学术投稿

Argonaute系列蛋白多克隆抗体制备和鉴定及组织定位

卢峪霞;黄志刚;陈锡美;郜恒骏;胡莺;张小燕

关键词:Argonaute蛋白, 多克隆抗体, 组织芯片
摘要:目的 制备一系列Argonaute(简称AGO)蛋白多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类组织中的分布.方法 合成特异性AGO多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和western方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行AGO的免疫组化研究.结果 通过构建系列AGO多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,成功制备了3个兔抗人AGO蛋白多克隆抗体,经ELISA及Western blot证实兔抗人AGO抗体可特异性识别AGO多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在部分肿瘤组织上皮来源细胞胞浆中呈阳性染色.结论 本项研究成功制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,为进一步研究AGO在miRNA/RNAi通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.
同济大学学报(医学版)杂志相关文献
  • SEZ6基因在人肿瘤细胞的表达

    目的 通过检测SEZ6基因在15种不同组织来源的人肿瘤细胞中的表达情况,以探讨SEZ6基因与肿瘤的发生、发展之间的关系,为进一步研究SEZ6基因的生物学功能提供理论依据.方法 体外培养15种不同组织来源的人肿瘤细胞,抽提总RNA,运用RT-PCR检测SEZ6基因的表达情况.结果 (1)SEZ6在肿瘤细胞K562、A2780、SHP-77、H1299、SGC 996、A549、H2122、SPCA、MHCC-97H、SW480、MDA-MB-435中表达,其中,在A2780、H1299、A549、MHCC-97H、SW480及MDA-MB-435细胞系中高表达,与阳性对照组无差异.另外,在6种肺癌细胞系中,5种(SHP-77、H1299、A549、H2122、SPCA)有SEZ6基因表达;(2)在高转移性肿瘤细胞MHCC-97H、SW480、MDA-MB-435、H1299和SHP-77中SEZ6高表达,与低转移性肿瘤细胞有显著性差异,P<0.05.结论 SEZ6基因在部分肿瘤细胞中表达,并在高转移性肿瘤细胞中高表达,提示SEZ6基因可能参与了肿瘤的发展过程,并与肿瘤的转移有关.

    作者:邵志华;杨敏;王璐;张军 刊期: 2009年第01期

  • 不典型骨纤维结构不良的临床分析

    目的 分析不典型骨纤维结构不良的临床特点和可能导致误诊的原因.方法 总结1991-2007年经我院手术治疗的不典型骨纤维结构不良患者24例,其中男13例,女11例;年龄4~65岁,平均26岁.单发19例,多发5例.并发病理性骨折6例.本组手术治疗方法有行单纯病灶切除术2例;病灶切除带血管腓骨重建胫骨术1例;单纯病灶切刮术4例;病灶切刮骨水泥填塞术6例;病灶切刮髂骨植骨术2例;切刮同种异体骨移植术4例;病灶切刮人工骨植骨术2例.使用气磨钻行病灶切刮术的2例,接受植骨术的15例中3例采用内固定治疗.结果 24例患者均未出现感染或皮缘坏死等手术并发症.其中20例获随访,随访时间16个月~17年,平均9.5年.20例患者病损区均无复发、恶变及术后病理性骨折,植骨处均愈合,患肢功能恢复良好.结论 不典型骨纤维结构不良临床表现多样,常规影像学检查(包括MRI)仍缺乏特异性表现,采用病损局部C臂透视下配合高速磨钻切刮术对瘤灶彻底清除,可降低局部复发率.

