郭瑞霞；范丽君；李艳敏
目的：建立黄曲霉菌感染小鼠角膜动物模型，并观察病变后不同时期角膜组织病理学变化。方法：用培养接种棒对40只C57 BL／6小鼠进行仿真临床角膜划痕导致真菌感染。在第1、3、5、7和14天行裂隙灯显微镜检查评分，随后处死小鼠制作角膜铺片，免疫荧光染色后进行激光扫描共聚焦显微镜观察。结果：术后第1、3和5天，接种眼临床评分升高迅速，在第5天达到峰值，随后第7和14天临床评分逐渐降低；术后第1天接种眼角膜缘组织已有中性粒细胞浸润、角膜巩膜缘血管扩张充血等明显急性炎症变化，第3天角膜巩膜缘出现新生血管芽，中性粒细胞向角膜中央溃疡灶浸润、聚集，第5天中性粒细胞浸润进一步加重，见侵入角膜基质层放射状生长的新生血管，第7天中性粒细胞浸润仍较严重，新生血管向角膜中央溃疡灶生长明显，管腔增粗，第14天中性粒细胞明显减少，新生血管萎缩、减少。结论：成功建立黄曲霉菌角膜炎小鼠动物模型；感染第5天可能是角膜炎症过程中的关键时间窗。
作者：张伟宏；蒋莉莉；汪晓凯；赵秋民；杨东斌；黄贯峰；张焕云；杨阳；梁芳；韩雷；吴细丕 刊期： 2015年第06期
嗜铬细胞瘤来源于肾上腺髓质及交感神经系统的嗜铬组织，肾上腺嗜铬细胞瘤约占90％，另10％为肾上腺外的嗜铬细胞瘤［1-3］。肾上腺外嗜铬细胞瘤主要位于腹部，多在腹主动脉旁，其他少见部位为肾门、肝门区、肝及下腔静脉之间、近胰头部位、髂窝或近髂窝血管处，腹外甚少见，心脏内者更是罕见。现将2013年11月郑州大学第一附属医院心血管外科收治的1例右心房嗜铬细胞瘤报道如下。
作者：李杰；唐丽；魏廷举；张新 刊期： 2015年第06期
目的：获取结核分枝杆菌mpt59和esxA基因编码的原核表达融合蛋白，并将该蛋白初步用于结核患者的快速诊断。方法：PCR扩增含有柔性链接肽段的esxA核苷酸序列，并将其连接至原核表达载体pET28a上，再将mpt59连接至pET28a-esxA上。该融合蛋白在大肠杆菌BL21中原核表达后，用镍珠子进行亲和纯化。采用垂直电泳和免疫印迹分析重组蛋白，并用于结核患者的诊断。结果：成功构建了原核表达载体pET28a-esxA-mpt59，转化大肠杆菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物。用该纯化蛋白进行ELISA检测，结果表明其诊断结核的灵敏度为97．8％，特异度为100％。结论：构建了含mpt59和esxA融合抗原基因的原核表达载体，并诱导表达了融合蛋白，为进一步研究结核分枝杆菌疫苗或诊断试剂奠定了基础。
作者：石洁；朱岩昆；郑丹薇；马晓光；王少华；李辉；邢进；吴彩霞 刊期： 2015年第06期
目的：通过构建pCAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法：PCR无义突变去除pCAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点，构建启动子陷阱载体pCAT3。 TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组，插入pCAT3载体中，转化至大肠杆菌DH5α，通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌；随机挑取1株提取质粒，测序及比对分析插入序列；根据分析结果设计引物，扩增可能的启动子序列，并插入验证载体p-3lysm-egfp，转化DH5α，荧光显微镜观察。结果：成功构建pCAT3启动子陷阱载体，获得约100启动子文库菌，其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的 ORF4启动子；插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论：该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。
作者：曾韦锟；毛普加；洪愉；冯梦蝶；许泽仰；宋武战；杨洪文；赵继华；王纪爱；黄芬；井申荣 刊期： 2015年第06期
目的：构建长QT综合征（ LQTS ）2型hERG 基因G604 S突变的真核表达载体G604 S-hERG-pcDNA3、G604S-hERG-pEGFP。方法：采用重叠延伸PCR 法在pEGM-hERG基础上构建G604S突变体PGEM-hERG-G604S，通过限制性内切酶法和基因重组技术将突变体插入到真核表达载体pcDNA3和pEGFP-C2中并测序验证，用脂质体转染法将G604 S-hERG-pEGFP转染至HEK293细胞并观察其荧光表达。结果：构建的含有突变位点的真核表达载体经DNA测序均成功验证hERG基因1810位点碱基G突变为A，构建的G604 S-hERG-pEGFP在HEK293细胞中成功表达绿色荧光。结论：成功构建hERG基因G604 S h-ERG-pcDNA3和G604 S-hERG-pEGFP表达载体。
