学术投稿

rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

侯桂华;梁婷;李璐娜;刘德宜;张超;于新娟

关键词:促血小板生成素, 克隆, 分子, 基因表达, 大肠杆菌, 血小板减少
摘要:目的:探讨人促血小板生成素(human thrombopoietin,hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定.方法:利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段,将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区,转化大肠杆菌M15,得到pQE30-TPO的工程菌,诱导目的蛋白表达、纯化.将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射,观察注射后不同时间血小板量的改变.结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养,该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带.将纯化后的表达蛋白注射小鼠,结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用.结论:在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO,该产物具有促血小板生成的活性.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 山东省糖尿病死亡率的趋势面分析

    目的:研究山东省糖尿病死亡率的地理分布规律.方法:应用趋势面模型探讨山东省2000年各疾病监测点糖尿病的死亡率空间分布趋势.结果:鲁西北和胶东地区为糖尿病高死亡区域,而鲁中、鲁西南、鲁南的糖尿病死亡率水平相对较低.另外,某些地区的剩余值明显高于或低于剩余界值,属局部异常点.结论:山东省糖尿病死亡率呈明显的地域分布规律,为进一步探讨其地理危险因素提供了理论依据.

    作者:张际文;王洁贞;薛付忠;马吉祥;吴晓云 刊期: 2003年第04期

  • 大学生营养知识、态度、行为的调查

    目的:通过了解高年级大学生营养知识、态度、行为(KAP)的现状,为进行营养教育提供科学依据.方法:选择山东大学和山东师范大学1 907名3~5年级在校大学生进行自行设计的营养知识-态度-行为的问卷调查.结果:大学生营养知识不足,其营养知识得分≥80分者为740人,占38.80%,临床应用部分得分偏低,≥80分者仅471人,占24.70%;38.9%的学生有不良饮食行为,选择食物较单一,但他们普遍具有良好的营养态度.结论:需采取多种方式对高年级大学生进行营养教育.

    作者:蔺新英;姜希洪;刘彧;刘言训;黄思桂;王承芳 刊期: 2003年第04期

  • 维脑路通鉴别及其7,3',4'-三羟乙基芦丁含量测定

    维脑路通是以天然芦丁经羟乙基化合成的黄酮化合物衍生物,其主要有效成分为三羟乙基芦丁[1,2].由于维脑路通组分多,各组分间理化性质差异小,采用通常方法难以对其进行全组分的分离鉴别及单一组分的含量测定.

    作者:程秀民;张建礼;王志军;高彦慧;任健 刊期: 2003年第04期

  • rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

    目的:探讨人促血小板生成素(human thrombopoietin,hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定.方法:利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段,将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区,转化大肠杆菌M15,得到pQE30-TPO的工程菌,诱导目的蛋白表达、纯化.将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射,观察注射后不同时间血小板量的改变.结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养,该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带.将纯化后的表达蛋白注射小鼠,结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用.结论:在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO,该产物具有促血小板生成的活性.

    作者:侯桂华;梁婷;李璐娜;刘德宜;张超;于新娟 刊期: 2003年第04期

  • 人ODC基因第三外显子反义RNA腺病毒载体的构建

    目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因第三外显子反义RNA的腺病毒载体.方法:RT-PCR方法克隆出人ODC基因第三外显子的片段,插入pMD18-T载体中,经Sal Ⅰ、Bgl Ⅱ酶切,插入穿梭质粒pAd-Track-CMV形成重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr.经Pme Ⅰ酶切线性化后,转入pAdesy-1细菌中与含腺病毒基因骨架的质粒pAdesy-1同源重组.将重组质粒pAdesy-ODCr经Pac Ⅰ酶切后,转染293细胞包装成腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定.结果:用RT-PCR方法从人前列腺癌组织中扩增出120 bp的cDNA片段,经测序证实为ODC基因第三外显子的片段.重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr转入pAdesy-1细菌中获得多个阳性克隆.重组质粒pAdesy-ODCr转染293细胞进行包装,经荧光显微镜观察可见其在293细胞中表达.进一步通过PCR法证实其含有目的基因.结论:成功地构建了ODC基因第三外显子反义RNA重组腺病毒载体,为研究其抗肿瘤的作用奠定了基础.

