学术投稿

人源化BPVL1-GFP融合基因的构建以及在哺乳动物细胞中的瞬时表达

王红;赵蔚明;周亚滨;贾继辉;孙建芝;于修平

关键词:乳头状瘤病毒, 基因, L1, 密码子
摘要:目的:构建牛乳头瘤病毒晚期基因L1-GFP融合基因真核表达质粒,自细胞水平探讨优化密码对晚期基因L1蛋白瞬时表达的影响.方法:用PCR方法扩增获得优化密码人源化BPVL1(hL1)基因.TA克隆后,酶切释放hL1基因,定向插入质粒pET30a/NM-GFP的BamHI、SacII位点,获得正确框架的hL1-GFP融合基因.再用BamHI、NotI酶切释放hL1-GFP融合基因,与pcDNA3载体定向重组构建真核表达质粒pcDNA3/hL1-GFP.同法克隆获得含野生型BPVL1-GFP融合基因的表达质粒pcDNA3/wL1-GFP.用质粒DNA分别在体外转染哺乳动物细胞COS-1细胞和Wish细胞,荧光显微镜下观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况.结果:酶切鉴定表明成功构建了含wL1-GFP、hLI-GFP的真核表达载体,与pcDNA3/wL1-GFP相比,pcDNA3/kL1-GFP在COS-1细胞、WISH细胞中获得有效表达.结论:优化密码能提高乳头瘤病毒L1基因在哺乳动物细胞内的蛋白表达.
山东大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞的研究

    目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)体外扩增不同诱导剂向神经元样细胞诱导分化的潜能.方法:采用贴壁筛选法分离Wistar大鼠股骨rMSCs,体外扩增5~10代后,分别用2-巯基乙醇、硫代甘油等无血清的DMEM培养液诱导hMSCs分化为神经元.用流式细胞仪鉴定rMSCs特异抗原表达,免疫组化鉴定诱导后神经元样细胞的神经元烯醇化酶(NSH)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果:大鼠MSCs体外扩增传至5代后,流式细胞仪显示rMSCs CD27、CD44、CD90呈阳性表达;将rMSC加入2-巯基乙醇和硫代甘油等诱导剂3 h后,rMSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性,GFAP阴性.结论:大鼠骨髓间充质干细胞在体外一定条件下可以分化为神经元样细胞.

    作者:刘雪平;姚红;朱艳丽;张捷;宋玉琴;赵跃然;焦玉莲 刊期: 2003年第06期

  • SARS冠状病毒M基因片断在大肠杆菌中表达及其抗原性的研究

    目的:获得纯的重组SARSCoV M蛋白,并初步测定重组蛋白的抗原性.方法:软件分析SARSCoV M蛋白富含免疫表位的片断,体外合成编码SARSCoV M蛋白15-170aa序列的DNA片段,利用DNA重组技术,将该合成DNA克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建重组质粒pGEX-SARSCoV M.在大肠杆菌BL21中诱导表达GST-SARSCoV M重组融合蛋白,分离纯化GST-SARSCoV M蛋白,利用纯化蛋白作为抗原,建立ELISA试验检测抗SARSCoV M抗体.结果:GST-SARSCoV M蛋白分子量为43kD,纯化的GST-SARSCoV M蛋白作为抗原检测血清中SARSCoV M抗体,53例正常成人献血者血清未检出SARSCoV M抗体.结论:SARSCoV M蛋白表达成功,在健康人血清中未检出SARSCoV M抗体.

