学术投稿

目的基因慢病毒载体的构建与包装

王孟丽;马建党;侯小霞

关键词:慢病毒载体, 构建, 目的基因, 包装
摘要:目的 探讨Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体的构建与包装.方法 从含有Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4的质粒中获取目的基因,将目的基因与酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其连接产物转化细菌感受态细胞,对长出的阳性克隆进行测序和比对分析,并对长出的阳性克隆进行PCR鉴定,通过三质粒系统共转染293T细胞对慢病毒进行包装并进行滴度测定.结果 成功构建并包装出Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体,基因测序结果与目标序列完全一致;PCR鉴定结果显示,4个目的基因均为阳性;Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体滴度分别为1×109,1×109,1×109,2×109TU/mL.结论 通过三质粒系统可构建并包装Oct4,Sox2,c-Myc及KIf4-慢病毒载体.
中华实用诊断与治疗杂志相关文献
  • 染色体9p21上rs1333049单核苷酸多态性与新疆维吾尔族及汉族心肌梗死的相关性分析

    目的 探讨染色体9p21上rs1333049基因多态性在新疆维吾尔族(维族)和汉族心肌梗死患者中的分布特征.方法 227例心肌梗死患者(梗死组)(维族115例,汉族112例)和192例冠状动脉造影正常者为对照组(维族92例,汉族100例),应用TaqMan单核苷酸多态性基因分型方法进行基因分型,比较维、汉族梗死组和对照组rs1333049基因型频率和等位基因频率的分布情况.结果 维、汉族梗死组rs1333049位点基因型分布频率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);维族梗死组等位基因分布频率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),汉族梗死组等位基因分布频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);维、汉族梗死组rs1333049位点CC与CG基因型分布频率高于对照组(P<0.05);梗死组维族CC与CG基因型分布频率高于汉族(P<0.05),维族C与G等位基因与汉族比较差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,rs1333049的CC表型是新疆维、汉族心肌梗死的独立危险因素.结论 染色体9p21的rs1333049位点CC与CG基因型为维族心肌梗死的易感相关危险基因型;C等位基因为维族心肌梗死患者患病的危险等位基因.

    作者:杜蓉;李国庆;彭辉;程慧;郭自同;余小林;王凤霞 刊期: 2012年第08期

  • HBcAg和HBeAg对人树突状细胞成熟和功能的影响

    目的 观察乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)和乙型肝炎e抗原(hepatits B e antigen,HBeAg)对人树突状细胞的影响.方法 分离20例健康者外周抗凝血淋巴细胞,将贴壁细胞加重组人白细胞介素4和重组人粒巨噬细胞集落刺激因子培养至第7天,将树突状细胞分为HBcAg组、HBeAg组和树突状细胞对照组,分别加入HBcAg、HBeAg对树突状细胞刺激培养至第10天,检测刺激培养后细胞表型与分泌的细胞因子及其对树突状细胞体外诱导的淋巴细胞增殖效应和淋巴细胞毒活性的影响.结果 HBcAg组、HBeAg组树突状细胞表面分子(CD83,CD86,HLA- ABC)水平和分泌干扰素-γ、白细胞介素-12p70水平、体外诱导淋巴细胞增殖效应及淋巴细胞毒活性与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);HBcAg组增强树突状细胞的分子表达、分泌白细胞介素-12p70及体外诱导淋巴细胞毒活性与HBeAg组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 HBcAg和HBeAg可增加人树突状细胞表达成熟活化的分子、分泌细胞因子,增强树突状细胞体外诱导淋巴细胞增殖效应及淋巴细胞毒活性.

    作者:石庆凤;刘琛志;袁建国;李庆方;曾维群;陈敏;任红 刊期: 2012年第08期

  • 体外反搏治疗糖尿病肾病的价值

    目的 探讨体外反搏治疗糖尿病肾病的临床价值.方法 糖尿病肾病患者216例随机分为2组,常规治疗108例为对照组,在常规治疗基础上加行体外反搏治疗108例为治疗组,对治疗前、后24 h尿白蛋白和β2微球蛋白水平进行比较.结果 体外反搏治疗后,治疗组糖尿病肾病Ⅲ与Ⅳ期患者24 h尿白蛋白、尿及血β2-微球蛋白较对照组明显减少(P<0.01,P<0.05),较治疗组治疗前明显下降(P<0.01,P<0.05),治疗组糖尿病肾病V期患者治疗后与治疗前及对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 体外反搏治疗可降低早期糖尿病肾病24h尿白蛋白、尿及血β2微球蛋白水平,对患者肾脏功能有保护作用.

