妍;郭晓蕙 刊期: 2003年第05期

  • 原发性甲状旁腺功能亢进症:45年间的发病变化

    分析45年间收治的原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)发病情况之变化.观察到至目前为止,国内PHPT患者仍以中青年为主,女性略多于男性.病程较长,临床症状严重.但近年来,绝经后妇女患者增加.

    作者:陈曦;蔡伟耀;杨卫平;李宏为 刊期: 2003年第05期

  • Graves病患者血清粒细胞集落刺激因子水平检测

    用ELISA法测定正常人、Graves病粒细胞正常者及因抗甲状腺药物(ATD)治疗所致粒细胞减少者血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)水平,结果提示ATD致粒细胞减少并不是G-CSF缺少所致.

    作者:顾丽群;赵咏桔;李凤英;荣蓉;赵红燕;张连珍;宁光;罗邦尧 刊期: 2003年第05期

  • 促生长激素分泌的新多肽--Ghrelin

    本文复习了一种新近发现的新的多肽--生长激素释放多肽:ghrelin.机体的各种组织能分泌ghrelin,但主要是胃组织分泌.Ghrelin调节垂体的GH释放,参与能量代谢调节,抑制肿瘤细胞增殖,以及影响心血管功能和其它激素的释放.Ghrelin在许多方面的研究仅是初步的,需作进一步的研究.

    作者:李华琦;童南伟 刊期: 2003年第05期

  • 甲状腺激素对脑发育的重要影响

    甲状腺激素(TH)在哺乳类动物脑发育中具有重要的作用.孕母亚临床甲状腺功能减退症(甲减)可造成胎儿神经发育受损,对孕妇作甲减筛查是值得推荐的做法.脑TH反应基因的鉴定及功能研究有助于阐明TH调节脑发育的分子机制.

    作者:苏青;罗敏 刊期: 2003年第05期

  • 阑尾系膜根部嗜铬细胞瘤危象伴急性阑尾炎一例报告

    患者男性,44岁,因血压剧烈波动伴恶心、呕吐、腹泻1天,晕厥1次入院.患者在外院以肠炎予抗炎支持治疗中出现头晕,出汗,测血压250/195 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),予硝酸甘油静脉点滴,血压突降至50/30 mm Hg,此后动态观察血压,发现血压自行波动于50~270/30~230 mm Hg,急转来诊.既往体健,否认高血压病史及家族史.体检:体温37.5℃,脉搏100次/min,呼吸24次/min,血压50~270/30~230 mm Hg,精神差,皮肤潮湿,肢端皮温低,脉搏细速,双肺未闻及干湿性罗音,心界不大,律齐,无杂音,腹部平软,下腹略压痛,未及明显包块,肠鸣音略活跃,血常规白细胞19.0×109/L,中性0.84,血生化及尿常规未见异常,肾上腺CT未见异常.

    作者:杨军;钟伟;程文伟 刊期: 2003年第05期

  • 甲状腺激素反应蛋白1的原核生物表达

    目的应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1).方法应用RT-PCR方法,从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量.结果所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中.Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白,亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23 400的融合目的蛋白.结论应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白,为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能.

    作者:许光武;贾秀娟;谢超;周文中;张迪;谢晓雁;罗敏 刊期: 2003年第05期

  • 去卵巢、去松果体对大鼠扣带回细胞凋亡的影响

    探讨去卵巢(OVX)、去松果体(PX)对大鼠扣带回细胞凋亡的影响.结果提示OVX、PX可诱发扣带回细胞凋亡,OVX、PX和OVX+PX 3组细胞凋亡依次显著增高;这种影响与胶质细胞无关.