    作者:林娜;王家骐;梅炯;闵晓晖;祝晓忠;俞光荣 刊期: 2009年第01期

  • 经尿道电切联合气化治疗浅表性膀胱肿瘤临床分析

    目的 探讨经尿道膀胱肿瘤电切术(transurethral resection of bladder tumor,TURBt)联合经尿道膀胱肿瘤气化术(transurethral vaporization of bladder tumors,TVBt)治疗浅表性膀胱肿瘤的方法及临床疗效.方法 应用TURBt结合TVBt治疗浅表性膀胱肿瘤98例,术后常规予以丝裂霉素20 mg膀胱灌注,观察其对膀胱肿瘤的治疗效果.结果 98例膀胱肿瘤均一次切除,手术平均时间34 min,未发生大出血及膀胱穿孔,平均随访18个月,术后复发15例,远处转移1例.结论 TURBt联合TVBt治疗膀胱肿瘤具有出血少,手术视野清晰,操作简便,可多次重复,安全性高等优点.

    作者:巢月根;段强林;鄢阳;郑军华 刊期: 2009年第01期

  • 大肠癌贫血相关因素分析

    目的 分析大肠癌的部位、分期、营养状况、治疗方法、性别、年龄等因素与贫血的相关性.方法 回顾319例大肠癌患者资料,按国际抗癌联盟(UICC)大肠癌TNM分期法(2001年)进行分期,运用SPSS10.0统计软件包分析大肠癌贫血的相关因素.结果 贫血131例(41.06%),血红蛋白水平正常188例(58.94%).升结肠癌(包括盲肠癌)64例(20.06%),其他部位大肠癌255例(79.94%).低蛋白血症50例(15.70%),血清白蛋白水平正常269例(84.30%).结论 大肠癌贫血的发生与诊断部位、分期无明显相关性.结果 提示应将女性和低蛋白血症考虑为大肠癌发生贫血的危险因素.

    作者:曹传武;徐家华;徐霁充;张家兴;王杰军;李茂全 刊期: 2009年第01期

  • 早孕终止妊娠妇女焦虑抑郁情绪现患率和相关危险因素分析

    目的 了解早孕终止妊娠妇女焦虑、抑郁情绪现患率以及相关危险因素,为进一步前瞻性研究和干预提供依据.方法 于2007年5月18日-7月20日期间连续入选同济大学三所附属医院妇产科符合纳入标准的348名孕早期妇女,采用流行病学调查表及综合医院焦虑抑郁情绪量表(HAD量表)实施问卷调查.结果 该人群焦虑抑郁症状现患率为21.8%;经趋势卡方检验发现,低年龄组,焦虑抑郁率显著升高(P<0.05);无痛人流组焦虑抑郁率较药物流产组和普通人流组低(P<0.05);同时有妇科疾病史的相对危险度为1.928(95%CI:1.024~3.630).结论 早孕终止妊娠期妇女焦虑抑郁症状现患率较高,应加强该人群性健康及孕健康教育;尤其是针对年龄偏小的早孕人群和有妇科疾病史的人群需给以必要的卫生干预措施.

    作者:王净;乔永霞;李觉 刊期: 2009年第01期

  • 悬吊式无气腹腹腔镜在子宫肌瘤切除术中的应用

    目的 比较悬吊式无气腹腹腔镜与传统腹腔镜在子宫肌瘤切除术中的可行性、安全性以及术后恢复情况.方法 112例子宫肌瘤患者被随机分成悬吊式无气腹腹腔镜切除子宫肌瘤组(n=58)和传统气腹腹腔镜切除子宫肌瘤组(n=54).所有患者均由相对固定的一组医生进行手术,记录手术时间、患者术中的出血量、切除肌瘤数量和大小以及术后患者腹腔引流量、体温恢复时间、出院时间等情况.结果 两组均能完成子宫肌瘤的切除,与传统腹腔镜手术相比,悬吊式腹腔镜组手术时间短,术中及术后出血量较少,差异有统计学意义.在术后体温恢复正常时间、肛门排气和平均住院时间方面差异无统计学意义.结论 悬吊式无气腹腹腔镜与传统腹腔镜均能成功地进行子宫肌瘤的切除,但是悬吊式无气腹腹腔镜在子宫肌瘤切除术方面显示出更多的优势.