    作者:谢玉谦;陈亚利;刘晓康;丁艳;伍珊;陈萍;梁亚苹 刊期: 2012年第08期

  • 99锝-亚甲基双膦酸盐联合钙剂治疗乳腺癌术后骨质疏松症疗效观察

    目的 观察99锝-亚甲基双膦酸盐联合碳酸钙D3及活性维生素D3治疗乳腺癌术后骨质疏松症的疗效和安全性.方法 乳腺癌术后骨质疏松症患者130例均给予99锝-亚甲基双膦酸盐+碳酸钙D3+活性维生素D3治疗,比较治疗前及治疗1 a后患者骨密度值及血清钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽、1,25-二羟维生素D3等水平变化.结果 治疗后腰椎(L1-4)及左髋股骨颈、大转子及小转子骨密度均较治疗前增加(P<0.05);血清骨钙素水平较治疗前增高(P<0.05),Ⅰ型胶原交联羧基末端肽较治疗前下降(P<0.05);血清钙、磷、碱性磷酸酶及1,25-二羟维生素D3水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 39锝-亚甲基双膦酸盐联合碳酸钙D3及活性维生素D3治疗乳腺癌术后骨质疏松症疗效满意.

    作者:李镜发;邹德环;佘立群;朱旭生 刊期: 2012年第08期

  • 白塞病60例临床特点分析

    目的 总结白塞病的临床特征,提高诊断准确率.方法 回顾性分析60例白塞病患者的临床资料.结果 以口腔溃疡、生殖器溃疡、皮肤损害、眼部损害为首发症状者分别为20,19,12,9例;随病情进展,60例患者临床表现为口腔溃疡并生殖器溃疡22例,口腔溃疡并皮肤损害14例,口腔溃疡并眼部损害11例,口腔溃疡、生殖器溃疡、皮肤损害并眼部损害13例.结论 正确认识白塞病多器官损害的特点是早期诊断的关键.

    作者:闫磐石 刊期: 2012年第08期

  • 槲皮素抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促凋亡机制的研究

    目的 观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 人肝癌HepG2细胞系,分为6组,A~E组加入终浓度分别为12.5,25.0,50.0,100,0,200.0μmol/L槲皮素,F组为空白对照组,加入等量营养液.采用MTT法及流式细胞检测技术检测各组人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性,应用免疫细胞化学技术检测细胞中Bcl 2及Bax蛋白的表达情况.结果 槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,作用48h后,A~E组抑制率与凋亡率高于F组,差异均自统计学意义(P<0.05);槲皮素作用HepG2细胞24 h后,D组G1期细胞比率高于F组,差异有统计学意义(P<0.05),S和M期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);作用48 h后,D组Bcl- 2和Bax表达灰度值与F组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过激活线粒体凋亡途径来促进细胞凋亡.

    作者:卢创新;周云;薛飞;王文玉;李晓燕;郭志松 刊期: 2012年第08期

  • 淋巴细胞主动免疫治疗原因不明复发性流产后HLA-DR抗体检测及意义

    目的 探讨淋巴细胞主动免疫治疗原因不明的反复自然流产后患者免疫功能变化及其对妊娠结局的影响.方法 选取确诊为原因不明的复发性流产患者350例,应用自身对照法,采用配偶或第三方个体淋巴细胞主动免疫治疗,检测和记录免疫治疗前后患者封闭抗体( HLA- DR抗体)的变化及妊娠成功率.结果 符合入组条件321例,经淋巴细胞主动免疫治疗1个疗程后,封闭抗体转为阳性195例(60.75%),2个疗程后累计转为阳性315例(98.13%);封闭抗体转为阳性患者中309例(98.09%)妊娠成功,6例封闭抗体持续阴性者仅3例妊娠成功.结论 淋巴细胞主动免疫治疗可有效提高原因不明复发性流产患者妊娠成功率;封闭抗体检测对评估原因不明复发性流产有一定价值.

    作者:刘红彦;廖世秀;侯巧芳;郭谦楠;郭社珂;何淼;楚艳 刊期: 2012年第08期

  • 囊型肝包虫病影像学诊断

    肝包虫病是畜牧地区常见的一种人兽共患病,是危害牧区人民健康以及使牧区人民因病致贫、因病返贫的重要原因.影像学是囊型肝包虫病的主要诊断方法,本文从影像学分型、影像学表现等方面对囊型肝包虫病的影像学诊断进展作一综述.

