高方
2000年6月人类基因组工作框架图的完成,标志着生命科学开始进入后基因组时代,研究的重心已逐渐转移到对生物功能的整体性研究上,其特征是产生了功能基因组学和蛋白质组学.
作者:李荣;刘晓力 刊期: 2002年第06期
目的研究人脑胶质瘤中p14ARF蛋白的缺失情况及其与临床病理的关系.方法采用链霉菌素-生物素(SP)免疫组织化学法对55例脑胶质瘤标本进行分析.结果在55例人脑胶质瘤标本中p14ARF缺失率为50.9%.Ⅰ级-Ⅱ级病例p14ARF缺失率为32%,Ⅲ级-Ⅳ级病例p14ARF缺失率为66.7%(P<0.05).结论 p14ARF蛋白缺失与脑胶质瘤的发生发展有一定的相关性,提示p14ARF基因的失活可能是脑胶质瘤恶性演变的重要因素.
作者:曹晓运;陈衔城;张玉林 刊期: 2002年第06期
目的探讨丙肝病毒感染在胆管癌中的致癌机理.方法通过分子克隆技术构建HCV-C基因重组质粒(PBK-HCVC),将其转染到胆管癌细胞(QBC939)中,经G418选择培养筛选阳性克隆,以PCR、Western blotting、免疫细胞学鉴定其表达.光镜及透射电镜观察细胞形态学改变.同时以裸鼠为研究对象进一步观察HCV对胆管癌细胞生长的影响.结果限制性内切酶反应证明HCV-C基因质粒构建成功.构建的PBK-HCVC质粒经PCR、Western blotting、免疫细胞学鉴定在QBC939细胞中有稳定表达.透射电镜见胞质空泡内球型病毒颗粒,病毒颗粒直径约50~80nm,有外膜结构.光镜下见HCV转染的胆管癌细胞恶性程度增加,在裸鼠中的致瘤性提高.结论丙肝病毒可感染胆管癌细胞并可能与胆管癌发生有关.
作者:刘小方;邹声泉;裘法祖 刊期: 2002年第06期
目的探索高致瘤性K562-n细胞系在胸腺缺陷裸小鼠体内致瘤的细胞生物学机理.方法通过极限稀释法建立K562-n细胞系致瘤率不同的克隆株,并以K562细胞为对照,对各克隆株进行裸小鼠体内外生物学特性的比较研究.结果高致瘤性的K562-B、K562-C、K562-E克隆株(致瘤率≥5/6),其软琼脂培养集落形成率,特别是大集落形成率,较对照K562细胞显著增高,(P<0.01),而无致瘤性或低致瘤性的K562-A、K562-D克隆株(致瘤率≤2/6),其集落形成率与对照无显著差别(P>0.05);超微结构观察提示高致瘤性克隆株,常染色质成分增多,异染色质少见,胞浆内微丝增多且排列紊乱;流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加.实验结果还表明裸小鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著低于对照的K562细胞(P<0.01),而低致瘤性克隆株与对照无显著差别(P>0.05);组织病理观察显示低致瘤性的克隆株及对照K562细胞,所成裸小鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润,大量肿瘤细胞被杀伤,血供丰富区尤甚,而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见,肿瘤组织增殖旺盛.结论 K562-n细胞系的裸小鼠高致瘤机理在于:1.软琼脂集落形成率增高.2.细胞增殖和DNA合成活跃,涉及细胞周期调节因素和细胞骨架成分的改变.3.对裸小鼠NK细胞杀伤的耐受性增强,所接种宿主的免疫力受到抑制,形成肿瘤组织内炎性细胞浸润减少.
作者:吕书晴;许小平;王健民;周虹;居小萍 刊期: 2002年第06期
目的研究人骨肉瘤组织中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原蛋白和mRNA的表达及其与骨肉瘤分型和分化的关系.方法用饱和苦味酸-天狼星红-偏振光镜、免疫组化LSAB和原位杂交法检测46例人骨肉瘤组织中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原蛋白和mRNA的表达,EMAL-200真彩图像分析系统进行分析和半定量测定.结果骨肉瘤组织中不仅有Ⅰ型胶原蛋白的表达(阳性率87%,灰度值171.99±14.74),且出现了Ⅱ型和Ⅲ型胶原蛋白(阳性率分别为30.4%和43.4%,灰度值分别为153.07±18.82和168.29±18.36);Ⅱ型胶原在软骨母细胞型和混合型的表达明显高于其它型(P<0.01),而Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达在各型骨肉瘤间差异无显著性;高、中、低三组不同分化程度的骨肉瘤Ⅰ型胶原表达阳性率和灰度值分别为100%,157.38±5.49;83.33%,173.58±12.61;76.92%,186.59±6.92;三组间差异有显著性(P<0.01),分化越低表达越少;天狼星红与免疫组化染色结果基本一致.Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA原位杂交与蛋白免疫组化所得结论基本一致.结论Ⅱ型胶原可作为软骨母细胞型和混合型骨肉瘤的分型参考指标,Ⅰ型胶原的表达可作为骨肉瘤分化及恶性度判断的参考指标.天狼星红染色是鉴别Ⅰ、Ⅲ型胶原简便、经济的方法之一.