    作者:高阗;王建军;樊伯珍;郭飒;张弋;李怀芳 刊期: 2009年第01期

  • 超声组织谐波成像对浅表脏器疾病的诊断价值

    目的 探讨组织谐波成像在浅表脏器疾病诊断中的临床应用价值.方法 对97例甲状腺、乳腺疾病患者分别进行传统超声成像及组织谐波成像.采用双盲方法对上述影像资料进行评价分析.结果 组织谐波成像图片评价明显优于传统超声成像,经统计学处理,P<0.05,二者比较有差异性.结论 组织谐波成像可以提高浅表脏器病变图像的质量,有重要的临床应用价值.

    作者:胡小涛;陈苏宁;陈建忠;王硕;张天杰 刊期: 2009年第01期

  • 肢体骨肿瘤活检失误临床分析

    目的 分析临床上骨肿瘤活检手术中的常见失误,降低活检手术给骨肿瘤保肢手术带来的不利影响.方法 分析55例骨肿瘤活检手术失误患者的所有临床资料,包括男25例,女30例,平均年龄26.6岁.肿瘤部位包括股骨近端12例,股骨远端13例,胫骨上端17例,胫骨干及胫骨远端3例,腓骨近端2例,肱骨近端及肱骨干5例,桡骨远端3例.肿瘤诊断:骨肉瘤28例,皮质旁骨肉瘤3例,骨巨细胞瘤6例,恶性纤维组织细胞瘤6例,软骨肉瘤6例,恶性淋巴瘤1例,转移癌3例,尤文氏瘤2例.结果 55例患者中,17例因为活检手术失误及相关并发症而行截肢手术,占30.9%.4例切除活检失误均为切除范围不足.9例穿刺活检失误中,6例穿刺活检的入路太靠近主要血管神经束,3例发生诊断失误.42例切开活检失误中,以手术入路失误为多,共31例,占73.8%.切开活检并发症中,开窗不当造成病理性骨折2例,止血不彻底形成较大血肿7例,术后引流放置不恰当5例.结论 骨肿瘤活检手术失误严重影响骨肿瘤患者的后续治疗,临床上应引起足够的重视.

    作者:王志远;梅炯;陈雁西;倪明 刊期: 2009年第01期

  • 离体大鼠缺血性心室颤动模型的建立

    目的 建立Langendorff灌流的离体大鼠缺血性心室颤动模型.方法 80只健康Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠,随机分为正常流量灌流组、正常流量灌流+burst刺激组、低灌流模拟心肌缺血组、低灌流模拟心肌缺血+burst刺激组,每组20只.采用Langendorff灌流装置行主动脉逆行灌流,通过缺血和短暂的burst刺激诱发心室颤动.结果 正常流量灌流组、正常流量灌流+burst刺激组、低灌流模拟心肌缺血组心室颤动的发生率和持续率均为0%,而低灌流模拟心肌缺血+burst刺激组心室颤动的发生率为80%且持续率为50%(P<0.05).结论 在Langendorff心脏灌流系统中通过低灌流模拟心肌缺血,并给予burst刺激模拟应激事件,可以稳定地诱导心室颤动的发生.

    作者:刘颖;梁丹丹;张弘;刘懿;肖俊杰;陈义汉 刊期: 2009年第01期

  • 多西他赛二线治疗非小细胞肺癌每周方案的临床分析

    目的 研究和评价单药多西他赛二线治疗非小细胞肺癌每周方案的临床疗效和不良反应.方法 对2005年11月-2007年3月同济大学附属肺科医院收治的60例一线治疗失败的非小细胞肺癌患者,应用单药多西他赛第1天和第8天用药,剂量为35 mg/(m2*次)化疗,21 d为1个周期,每个周期评价毒性反应,至少化疗2个周期后评价疗效.结果 60例患者共经历203个周期多西他赛化疗,年龄39~78岁, 60例患者完全缓解(complete response,CR) 0例,部分缓解(partial response,PR) 7例(11.7%),稳定(stable disease,SD)19例(31.6%),疾病控制率(disease control rate,DCR)43.3%,无疾病进展生存时间(progression free survival,PFS)14周.结论 单药多西他赛每周方案二线治疗非小细胞肺癌患者疗效较好,可延缓患者病情进展,不良反应相对较轻, 适合在一般状况较差有合并疾病的患者二线治疗中应用.