作者：韩稳琦；霍建华；李国良；蒋永荣；武金娥；孙超峰 刊期： 2015年第06期
目的：对豫医卷毛大鼠的Krt71基因进行比较生物学分析。方法：采用PCR方法对豫医卷毛大鼠Krt71的cDNA序列进行克隆、测序，并与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的Krt71 cDNA序列及其编码产物的氨基酸序列进行同源性比较和系统遗传学分析。结果：获得了豫医卷毛大鼠Krt71基因全长1573 bp的cDNA序列（ GenBank登录号：KF303588）。豫医卷毛大鼠与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的同源性分别为99．9％、95．2％、88．5％、87．5％、88．0％、88．1％、88．1％，氨基酸序列的同源性分别为99．9％、98．9％、92．4％、91．2％、91．4％、92．3％、92．1％。结论：Krt71基因在哺乳动物进化过程中具有较高的保守性，是一个具有重要功能的“持家基因”。
作者：张明昊；章金涛 刊期： 2015年第06期
目的：探讨CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达的负调控作用。方法：设计合成包含CYP3A4*1G G或A等位基因的一系列基因片段（外显子10与内含子10交界处287和181 bp），构建CYP3A4*1G正向位于CYP3A4启动子上游的荧光素酶报告基因载体，与内参质粒pRL-TK共转染HepG2细胞，通过双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果：与CYP3 A4启动子相比较， G与A等位基因在287 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达（F＝795．575，P＜0．001），且G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与CYP3A4启动子相比较，G 与A 等位基因在181 bp DNA 片段中均降低了荧光素酶表达（F＝23．218，P＜0．001），而G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：在CYP3A4内含子10与外显子10交界处CYP3A4*1G存在与CYP3A4*1G变异无关的CYP3A4启动子的抑制元件，该抑制元件对CYP3 A4*1 G增强CYP3 A4基因表达起负调控作用。
作者：杨卫红；闫良；刘利娥；赵登职；张卫；张莉蓉 刊期： 2015年第06期
目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）患者情绪障碍与唾液皮质醇和脱氢表雄酮（DHEA）水平的相关性。方法：采用汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评定非糜烂型OLP组（40例）、糜烂型OLP组（31例）和对照组（31例）的焦虑、抑郁状况，并在早晨采集唾液，通过放射免疫法对受试者的唾液皮质醇和DHEA水平进行测定，分析量表得分与唾液皮质醇和DHEA水平的相关性。结果：3组受试者的HAMA得分、HAMD得分、唾液皮质醇水平差异均有统计学意义（F＝15．892、4．876和14．375，P＜0．05），糜烂型OLP组HAMA得分、HAMD得分、唾液皮质醇水平均高于对照组和非糜烂型OLP组（P＜0．05）。糜烂型OLP组唾液皮质醇水平与HAMA得分和HAMD得分（r＝0．965、0．923，P ＜0．001）呈正相关，而唾液 DHEA 水平与 HAMA 得分和 HAMD 得分（r ＝－0．948、－0．966，P＜0．001）呈负相关。非糜烂型 OLP组唾液皮质醇水平与 HAMA 得分和HAMD 得分（r ＝0．963、0．957，P＜0．001）呈正相关，而唾液DHEA水平与HAMA得分和HAMD得分（ r＝－0．962、－0．971，P＜0．001）呈负相关。结论：糜烂型OLP的发生、发展与焦虑、抑郁等情绪障碍有关，其作用机制可能是通过应激反应导致糜烂型OLP患者的唾液皮质醇水平升高，但是否与唾液DHEA水平的降低相关还有待进一步的研究。