    作者:栾怡;于修平;赵蔚明;张静;周亚滨;齐眉 刊期: 2003年第06期

  • 肺动脉高压检测对甲亢性心脏病的早期诊断价值

    目的:探讨肺动脉高压对甲状腺功能亢进(甲亢)性心脏病的早期诊断价值.方法:应用彩色多普勒超声诊断技术评价了75例甲亢患者的肺动脉压,其中单纯甲亢患者34例,甲亢性心脏病(甲亢心)患者41例,92例为健康对照组.用放射免疫法测定了所有受试者治疗前后的甲状腺功能、血浆内皮素(ET1)、血管紧张素Ⅰ(A1)及血管紧张素Ⅱ(A2)的含量.结果:34例甲亢组患者检出肺动脉高压12例(32.4%),41例甲亢心患者检出肺动脉高压39例(94.5%)(P<0.05).单纯甲亢组中12例肺动脉高压患者有4例在2~6月之内发生了心房颤动.甲亢患者血浆中ET1、A1及A2水平显著高于对照组(P<0.01).结论:用彩色多普勒超声诊断技术检出的肺动脉高压,是甲亢心的早期诊断指标,其敏感度为81%,特异度为92.59%,阳性预测值为96.23%,阴性预测值为67.57%.是一个实用的无创早期诊断方法.肾素-血管紧张素-醛固酮系统被激活可能参与了肺动脉高压的形成过程.

    作者:陈玉萍;司福中;甘志浩;盛春勇;任忠发 刊期: 2003年第06期

  • 葡萄籽原花青素抗兔动脉粥样硬化形成的实验研究

    目的:观察葡萄籽原花青素(GSPE)对兔动脉粥样硬化(AS)形成的影响并探讨其作用机制.方法:30只雄性新西兰兔随机分为正常对照(A)组、高脂模型(B)组、GSPE(C)组,分别饲喂:标准、标准+1%胆固醇、标准+1%胆固醇+1%GSPE的颗粒饲料.于实验前1天和实验第1、2、4、8、12周末取空腹血,检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙二醛(MDA)和血浆氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL).12周末动物取血后处死,取主动脉作病理形态学观察.所有数据经SAS 8.2混合模型方差分析.结果:与高脂模型组相比,GSPE能显著降低血清TC(P<0.0001)、LDL-C(P<0.0001)、TG(P<0.0001)、TG/HDL(P<0.0001),升高HDL-C(P<0.05);GSPE能显著降低血清MDA、血浆ox-LDL(P<0.0001);病理分析显示GSPE组兔主动脉壁厚度和泡沫细胞数量较高脂模型组明显减轻、减少(P<0.01).结论:GSPE具有预防AS的作用,该作用的发挥与其能调节血脂、抗LDL氧化修饰有关,并能改善胰岛素抵抗.

    作者:马亚兵;高海青;由倍安;伊永亮;毕轶;刘相菊;沈琳;李曼 刊期: 2003年第06期

  • 职业性铅接触与尿绒毛膜酶活性的关系

    目的:探讨铅接触者尿绒毛膜酶活性的变化及其意义.方法:对147例铅作业工人采用免疫吸附比色法测定尿绒毛膜酶(LAP、ALP)活性.结果:铅接触者尿绒毛膜酶活性增加[LAP(16.16±3.18)μg/L、ALP(30.83±4.91)μg/L],且随接触时间延长而升高,铅接触史≥5年者尿绒毛膜酶活性[LAP(18.94±5.22)、ALP(33.45±5.13)μg/L]较铅接触史<5年者[LAP(14.12±2.76)、ALP(28.6±3.82)μg/L]为高(P<0.05).结论:尿绒毛膜酶活性升高是铅致早期肾损害的敏感指标.

    作者:杜贻萌;李琦;鹿庆华;孙慧;吴凡;林娟 刊期: 2003年第06期

  • 乙醇慢性摄入对大鼠肝组织细胞因子TGF-β、TNF-α mRNA表达的影响

    目的:观察乙醇慢性摄入对大鼠肝组织细胞因子TGF-β、TNF-αmRNA表达的影响.方法:选用30只体重(200±20)g的Wistar雄性大鼠,随机分为3组(每组10只),对照组为清水+普通饮食(A组),实验组为:①20%酒精饮料+普通饮食(B组);②20%酒精饮料+高脂饮食(C组).饲养3个月全部处死,分别进行血清酶学、血脂、组织病理学及细胞因子基因学测定.结果:A组无异常,B、C组均出现血脂升高及病理学变化,同时C组出现酶学变化,B、C组肝组织TGF-β、TNF-αmRNA表达水平增高.结论:乙醇慢性摄入上调大鼠肝组织细胞因子TGF-β、TNF-αmRNA的表达.