    作者:李岩;陈俊抛;沈君;孙荣;孔庆胜 刊期: 2003年第05期

  • 磺脲类药物受体1基因多态性与2型糖尿病相关性

    目的探讨中国南方人群2型糖尿病(DM)的发生与磺脲类药物受体1(SUR1)基因多态性的关系.方法抽提正常人51名及2型DM患者105例外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增SUR1基因4个多态性位点的区域,用限制性酶切片段长度多态性分析其基因型,并用测序证实不同酶切图形基因型的准确性.结果 SUR1基因16号外显子-3t→c的多态性在2型DM和正常人群之间差异无显著性.研究人群未发现SUR1基因18号外显子(ACC→ACT,T761T)和31号外显子(R1273R,AGA→AGG)的多态性变化.SUR1基因33号外显子1370位(TCC→GCC,S1370A)的多态性变化,在2型DM和正常人群之间差异有显著性(P<0.05).结论 SUR1基因可能是中国南方2型糖尿病发生的易感基因.

    作者:陈凤玲;史文静;张晓梅;李荣英;宋怀东;胡仁明;陈家伦 刊期: 2003年第05期

  • 非ACTH依赖性肾上腺皮质大结节增生症

    目的探讨非ACTH依赖性双侧肾上腺皮质大结节增生症(AIMAH)的临床特点.方法分析4例AIMAH临床和实验室资料,结合有关文献进行讨论.结果 4例AIMAH均有库欣综合征的临床表现及生化异常,实验检查显示血浆ACTH水平低下,皮质醇分泌节律紊乱,小剂量、大剂量地塞米松抑制试验均不被抑制,CT检查示双侧肾上腺明显增大呈结节样改变.结论 AIMAH是库欣综合征中病因独特的临床亚型,有其特有的临床特点及病理改变.

    作者:李雅静;陆菊明;李明;邵迎红 刊期: 2003年第05期

  • T3对人神经干细胞分化过程中甲状腺激素受体表达的影响

    目的探讨三碘甲状腺原氨酸(T3)在神经干细胞(NSC)分化中的作用以及甲状腺激素受体(TR)mRNA在NSC分化过程中的表达变化.方法在体外成功诱导扩增NSC,用T3对NSC进行诱导分化,半定量RT-PCR法检测NSC在分化前后TRs mRNA的表达变化,免疫细胞化学方法鉴定分化后的细胞类型.结果 T3可诱导NSC分化为神经元、少突和星形胶质细胞,其中髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性细胞约占80%.当NSC分化时存在不同的TRs mRNA的时间顺序表达.结论 T3能诱导NSC向胶质细胞分化,是少突胶质细胞分化的重要调控因子,并通过TRs的时间顺序表达来发挥其重要生理作用.

    作者:李兰英;刘春蓉;刘奔;臧晓怡;陈祖培 刊期: 2003年第05期

  • 达那唑诱导的雌性性早熟大鼠GnRH及其受体mRNA的表达

    目的观察达那唑对雌性大鼠下丘脑-垂体-靶腺轴及下丘脑GnRH mRNA和垂体GnRH受体mRNA表达的影响.方法 5天龄雌性大鼠皮下一次注射300 μg达那唑以诱导真性性早熟.从25日龄起观察和记录阴门开启鼠龄和从阴门开启日起进行阴道涂片以确定第一个动情周期.检查阴道涂片和体重及垂体、肾上腺、子宫、卵巢器官重量,观察雌激素依赖的阴道脱落细胞的周期性变化和主要器官的发育情况.RT-PCR法观察雌性大鼠下丘脑GnRH mRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达.结果 5日龄雌性大鼠给予皮下注射达那唑,可诱导大鼠阴门提前开启和建立性周期的时间提前,子宫和卵巢的重量明显增加,下丘脑GnRH mRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达升高.结论达那唑对雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴有多层次的作用,可诱导雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的功能提前启动.

    作者:田占庄;赵宏;陈伯英 刊期: 2003年第05期

  • 静脉输注维生素C影响血糖测定一例报告

    1例患者因输注大剂量维生素C引起实验室假性低血糖症.

    作者:谢可瓦;孙莎莎;谢可呐;张永生;赵丽丽;吴小雪;王宁 刊期: 2003年第05期

  • 糖尿病与肥胖病现代概念及临床新技术提高班

    作者: 刊期: 2003年第05期

中华内分泌代谢杂志

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