快速荧光定量PCR检测副溶血性弧菌及其毒力基因方法建立与应用效果评价的研究

王忠发；顾松叶；王虹玲

关键词：快速荧光定量PCR, 副溶血性弧菌, tlh、tdh、trh基因检测, 应用效果评价

摘要：目的:建立一种快速、特异、灵敏、定量检测副溶血性弧菌及其毒力基因的方法,用于副溶血弧菌性食物中毒的应急检测.方法:根据GenBank中副溶菌(AY-289609)全基因序列上不耐热溶血素基因(tlh)、耐热直接溶血素基因(tdh)、耐热相关溶血素基因(trh)为靶序列,设计引物与Tagman探针并对模板DNA制备方法和PCR反应时间进行改进与优化以提高检测速度,采集食物中毒样本与国家标准方法进行现场平行比对.结果:本方法检测时间仅需30 min.检出限2×101cfu/ml,定量线性范围2×103cfu/ml～2×108cfu/ml,对77份患者粪便增菌前后平行检测结果显示该方法检出率明显高于国家标准方法并具有统计学意义(χ2=58.80,P＜0.01;χ2=42.98,P＜0.01).与7种常见肠道细菌均无反应.对6个浓度的副溶血弧菌测定的批内标准差在0.10～0.56之间.结论:该方法可在30 min内完成粪便中副溶血性弧菌的tlh、tdh、trh的检测,具有灵敏度高、特异性好、结果稳定、抗杂菌与药物干扰能力强等优点.非常适合食物中毒的应急检测.

中国卫生检验杂志相关文献

石墨炉原子吸收光谱法测定酱油中的铅

酱油中铅的测定方法按国标GB/5009.12-2003规定石墨炉原子吸收光谱法为第一法,该法灵敏度虽高,但前处理过程还是较繁琐,干法灰化,需炭化后再灰化,步骤多且灰化时间长,微波消解虽较理想,但消解仪设备昂贵,基层难以普及,而湿式消解法要混合酸浸泡放置过夜,费工费时[1].为此本文对湿式消解法进行了简化改进,不仅无上述弊端,而且操作简便、快速,精密度和准确度均好,能满足酱油中铅批量样品及快速分析要求,适宜推广应用.

作者：陈宇鸿；沈仁富刊期： 2009年第08期
培养法与EquateTM抗原检测法检测集中空调冷却水军团菌

目的:了解集中空调冷却水军团菌污染状况和血清型分布,评价利用EquateTM水军团菌快速试验试剂盒检测军团菌.方法:选取南京、常州、苏州共148家集中空调冷却塔,每个冷却塔平行采集两份水样,分别用培养法和EquateTM水军团菌快速试验试剂盒检测军团菌.结果:培养法军团菌的总阳性率为75%,共检出菌株145株,血清型分布以LP1(65.5%)为主,IP2-8、L micdadei、L. bozemanii均有检出;EquateTM试剂盒检测LP1阳性率为57.4%,与培养法比较差异无统计学意义(McNemarχ2=1.56、P=0.26),检测灵敏度、特异度易受其他细菌干扰.结论:集中空调冷却水军团菌污染较普遍,血清型别多样以LP1为主.EquateTM水军团菌快速试验试剂盒,可作为培养法的辅助手段用于突发事件应急,筛查高浓度LP1污染,不适于常规监测.

作者：张琦；陈晓东；张宝莹；张秀珍；杜雪飞；曾晓燕；陈连生刊期： 2009年第08期
下城区饮食和公共场所从业人员肠道沙门菌携带状况调查分析

目的:了解和分析杭州市下城区饮食、公共场所从业人员肠道沙门菌携带情况及菌型分布特点、耐药状况.方法:按沙门菌分离鉴定方法进行检测,WHO推荐的K-B法进行药敏试验.结果:73601名饮食和公共场所从业人员中检出沙门菌217株,检出率0.30%,分布于7个血清群,29个血清型,其中B群占比例高,依次为B群、E1群、E4群、C1群、D群、C2群、E2群,有5个血清型为我区首次检出.217株沙门菌对阿莫西林/克拉维拉、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻肟、头孢哌酮、环丙沙星、氧氟沙星的敏感度较高,均在94%以上,妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素的敏感度略低,而复方新诺明、氨苄青霉素耐药率高为16.59%.结论:本文实验结果可为研究我区饮食、公共场所从业人员沙门菌健康带菌者菌型分布规律及其对抗生素的敏感性提供参考.