    作者:郝洪升;邢全台;陈建;李延青;赵幼安;袁孟彪 刊期: 2003年第06期

  • 后腹腔镜手术治疗肾囊肿22例

    1997年5月~2001年2月,我院采用水囊扩张建立腹膜后腔的方法,施行后腹腔镜泌尿外科手术治疗肾囊肿22例,手术全部成功,均未出现并发症,现报告如下.

    作者:徐忠华;崔先泉;胡三元;张向宁;田军;张楠;刘照旭;周尊林;玄绪军;郑宝钟 刊期: 2003年第06期

  • 米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响

    目的:研究米非司酮对人卵巢上皮癌细胞株3AO体外增殖和性激素受体ER、PR表达的影响.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测人卵巢上皮癌细胞株3AO体外增殖活性,以流式细胞间接荧光技术检测肿瘤细胞ER、PR蛋白表达率.结果:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制3AO细胞体外增殖活性,3AO细胞在不同浓度米非司酮(5、10、20、40、80μmol/L)和不同时间(24、48、72、96、120h)培养下,生长抑制率从1.7%增加至85.2%(P<0.05),米非司酮和地塞米松联合应用与相同浓度的米非司酮单独应用比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05).米非司酮浓度为10μmol/L,培养48 h,3AO细胞PR表达率为(12.7±1.4)%,明显低于对照组(44.9±1.4)%,(P>0.01);3AO细胞ER表达率为(55.1±1.7)%,与米非司酮组ER表达率(52.3±0.8)%比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:米非司酮以剂量-时间依赖方式抑制人卵巢上皮癌3AO细胞体外增殖活性,其对3AO细胞的抑制作用与PR变化相关.

    作者:李强;李继俊;季梅 刊期: 2003年第06期

  • 葛根汤颗粒喷雾干燥工艺条件试验研究

    目的:优选葛根汤颗粒喷雾干燥的佳工艺条件.方法:应用正交设计法,以每小时药粉产率及有效成分含量为考察指标,对影响葛根汤喷雾干燥过程的因素进行考察.结果:正交试验法设计的三个因素中,浸膏的相对密度影响显著,入塔风温影响较显著.结论:颗粒佳工艺条件为:入塔风温:170℃,气流量:700L/h,浸膏相对密度:1.22,在此条件下,葛根汤颗粒有效成分中葛根素及芍药苷的含量明显高于原湿法制粒制剂.

    作者:季梅;娄红祥;马斌;任冬梅 刊期: 2003年第06期

  • 急性心肌梗死患者PAI-1、sVCAM-1及hsCRP水平与溶栓抵抗的关系

    目的:寻找急性心肌梗死(AMI)患者出现溶栓抵抗的预测因子.方法:将68例急性心肌梗死患者分为溶栓再通组和溶栓未通组,比较两组患者溶栓前的纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、可溶性血管细胞粘附分子-1(sVCAM-1)及超敏C-反应蛋白(hsCRP)水平的不同.结果:溶栓未通组PAI-1、sV-CAM-1水平均显著高于再通组,P<0.05;溶栓未通组和再通组hsCRP水平差异无统计学意义,P>0.05.结论:PAI-1、sVCAM-1有可能成为溶栓抵抗的预测指标.

    作者:朱艳利;朱兴雷;吕琳;郑霞;卓晶明 刊期: 2003年第06期

  • 保留半月板的胫骨近端骨巨细胞瘤切除及膝关节重建的围手术期处理

    1990年1月~2002年2月,我们共收治13例胫骨近端单侧髁骨巨细胞瘤患者,疗效良好,报告如下.

