学术投稿

乐果单克隆抗体制备的初步研究

张文元;杨亚冬;房国坚

关键词:乐果, 单克隆抗体, 杂交瘤细胞, 效价, 亲和常数, 交叉反应
摘要:目的:制备特异性抗乐果单克隆抗体(McAb).方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原.将免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,通过杂交瘤技术,制备特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,并通过有限稀释法克隆化3次.用间接ELISA检测该McAb的效价和亲和性,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率.结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13:1和11:1.通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,其培养上清与腹水效价分别为1:32和1:1024,McAb亲和常数为1.4×104 L/mol,与氧化乐果的交叉反应率为10.6%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于0.5%.结论:通过杂交瘤技术,获得l株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,但McAb效价、亲和力都较低,与制备试剂盒的要求尚有较大的差距.
中国卫生检验杂志相关文献
  • 肺炎衣原体主要外膜蛋白重组抗原制备与应用的研究

    目的:为了研究肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,Cpn)抗原作为特异性诊断试剂,本文应用重组技术研制Cpn主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)重组抗原,用于血清IgG抗体的检测.方法:通过构建和表达CpnMOMP重组抗原,应用包涵体纯化法纯化重组抗原后建立ELISA试验,并检测了82份正常人血清及临床标本207份,其中心血管疾病血清118份,呼吸系统疾病血清59份,其他疾病30份.结果:应用克隆技术,获得纯化的Cpn MOMP重组抗原.用重组抗原检测血清IgG,正常人血清阳性检出率仅为3.7%;而207份病人血清,116份为阳性,总阳性率56.0%.其中心血管疾病血清118份,阳性69份,阳性率58.5%;呼吸系统疾病血清59份,阳性38份,阳性率64.4%;其他疾病患者30份,阳性9份,阳性率仅30.0%.结论:与进口ELISA试剂盒相比阳性率基本相符,统计分析无显著意义,但重组MOMP蛋白的抗原特异性较高,且具有抗原制备较为方便和价廉等特点.由于临床标本数量有限,尚需进一步探索MOMP重组抗原作为Cpn感染疾病的辅助诊断.

    作者:陈学勤;陈圆圆;李雪萍;钱利生 刊期: 2008年第01期

  • 高效液相测定保健食品中染料木甙的含量

    目的:建立保健食品中测定染料木甙含量的方法.方法:用反相高效液相色谱法测定保健食品中染料木甙的含量.结果:方法线性范围为:0.31000~0.00248 mg/ml,低检出限为0.01μg/ml,总分析时间:7.5 min.染料木甙平均保留时间:6.2 min.平均回收率为:98.02%.结论:反相高效液相色谱法测定染料木甙样品的含量方法稳定、可靠、简便,适用于保健食品的分析.

    作者:廖一民 刊期: 2008年第01期

  • 乐果单克隆抗体制备的初步研究

    目的:制备特异性抗乐果单克隆抗体(McAb).方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原.将免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,通过杂交瘤技术,制备特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,并通过有限稀释法克隆化3次.用间接ELISA检测该McAb的效价和亲和性,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率.结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13:1和11:1.通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,其培养上清与腹水效价分别为1:32和1:1024,McAb亲和常数为1.4×104 L/mol,与氧化乐果的交叉反应率为10.6%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于0.5%.结论:通过杂交瘤技术,获得l株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,但McAb效价、亲和力都较低,与制备试剂盒的要求尚有较大的差距.

    作者:张文元;杨亚冬;房国坚 刊期: 2008年第01期

  • 双色红外荧光在蛋白检测中的优势

    目的:通过比较Western blot的两种不同显色方法,了解双色红外荧光检测技术在蛋白检测中的优势.方法:制备L-02肝细胞总蛋白,SDS-PAGE电泳分离后转膜,内参蛋白GADPH,β-actin-抗孵育,二抗用藕联有IRDye700、IRDye800的荧光抗体和辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光检测技术和化学发光法检测,比较相同量时,两种方法的灵敏度及特异性差异.结果:双色法显色的图像较化学发光法更清晰直观,且实验背景低.结论:双色红外荧光检测提高了蛋白检测灵敏度,保证实验结果的准确,在蛋白检测方面具有不可比拟的优势.