作者：商晓春；帅慧群；赵雪琴；张睿；胡薇薇刊期： 2009年第08期
微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定面制食品中铝

目的:建立微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定面制食品中铝的方法.方法:样品经微波消解后,用石墨炉原子吸收光谱法对面制食品中铝进行测定.结果:方法的线性范围5～80μg/L,相关系数为0.9999.铝特征浓度为5.70μg/L,面制食品中铝的含量测定,平均回收率为96%～104%,RSD为0.9%～3.4%.结论:本方法样品前处理简单、快速、试剂用量少,检测结果准确度高、精密度好,能满足面制食品中铝含量的测定要求,值得推广使用.

作者：方治富刊期： 2009年第08期
妊娠妇女纤维蛋白原含量变化的特性分析

目的:通过研究妊娠妇女包括正常孕产妇和妊高征(Hypertensive syndrome of pregnancy)个体血浆中纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)含量的变化,明确临床监测Fg含量对妊娠期妇女的重要价值.方法:选取148例妊娠妇女,其中正常孕产妇60例,妊高征孕产妇30例和58例非孕产妇血浆标本,采用凝固法,进行Fg含量的测定,并与非孕产妇的健康对照组做比较.结果:与对照组相比,妊娠妇女体内Fg的含量显示有不同程度的增高.正常孕产妇组与健康对照组比较,有较明显差异(P＜0.05);妊高征组与健康对照组比较有极显著差异(P＜0.01).结论:妊娠妇女包括正常和妊高征个体血浆中Fg的含量可明显增多.说明,妊娠妇女机体内可出现凝血一抗凝以及纤溶等系统的一系列改变甚至失衡.提示孕产妇特别是妊高征患者,应随时监测Fg含量,以便能密切观察其凝血功能,预防和治疗出血,降低DIC的发生率,确保临床安全.

作者：张景丹；李颖刊期： 2009年第08期
兰溪市农村儿童肠道志贺菌的分离率与耐药性分析

目的:探讨兰溪市农村儿童肠道志贺菌的分离情况及耐药性的情况,为儿童细菌性腹泻的治疗与预防提供依据.方法:采集兰溪市农村在校和不在校的3078名儿童(年龄6～12岁)的新鲜粪便,经粪便细菌培养鉴定,并用.KB法进行体外抗菌药物的敏感性检测.结果:在3078名儿童的肠道中分离到志贺菌86株(2.79%),其中痢疾志贺菌17株,占分离菌株的19.8%;福氏志贺菌Ⅱ 57株,占分离菌株的66.3%;宋内志贺菌12株,占分离菌株的13.9%,鲍氏志贺菌0株.体外抗菌药物敏感性检测显示,86株志贺菌总的耐药率,氨苄西林76.7%、头孢曲松14.0%、亚胺培南0.0%、氯霉素9.3%、四环素75.6%、庆大霉素37.2%、环丙沙星4.7%、复方新诺明81.4%.结论:兰溪市农村的儿童肠道中携带有一定比例的志贺菌,其中以福氏志贺菌为主.体外抗菌药物的敏感性以三代头孢菌素、亚胺培南、环丙沙星较好.

作者：陈一梅刊期： 2009年第08期
体重指数与血糖、脂类代谢的相关性分析

目的:探讨体重指数(BMI)与血糖、脂类代谢的相关性.方法:采用回顾性分析的方法对2008年5月至12月在我院体检中心健康体检人员1284例的体重指数、血糖和血脂等检测结果进行分析.结果:高血糖和高血脂的总检出率为21.8%,超重和肥胖的总检出率为41.1%.体重指数正常组748例,高血糖和高血脂检出96例,占12.8%;超重组400例,高血糖和高血脂检出128例,占32.0%;肥胖组136例,高血糖和高血脂检出56例,占41.2%.结论:体重指数与高血糖、高血脂的高检出率密切相关,建议通过加强改变不良生活方式、减轻精神压力、控制体重来有效地预防超重和肥胖,减少各种慢性病的发病率.