    作者:张岩;刘贤锡;胡海燕;耿昭;王晓明;张冰 刊期: 2003年第04期

  • 髁状突或髁状突软骨缺损对生长期大鼠下颌骨生长发育的影响

    目的:观察髁状突切除术和髁状突软骨全层削刨术对生长期大鼠下颌骨发育的影响,为临床治疗儿童发育期髁状突病变提供理论指导.方法:36只大鼠平均分为3组,髁状突切除组、髁状突软骨全层削刨组和正常对照组,分别于术后6、12周处死后测量下颌骨大体标本并做髁状突中份软骨组织学观察.结果:同正常对照组比较,术后6、12周髁状突切除组下颌升枝高度(H)、下颌体高度(M)、下颌体长度(L)都明显缩短;两手术组间H和L差异显著(P<0.01);两手术组的修复组织大部分为纤维软骨样组织.结论:下颌骨的生长发育是内部生长中心发育和外部功能刺激双重作用的结果.

    作者:马跃;黄海云;徐欣;任俊岭;魏魁杰 刊期: 2003年第04期

  • 9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

    目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化.探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制.方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化.结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05).结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关.

    作者:刘志方;任桂杰;丁磊;胡国强;胡晓燕;于雪艳 刊期: 2003年第04期

  • 白细胞介素-4基因多态性与Graves'病的关系

    目的:探讨白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因多态性与Graves'病(Graves'Disease GD)发病易感性的关系.方法:选择汉族GD患者和正常人各100例,采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测等位基因和基因型.结果:GD组IL-4启动子区-590位置t等位基因频率明显低于对照组(8%对15.5%;P<0.05).GD组IL-4(-590)c/t杂合子基因型频率显著低于对照组(12%对25%;P<0.05).结论:在中国汉族人群中,GD患者和正常人之间存在IL-4(-590)等位基因和基因型频率分布的差异.GD患者IL-4启动子区-590位置t等位基因频率下降,可能使IL-4总的转录活性减低,通过免疫炎症反应导致GD发病.

    作者:龚莹;蒋玲;江维岩;张晓黎;武传龙 刊期: 2003年第04期

  • 不同剂量米非司酮用于紧急避孕的有效性及安全性观察

    为探索米非司酮用于紧急避孕的低有效剂量,我们对2000年1月~2002年1月间的270例要求紧急避孕的妇女分别给予不同剂量的米非司酮,观察避孕效果及副反应,结果分析报告如下.

    作者:赵晶;李瑞兰;李红燕;张迎新 刊期: 2003年第04期

  • CD62P在2型糖尿病心脑血管病变中的表达及相关因素分析

    目的:探讨2型糖尿病心脑血管病变患者血小板膜蛋白表达及其与C反应蛋白、内皮素等因素的关系.方法:对60名2型糖尿病患者(其中33人伴心脑血管病变,27人不伴心脑血管病变)及25名正常对照,应用FACSVvantage流式细胞仪检测血小板膜蛋白CD62P的表达,采用放免法检测ET-1浓度,散射比浊法检测C反应蛋白.结果:2型糖尿病伴心脑血管病变组血小板膜蛋白CD62P阳性表达率、血浆C反应蛋白及ET-1水平较其他各组都高(P<0.05);多元回归分析显示,在心脑血管病变组以CD62P为因变量,ET-1、BMI、C反应蛋白、糖化血红蛋白Alc等指标进入回归方程.结论:2型糖尿病心脑血管病变存在血小板CD62P表达升高;CD62P升高与糖尿病糖内皮损伤、炎症反应及代谢紊乱密切相关.