作者：莫珩；高承志；王少杰；曲姗 刊期： 2015年第06期
目的：通过RNA干扰抑制食管癌细胞Eca-109 survivin基因的表达，观察survivin基因沉默对Eca -109细胞增殖与凋亡的影响。方法：构建靶向survivin基因的siRNA表达载体并借助脂质体稳定转染Eca -109细胞（干扰组），同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照，未转染细胞为空白对照。采用Western blot 检测sur-vivin基因沉默效果，MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术分析干扰前后Eca-109细胞增殖与凋亡的变化。结果：与两对照组相比，干扰组Survivin蛋白的表达降低（F＝79．397，P＜0．001）；MTT检测结果显示，干扰组抑制细胞增殖效果优于两对照组，而平板克隆形成实验显示干扰组克隆形成率低于两对照组（F＝1620．26， P＜0．001）；流式细胞术分析显示，干扰组凋亡指数高于两对照组（F＝2284．205，P＜0．001）。结论：RNA干扰可特异性沉默survivin基因的表达，抑制Eca-109细胞的增殖，诱导细胞凋亡。
作者：牛朝霞；李宁宁；陈洁；李宜培；彭蕤蕤；秦紫芳 刊期： 2015年第06期
目的：研究Notch1和HES1基因在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系U2OS中的表达及其对U2OS侵袭能力的影响。方法：组织学水平研究中，配对选取23例骨肉瘤及临近瘤旁正常骨骼肌组织标本；细胞学水平研究中，选取骨肉瘤细胞系U2OS及人正常成骨细胞系hFOB1．19；采用免疫组化法检测组织学水平Notch1及HES1蛋白的表达，采用Western blot及Real-time PCR法检测组织学及细胞学水平Notch1、HES1蛋白及mRNA的表达。用Notch1-siRNA沉默U2OS细胞中Notch1基因后，应用Western blot及Real-time PCR法检测U2OS细胞中Notch1及HES1的表达，Transwell法检测U2OS侵袭能力的变化。结果：相比于正常组织，骨肉瘤组织中Notch1、HES1 mRNA和蛋白呈高表达（t配对＝22．567，14．830和8．439，7．100，P＜0．001）。 U2OS细胞中Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达强于hFOB1．19细胞（t＝11．053，20．482和28．845，34．681，P＜0．001）。沉默Notch1基因后，U2OS细胞Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达下降（t＝6．294，9．209和9．151，13．953，P＜0．05），侵袭能力下降（t＝71．387，P＜0．001）。结论：Notch1和HES1在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系中呈高表达，沉默Notch1基因可降低U2OS细胞侵袭能力。
作者：王勇；赵伟；马骥 刊期： 2015年第06期
目的：研究不同粒径羟基磷灰石（ HA）对人工早期龋的再矿化作用。方法：应用离体人恒前磨牙制备早期釉质龋标本50个，随机分为5组（n＝10）：阳性对照组（NaF溶液）、阴性对照组（去离子水）、30 nm HA组、60 nm HA组和12μm HA组，用显微硬度计检测标本脱矿前后表面显微硬度，并用扫描电镜观察各组样本脱矿前后的形态；按照分组进行早期龋体外循环实验12 d，同法测定体外循环后各组样本的表面显微硬度，并观察其形态。结果：与阴性对照组相比，各HA组均能提高标本的表面显微硬度，且随着粒径的减小，其表面显微硬度增大（ F＝86．272，P＜0．001）。扫描电镜下观察，30 nm HA组和60 nm HA组的脱矿区有针状或短棒状晶体颗粒沉积，表面变得均匀、平整，且以30 nm HA组的再矿化效果更佳，12μm HA组的再矿化效果不明显。结论：HA能有效促进早期釉质龋的再矿化；纳米级HA优于微米级HA，且随着粒径的减小，其再矿化效果更佳。
作者：刘成霞；申晓青；徐平平 刊期： 2015年第06期