    作者:黄海燕;刘建军;席仁荣;邢秀梅;陈国仁;王艳 刊期: 2008年第01期

  • 孝感市食品中食源性致病菌污染状况调查

    目的:了解孝感市食品中单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、EHEC O157、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌的分布状况,初步确定可能污染上述致病菌的高危食品,为食源性疾病的监测提供科学依据.方法:从市场上随机抽取7类食品(生肉、熟肉、蔬菜、奶等)共计253份.依据全国食源性致病菌检测工作手册及国标方法(GB4789)进行检测.结果:253份食品样品中检出致病菌共48株(18.97%),其中分离单核细胞增生李斯特菌20株(7.91%);沙门菌25株(9.88%);EHEC O157检出2株(0.79%);26份水产品中检出副溶血性弧菌1株;48份生鸡肉样品中未分离出空肠弯曲菌.结论:孝感市居民主要消费食品存在致病菌的污染,其中生肉、水产品及散装速冻食品受污染为严重,应加强市场卫生的监控力度,建立食源性疾病风险预警评估机制,有效预防食源性疾病的暴发流行.

    作者:吕斌;李启泉 刊期: 2008年第01期

  • 萧山区部分人群血清军团菌LP1~LP6型及Lm型抗体水平调查

    为了解萧山区人群军团菌感染情况,作者采集了部分健康人群及肺科门诊病人的血清标本进行嗜肺军团菌(Lp1~Lp6型)及米克戴德军团菌(Lm型)抗体水平检测,现将结果报道如下:

    作者:陆扁;马光辉;丁水军 刊期: 2008年第01期

  • 疾控中心卫生监测现状与对策探讨

    疾病预防控制中心的职能之一是:健康危害因素监测与干预,其中包含了对人类生存环境的危险因素进行的卫生监测.工业发展对环境的污染,室内装饰材料对居室的污染,食物中毒与其他突发事件的频发,都在越来越严重地危害和威胁着人类健康,制约着社会经济的可持续发展.我市地处浙南沿海发达地区,生产、贸易活跃,人口稠密,流动频繁,自然灾害多,食品、职业、环境、学校、放射等公共卫生工作任务越来越繁重.

    作者:陈红娟 刊期: 2008年第01期

  • 动态质控图法及其在HIV检测实验室中的应用

    HIV抗体检测是艾滋病防治的一项重要保证措施.因此,提高实验室检测的准确性,减少假阳性和假阴性反应的发生,对监测、诊断、血液筛查艾滋病来说是很重要的.目前在艾滋病检测实验室常用的质控图是Levey-Jennings质控图[1-3],该种质控图有许多优点,但也存在着一些缺陷,如前20次异常值的出现会对所求得的均值和标准差有较大的影响,均值和标准差的确定没有充分利用每一次的检测信息等.

    作者:赵国有;林滢;史晓燕 刊期: 2008年第01期

  • 冻干技术在果蔬中有机氯及多种拟除虫菊酯农药残留检测中的应用

    目的:应用冻干技术建立果蔬中有机氯及多种拟除虫菊酯农药残留检测方法.方法:应用冻干技术去除果蔬中的水分,以丙酮-二氯甲烷(1:1)为提取溶剂,经CARB/NH2和Florisl固相萃取柱净化,用GC-ECD测定,峰面积定量.结果:10种农药加标回收率为80.8%~95.4%,相对标准偏差为1.8%~4.8%,低检出浓度为0.001~0.005 mg/kg(当称样量为5.00 g时).结论:冻干技术对检测结果影响较小,而且前处理过程中有机溶剂的用量大大减少了,操作简单,检测结果的重现性及方法回收率明显改善,该方法适合果蔬中1种有机氯及9种拟除虫菊酯类农药残留的同时检测,尤其适合大批量农残样品的检测.