作者：张云；马骢；刘敏；郭建巍；钱扬会；齐永志刊期： 2009年第08期
重庆市0139型霍乱弧菌耐药性监测分析

目的:了解2000～2005年重庆市0139型霍乱弧菌的耐药性和耐药性的变迁.方法:采用K-B法检测118株0139型霍乱弧菌对16种抗菌药物的敏感性.结果:重庆地区0139型霍乱弧菌对丁胺卡那、诺氟沙星和环丙沙星100%敏感,对四环素、复方新诺明、痢特灵、吡哌酸、新霉素、强力霉素和链霉素的耐药率达到了80.51%～88.98%.2005年分离菌株对妥布霉素、氨苄西林、氯霉素的耐药率较2002年和2003年有所增高,而链霉素的耐药率较2003年和2002年有所下降.结论:重庆市O139型霍乱弧菌对四环素、复方新诺明、痢特灵、吡哌酸、新霉素、强力霉素和链霉素耐药严重.长期对霍乱弧菌的耐药性进行监测和动态分析,可以为霍乱弧菌的流行病学研究以及对霍乱的监控和防治提供依据.

作者：李志峰；冯连贵；王文斟；廖春艳；王红；段刚；何源；王玲；赵波；许静茹刊期： 2009年第08期
HIV/AIDS合并结核分枝杆菌播散性感染免疫学研究进展

结核病是HIV/AIDS患者常见的机会性感染,感染HIV可使结核病发病率增加30倍[1],随着HIV/AIDS病程的进展,结核分枝杆菌常可由肺内感染急速向肺外扩展,发生结核和鸟胞内分枝杆菌等血液感染,而分枝杆菌播散性感染无疑会严重影响HIV/AIDS的生存期.

作者：章松平；朱明利；厉小玉刊期： 2009年第08期
住院患者梅毒感染现况分析

目的:对住院患者手术或输血前配血标本,均进行常规检测梅毒螺旋体抗体,以避免医院内感染及其引起的医疗纠纷.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对2001年1月～2007年12月期间在本院住院的患者配血标本进行梅毒抗体初检,对初检阳性标本再用梅毒螺旋体颗粒凝聚试验(TPPA)法确认.结果:10498份输血前标本,用ELISA法检出梅毒抗体阳性56份,阳性率为0.53%.ELISA法检出的56份阳性标本,经TPPA法确认阳性52例,阳性检出率为0.48%.结论:ELISA法作为住院患者手术及输血前梅毒抗体常规方法,可以及时了解掌握医院内输血感染情况,确保医患安全.

作者：王振芳刊期： 2009年第08期
海水浸泡对腹部开放伤大鼠凝血系统影响的研究

目的:观察海水浸泡对腹部开放伤大鼠凝血系统的影响.方法:Wistar大鼠随机分为腹部开放伤合并海水浸泡组和单纯腹部开放伤组,分别检测实验动物致伤后0、0.5、1、2、3、4 h的血浆凝血酶原时间和部分凝血活酶时间,以及血浆纤维蛋白原、纤溶酶原和D-二聚体含量.结果:与单纯腹部开放伤大鼠相比,腹部开放伤合并海水浸泡大鼠血浆凝血酶原时间延长、血浆部分凝血活酶时间缩短、纤维蛋白原含量减少,提示外源性凝血途径被抑制而内源性凝血途径被激活.在海水浸泡2 h后,血浆纤溶酶原和D-二聚体含量增加,提示伴随继发性纤溶亢进.凝血酶原时间和血浆纤溶酶原含量与海水浸泡时间呈正相关(相关系数分别为0.9361和0.9875),血浆纤维蛋白原含量与海水浸泡时间呈负相关(相关系数为0.9136).结论:海水浸泡可以激活腹部开放伤大鼠凝血系统.在海水浸泡晚期,致伤大鼠具有弥漫性血管内凝血倾向.

作者：张达矜；曲佳；熊鸣；乔媛媛；王大鹏；马聪；虞积耀；赵晓航刊期： 2009年第08期
微波消解火焰原子吸收法测定茶叶中的铅铬绿

铅铬绿(lead chrome green)又称美术绿,是铬黄和铁蓝的混合无机颜料,组成可以用PbCrO4·xPbSO4·yFeKFe(CN)6表示.铁蓝含量可自5%～45%幅度而变动得到黄光的翠绿至深绿色,可用于涂料、塑料、纸张等着色,有优良的着色力,色泽鲜明.

