学术投稿

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

王群;张利宁;肖东杰;丁培芳;宋静;孙汶生

关键词:树突状细胞, 单核细胞, 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子, 白细胞介素4, CD137, CD137配体
摘要:目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点.方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达.结果:诱导培养5~7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%.结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加.为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 青光眼术后低眼压黄斑病变及其治疗效果

    自从抗代谢药物,尤其是丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)作为辅助药物应用于青光眼滤过性手术以来,青光眼手术的成功率大大提高.与此同时,相应的并发症也明显增多,低眼压黄斑病变是其中严重的并发症之一,是青光眼患者手术后视力下降的重要原因.我科自1999年2月~2001年7月收治4例(6只眼),现报告如下.

    作者:乔智;李淑卿;盛新华 刊期: 2003年第04期

  • 交感神经节与心肌细胞联合培养中神经元的迁移

    目的:探测交感神经节与心肌细胞联合培养中神经元迁移以及迁出的神经元与心肌细胞之间的关系.方法:用倒置相差显微镜定期观察神经纤维和心肌细胞的生长;终止培养后,用Holmes还原银染色法观察神经纤维的生长情况和单个神经元的迁移、生长情况及其与心肌细胞之间的关系.结果:在相同的培养条件下,联合培养中的某些区域可见由交感神经节组织块迁出许多单个神经元,散在于单层分散的心肌细胞之间,为双极或单极神经元,并发出突起加入邻近的神经纤维网或终止于心肌细胞表面;由单纯培养的交感神经节中生长出的神经纤维弯曲较多,并相互交织成网状,在神经纤维网之间偶尔可见由交感神经节组织块中迁出的神经元,亦为双极或多极神经元,其突起加入邻近的神经纤维网,迁出的神经元的数量较联合培养中由交感神经节组织块迁出的神经元少.结论:在体外联合培养中,单层分散的心肌细胞对交感神经节中神经元的迁移具有诱导作用.

    作者:刘花香;李振中;尹群生;贾曼 刊期: 2003年第04期

  • 白细胞介素-4基因多态性与Graves'病的关系

    目的:探讨白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因多态性与Graves'病(Graves'Disease GD)发病易感性的关系.方法:选择汉族GD患者和正常人各100例,采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测等位基因和基因型.结果:GD组IL-4启动子区-590位置t等位基因频率明显低于对照组(8%对15.5%;P<0.05).GD组IL-4(-590)c/t杂合子基因型频率显著低于对照组(12%对25%;P<0.05).结论:在中国汉族人群中,GD患者和正常人之间存在IL-4(-590)等位基因和基因型频率分布的差异.GD患者IL-4启动子区-590位置t等位基因频率下降,可能使IL-4总的转录活性减低,通过免疫炎症反应导致GD发病.

    作者:龚莹;蒋玲;江维岩;张晓黎;武传龙 刊期: 2003年第04期

  • HPV6b野生型E7基因与优化密码E7基因mRNA表达的分析

    目的:构建人乳头瘤病毒6b型(HPV 6b)E7基因重组真核表达质粒,比较优化密码E7基因(hu-E7)与野生型E7基因(wtE7)在mRNA水平的表达差异,初步探讨优化密码增强E7基因表达的机制.方法:EcoRI和KpnI双酶切pUC-wtE7质粒,游离wtE7片段,定向克隆入pcDNA3的EcoRI和KpnI位点,构建含wtE7的重组真核表达质粒pcDNA3-wtE7;与含hu-E7的pcDNA3-huE7质粒同时体外脂质体转染人羊膜细胞(wish细胞),提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法,以β-actin做内参照半定量分析比较hu-E7与wtE7在wish细胞内的mRNA表达水平.结果:用EcoRI和KpnI双酶切重组表达质粒pcDNA3-wtE7可释放5.4kb和314 bp两片段,说明质粒构建正确.RT-PCR结果显示,HPV6b-huE7与HPV6b-wtE7转染组在预计分子量190 bp处均有明显特异性条带,对照组则无.凝胶成像分析仪半定量结果分析,二者无明显差异,无统计学意义P>0.05.结论:成功构建pcDNA3-wtE7真核表达质粒,并在wish细胞中获得特异性E7 mRNA表达.HPV6b-hu-E7与HPV6b-wtE7基因在wish细胞内特异性E7mRNA的表达水平没有明显差异.