    作者:刘巧慧;刘培来;郭公英;李德强 刊期: 2003年第06期

  • 阿奇霉素固态类脂纳米粒的制备及其体外释药特性的研究

    目的:以硬脂酸为载体材料制备阿奇霉素固态类脂纳米粒(AZM-sLN),并考察其体外释药特性.方法:采用乳化蒸发-低温固化法制备AZM-SLN;并对其形态、粒径、包封率、结构和质量、体外释药特性等进行研究.结果:得到的硬脂酸固态类脂纳米粒为类球形实体,粒径分布比较均匀,平均粒径dav=(17.75±5.00)nm;三批载药纳米粒的包封率为(81.57±1.33)%;体外释药符合Higuchi方程;用DSC分析证明纳米粒确已形成.结论:硬脂酸纳米粒有可能成为一种新型药物载体.

    作者:张典瑞;张君华;陈江飞 刊期: 2003年第06期

  • 牙科全瓷修复材料-GC陶瓷的肌肉埋植实验研究

    目的:进一步检验GC牙科全瓷材料的生物相容性.方法:选用兔龄3个月左右,体重2~3kg纯种新西兰大白兔8只,进行肌肉埋植实验.结果:实验动物均未出现局部及全身不良反应.组织学观察与阴性对照无显著性差异.结论:GC牙科全瓷材料有良好的组织相容性.

    作者:刘倩;郭庆泰;张立军;刘文侠;郭剑 刊期: 2003年第06期

  • 单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D酵母表达载体的构建

    目的:构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础.方法:应用PCR方法从HSV-Ⅰ基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD.结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%.结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒.

    作者:王战勇;王志玉;温红玲;宋艳艳;王桂亭;许洪芝 刊期: 2003年第06期

  • 肾上腺皮质激素对心肌炎小鼠肌钙蛋白Ⅰ的影响

    目的:研究肾上腺皮质激素治疗病毒性心肌炎时血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的变化.方法:对不同时期应用激素治疗的心肌炎小鼠采用化学发光法检测血清cTnI水平,并同正常对照组及病毒对照组比较,同时与心肌病理积分进行相关分析.结果:病毒性心肌炎小鼠血清cTnI显著升高,并与病理变化呈直线正相关(r=O.70).病毒性心肌炎早期和中期使用肾上腺皮质激素可明显降低cTnI水平,中期使用肾上腺皮质激素疗效尤为明显.结论:中期应用激素治疗CVB3心肌炎小鼠可明显阻止炎细胞浸润心脏组织,降低血清cTnI水平,保护心肌细胞,控制心肌炎病情发展,改善预后.

    作者:王述昀;牟道玉;马沛然;汪翼;韩秀珍;王玉林 刊期: 2003年第06期

  • 反相高效液相色谱法测定注射用盐酸氨溴索的含量

    盐酸氨溴索(ambroxol hydrochloride),化学名反式-4-[(2-氨基-3,5-二溴苄基)氨基]环己醇盐酸盐,临床用于治疗多种原因引起的痰多、咳嗽,是某些祛痰药的主要成份[1,2].

    作者:吴敬德;凌霄;席延卫 刊期: 2003年第06期

  • 缺血预处理的次数对兔缺血心肌电生理活动的影响

    目的:观察缺血预处理(IPC)的次数对缺血-再灌流过程中兔心脏电生理活动的影响,探讨IPC的抗心律失常作用机制.方法:家兔24只,随机分为对照组(C)、缺血组(IR)、一次预处理组(SPC)和两次预处理组(BPC).应用心外膜单相动作电位(MAP)探针记录技术检测缺血-再灌流过程中MAP幅度(MAPA)、复极50%时程(MAPD5o)、零相大上升速度(Vmax)及心律失常发生率.结果:各预处理组中缺血后5 min时的MAPD5o、MAPA、Vmax迅速缩短或降低(P<0.05).SPC组与IR组相比,促进了缺血20min之后MAPA、Vmax的恢复,改善了缺血20 min MAPD50的过度缩短,限制了复灌时MAPD50的过度延长(P<0.05).SPC完全抑制了缺血-再灌中室颤的发生率(0%,P<0.05).BPC组中,缺血-再灌注中室颤发生率及在缺血30 min末及再灌注末上述参数与缺血组比较均无显著差异.结论:①SPC在在体家兔心脏上具有好的抗心律失常作用,随IPC次数增加,其抗心律失常作并不增强;②缺血早期sPC迅速缩短MAPD,抗早期心律失常的机制可能是缩小了造成单向阻滞的窗口;③改善缺血晚期电生理参数,抗晚期心律失常的机制可能是减小不应期离散度;④限制复灌时MAPD过度延长,抗再灌注心律失常可能与减少内向离子流及触发活性有关.