作者:张惠忠;丘距世;申丽娟;郝亚萍;饶慧兰 刊期: 2002年第06期
目的对鼻咽癌放疗后残留/复发颈部转移灶采用手术治疗的疗效、并发症等进行探讨.方法对31例鼻咽癌放疗后残留颈部转移灶患者进行了手术治疗,术后进行病检以了解颈部转移灶的病理学基础;并进行随访,以确认手术治疗的效果和优缺点.结果手术治疗的3、5年生存率为65.52%和30.43%,3、5年无瘤生存率为58.63%和30.43%;死亡病例中死于远处转移者10例(52.63%),颈部术后复发者5例(26.32%),鼻咽部复发者4例(21.05%).本组病例未发生严重并发症;术后标本行病理学检查见淋巴结外有大量的孤立肿瘤细胞团,仅4例患者未见淋巴结外肿瘤细胞.结论鼻咽癌放疗后残留/复发的颈部转移灶可首选采用手术治疗;术式应采用根治性颈清扫术.
作者:张纲;李彩;刘磊;李声伟;谭颖徽;周立伟 刊期: 2002年第06期
动物模型的建立,除人类瘤株移植裸鼠外,目前以各种化学物质诱发肠道的肿瘤,亦是常用的动物模型[1].
作者:李威;朱晓玲;刘耐雪 刊期: 2002年第06期
目的探讨T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)在恶性肿瘤诊断及疗效观察中的临床价值.方法制作银染T淋巴细胞涂片,显微镜下选取转化良好的T淋巴细胞,利用KL型肿瘤免疫图像分析系统检测其Ag-NORs含量(Ag-NORs面积与细胞核面积的比值,即Ⅰ/S%).结果检测66例正常人、117例恶性肿瘤患者和25例良性肿瘤患者,发现:(1)正常人的T淋巴细胞Ag-NORs含量与良性肿瘤患者和恶性肿瘤患者均有显著性差异(P<0.05),其均值分别为:7.09±0.79、6.31±0.75、5.44±1.13.(2)正常人和良性肿瘤患者的T淋巴细胞AgNORs含量与鼻咽癌、食管癌、乳腺癌、肝癌患者之间有显著性差异(P<0.05).鼻咽癌、食管癌、乳腺癌、肝癌患者T淋巴细胞AgNORs检测的阳性率分别为62.86%、71.43%、66.67%、70%.(3)观察67例鼻咽癌患者放疗过程的不同阶段,发现放疗中和放疗结束患者的T淋巴细胞Ag-NORs均值分别为4.38±1.16和4.16±1.27,较放疗前(均值5.55±1.20)低,但放疗一年后有所上升(均值5.75±0.48).(4)观察28例食管癌患者的不同治疗阶段(术前、术后七天和术后一月),发现其T淋巴细胞AgNORs值没有显著性差异(P>0.05),分别为:5.23±1.16、5.11±1.07、5.07±1.39.结论 T淋巴细胞AgNORs检测在恶性肿瘤的诊断及疗效观察中有一定的意义.
作者:陈巧伦;梁伊仁;何丽容;林静怡;梁永能;吴兴平;蔡体育 刊期: 2002年第06期
目的探讨特素(紫杉醇注射液)在体外对人胃腺癌细胞的增殖抑制效应.方法将不同浓度的特素与三株不同分化程度的人胃腺癌细胞株共同温育,采用体外药物敏感试验及流式细胞仪技术,检测特素对胃癌细胞的杀伤率,并对细胞周期的改变进行初步分析.结果特素对三株胃癌细胞均存在显著的增殖抑制作用,对不同胃癌细胞的增殖周期影响不一.结论特素体外对人胃癌细胞有良好的杀伤作用.