    作者:郑燕;赵蔚明;周亚滨;王红;栾怡;于修平 刊期: 2003年第04期

  • 维脑路通鉴别及其7,3',4'-三羟乙基芦丁含量测定

    维脑路通是以天然芦丁经羟乙基化合成的黄酮化合物衍生物,其主要有效成分为三羟乙基芦丁[1,2].由于维脑路通组分多,各组分间理化性质差异小,采用通常方法难以对其进行全组分的分离鉴别及单一组分的含量测定.

    作者:程秀民;张建礼;王志军;高彦慧;任健 刊期: 2003年第04期

  • rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

    目的:探讨人促血小板生成素(human thrombopoietin,hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定.方法:利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段,将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区,转化大肠杆菌M15,得到pQE30-TPO的工程菌,诱导目的蛋白表达、纯化.将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射,观察注射后不同时间血小板量的改变.结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养,该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带.将纯化后的表达蛋白注射小鼠,结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用.结论:在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO,该产物具有促血小板生成的活性.

    作者:侯桂华;梁婷;李璐娜;刘德宜;张超;于新娟 刊期: 2003年第04期

  • 自泌性白细胞介素6在人脑胶质瘤发病中的作用

    目的:探讨原代培养的人脑胶质瘤细胞是否分泌及表达白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6),以及IL-6在人脑胶质瘤发病中的作用.方法:采用手术中直接获得的人脑胶质瘤组织,进行胶质瘤细胞的原代培养,并分别采用四唑盐比色分析法(MTT)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定人脑胶质瘤细胞中IL-6的分泌及表达;再分别采用IL-6及IL-6单抗处理脑胶质瘤细胞.结果:①原代培养的人脑胶质瘤细胞可自发分泌IL-6,而正常人脑胶质细胞则无IL-6的分泌;②30例人脑胶质瘤标本中有25例表达IL-6基因,且其表达量与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关关系;③IL-6能刺激脑胶质瘤细胞的增殖,而IL-6单抗则能抑制脑胶质瘤细胞的增殖.结论:IL-6在人脑胶质瘤中的异常分泌及表达可能是参与和维持脑胶质瘤恶性增殖的原因之一.

    作者:李刚;张庆林;李新钢;田志刚;江玉泉;张建华 刊期: 2003年第04期

  • 小儿呼吸道疾病肺炎衣原体感染的临床探讨

    为探讨肺炎衣原体(CP)在小儿急性呼吸道感染中的致病情况及临床特点,我们采用聚合酶链反应(PCR)法对各类呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物进行了CP特异性DNA检测,现报告如下.

    作者:杨慧萍;江俭平;毕研琴;丁明杰 刊期: 2003年第04期

  • 大黄乙醇提取物对小鼠疱疹性脑炎的治疗作用

    目的:研究中药大黄乙醇提取物对病毒性脑炎的治疗作用.方法:采用标准昆明鼠为动物模型,用单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)进行脑内局部接种,制成小鼠疱疹性脑炎模型,以无环鸟苷为阳性对照,用不同剂量的大黄乙醇提取物进行治疗.结果:大黄乙醇提取物可以显著提高疱疹性脑炎小鼠的存活率,延长平均存活时间,减轻脑组织的病理改变,明显消除脑内的病毒抗原,降低各个时期的病毒滴度.皮下注射给药3.3g/(kg@d)与4.9 g/(kg@d)组效果优于无环鸟苷对照组.结论:中药大黄能有效地治疗由单纯疱疹病毒引起的脑炎,在体内有抗病毒作用,是一种有效的抗病毒中药,其在抗病毒领域的开发前景广阔.