    作者:刘桂生 刊期: 2012年第08期

  • 冠心病患者缺血再灌注治疗后血清基质金属蛋白酶-2及-9水平变化及临床意义

    目的 探讨冠心病患者缺血再灌注治疗后血清基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinase,MMP)-2及MMP-9水平变化及其意义.方法 35例急性心肌梗死急诊行经皮冠状动脉介入术患者(A组)、35例择期经皮冠状动脉介入术患者(B组)及32例行冠状动脉造影术除外冠心病患者为对照组(C组),采用酶联免疫吸附法测定术前1d、术后1,3,5d血清MMP-2及MMP 9水平.结果 术前1d,A组血清MMP 2与MMP 9水平高于B组,B组高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);C组术后1,3,5d血清MMP 2及MMP -9水平与术前比较差异无统计学意义(P>0.05),A,B组术后1 d与3d血清MMP 2及MMP 9水平明显高于术前(P<0.05),术后5d与术前比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 血清MMP 2及MMP-9表达水平增高可能是心肌缺血再灌注损伤的机制之一,有可能成为经皮冠状动脉介入术后评价心肌缺血再灌注损伤严重程度的较好预测因子.

    作者:李科;刘俊明;黄文军;高霞;谢伟 刊期: 2012年第08期

  • 薄层及增强CT扫描诊断孤立性肺结节价值

    目的 评价CT薄层及增强扫描在孤立性肺结节诊断中价值.方法 经手术或组织活检病理证实的186例肺部孤立性肺结节患者均行CT平扫、增强扫描及薄层扫描,并与组织病理结果进行对照,比较3种方法诊断肺部疾病的准确率.结果 CT平扫、增强扫描及薄层扫描诊断恶性结节的准确率分别为78.5%,87.1%,88.2%;薄层扫描发现恶性征象结节计数高于CT平扫(z=-5.72,P=0.000);以组织病理结果为金标准绘制增强扫描ROC曲线,ROC曲线下面积为0.537.结论 CT薄层扫描可较清晰显示病灶细微结构,对诊断肺结节有重要价值.

    作者:孙槟;赵绍宏;聂永康 刊期: 2012年第08期

  • N-乙酰半胱氨酸对老年糖尿病患者造影剂肾病的预防作用

    目的 观察N-乙酰半胱氨酸(N -acetylcysteine,NAC)对肾功能正常或轻度肾功能不全的老年糖尿病患者造影剂肾病的预防作用.方法 拟采用低渗造影剂进行增强CT检查70例年龄>60岁、糖尿病史1 a以上的正常或轻度肾功能不全患者,随机分为NAC组与对照组各35例,NAC组造影前1d及造影后连续2d口服NAC,600 mg/次;2组均给予水化治疗;比较造影前和造影后24,48 h 2组血肌酐、尿素氮和血胱抑素C水平及造影剂肾病发生率.结果 NAC组无造影剂肾病发生,对照组发生造影剂肾病2例,2组比较差异无统计学意义(P>0.05);增强CT检查后48h,NAC组血肌酐、尿素氮和血胱抑素C水平低于对照组,估测肾小球滤过率水平高于对照组(P<0.05).结论 NAC联合水化治疗对肾功能接近正常的老年糖尿病患者造影剂肾病有一定预防作用.

    作者:王瑞强;王毅;蒲娟娟;刘闯;于洁;李涛 刊期: 2012年第08期

  • 彩超诊断肠系膜上动脉病变的价值

    目的 探讨彩超诊断肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)病变的价值.方法 因腹痛就诊拟诊SMA病变患者104例,均行彩超检查,观察SMA管腔有无斑块、血栓、动脉瘤等,有无狭窄或闭塞,并测量狭窄处及腹主动脉 血流速度;对超声诊断SMA病变者行CT血管造影(CT angiography,CTA)检查,并进行结果对比.结果 超声检查共检出 SMA病变17例,其中粥样硬化斑块并重度狭窄11例,闭塞2例(1例为完全闭塞,1例为起始段闭塞并侧支循环形成),主动脉夹层累及SMA致血栓形成2例,SMA动脉瘤2例,均经CTA证实超声诊断.结论 彩超对SMA病变诊断价值较高,并与CTA具有良好一致性.

