学术投稿

杜氏盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR的构建

曾磊;潘卫东;王翠;薛乐勋

关键词:杜氏盐藻, 叶绿体转化, chlN基因
摘要:目的:利用同源重组方法将外源选择标记基因转入杜氏盐藻叶绿体中并表达。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶(cat)基因和除草剂草丁膦(PPT)抗性bar基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR,并通过基因枪法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株。对转化株和野生对照组的细胞计数结果进行统计学分析。结果:在200mg/L氯霉素的选择下,野生型盐藻12d左右死亡,转化藻仍正常生长,再经4mg/LPPT继代筛选3~5代,得到表达氯霉素和PPT抗性的盐藻转化株。盐藻转化株和野生株1个月内藻株生长差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的。
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 河南省就业人员职业结构变迁

    职业结构是一个国家的基本社会结构。人们的阶层地位流动主要是在职业结构这一框架内进行的,职业结构变迁既是社会发展和社会变迁的结果,也是社会发展程度的一个重要标志[1]。进入21世纪以来,河南省社会经济发生了巨大变化,这些变化作为职业结构变化的经济和社会基础,引领河南省职业结构也产生了明显变化。关注并正确认识当前和今后一定时期内职业结构构成的变化,有利于合理地分配人力资源,调动社会各个阶层的积极性。该研究利用2005年1%人口抽样调查资料,对河南省就业人员的职业结构进行分析,并与第5次人口普查资料进行比较,探究河南省职业结构的变化,报道如下。

    作者:孙浩;张曼平 刊期: 2010年第06期

  • 老年胸腔积液患者54例内科胸腔镜检查和胸膜活检分析

    胸腔积液是呼吸内科常见的一种临床综合征,其病因复杂,临床上常采用的诊断性检查包括X射线、CT、胸水常规及生化检查。细胞学检查、经皮胸膜穿刺活检和胸腔镜检查。老年患者中恶性肿瘤占一定比例,故胸膜组织病理诊断不可缺少,胸膜活检和内科胸腔镜检查为常用取材方式。郑州大学第二附属医院呼吸内科收治老年胸腔积液患者54例,接受胸膜活检及内科胸腔镜检查,分析报道如下。

    作者:刘颖;吴金如;夏熙郑;齐景宪;高元勋 刊期: 2010年第06期

  • 小鼠腹水型肝癌多药耐药模型的建立

    目的:建立小鼠腹水型肝癌(Hca)多药耐药(MDR)模型并探讨其产生的分子机制。方法:荷Hca小鼠分为2组,每组10只。化疗组采用临床化疗FAP方案,以剂量递增的方法诱导耐药模型,对照组仅给予等体积的生理盐水。MTT法检测瘤细胞对7种化疗药物的耐药性;流式细胞术检测瘤细胞对Rh123的蓄积与泵出能力,计算平均荧光强度(MFI);RT-PCR检测瘤细胞mdr1和mrp1mRNA的表达及停药后化疗组小鼠瘤细胞mdr1和mrp1mR-NA的表达。结果:化疗组小鼠瘤细胞对7种化疗药物均产生耐药性。与对照组相比,化疗组小鼠瘤细胞内Rh123蓄积量减少,泵出率增加(t=6.067和6.811,P均〈0.05),mdr1和mrp1mRNA的表达水平升高(t=18.807和4.420,P均〈0.05);mdr1和mrp1mRNA的表达水平在停药4周内稳定(P〉0.05),停药8周后下降(P〈0.05)。结论:成功建立了小鼠腹水型肝癌MDR模型,MDR的产生与mdr1和mrp1mRNA过度表达从而影响药物蓄积有关。

    作者:王欣;张艳;王宁;江金花;郑立运;王庆端 刊期: 2010年第06期

  • 骨显像和CT诊断多发性骨髓瘤骨质破坏的比较

    多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是源于骨髓浆细胞单克隆恶性增殖性肿瘤,约占血液系统恶性肿瘤的10%,随着病情进展,约90%的患者病变累及骨骼[1]。99Tc^m一亚甲基二膦酸盐(MDP)骨显像及CT均能检测MM所伴有的骨质破坏,现将MM患者2种影像检查结果进行对比分析,以期提高MM的诊断效能。