作者：王庆堂；周伶；张秋萍；李建；杜晟威刊期： 2009年第08期
伤寒和甲型副伤寒沙门菌PFGE分型方法研究与应用

目的:了解宁波地区伤寒和甲型副伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因型和流行优势型,为探讨传播途径和追踪传染源等提供帮助.方法:用全自动细菌鉴定仪(Vitek32)确定细菌的生物学特征;用诊断血清确定细菌的血清型;用PFGE方法对细菌的染色体进行基因分型.结果:14株伤寒沙门菌分成3个PFGE基因型,364株甲型副伤寒沙门菌分成12个PFGE基因型,其中伤寒沙门菌1型10株,占71.43%,甲型副伤寒沙门菌2型295株,占81.04%;其次为1型42株,占11.54%;其他各型相对较少,伤寒沙门菌的流行优势型是1型,甲型副伤寒沙门菌是2型.菌株的带型变化在1～3条范围内,表明宁波地区的伤寒和甲型副伤寒沙门菌变异不大,有可能是同一克隆系的伤寒和甲型副伤寒沙门菌.结论:PFGE分型对探讨伤寒、副伤寒疫情内在联系具有重要意义,宁波地区的伤寒和甲型副伤寒疫情是本地菌株反复在人群带菌,污染环境和食物所致,应引起我们的关注.研究认为PFGE分型法特异性高、重复性好、结果容易判读,是一种分子分型的可信方法,为确定菌株之间的亲缘关系,提供了可靠的检测手段.

作者：徐景野；许国章；金春光；章丹阳；沈玄艺刊期： 2009年第08期
福州市2004～2008年登革热疫情监测分析

目的:分析近5年福州市登革热监测结果,为福州市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据.方法:对2004～2008年布雷图指数、容器指数和房屋指数等进行综合分析,采用酶联免疫法(ELISA法)对监测点正常人群的登革热IgG抗体水平和发热病人的IgG和IgM进行检测.结果:04年福州市出现登革热暴发,发热病人血清抗体IgG和IgM的阳性率均为28.49%(94/330),在05～08年正常人群血清IgG和监测点发热病人的IgM和IgG抗体阳性率均为0%.年均布雷图指数均超过10,分别为20.07、15.69、26.96、12.22、20.85.05～08年均有病例报告,且经流行病学调查系境外感染.结论:布雷图指数相对较高,一旦有传染源输入,极可能导致登革热流行,必须引起高度警惕.

作者：黄春文；陈敏红；陈艳；黄晓霞刊期： 2009年第08期
佛山市部分公共场所空调冷却循环水军团菌污染状况分析

目的:了解佛山市部分公共场所集中式空调通风系统军团菌的污染状况及血清型别分布,为军团菌病的预防控制提供依据.方法:采集我市商场(超市)、宾馆及体育场馆共30家公共场所的集中式空调系统循环使用的冷却水和冷凝水共106份,分别进行军团菌的病原学调查.结果:106份水样中有54份检出军团菌,阳性率50.94%(54/106),并分离出62株军团菌,同一份水样同时检出两种不同血清型军团菌的占检出水样的14.81%(8/54),其中以嗜肺军团菌1型(LP1)为主,占58.06%(36/62).结论:我市部分公共场所集中式空调通风系统军团菌污染较严重,对人群健康构成潜在的危害,应加强公共场所集中式空调通风系统的卫生监测.

作者：梁景涛；谢铭；陈淑玲；林秋芬；卢振林刊期： 2009年第08期
白喉类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备并鉴定白喉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,为白喉的快速检测及致病机制的研究提供有力的抗体工具.方法:用白喉类毒素做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度针对白喉类毒素的杂交瘤细胞株,测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接ELISA和Western-blot检测单克隆细胞株的特异性.结果:通过细胞融合和克隆化,筛选出3株持续分泌抗白喉类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E12、1E11、1G10.间接ELISA和Western-blot检测结果表明1E12、1E11、1G10可以和白喉类毒素发生特异性反应.结论:成功制备了抗白喉类毒素单克隆抗体,为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定了基础.