    作者:侯新国;于伟华;陈丽 刊期: 2003年第04期

  • 羟甲基烟酰胺分散片的研制

    目的:研制羟甲基烟酰胺分散片.方法:以崩解时间为指标.比较几种崩解剂的作用,以正交试验设计确立佳处方,并与普通片进行体外溶出度比较.结果:崩解剂以低取代羟丙纤维素(L-HPC)效果优,佳处方崩解时间为78.9 s,溶出速度远大于普通片.结论:所研制的羟甲基烟酰胺分散片溶出迅速.

    作者:雍德卿;臧恒昌;翟光喜 刊期: 2003年第04期

  • 人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

    目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点.方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达.结果:诱导培养5~7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%.结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加.为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础.

    作者:王群;张利宁;肖东杰;丁培芳;宋静;孙汶生 刊期: 2003年第04期

  • 球后麻醉注射利多卡因、布比卡因导致暂时视力丧失并发症的治疗(附5例报告)

    球后注射是眼科手术主要麻醉手段,阻滞睫状神经节,可使结膜、角膜、葡萄膜得到局部麻醉,使手术顺利进行,我科自1984年1月以来,球后注射2%利多卡因、0.75%布比卡因混合液引起暂时失明5例(5只眼).经应急治疗全部康复,报道如下.

    作者:李淑卿;曲毅 刊期: 2003年第04期

  • 颈椎动态斜位X线片测量在神经根型颈椎病诊断中的临床应用

    目的:应用改良的颈椎斜位X线片测量方法测得动态颈神经根管矢状径,确定对诊治神经根型颈椎病有指导意义的X线片测量指标.方法:选取100名成年人动态颈椎斜位X线片,应用ACR-2000i型计算机影像系统行颈椎侧位、双斜位、过屈过伸斜位X线投照.测得椎间孔矢状径(a),同一椎体下缘斜位矢状径(b),并计算神经根管率(a/b).结果:颈椎动态神经根管率的均数:中立位0.37;过屈位0.45;过伸位0.35.标准差为0.06.颈椎动态神经根管比率的95%理想值范围底限为0.30.结论:动态颈神经根管矢状径率≤0.30时应考虑有颈神经根管狭窄;动态颈神经根管矢状径率,是诊断神经根型颈椎病有效和敏感指标,对神经根型颈椎病治疗方案的选择有重要的指导意义.

    作者:陈允震;栗向明;刘海春 刊期: 2003年第04期

  • 川芎醇对血管内皮细胞增殖与损伤保护作用的研究

    目的:研究川芎醇促血管内皮细胞增殖与对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用.方法:用过氧化氢致人胎儿脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量.结果:川芎醇在浓度0.1~1.5 mmol@L-1具有促进正常HUVECs增殖的作用,并且浓度依赖性地拮抗过氧化氢抑制血管内皮细胞的增殖,其活性较川芎嗪强.结论:川芎醇具有促血管内皮细胞增殖及保护血管内皮细胞损伤的作用.

    作者:李朝武;刘新泳;张蕊;徐文方;李忠;王德风 刊期: 2003年第04期

  • 动态心电图不同分析方式对心律失常事件检出率的影响

    为进一步提高心律失常事件检出率,给临床医生提供更可靠的诊断治疗资料,同时在不影响分析质量的情况下,提高工作效率,我们对动态心电图(dynamic electrocardiogram.DCG)的全自动认证分析、认证分析和半自动认证分析三种方法进行比较,报告如下:

    作者:候胜华;隋京美;陈焕芹 刊期: 2003年第04期

  • 中缝苍白核调制Bo(..)tzinger复合体的吸气抑制效应

    目的:研究中缝苍白核对Botzinger复合体吸气抑制效应的调制作用,并探讨其可能机制.方法:长串电刺激家兔Botzinger复合体,观察膈神经吸气相放电的变化.然后先长串电刺激中缝苍白核或向中缝苍白核内微量注射谷氨酸钠后,再长串电刺激Botzinger复合体,观察膈神经吸气相放电的变化,并与前对照作比较.结果:长串电刺激Botzinger复合体,膈神经吸气相放电的幅度降低.长串电刺激中缝苍白核或向中缝苍白核内微量注射谷氨酸钠后,再长串电刺激Botzinger复合体,则导致膈神经吸气相放电幅度被降低的程度减小.结论:中缝苍白核对Botzinger复合体的吸气抑制效应具有一定的调制作用,表现为使其吸气抑制效应减弱,且此调制作用呈现短时记忆性特点.