    作者:革化民;崔静;刘保平;韩星敏;谢新立;王瑞华;任振泰 刊期: 2010年第06期

  • 纯合子胃壁细胞特异性表达SV40T抗原转基因小鼠品系的建立

    目的:建立稳定遗传的纯合子SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠品系。方法:通过定量PCR法比较已知杂合子小鼠和未知阳性小鼠中外源基因的起始模板量来确定小鼠的基因型,并通过测交的方法来验证试验结果。结果:用定量PCR法选育出15只纯合子小鼠,经测交验证它们与野生型小鼠交配所生的后代均为阳性,证明了定量PCR的结果是正确的。通过纯合子之间的全同胞交配建立了6个独立的纯合子品系。结论:定量PCR具有省时、省力及高通量等优点,能够很好地应用于筛选纯合子转基因动物。

    作者:郜十伟;刘书漫;陈辉;李倩茹;金辉;张钦宪 刊期: 2010年第06期

  • 胃癌及癌前病变组织中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达

    目的:探讨胃癌及癌前病变组织中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达及意义。方法:采用免疫组化方法检测COX-2和iNOS蛋白在28例慢性浅表性胃炎、23例慢性萎缩性胃炎伴肠化、19例胃黏膜不典型增生及53例胃癌组织中的表达情况。结果:慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率分别为17.9%、30.4%、42.1%和62.3%;iNOS蛋白的阳性表达率分别为21.4%、34.8%、52.6%和71.7%,差异均有统计学意义(COX-2:χ2=16.725,P=0.001;iNOS:χ2=21.300,P〈0.001)。胃癌组织中,COX-2和iNOS蛋白在侵及浆膜层组织及有淋巴结转移组织中阳性表达率均高于未侵及浆膜层组织及无淋巴结转移组织(COX-2:χ2=4.154和5.123,P=0.042和0.024;iNOS:χ2=5.539和8.640,P=0.019和0.003);且两者间有关联(rP=0.351,P=0.006)。结论:COX-2和iNOS参与胃癌形成的全过程,且可能为其早期事件。

    作者:李晓丽;林锐 刊期: 2010年第06期

  • 一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE-2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响

    目的:构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z的干扰作用。方法:根据VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesil-1中,同时构建单基因(VEGF)质粒pGenesil-2。分别转染CNE-2Z细胞,分为多基因质粒(P-1)组和单基因质粒(P-2)组,并设空白对照(BC)组和阴性对照(NC)组。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用实时定量PCR和Western-blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。结果:通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示P-1组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于P-2组。结论:成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。

    作者:宋英;董明敏;杨海峰 刊期: 2010年第06期

  • 磁共振与磁共振脑静脉成像对23例脑静脉窦血栓形成的诊断

    脑静脉血栓形成(cerebral veDous thrombosis,CVT),尤其是脑静脉窦血栓形成(cerebral venoussi—flUS thrombosis,CVST)为少见的缺血性脑血管病,临床表现多样且特异性不强,易误诊。其诊断特别是早期诊断的价值很大。现对23例CVST患者磁共振与磁共振脑静脉成像结果进行分析,报道如下。

    作者:杜秀明 刊期: 2010年第06期

  • 外伤性脑脊液鼻漏60例手术治疗分析

    脑脊液鼻漏是颅脑外伤中常见的并发症,多在伤后立即出现或于数日内发生,发生率高达39%,多数经保守治疗可自愈,需手术治疗的仅占2.4%[1]。为了比较不同手术人路修补脑脊液鼻漏的效果,作者就郑州大学第一附属医院收治的60例外伤性脑脊液鼻漏的临床治疗及效果进行分析,报道如下。