    作者:许斌;王志玉;宋艳艳;王桂亭;王志波;袁惠民 刊期: 2003年第04期

  • 川芎嗪注射液对脑缺血再灌注家兔体感诱发电位的影响

    目的:研究川芎嗪注射液对脑缺血再灌注脑功能损害的保护作用.方法:用后肢体感诱发电位作为衡量缺血再灌注过程中脑功能损害的指标,动态观测静脉注射川芎嗪注射液后不完全脑缺血家兔模型脑缺血和再灌注各时点的后肢体感诱发电位变化.结果:脑缺血再灌注期的各个时点,体感诱发电位P波潜伏期均明显延迟,P波的波幅也明显降低,与缺血前比较均有统计学意义(P<0.05).使用川芎嗪注射液后,上述各指标的异常变化明显减轻,与缺血前比较无统计学意义(P>0.05).结论:川芎嗪注射液对脑缺血再灌注脑功能损害有良好的保护作用.

    作者:刘德山;朱爱华;陈克忠 刊期: 2003年第04期

  • 球后麻醉注射利多卡因、布比卡因导致暂时视力丧失并发症的治疗(附5例报告)

    球后注射是眼科手术主要麻醉手段,阻滞睫状神经节,可使结膜、角膜、葡萄膜得到局部麻醉,使手术顺利进行,我科自1984年1月以来,球后注射2%利多卡因、0.75%布比卡因混合液引起暂时失明5例(5只眼).经应急治疗全部康复,报道如下.

    作者:李淑卿;曲毅 刊期: 2003年第04期

  • 胃空肠结肠瘘诊治分析

    1临床资料[例1],女,47岁,因十二指肠球部溃疡并穿孔在外院行穿孔修补、胃空肠吻合术.20 d后,因腹痛、呕血、便血,于我院急诊手术,见胃空肠吻合口前壁溃疡并出血,遂行胃大部切除、部分空肠切除、结肠前胃空肠Y型吻合术.

    作者:刘凤军;李占元;智绪亭;曾庆东 刊期: 2003年第04期

  • CD62P在2型糖尿病心脑血管病变中的表达及相关因素分析

    目的:探讨2型糖尿病心脑血管病变患者血小板膜蛋白表达及其与C反应蛋白、内皮素等因素的关系.方法:对60名2型糖尿病患者(其中33人伴心脑血管病变,27人不伴心脑血管病变)及25名正常对照,应用FACSVvantage流式细胞仪检测血小板膜蛋白CD62P的表达,采用放免法检测ET-1浓度,散射比浊法检测C反应蛋白.结果:2型糖尿病伴心脑血管病变组血小板膜蛋白CD62P阳性表达率、血浆C反应蛋白及ET-1水平较其他各组都高(P<0.05);多元回归分析显示,在心脑血管病变组以CD62P为因变量,ET-1、BMI、C反应蛋白、糖化血红蛋白Alc等指标进入回归方程.结论:2型糖尿病心脑血管病变存在血小板CD62P表达升高;CD62P升高与糖尿病糖内皮损伤、炎症反应及代谢紊乱密切相关.

    作者:侯新国;于伟华;陈丽 刊期: 2003年第04期

  • 胃癌患者血清中血管内皮生长因子水平与胃癌分期及预后的关系

    目的:检测胃癌患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)水平,探讨VEGF与胃癌分期和预后的关系.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定66例胃癌患者和20例健康人血清中血管内皮生长因子水平并进行对照分析.结果:胃癌患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.001).其中Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者血清中VEGF水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者(P<0.001).出现转移者VEGF水平明显高于未发生转移者.结论:血管内皮生长因子不仅与胃癌的发生发展密切相关,而且与其预后也密切相关.