    作者:王蓉;曾晓荣;陈连璧 刊期: 2003年第06期

  • 低温洗涤红细胞肺保护液对体外循环术后肺保护作用的研究

    目的:探讨体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)术中采用低温洗涤红细胞肺保护液实施肺动脉灌注对肺的保护效果.方法:随机选取20例风湿性单纯二尖瓣病变合并中度肺动脉高压的患者,分为肺动脉灌注组和对照组(每组各10例).灌注组在主动脉阻断后,经肺动脉根部间断灌注低温洗涤红细胞肺保护液,测定两组患者围术期的机械通气时间、肺血管阻力、白细胞比值(静脉血/动脉血)、肺循环血浆MDA含量.结果:体外循环术后灌注组机械通气时间显著低于对照组(P<0.05);各时点肺血管阻力、白细胞比值(静脉血/动脉血)、肺循环血浆MDA含量均显著低于对照组(P<0.01).结论:低温洗涤红细胞肺保护液肺动脉灌注对体外循环术后肺损伤有明显的保护作用.

    作者:宋毅;吴树明;王涛;谷兴华;杨长勇 刊期: 2003年第06期

  • 颅脑手术后发生颅内感染的危险因素探讨

    目的:探讨颅脑手术后发生颅内感染(intracranial infections,ICI)的危险因素及预防措施.方法:回顾性分析1994年1月至2002年12月我科4 877例颅脑手术患者临床资料.结果:术后发生颅内感染141例,感染率2.89%.术后有脑脊液漏、刀口皮下积液及术后急症再次手术者,术后颅内感染的发生率分别为35.34%、24.60%及15.78%,明显高于平均感染率(P<0.05);有颅脑手术史者术后ICI发生率为5.10%,幕下手术后为6.40%,手术时间4~8 h为4.40%,8 h以上为7.09%,术前使用糖皮质激素者为4.80%.结论:术后脑脊液漏、局部皮下积液及急症再次手术是术后ICI发生的危险因素.

    作者:江玉泉;徐卫萍;吴承远;刘玉光;周茂德;王磊 刊期: 2003年第06期

  • 人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响

    目的:观察人早孕绒毛膜匀浆(UPHC)和人脐静脉内皮细胞(ECHUV)对早期鼠胚体外发育的影响.方法:观察早期鼠胚在UPHC培养液及ECHUV联合培养液中的发育情况;用ELISA法检测两培养系统上清液中表皮生长因子(EGF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量.结果:在UPHC培养系统和ECHUV联合培养系统中,早期鼠胚的桑葚胚形成率分别为79.5%和81.2%,囊胚形成率分别为60.2%和61.2%,囊胚孵出率分别为41.0%和42.1%,均明显高于对照组(P<0.05).早期鼠胚A和B级桑葚胚形成率,在UPHC培养系统中分别为45.2%和32.3%,在ECHUV培养系统中分别为44.6%和27.7%,均显著高于对照组(P<0.05).UPHC培养系统和ECHUV联合培养系统中,EGF的浓度分别为(52.65±7.37)pg/ml和(58.14±3.03)pg/ml;GM-CSF的浓度分别为(11.81±3.76)pg/ml和(9.20±2.59)pg/ml;VEGF的浓度分别为(61.43±11.38)pg/ml和(256.54±9.15)pg/ml,均显著高于对照组(P<0.05);ECHUV培养系统的VEGF浓度又显著高于UPHC培养系统(P<0.01).结论:UPHC和ECHUV培养系统促进早期鼠胚体外发育,提高桑葚胚和囊胚形成率、囊胚孵出率和胚胎质量,其作用与EGF、GM-CSF及VEGF有关.

    作者:王伟;李继俊;陈子江;李明江;曲春晓 刊期: 2003年第06期

山东大学学报(医学版)杂志

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