目的：研究FATE／BJ-HCC-2基因表达与肝癌细胞迁移及侵袭的关系。方法：体外合成FATE／BJ-HCC-2基因序列特异性小干扰RNA（siRNA），转染肝癌细胞系克隆株5B4，并设非特异性siRNA转染和空白对照组。采用RT-PCR及Western blot方法检测各组细胞中 FATE／BJ-HCC-2 mRNA和蛋白的表达；通过Transwell小室模型检测各组细胞体外迁移及侵袭的能力；激光共聚焦显微镜下观察5B4及空质粒转染的对照细胞（ Mock）的骨架结构。结果：各组细胞中FATE／BJ-HCC-2 mRNA和蛋白表达差异有统计学意义（F＝15．321，P＝0．020），特异性siRNA转染组细胞低于其他2组（ P＜0．05）。抑制FATE／BJ-HCC-2基因表达后，细胞体外迁移及侵袭的能力降低（ F＝6．171和10．109，P＜0．05）。5B4细胞形态拉长，蝌蚪状，呈现迁移、游走的状态；微丝丰富，形态规则，平行贯穿于细胞全长，细胞膜周围有较多丝状伪足伸出；微管减少，分布不规则。结论：FATE／BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞的迁移及侵袭。
作者：葛丽丽；朴军颜；杨小昂；尹艳慧；张毓 刊期： 2015年第06期
目的：探讨CK19、Galectin-3及CD56在良恶性卵巢甲状腺肿鉴别诊断中的应用价值。方法：采用免疫组化法检测6例卵巢甲状腺癌和10例卵巢甲状腺肿组织中CK19、Galectin-3及CD56蛋白表达情况。结果：卵巢甲状腺癌组织中CK19、Galectin-3蛋白的表达高于卵巢甲状腺肿组织（t＝4．807，3．835，P均＜0．05），CD56蛋白的表达低于卵巢甲状腺肿组织（t＝3．105，P均＜0．05）。分别利用CK19、Galectin-3及CD56蛋白表达水平绘制ROC曲线，曲线下面积（AUC）分别为0．983、0．933和0．867；以其中1个指标恶性即判定为恶性，则3者联合检测对良恶性卵巢甲状腺肿鉴别诊断的灵敏度可达100％。结论：CK19、Galectin-3及CD56对卵巢甲状腺肿良恶性的鉴别有很好的应用价值。
作者：邵世清；杨少琴；黄贵；田君；张红霞；王社莲 刊期： 2015年第06期
促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白，作用于骨髓中红系造血祖细胞，能促进其增殖、分化。1977年从再生障碍性贫血患者的尿液中分离提纯得到EPO后［1］，人们第一次能够用重组人EPO治疗慢性肾脏病贫血和化疗导致的非髓性恶性肿瘤相关的贫血。近年来研究［2-3］发现其不仅具有促进骨髓造血作用，还有一系列非造血作用，如抗炎、抗凋亡、抗氧化应激等。作者针对EPO研究的新进展及其在临床的应用综述如下。
作者：文建国；冯锦锦 刊期： 2015年第06期
目的：提高郑州市校外青少年艾滋病相关知识知晓水平。方法：采用整群抽样的方法于2014年5月至6月抽取郑州市校外青少年372人为研究对象。先对其艾滋病知识进行基线调查，之后在该人群中开展艾滋病知识健康教育、发放艾滋病宣传材料和提供咨询服务等干预活动，干预活动结束后对该部分人群再次进行艾滋病知识调查。结果：干预前的艾滋病知识知晓率为39．2％，干预后提高到98．9％，差异有统计学意义（χ2配对＝222．001，P＜0．001）。结论：郑州市校外青少年艾滋病知识知晓率干预后得以明显提高。
作者：楚子君 刊期： 2015年第06期
目的：探讨特发性弱精子症患者精子中TEKT3表达的特点。方法：采用非连续密度梯度离心法分离、纯化正常对照组和弱精子症组精子标本各35份，分别采用RT-PCR和Western blot检测精子中TEKT3 mRNA和蛋白的表达。结果：与正常对照组比较，弱精子症组TEKT3 mRNA 和蛋白表达均显著降低（t ＝9．610、10．090，P＜0．001），相关性分析显示弱精子症组精子TEKT3 mRNA和蛋白表达水平与前向运动精子率呈正相关（r＝0．684， P＝0．001；r＝0．483，P＝0．013）。结论：TEKT3表达降低可能在特发性弱精子症发病中具有重要作用。
作者：李玉山；陈河涛；杨夕阳；王全先；刘军杰；王琳凯；苏彦华；孙琳 刊期： 2015年第06期