    作者:林国斌;于凌志;倪蕾;唐昌东 刊期: 2008年第01期

  • 进口与国产培养基对肉类、海产品中4种致病菌检出率的比较分析

    目的:比较肉类、海产品中4种致病菌在进口科玛嘉培养基与国产培养基上的检出率.方法:增菌后分别用科玛嘉显色培养基与国产培养基分离培养4种致病菌.比较检出率.结果:沙门菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上无显著性差异(P>0.05,X2检验),副溶血性弧菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上有显著性差异(P<0.01,X2检验),金黄色葡萄球菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上无显著性差异(P>0.05,X2检验),单核细胞增生李斯特菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上有显著性差异(P<0.01,X2检验).结论:进口科玛嘉显色培养基在副溶血弧菌和单核细胞增生李斯特菌上比国产培养基有较高的检出率,而在沙门菌和金黄色葡萄球菌上的检出率与国产培养基无差异.

    作者:张一;陈伊娜;何水渊;应慧红 刊期: 2008年第01期

  • 薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强

    目的:建立用薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强的方法.方法:用薄层层析法分离检测.结果:毒鼠强标准的Rf=0.59,显蓝紫色斑点,蟾蜍毒素在Rf=0.2~0.65,能得到至少8个以上的彩色斑点,毒鼠强的蓝紫色斑点不受干扰.结论:该方法操作简便,结果可靠.

    作者:肖雪花;陈湛;庞智锋 刊期: 2008年第01期

  • 火焰原子发射法测定食品中钙

    钙是人体必需的微量元素,它与人类健康密切相关.钙是人体骨胳及牙齿的正常组成成份,有助于降低心血管疾病的死亡率,调节神经及肌肉的兴奋性[1].为了增加食品营养价值,钙作为食品营养强化剂使用.因此测定食品中钙有着重要意义.目前,钙的测定方法有火焰原子吸收光谱法、EDTA滴定法[2].本文研究了以乙炔-空气火焰原子发射法测定食品中钙.该法简便、灵敏、准确,为测定食品中钙提供了一种新的方法.

    作者:李翼斌;龙强军;胡丽娟 刊期: 2008年第01期

  • 2006年柳州市城区二次供水卫生状况调查

    目的:了解柳州市城区二次供水设施卫生状况.方法:现场调查二次供水基本卫生状况,同时采集水箱末梢水进行水质检测.结果:对27家二次供水单位进行卫生学调查,检测水样48份,水样综合项目合格率为45.83%、依检测项次统计合格率为97.06%,与城市管网自来水综合评价合格率差别有统计学意义(X2=25.51,P<0.01),不合格项目主要为游离余氯和细菌总数.结论:加强预防性监督监测,完善卫生管理制度和定期消毒措施,保障居民饮水安全.

    作者:周磊;秦景新;蒙进怀 刊期: 2008年第01期

  • 染发剂中对苯二胺的测定方法研究与改进

    染发剂是一种改变头发颜色的特殊用途的化妆品,其中以染料中间体对苯二胺作为主要原料,由于对苯二胺类具有一定的毒性和致癌性,因此要严格控制和检测对苯二胺的含量.按照染发过程中发生的化学变化,有机合成染料可分成氧化染料、还原染料和仿天然黑素染料.氧化染料是目前广泛应用的染发剂原料[1].

    作者:曹美龄;徐立;麦琦 刊期: 2008年第01期

  • 生活饮用水中耗氧量检测不确定度的评定

    目的:建立简化水中耗氧量检测不确定度评定的方法.方法:对<生活饮用水标准检验方法>2006)水中耗氧量的不确定度进行分析评定,舍去对计算贡献小的分量,找出引起不确定度产生的主要因素.结果:舍去小于大分量1/20的不确定度,引起的误差不影响不确定度结果.结论:此方法对简化滴定法产生的不确定度的评定具有指导意义.