作者:吴云林;孙波;乔敏敏;章永平;傅华 刊期: 2002年第06期
目的 KAI1是一种特异性抑制肿瘤转移的基因,其蛋白产物为KAI1/CD82.通过检测64例结肠腺癌石蜡切片的KAI1/CD82蛋白表达,探讨其与预后等临床因素的相关性.方法肿瘤经福尔马林固定,石蜡包埋.免疫组化方法检测石蜡切片中KAI1/CD82蛋白表达水平.生物学统计采用x2检验法.生存曲线采用Kaplan-Meier软件绘制.结果 KAI1/CD82蛋白呈现棕褐色、细颗粒状物,弥漫性分布结肠腺癌细胞膜上.KAI1/CD82蛋白在结肠腺癌组织中表达阳性率为51.56%.生物学统计结果表明,KAI1/CD82蛋白表达与淋巴结转移、远处转移及肿瘤临床分期等密切相关,有统计学意义;而与肿瘤患者的年龄和性别、肿瘤大小、分化程度及肿瘤部位等无关.KAI1/CD82蛋白阳性结肠腺癌患者的术后生存期明显高于阴性患者,前者平均术后生存期为54.27±21.51月,而后者仅为37.55±15.17月,具有统计学意义.结论 KAI1/CD82表达水平与结肠腺癌分期、淋巴结转移及远处转移关系密切,可能和其它指标一起作为判断结肠腺癌预后的指标之一,对术后进一步治疗具有一定的指导意义.
作者:陈玉强;吴乔;纪元;史大林;谢静凯;张鸣青 刊期: 2002年第06期
目的构建抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40并在大肠杆菌中表达.方法从质粒pVC85中克隆出PE40基因,与抗胶质瘤单链抗体SZ39-ScFv基因进行拼接,构建出重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40基因,并将其克隆于表达载体pET20b(+),在大肠杆菌Bl21(DE3)pLysS中以IPTG诱导表达.结果 SDS-PAGE分析显示表达产物主要以包涵体的形式存在,分子量为68kD左右,与SZ39(ScFv)-PE40的分子量理论推算值相符;Western blot显示在68kD处出现特异性显色印迹;凝胶灰度扫描显示其表达量占菌体总蛋白的20%.结论重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40可经原核表达载体,pET20b(+)在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中以包涵体形式得到较高效率的表达.
作者:罗良生;王爱东;黄强 刊期: 2002年第06期
目的观察膜活化剂吐温80合并温热作用对人胃癌细胞BGC-823的抑制效应及其对Hsp70、bcl-2、bax表达的影响.方法通过MTT法,测定0.1%及0.15%吐温80与42℃温热合并作用对BGC-823细胞的抑制作用;运用免疫细胞化学染色,观察0.1%吐温80与42℃温热合并作用后(0h、8h、16h、24h)BGC-823细胞Hsp70、bcl-2、bax表达的改变.结果吐温80合并42℃100min温热作用对BGC-823细胞具有明显的抑制效应,温热后保留吐温80继续作用将进一步增强抑制效应,合并抑制效应与吐温80浓度相关(P<0.01).合并作用能明显抑制BGC-823细胞热作用后的Hsp70表达,但bcl-2、bax的表达均增加,且bax的表达强于bcl-2,并全部分布于胞浆.结论吐温80与42℃温热有明显协同抑制肿瘤细胞生长效应,对Hsp70和bcl-2、bax表达及分布的影响提示其抑制机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
作者:陶惠红;杨虎川;陈斌;杨耀琴 刊期: 2002年第06期
近年来肺癌的发病率在逐年上升,非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌病例数的70%~80%,部分NSCLC患者在确诊时已失去了手术机会,又因机体状态差而不能耐受化疗;康莱特注射液系从传统中药薏苡仁中经现代科学方法提取的新型抗癌注射液,经过大量的临床研究,证实对肺癌尤其是NCSLC具有抗癌作用.
作者:林育红;原雪晴 刊期: 2002年第06期
目的研究人肝癌细胞H7721表面4种含岩藻糖类抗原一Lewis抗原的表达、它们与肝癌细胞在体外侵袭行为的关系,及其合成相关酶α1,3岩藻糖转移酶(FucT)5种亚型的基因表达.方法用单克隆抗体结合流式细胞仪测定Lewis抗原,用涂有Matrigel膜的转移小室测定细胞的侵袭行为,利用实时RT-PGR测定FucT的表达.结果 H7721细胞表面主要表达Slex和少量SDLex,而Lex和Slea表达极微.其中只有Slex和H7721细胞的侵袭明显相关.H-7721细胞中FucT的表达强度为FucT-Ⅳ>FucT-Ⅲ>FucT-Ⅵ≥FucT-Ⅶ,后两者表达少,而几乎完全缺乏FucT-Ⅸ.结论 Slex是H7721细胞表面多也是与细胞侵袭有关的Lewis抗原,因据报道FucT-Ⅵ催化合成Slex和SDLex的效率高于FucT-Ⅲ及Ⅶ,故可能是负责H7721细胞中Slex和SDLex合成的主要FucT,但也不排除FucT-Ⅶ和FucT-Ⅲ也参与Slex的合成.合成Lex中重要的FucT-Ⅸ的缺乏可能是Lex低表达的原因.