    作者:于书彦;宋刚 刊期: 2003年第04期

  • 人工晶体瞳孔夹持的病因和防治

    目的:探讨白内障摘除联合人工晶体植入术后人工晶体瞳孔夹持的病因及防治原则.方法:对206只眼行白内障摘除联合人工晶体植入术,术后观察6~24个月.结果:术后发生人工晶体瞳孔夹持的有9只眼,其中老年性白内障2只眼(1.4%,2/139),先天性白内障4只眼(9.8%,4/41),外伤性白内障3只眼(11.5%,3/26).结论:术中减少前房操作时间、术后控制前房炎症,植入的人工晶体位置平整,可以减少瞳孔夹持的发生率.

    作者:蔡可丽;胡萍 刊期: 2003年第04期

  • 新生儿乙肝疫苗接种阻断HBV母婴传播与HLA-DR区域基因相关性的研究

    目的:研究HBV母婴传播导致新生儿接种乙肝疫苗免疫失败与HLA-DR区域基因的相关性,以及HLA-DR基因控制机体对乙肝疫苗免疫应答的机理.方法:60例HBsAg阳性产妇所分娩的新生儿,均于出生后24 h内、1月、6月龄共接种3次乙肝疫苗,每次30μg,随访至幼儿3周岁时采其外周静脉血检测乙肝血清标志物,根据检测结果分为两组:①免疫失败组:HBsAg阳性和/或抗-HBs阴性,共12例;②免疫成功组:HBsAg阴性,抗-HBs阳性,共48例.采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)检测其HLA-DR3、HLA-DR4、HLA-DR13、HLA-DR15基因分布及频率.结果:①两组观察对象性别、母亲HBeAg阳性率、宫内感染率及出生体重差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性.②免疫失败组幼儿HLA-DR3基因频率明显高于免疫成功组,HBV母婴传播导致新生儿免疫失败与HLA-DR3呈强关联(OR=7.86,P<0.05),与HLA-DR15亦呈关联性(OR=0.14,P<0.05),HLA-DR4、HLA-DR13基因频率在两组研究对象中差异均无统计学意义(P>0.05).结论:HBV母婴传播导致新生儿接种乙肝疫苗免疫失败与HLA-DR抗原有关,HLA-DR3可能为免疫失败的易感基因,HLA-DR15则可能为其保护基因.

    作者:刘海英;孔北华;徐群;王磊一;江森 刊期: 2003年第04期

  • 血浆纤溶酶原激活物抑制物1、胰岛素抵抗与冠状动脉病变程度的关系

    目的:研究血浆纤溶酶原激活物抑制物1(PAI 1)、胰岛素抵抗和冠心病患者冠状动脉病变程度的关系.方法:对120例患者行冠脉造影,其中冠心病组60例,非冠心病组60例,测定血清胰岛素、血浆PAI 1抗原含量等指标,各检测指标与冠状动脉病变严重度积分(CSS)行直线相关分析及多因素逐步回归分析.结果:随着冠状动脉病变支数的增加,PAI 1水平逐渐增高,INS敏感性指数逐渐下降.血浆PAI 1水平、空腹胰岛素和胰岛素抵抗与冠状动脉病变范围和病变程度密切相关.多元逐步回归发现血浆PAI 1抗原含量与冠脉病变严重性积分和支数相关.结论:血浆PAI 1水平和胰岛素抵抗对预测冠状动脉病变有一定的价值.

    作者:刘志福;姚玉才;蔡卫东 刊期: 2003年第04期

山东大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:山东大学