    作者:徐陆妹;楼冰冰;章春锋 刊期: 2008年第01期

  • Fe3+/TiO2-xNx太阳光下降解亚甲基蓝的研究

    目的:采用溶胶-凝胶法制备一系列不同Fe3+掺杂量的复合纳米Fe3+/TiO2-xNx光催化剂,建立以太阳为光源高效降解亚甲基蓝的反应体系.方法:利用UV-Via-DRs和XRD对其光谱学特征进行研究.以亚甲基蓝(MB)的光催化降解反应为模型,研究Fe3+/TiO2-xNx光催化剂的催化活性及其影响因素,探讨了采用太阳光为光源降解MB的可行性.结果:x(Fe3+)为0.4%,光催化剂用量为2 g/L,初始MB浓度为1×10-6mol/L,初始pH值为8,初始H2O2浓度为6 mmol/L,采用太阳光照射4 h,MB降解率可达87%.结论:自制光催化剂能有效利用太阳光,高效降解水中亚甲基蓝.

    作者:李乐;袁亚莉;许金生;刘万斌;丁坚强 刊期: 2008年第01期

  • 微波皂化水解法测定肉制品中淀粉

    目的:建立微波皂化水解肉制品后测定淀粉的方法.方法:利用微波加热皂化肉制品,除去脂肪和可溶性糖类后,再微波加热水解淀粉,通过测定水解液的还原糖求得淀粉含量.结果:本方法的相对标准偏差为3.66%~8.58%,加标回收率为80.0%~120%.结论:本方法简便、快速,适于肉制品中淀粉的测定.

    作者:黄会秋 刊期: 2008年第01期

  • 非水化磷脂及其定量检测

    目的:了解油脂中的非水化磷脂的含量.方法:用磷脂测定法(钼蓝比色法)测定油脂水化前后磷脂含量,从而计算出非水化磷脂的含量.结果:分析几十批四级菜籽油样和毛豆油样品,四级菜油中非水化磷脂占油中总磷脂含量比例较大.按本文的检测方法测得平均在84%,高的达到90%.结论:准确检测非水化磷脂在磷脂中的比例,对工厂内部指导脱胶生产工艺有一定的重要意义.

    作者:杨梅桂;周秀娟;金琰斐 刊期: 2008年第01期

  • 新生儿缺氧缺血性脑病患儿外周单个核细胞CD25 mRNA表达

    目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD25 mRNA表达.方法:以管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为参照,应用Real-time PCR法检测新生儿HIE患儿及足月正常新生儿出生后第1、7天外周血CD25 mRNA水平,以lg cDNA/Ig GAPDH比值代表其终mRNA水平.结果:HIE患儿生后第1天静息期和诱导期CIY25 mRNA水平分别为0.72±0.19和1.12±0.23,与正常对照组相比,差异有显著性(P<0.05);随着通气、换气等综合性治疗时间的延长,患儿缺氧缺血症状逐步改善,生后第7天静息期和诱导期CD25 mRNA水平分别为1.02±0.22和2.02±0.32,与正常对照组相比,差异无显著性(P>0.05).其中HIE(重度)患儿静息期和诱导期CD25 mR-NA水平均较低,与正常对照组相比,差异有显著性(P<0.05).结论:HIE患儿存在一定程度的细胞免疫功能紊乱,主要表现为外周血CD25 mRNA水平降低,并与HIE严重程度有关.

    作者:孙琳;陆勤;王健 刊期: 2008年第01期

  • 孕妇与微量元素铁及血红蛋白之间的关系

    铁是构成血红蛋白的必需微量元素之一.妊娠合并贫血是妊娠期常见的合并症,如果妊娠期缺铁,血红蛋白偏低,便会导致缺铁性贫血,妊娠贫血不仅影响母体的健康,而且会影响胎儿的正常发育.为了解太原市孕妇贫血状况,现将2005~2006年来我院就诊的500例健康妊娠妇女的铁和血红蛋白值进行如下分析.

    作者:胡蕊;郝福华 刊期: 2008年第01期

中国卫生检验杂志

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