目的：探讨Wnt／β-连环蛋白（β-catenin ）通路对大鼠脑出血的保护作用机制。方法：96只成年SD雄性大鼠随机分为假手术组、脑出血组、脑出血假干预组、siDkk-1干预组4组，采用Real-time PCR方法检测各组大鼠脑出血后24、72 h脑组织中Wnt-1和糖原合成酶激酶3β（ GSK-3β） mRNA表达的变化，采用Western blot法检测各组大鼠脑出血后24、72 h脑组织中β-catenin表达的变化，各组大鼠处死前均进行行为学检测。结果：大鼠脑出血后24和72 h，Wnt-1 mRNA水平与假手术组相比均降低，经siDkk-1干预后，Wnt-1 mRNA水平较脑出血假干预组升高（F＝9．040和26．400， P均＜0．05）。大鼠脑出血后24和72 h，GSK-3βmRNA 水平与假手术组相比均升高，经siDkk-1干预后，GSK-3βmRNA水平较脑出血假干预组下降（F＝41．100和17．800， P均＜0．001）。大鼠脑出血后24和72 h，β-catenin蛋白的表达较假手术组均升高，经siDkk-1干预后，其表达较脑出血假干预组进一步升高（ F＝15．100和14．000， P均＜0．05）。大鼠脑出血后24和72 h，刺激触须前肢上抬比例较假手术组降低，经siDkk-1干预后，前肢上抬比例较脑出血假干预组升高（F＝2450．000和2230．000，P均＜0．001）。结论：Wnt／β-catenin通路对脑出血大鼠有保护作用，可能是通过活化Wnt-1、抑制GSK-3β，进而导致β-catenin 在胞浆中聚集、移位入核后启动Wnt下游靶基因的转录所致。
作者：李治华；陈曦；臧卫东；郭付有 刊期： 2015年第06期
目的：探讨线粒体转录因子A（ TFAM）基因多态性与精神分裂症的关系。方法：采用PCR-RFLP及DNA序列分析技术分别对237例精神分裂症患者及246例健康对照TFAM基因rs10826178、rs4390300两多态位点进行检测及分析。结果：rs10826178与rs4390300位点等位基因与基因型频率分布在两组之间比较，差异无统计学意义（P均＞0．05）。结论：TFAM基因rs4390300、rs10826178的基因型差异可能与精神分裂症的发病无关。
作者：孙逸杰；景戈翰；杨菁；何书平；仝冬晓；王丽雯；司沛茹；金璐；程晓丽 刊期： 2015年第06期
目的：观察重复经颅磁刺激（rTMS）对抑郁大鼠学习记忆功能及海马CA3区突触素（SYP）表达的影响。方法：SD雄性大鼠40只，随机分为对照组、抑郁组、rTMS组和伪刺激组，每组10只，后3组采用为期21 d的孤养结合慢性不可预见轻度应激制备抑郁模型。造模成功后，rTMS组给予3个疗程15 Hz的rTMS治疗；伪刺激组只施予同样次数的声音刺激而无电流脉冲。采用Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验评定大鼠学习记忆功能。应用免疫组织化学方法检测大鼠海马CA3区SYP蛋白的表达情况。结果：4组大鼠逃避潜伏期、原平台象限游泳时间及原平台象限游泳路程占总路程的百分比及海马CA3区SYP蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F＝39．608、646．088、198．940、388．673，P＜0．001）。与对照组比较，抑郁组、伪刺激组大鼠逃避潜伏期延长，原平台象限游泳时间缩短，原平台象限游泳路程占总路程的百分比减小，SYP蛋白表达水平降低（P＜0．05）；与抑郁组、伪刺激组比较，rTMS组上述指标均明显改善（P＜0．05）。结论：rTMS干预可以改善抑郁模型大鼠的学习记忆功能，其机制可能与rTMS增加大鼠海马CA3区SYP的表达有关。
作者：欧阳华；白冰；赵琳；任慧聪；张朝辉 刊期： 2015年第06期
目的：探讨中国阿尔茨海默病（ AD）患者血清促甲状腺激素（ TSH ）水平的变化。方法：利用计算机及手工检索，全面检索AD患者血清TSH变化的病例对照研究，采用Stata 12．0进行meta分析。结果：共有16篇文献纳入分析，获得样本1760例，其中病例组918例，对照组842例。 Meta分析结果显示，AD患者血清TSH水平低于对照组（Z＝1．987，P＝0．046）；失安全系数Nfs0．05为895；平均年龄为异质性因素，进一步对病例组平均年龄进行亚组分析，发现随着年龄增高，病例组和对照组之间的TSH水平差异更为明显（Z＝2．110，P＝0．003），采用随机效应模型合并分析的结果可靠。结论：中国AD患者TSH水平低于正常人群，低水平的血清TSH可能与AD发生、发展有关。
作者：张亚峰；孙桂香；王炳花 刊期： 2015年第06期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