作者:郭鹏;张英;张夏英;陈惠黎;张延;成松久 刊期: 2002年第06期
目的总结13例中线外周T细胞淋巴瘤(MPTL)探讨其特征、治疗及预后.方法用病理、免疫酶标方法对13例MPTL进行确诊,采用CHOP方案化疗并观察其预后.结果8例CR,2例PR,其中2例CR后复发,另3例NR死亡.结论CHOP方案对MPTL有效.血和尿β2-MG升高和血清LDH升高应视为预后不良因素.
作者:谢永欣;陈钰;后盾;王爱华;沈杨;沈志祥 刊期: 2002年第06期
作者:高方 刊期: 2002年第06期
目的明确肿瘤转移相关基因TMSG-1编码蛋白在细胞内的定位.方法计算机分析TMSG-1的跨膜区,构建GFP与TMSG-1融合蛋白表达载体pEGFP-C1-TMSG-1,以LipofectAMINE介导转染人前列腺癌细胞PC-3M-1E8,荧光显微镜与共聚焦显微镜下观察.结果计算机分析表明所示,TMSG-1有四个跨膜区(aa33~48,aa64~79,aa114~130,aa158~174),推测其为跨膜蛋白.PSORTⅡ软件分析TMSG-1蛋白定位于胞浆(可靠性94.1%),具体位置为内质网66.7%、线粒体11.1%、质膜11.1%、高尔基体11.1%.显微镜下观察TMSG-1-GFP融合蛋白表达于胞浆,呈不均匀的颗粒状、环状分布;而对照的1GFP蛋白则在胞核和胞浆呈弥漫性分布.结论TMSG-1蛋白定位于细胞内膜系统;利用GFP进行的亚细胞定位具有精确、快速、可重复等优点,是研究基因与蛋白定位的有效方法.
作者:马春树;由江峰;郑杰;王洁良;崔湘琳;吴秉铨 刊期: 2002年第06期
目的探讨整合素p1(integrinp1)与脑胶质瘤恶性表型之间的关系.方法应用免疫组化SABC法和原位杂交检测integrinβ1在Ⅰ~Ⅳ级脑胶质瘤中的表达.结果 53例Ⅰ~Ⅳ级脑胶质瘤组织integrinβ1免疫组化阳性率分别为36.3%、38.5%、72.2%和81.8%,Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤阳性率明显高于Ⅰ~Ⅱ级脑胶质瘤,差异显著(P<0.05).原位杂交显示integrinβ1mRNA表达,与integrnβ1蛋白表达结果相近.结论 integrinβ1高表达与脑胶质瘤组织分化程度低、侵袭强等恶性表型密切相关,并可能对这些恶性表型起正性调节作用.
作者:郭衍;章翔;费舟 刊期: 2002年第06期
目的探讨β2-微球蛋白(β2-2 microglobulin,β2-MG)在食管癌的诊断、治疗及预后的临床价值.方法用免疫放射分析法(immunoradiometric assay,IRA)检测71例食管癌病人、32例食管良性疾病病人的血清β2-MG含量,以40例健康人做对照.并对食管癌病人做了手术前后动态检测.结果食管良性疾病组中血清β2-MG含量为1.69±0.51 mg@L-1,对照组为1.62±0.17 mg@L-1,食管癌组为2.41±0.56 mg@L-1.食管癌组高于对照组及食管良性疾病组,有显著性差异(P<0.05);术后2周血清β2-MG明显降低,与手术前相比,有显著性差异(P<0.05);在转移及复发时,其含量又升高.结论食管癌病人血清β2-MG水平升高并与肿瘤的消长有一定的相关性,对食管癌的治疗效果和预后判断有重要的临床价值.
作者:杨文锋;王善政;杨国涛;左传同 刊期: 2002年第06期
目的探讨薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制.方法应用形态学方法,流式细胞术(FACS),DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas与FasL的变化.结果薏苡仁酯对人宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂,DNA凝胶电泳显示清晰的DNA梯形条带,FACS检测到凋亡率高为13%.Annexin V标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存.在薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强,而FasL转录水平减低.结论除了坏死,凋亡也为薏苡仁酯抑癌的机制之一.薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡可能与Fas基因与FasL基因表达有关.
作者:韩苏夏;朱青;杜蓓茹;杜兰 刊期: 2002年第06期