    作者:孙辉;张玲;周崧雯;陈晓霞;徐清华;周彩存 刊期: 2009年第01期

  • 心肺复苏患者血清S100B蛋白检测的临床价值

    目的 观察血清S100B蛋白水平对心脏停搏(cardiac arrest,CA)患者心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后脑损伤早期诊断及预后评估的价值.方法 将38例患者CPR后根据2个月后是否恢复意识分为两组,检测患者CPR后第3 h、6 h、24 h、和72 h的血清S100B蛋白水平,分析两组在不同时间点S100B蛋白水平的差异,并与健康对照组进行比较.结果 (1) 意识未恢复组血清S100B蛋白水平在CPR后第3 h、6 h、24 h和72 h均显著高于意识恢复组及对照组(P<0.01);(2) 意识恢复组CPR 后第3 h、6 h、12 h和72 h的S100B蛋白水平较健康对照组均显著增高(P<0.01或P<0.05).结论 血清S100B蛋白水平有助于评估患者CPR后的脑损伤程度及意识能否恢复,对CPR后脑复苏的评估具有重要价值.

    作者:杨建;徐兵;庄育刚;彭沪;崔世涛 刊期: 2009年第01期

  • 儿童腹腔内炎性肌纤维母细胞瘤的诊治

    目的 报道和总结儿童腹腔内炎性肌纤维母细胞瘤(inflammatory myofibroblastic tumor,IMT)诊疗经验,以提高对该病的认识和诊疗水平.方法 收集总共10例儿童腹腔内IMT(本院2例,文献报道8例)的临床资料,分析和总结其主要临床表现、辅助检查、病理学诊断依据以及治疗经过和疗效.结果 儿童腹腔内IMT多见于学龄期儿童,女性多于男性.首发症状为阵发性腹痛,腹部体检和计算机断层扫描影像能发现肿瘤病灶;常伴有缺铁性贫血、白细胞和血小板增高.病理学检查可以确诊,镜检可见密集的梭形肿瘤细胞,伴有炎性细胞浸润;免疫组化为确诊的主要依据,波形蛋白(Vimentin,Vim)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle action,SMA)和肌特异性蛋白(muscle specific albumin,MSA)等表达阳性.儿童腹腔内IMT多为孤立型肿瘤,可与周围组织黏连,手术全切除预后良好;少数肿瘤广泛播散、恶性程度较高者,术后需行有效的全身化疗.初步结果显示术后及时使用蒽环类抗生素、环磷酰胺和大剂量氨甲喋呤,可能有助于提高恶性程度较高的患儿的远期疗效.结论 儿童腹腔内IMT是较为罕见的间叶性肿瘤,诊断必须依靠病理学检查和免疫组化检测;手术切除是大多数患儿的主要有效疗法,对少数恶性程度较高病例术后辅以全身化疗方案有待探讨.

    作者:邵越霞;谢晓恬;蒋莎义;匡寒琴 刊期: 2009年第01期

  • AMI患者PCI后血浆黏附分子表达水平的变化

    目的 观察急性心肌梗死患者介入治疗后黏附分子表达水平的动态变化,探讨卡维地洛对黏附分子表达的影响,及其在防治心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 急性心肌梗死患者共60例,随机分为对照组(不应用β受体阻滞剂,n=30)和卡维地洛组(n=30)两组.于术后即刻、7 d、3个月用间接免疫荧光法动态检测CD11b、CD18、ICAM-1以及L-selectin的表达.结果 两组患者接受PCI术后外周血黏附分子表达水平呈动态变化,卡维地洛组与对照组相比,CD11b、CD18、ICAM-1以及L-selectin的表达水平均明显下降,差别具统计学意义.结论 卡维地洛可降低AMI患者黏附分子表达水平,在防治心肌缺血再灌注损伤中具有一定积极作用.