    作者:章晓梅;任军;程孝国 刊期: 2003年第04期

  • 人胆囊癌裸鼠皮下瘤模型特性的初步观察

    目的:建立人胆囊癌裸鼠皮下瘤模型,并对其生物学特性进行初步观察.方法:培养人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞,收集细胞并制备细胞悬液.每只裸鼠于股外侧皮下注射GBC-SD细胞悬液0.2 ml(约2×106个细胞),共30只.观察GBC-SD细胞系成瘤率、成瘤时间、肿瘤生长情况及对裸鼠机体状况的影响.解剖观察瘤体情况并行病理切片观察.结果:裸鼠成瘤率为100%,GBC-SD细胞系对高周龄裸鼠亦有致瘤性,成瘤时间为1周左右.裸鼠于注射瘤细胞后约8周出现恶液质,晚期恶液质明显并衰竭死亡.荷瘤生存期平均为20周.结论:GBC-SD人胆囊癌裸鼠皮下瘤模型成瘤率高,GBC-SD细胞系对高周龄裸鼠亦有致瘤性.肿瘤生长速度稳定,易于观察,可作为胆囊癌治疗等研究的良好平台.

    作者:赵志伦;王占民;刘博;刘军;吴小鹏;马道新 刊期: 2003年第04期

  • 颅脑损伤致颅前窝底粉碎性骨折的治疗

    颅脑损伤导致颅前窝底粉碎性骨折,常伴有开放性颅脑损伤及脑脊液鼻漏.自1994年1月~2002年10月收治20例,现报告如下.

    作者:张乐祥;金力渤;王磊;贾德泽;周茂德 刊期: 2003年第04期

  • 山东省糖尿病死亡率的趋势面分析

    目的:研究山东省糖尿病死亡率的地理分布规律.方法:应用趋势面模型探讨山东省2000年各疾病监测点糖尿病的死亡率空间分布趋势.结果:鲁西北和胶东地区为糖尿病高死亡区域,而鲁中、鲁西南、鲁南的糖尿病死亡率水平相对较低.另外,某些地区的剩余值明显高于或低于剩余界值,属局部异常点.结论:山东省糖尿病死亡率呈明显的地域分布规律,为进一步探讨其地理危险因素提供了理论依据.

    作者:张际文;王洁贞;薛付忠;马吉祥;吴晓云 刊期: 2003年第04期

  • 川芎醇对血管内皮细胞增殖与损伤保护作用的研究

    目的:研究川芎醇促血管内皮细胞增殖与对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用.方法:用过氧化氢致人胎儿脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量.结果:川芎醇在浓度0.1~1.5 mmol@L-1具有促进正常HUVECs增殖的作用,并且浓度依赖性地拮抗过氧化氢抑制血管内皮细胞的增殖,其活性较川芎嗪强.结论:川芎醇具有促血管内皮细胞增殖及保护血管内皮细胞损伤的作用.

    作者:李朝武;刘新泳;张蕊;徐文方;李忠;王德风 刊期: 2003年第04期

  • 严重少精、无精患者无精子因子(AZF)的检测及意义

    目的:探讨无精子因子(azoospermia factor,AZF)与不育男性精子生成的关系.方法:检测79例无精、严重少精不育男性及10例正常生育男性的AZF基因缺失状况,并根据是否合并有其他男性学检查异常,将受检患者进一步划分为原发性和非原发性男性不育两组,比较各组间AZF基因缺失的检出率.结果:79例受检的无精或严重少精患者有8例(10.1%)AZF基因缺失,10例精液正常生育男性均未见有基因缺失.61例无精子和18例严重少精患者,分别检出6例(9.8%)和2例(11.1%)AZF基因缺失,两组AZF缺失检出率无统计学差异(P>0.05).34例原发性和45例非原发性男性不育患者,分别有6例(17.6%)和2例(4.4%)AZF缺失,两组缺失检出率有统计学差异(P<0.05).结论:AZF与精子生成障碍密切相关,它是原发性无精或严重少精的重要病因之一.

    作者:赵力新;卢少明;李媛;王丽;陈子江 刊期: 2003年第04期

  • 血脂和脂蛋白在健康中、老年人群中分布规律的探讨

    动脉粥样硬化性心脑血管疾病是引起人类死亡和致残的常见原因,血脂和脂蛋白异常是导致动脉粥样硬化的重要危险因素,而年龄增长也是动脉粥样硬化发生、发展不可变的独立危险因素.

    作者:李爱菊;陈焕芹;赵长芹 刊期: 2003年第04期

山东大学学报(医学版)杂志

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