作者：孙黎；刘正泉；罗强；贾天军；刘开扬刊期： 2009年第08期
梅毒患者外周血单核细胞TOLL样受体2和6的变化及意义

目的:观察梅毒患者外周血单核细胞(PBMC)表面Toll样受体2,6(TLR2,TLR6)的表达变化及其意义.方法:选取显性梅毒患者87例,采用流式细胞仪检测外周血单核细胞表面TLR2、TLR6蛋白表达水平(荧光强度)以及TLR2阳性细胞率,并与50例健康者作为对照组进行比较.结果:显性梅毒患者组与对照组比较:患者外周血单核细胞TLR2、TLR6的表达水平均明显升高,TLR2高于TLR6,且一期梅毒患者低于二期梅毒患者,差异均有统计学意义(P＜0.05);TLR2+CD14+、TLR6+CD14+细胞的阳性率低于对照组,且一期梅毒患者低于二期梅毒患者,差异均有统计学意义(P＜0.05):MFI(TLR2)与TLR2+CD14+阳性率、MFI(TLR6)与TLR6+CD14+阳性率,在整个研究对象群体中无明显相关性(r=0.096、r=0.089,P＞0.05),但在显性梅毒患者中呈正相关(r=0.813、r=0.752,P＜0.05);所有的差异与性别无关,但与年龄有关.结论:梅毒患者TLR2与TLR6的表达显著上调,与病程和免疫状态有关,与性别无关.

作者：彭明喜；汤晓娴；许德义；王峰刊期： 2009年第08期
高效液相色谱电化学法测定人血清中的儿茶酚胺及5-羟色胺含量

目的:建立高效液相色谱电化学法(HPLC-ECD)测定人血清中的儿茶酚胺(NE、E、DA)及5-羟色胺(5-HT)含量的方法.方法:运用高效液相色谱分离及电化学检测器检测,氧化铝固相萃取法测定NE、E、DA,5-磺基水杨酸蛋白沉淀法测定5-HT.结果:NE、E、DA在1～10 ng/ml,5-HT在10～100 ng/ml范围内线性良好(n=5,r均＞0.998),样品加标回收率为88%～105%,方法低检出限:NE、E、DA为0.1 ng/ml,5-HT为1 ng/ml.结论:高效液相色谱电化学法(HPLC-ECD)测定人血清中的NE、E、DA及5-HT含量,该方法灵敏度高,回收率和重现性良好,样本用量少,操作快速简便,结果准确可靠.

作者：李静娜；梁高道；朱其明；麦琦；黄万琪刊期： 2009年第08期
平顶山地区部分二级以上医院POCT血糖仪的使用现状调查

目的:促进医院POCT血糖仪的质量管理工作.方法:通过对POCT血糖仪的分布、操作人员素质、POCT血糖仪与大生化仪检测血糖对比试验及结果报告形式五个方面的调查.结果:POCT血糖仪的质量管理状况令人担忧,主要存在问题:1.缺乏医院内有效统一的检验质量系统管理;2.操作人员质量意识谈薄;3.POCT血糖仪检测结果的准确性差,我们抽查的42台POCT血糖仪,其合格率仅在48%～81%之间;4.检测结果报告缺乏统一、严谨、规范的报告形式.结论:因此,加强POCT质量管理势在必行,做好医院POCT血糖仪的质量管理工作,不仅为临床提供更准确的血糖监测结果,为患者带来福音,也是为医院今后检测一起自动化、小型化和多样化的POCT的发展打好基础.

作者：路丽影；王淼；王怡涵刊期： 2009年第08期
阻抑动力学光度法测定痕量水杨酸

目的:提出一种测定痕量水杨酸的动力学光度法.方法:基于酸性介质中水杨酸对羟基自由基氧化水杨酸反应的阻抑作用,通过监测大吸收波长617 nm下染料吸光值的下降测定水杨酸.结果:佳实验条件下水杨酸的检出限为2.37 × 10-2mg/L,测定的线性范围为0.072～0.396 mg/L.结论:该方法已用于化妆品紧肤水及药用软膏中的水杨酸测定,结果满意.

作者：曹金秀；蔡文开；梁晶晶；龚仁敏刊期： 2009年第08期