    作者:杜蕾;蒋金法 刊期: 2009年第01期

  • Bp3抗耐氟康唑白念珠菌活性研究

    目的 研究五环三萜类活性单体(saikosaponines,Bp3)的抗耐氟康唑白念珠菌(fluconazole-resistant candida albicans,FRCA)作用及其与氟康唑的协同作用.方法 对柴胡进行有效成分分离,并对其抗菌作用明确的成分进行结构测定,确定其分子结构,得到结构明确的单体Bp3,参照(national committee for clinical laboratory standard,NCCLS)标准,测定Bp3对20 株FRCA的低抑菌浓度值(minimal inhibitory concentration, MIC)及其与氟康唑的协同作用.结果 联合用药时显著减少了每一药物的MIC值,在20株FRCA均表现为协同或相加作用方式.结论 结构明确的五环三萜类单体Bp3对FRCA有一定的抑制作用,且与氟康唑有协同或相加作用.

    作者:高清云;沈亮亮;施伟民;叶元康;潘胜利;武济民 刊期: 2009年第01期

  • 基于三维CT的活体颌骨种植相关解剖结构测量

    目的 建立与口腔种植相关的活体颌骨解剖结构测量方法,使颌骨解剖结构的精确测量成为可能.方法 对9名正常咬合志愿者进行以下操作:全口取模、制取模板、标记放射模板参照阻射点并佩戴该模板进行CT扫描,所得数据由专用牙颌测量软件进行测量分析.结果 建立的方法可以精确地对颌骨进行线距、角度的测量,包括:牙槽嵴顶与下牙槽神经管、颏孔、上颌窦底、鼻底的距离,牙槽嵴的近远中距及颊舌径,上下牙间覆牙合、覆盖关系及相关夹角等.结论 基于三维CT技术的计算机辅助测量方法可用于精确测量颌骨解剖结构.

    作者:邱甜甜;黄远亮;尹吉林;黄玉峰;王利生;罗远 刊期: 2009年第01期

  • 复方苦参注射液对乳腺癌术后化疗患者免疫功能的影响

    目的 探讨复方苦参注射液对乳腺癌术后化疗患者细胞免疫功能的影响.方法 60例乳腺癌术后化疗患者随机分为复方苦参注射液观察组和对照组;两组在进行术后化疗的同时,复方苦参注射液观察组静脉点滴复方苦参注射液,对照组不加用该药;两组术后1周进行CAF方案化疗,每21 d为1周期,共化疗6个周期,化疗前1 d及化疗1周后取外周血测定血常规、免疫球蛋白及T细胞亚群.结果 化疗后:对照组中,患者的外周血白细胞计数为(3.3±1.7)×109*L-1,淋巴细胞转化率为(8.1±2.7)%;而复方苦参注射液观察组中外周血白细胞计数为(5.1±2.5)×109*L-1,淋巴细胞转化率为(18.6±2.9)%,高于对照组(P<0.001).在复方苦参注射液观察组中,CD4及CD8阳性细胞的百分率分别为(38.6±2.2)% 和(42.4±1.7)%,对照组分别为(30.4±1.5)%和(25.4±1.5)%,高于对照组(P<0.001).两组免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平差异有显著性,复方苦参注射液观察组高于对照组(P<0.05).结论 复方苦参注射液具有降低化疗药物的毒性、改善肝功能、升高血像、增强患者免疫功能的作用.

    作者:孙学民 刊期: 2009年第01期

  • Argonaute系列蛋白多克隆抗体制备和鉴定及组织定位

    目的 制备一系列Argonaute(简称AGO)蛋白多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类组织中的分布.方法 合成特异性AGO多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和western方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行AGO的免疫组化研究.结果 通过构建系列AGO多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,成功制备了3个兔抗人AGO蛋白多克隆抗体,经ELISA及Western blot证实兔抗人AGO抗体可特异性识别AGO多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在部分肿瘤组织上皮来源细胞胞浆中呈阳性染色.结论 本项研究成功制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,为进一步研究AGO在miRNA/RNAi通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.