    作者:王贤明;贺祎;张文君;刘超 刊期: 2012年第08期

  • 人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞及鉴定

    目的 探讨5-氮胞苷作为诱导剂体外诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)分化为心肌样细胞,并对其进行鉴定.方法 采用密度梯度离心法与贴壁培养法相结合分离培养hMSCs,以5-氮胞苷诱导第3代hMSCs,24 h后继续培养,观察细胞形态学的变化;培养4周,采用免疫细胞化学法对分化的心肌样细胞特异性蛋白结蛋白、心肌肌钙蛋白Ⅰ进行鉴定.结果 培养7d后hMSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观;5-氮胞苷诱导7 d后细胞呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成,免疫细胞化学法检测人心肌特异性蛋白结蛋白、心肌肌钙蛋白Ⅰ表达阳性,而未经诱导的相同培养时间的hMSCs中均未见表达.结论 hMSCs体外在5氮胞苷诱导下可定向分化为心肌样细胞.

    作者:银广悦;张继领;陈素萍;张龙;张明 刊期: 2012年第08期

  • α-酮酸联合醋酸钙对中老年腹膜透析患者代谢紊乱的影响

    目的 观察α-酮酸联合醋酸钙对中老年腹膜透析患者营养状况和代谢紊乱的影响.方法 行持续性不卧床腹膜透析(continuance ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)中老年患者63例随机分为3组,A组21例口服碳酸钙D3,B组21例口服碳酸钙+复方α-酮酸,C组21例口服醋酸钙+复方α-酮酸,3组疗程均为8周,比较3组治疗前后血清钙、磷及血红蛋白、血浆白蛋白水平.结果 3组治疗后血清磷水平均较治疗前下降(P<0.05),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);3组治疗后血清钙水平均高于治疗前(P<0.05),A,B组高于C组(P<0.05);A组治疗后血红蛋白及血浆白蛋白水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05),B,C组较治疗前增高(P<0.05).结论 α-酮酸与醋酸钙联合应用可有效降低CAPD患者高磷血症,避免血钙升高,改善患者营养状况.

    作者:李海剑;刘慧;陶雅非;任东升;李玉东;张红霞 刊期: 2012年第08期

  • 鸦胆子油乳注射液联合伽玛刀治疗脑胶质瘤疗效观察

    目的 观察鸦胆子油乳注射液联合伽玛刀治疗脑胶质瘤的疗效及不良反应.方法 脑胶质瘤患者69例随机分为2组,对照组33例给予伽玛刀治疗,治疗组36例给予伽玛刀联合鸦胆子油乳注射液治疗,比较2组治疗后3个月疗效、脑水肿及不良反应发生率.结果 治疗组近期缓解率(75.0%)较对照组(69.7%)高,但差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后1,3个月脑水肿发生率比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后1个月CD3+及CD4+水平较治疗前下降(P<0.05),CD8+水平及CD4+/CD8+较治疗前增高(P<0.05);2组白细胞计数下降程度比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 鸦胆子油乳注射液联合伽玛刀治疗脑胶质瘤可提高患者生活质量及免疫功能,降低不良反应及脑水肿发生率.

    作者:杨丽型;马晨辰;张建新;李学海 刊期: 2012年第08期

  • 机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者N-末端B型脑钠肽前体测定意义

    目的 探讨行机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)急性加重期患者N末端B型脑钠肽前体(N terminal probraintype natriuretic peptide,NT ProBNP)水平变化及其临床意义.方法 45例COPD急性加重期患者在抗感染、解除气道痉挛、祛痰等常规治疗基础上,均给予无创机械通气治疗,采用双水平气道正压(bi-level positive airway pressure,BiPAP)模式;呼气未正压为0.392~0,784 kPa,辅助通气起始压力1.00~1.47 kPa,并根据患者病情调整吸入氧浓度、压力;观察治疗前及治疗3,12h后患者血浆NT- proBNP水平、呼吸频率、心率、平均动脉压、pa( CO2)等指标.结果 治疗3,12h后,患者呼吸频率、心率、平均动脉压、pa(CO2)、NT-proBNP水平均较治疗前降低(P<0.05),pa(O2)较治疗前增高(P<0.05);治疗12h后各指标水平与治疗3h后比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧可能是心功能正常的COPD急性加重期患者NT-proBNP水平升高的主要原因.