    作者:卢峪霞;黄志刚;陈锡美;郜恒骏;胡莺;张小燕 刊期: 2009年第01期

  • 超声对肝外胆管梗阻的病因诊断价值

    目的 探讨超声对肝外胆管梗阻性疾病的病因诊断价值.方法 对我院2006-2007年收治并手术的91例肝外胆管梗阻性疾病患者的超声声像图进行回顾性分析和总结,并与手术病理结果对比分析,总结不同病因引起肝外胆管梗阻的超声影像特点,从而提高超声诊断率.结果 91例肝外胆管梗阻性疾病患者的超声病因诊断总符合率89.0%(81/91),其中胆管结石符合率94.7%(54/57),胰腺炎符合率66.7%(2/3),胆管炎符合率66.7%(2/3),胰头癌符合率84.6%(11/13),壶腹部癌符合率81.8%(9/11),胆管癌符合率75%(3/4).误诊10例(10.9%),分别为胆管结石3例,胰腺炎与胆管炎各1例,胰头癌与壶腹部癌各2例,胆管癌1例.结论 超声对肝外胆管梗阻的病因诊断与手术病理结果符合率高,具有较高的病因诊断价值,可作为肝外胆管梗阻性疾病检查的首选方法.

    作者:杨琳;马方;吕琛;黄晓 刊期: 2009年第01期

  • 不同手术方法对动眼神经功能修复的影响

    目的 研究不同手术修复方法对大鼠动眼神经损伤后功能重建的影响与机制.方法 健康成年SD大鼠35只,随机分4组,其中正常对照组(5只)动眼神经不损伤,其余30只均分为3组,在动眼神经海绵窦段将动眼神经锐性切断后分别将断端用羊肠线缝合、生物胶粘合、血凝块粘合修复神经,术后动态观察神经功能恢复情况并进行动眼神经系统解剖学、神经组织学研究.结果 以血凝块粘合和直接缝合神经断端实验组大鼠术后眼外肌功能恢复程度均优于生物胶粘合组大鼠,前两组实验大鼠支配眼外肌的中脑躯体运动神经元、新生神经纤维总数量明显多于后者,且前两个组实验大鼠新生神经纤维对上直肌特异性支配优于后者.结论 以直接缝合和血凝块粘合神经断端的手术方法优于生物胶粘合神经断端的方法,关键因素是两断端对齐并稳定固定,减少吻合口疤痕组织形成,进入靶器官新生神经纤维数量以及对靶器官特异性支配的情况决定神经功能恢复程度.

    作者:刘宁涛;潘庆刚;李世亭;黄晓松;王飞;管宇航 刊期: 2009年第01期

  • 基质金属蛋白酶-9在女性盆底功能障碍患者中的表达

    目的 研究女性盆底功能障碍(pelvic floor dysfunctions,PFD)患者尿道中段阴道壁组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及意义.方法 采用免疫组化S-P法检测47例单纯性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)、49例单纯性压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)和 20例对照患者尿道中段阴道壁组织中MMP-9的表达.结果 SUI组、POP组MMP-9表达均明显高于对照组(P<0.001).在不同程度POP患者中,检出阳性率分别为Ⅰ度41.7%(5/12)、Ⅱ度81.8%(18/22)、Ⅲ度92.3%(12/13).MMP-9随着盆底器官膨出的程度增加,其表达增强,与膨出程度呈正向变化趋势(r=0.525,P<0.001);在不同程度SUI患者中,检出阳性率分别为Ⅰ度41.1%(7/17)、Ⅱ度81.3%(13/16)、Ⅲ+Ⅳ度87.5%(14/16).MMP-9随着SUI严重程度增加,其表达增强,与严重程度呈正向变化趋势(r=0.613,P<0.001).结论 MMP-9与PFD密切相关,MMP-9的过度表达可能参与了PFD的发生发展过程.

    作者:姜敏;储怡星;范基农;龚晓霖;沈爱群 刊期: 2009年第01期

同济大学学报(医学版)杂志

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