    作者:刘志刚;黎志忠;吴杰;张晓宇 刊期: 2012年第08期

  • 大剂量阿托伐他汀对中青年急性冠状动脉综合征患者介入治疗术后高敏C反应蛋白水平的影响

    目的 探讨早期大剂量阿托伐他汀对行经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗的中青年急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者高敏C反应蛋白(high sensitivity C -reactive protein,hs- CRP)水平的影响.方法 经冠状动脉造影检查证实中青年ACS患者80例,随机分为治疗组和对照组各40例,2组均行PCI治疗,术后常规应用抗血小板聚集、抗心肌缺血、调脂、稳定斑块等药物;在常规治疗基础上,治疗组术后给予阿托伐他汀钙片60 mg/次,对照组给予阿托伐他汀钙片20 mg/次,均1次/d,睡前顿服;比较2组PCI术前以及术后第7,15,30天患者血清hs-CRP、总胆固醇(cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平,比较2组严重心ⅡL管事件发生率及不良反应.结果 术后第7,15,30天2组hs-CRP水平均较术前降低(P<0.05),治疗组下降优于对照组(P<0.05);对照组PCI术后第1 5,30天,TC及LDL -C水平较PCI术前下降(P<0.05),治疗组PCI术后第7天,TC及LDL-C水平较PCI术前下降(P<0.05),而术后第15,30天,TC,TG及LDL-C水平均较术前下降(P<0.05).HDL-C水平较术前增高(P<0.05);治疗组严重心血管事件发生率低于对照组(P<0.05).结论 PCI术后早期大剂量应用阿托伐他汀可改善中青年ACS患者hs-CRP水平.

    作者:吴哲兵;代升平;魏运亮;宗书峰;潘金生;丰冠鹏 刊期: 2012年第08期

  • 麻醉诱导前利多卡因超声雾化吸入对开胸手术患者双腔气管插管时血流动力学的影响

    目的 观察麻醉诱导前利多卡因超声雾化吸入对老年肺癌开胸手术患者双腔气管插管前后血流动力学的影响.方法 全身麻醉下开胸手术老年肺癌患者40例,随机分为A,B组各20例;麻醉诱导前,A组超声雾化吸入质量分数2%利多卡因15 mL、B组超声雾化吸入生理盐水15 mL,且均于10 min后开始麻醉诱导,并于诱导成功后行双腔气管插管;比较2组入室时(T0)、插管后即刻(T.)以及插管后1 min(T2)、3min(T3)、5 min(T4)患者平均动脉压、心率.结果 与T 0时间点比较,B组T2,T3,T4时间点平均动脉压、心率差异有统计学意义(P<0.05),A组差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,A组平均动脉压于T3,T4时间点,心率于T2,T3,T4时间点差异均有统计学意义(P<0.05).结论超声雾化吸入质量分数2%利多卡因10 min后行麻醉诱导,有助于维持老年肺癌开胸手术患者双腔气管插管时其血流动力学的稳定.

    作者:吴莹;刘艳霞 刊期: 2012年第08期

  • 目的基因慢病毒载体的构建与包装

    目的 探讨Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体的构建与包装.方法 从含有Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4的质粒中获取目的基因,将目的基因与酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其连接产物转化细菌感受态细胞,对长出的阳性克隆进行测序和比对分析,并对长出的阳性克隆进行PCR鉴定,通过三质粒系统共转染293T细胞对慢病毒进行包装并进行滴度测定.结果 成功构建并包装出Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体,基因测序结果与目标序列完全一致;PCR鉴定结果显示,4个目的基因均为阳性;Oct4,Sox2,c-Myc及Klf4-慢病毒载体滴度分别为1×109,1×109,1×109,2×109TU/mL.结论 通过三质粒系统可构建并包装Oct4,Sox2,c-Myc及KIf4-慢病毒载体.

    作者:王孟丽;马建党;侯小霞 刊期: 2012年第08期

  • 后牙区植入Bicon短种植体临床疗效观察

    目的 探讨后牙区骨高度不足患者植入Bicon短种植体的临床疗效.方法 112例后牙区骨高度不足患者共植入153颗Bicon短种植体,3~6个月后进行义齿修复,并评价临床疗效.结果 随访1~3 a,153颗种植体均获良好骨结合、并完成义齿修复;义齿修复后,除1例发生种植体周围炎致其松动而拔除外,其余修复效果满意;种植修复成功率达99.3%.结论 Bicon短种植体应用于后牙区牙槽骨高度不足的缺牙区种植修复成功率较高.

    作者:何宝杰;邹桂克;李蓓 刊期: 2012年第08期

中华实用诊断与治疗杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会 河南省人民医院