    作者:郭付有;李治华;宋来君 刊期: 2010年第06期

  • 重组慢病毒载体pLKO-1-EGFP-puro的构建

    目的:构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标记及嘌呤霉素(puro)抗性的重组慢病毒载体。方法:改建慢病毒载体质粒pLKO-1-puro的多克隆位点(MCS),以质粒pEGFP-C3为模板扩增出CMV-EGFP并与pLKO-1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro,后者与包装质粒Δ8.2和包膜蛋白质粒VSV-G在293T细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,感染非洲绿猴肾细胞Vero细胞,观察GFP的表达。结果:成功改建了慢病毒载体质粒pLKO-1-puro并插入了CMV-EGFP,形成了新型慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro。3质粒共转染293T细胞产生的重组慢病毒颗粒感染Vero细胞后高表达绿色荧光。结论:成功构建了高效的带GFP报告基因及嘌呤霉素抗性的慢病毒载体。

    作者:宋波;韩志强;吴少璞;刘景伟;蔡晓辉;杨靖;许予明 刊期: 2010年第06期

  • 一期双通道微造瘘经皮肾镜治疗肾鹿角状结石24例

    传统开放手术对肾鹿角状结石的处理较为困难,风险较大,尤其是有开放手术取石史者。体外冲击波碎石对鹿角状结石疗效差[1]。随着泌尿腔镜技术的发展,美国泌尿学会尿石症临床治疗指南推荐经皮肾穿刺取石术作为治疗鹿角状结石的首选方案,同时也指出,为清除结石,建立2个或者更多的通道是必要的[2]。作者分析河南省人民医院泌尿外科收治的56例鹿角状结石患者的资料,探讨一期双通道微造瘘经皮肾镜治疗鹿角状结石的疗效。

    作者:孔朝辉;李启忠;丁德刚;张祥生;王晓晖;姬彤宇 刊期: 2010年第06期

  • 杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆

    目的:构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白(KCBP)基因cDNA序列。方法:取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH10B。计算平板上单菌落数,测定文库的滴定度和重组率。运用PCR法筛选含有KCBP基因特异片段的质粒。结果:文库滴定度为5.6×106pfu/mL,重组率在90%左右,插入片段长度在0.4~6.0kb,平均长度为1.9kb。利用PCR法从该文库中筛选到了含有新基因KCBP特异片段的单菌落,经测序与cDNA末端快速扩增(RACE)-PCR获得的杜氏盐藻KCBP基因cDNA序列相符,此序列属于kine-sin-14家族。结论:成功构建杜氏盐藻cDNA文库,并从该文库筛选出一个kinesin样cDNA序列。

    作者:柳丽平;李杰;王翠;阎赘梦;薛乐勋 刊期: 2010年第06期

  • 大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶蛋白的表达

    目的:检测大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶(ATP7B)蛋白的表达。方法:分别取6只SD大鼠和7只昆明小鼠,取空肠、肝及肾组织,常规石蜡切片,采用免疫组化法检测ATP7B蛋白的表达。结果:大、小鼠空肠绒毛上皮的纹状缘和近基底部、小肠腺、肾小管和肝细胞中均有不同程度的ATP7B蛋白表达。大鼠空肠、肝及肾组织ATP7B的积分光密度分别为(224474.380±228536.513)、(94116.484±45821.113)和(118128.741±41046.629),小鼠上述3种组织中ATP7B的积分光密度分别为(129023.602±87570.591)、(150614.511±52981.792)和(118403.634±53656.681),大、小鼠同一组织器官ATP7B的积分光密度相比,差异均无统计学意义(t=1.239、1.355、0.009,P均〉0.05)。结论:ATP7B蛋白在大、小鼠空肠、肝及肾组织中均有表达,其表达量的高低与动物种属关系不大。

    作者:王杰玉;杨杰;李勇莉;王国栋;侯锐;高建凯;高福莲 刊期: 2010年第06期

  • 微螺钉种植体支抗感染后骨界面的组织学变化

    目的:观察在1.96N水平力作用下感染微螺钉种植体-骨界面的组织学变化。方法:健康雄性杂种犬4只,在犬的双侧上颌尖牙近远中、第二双尖牙近远中颊侧骨板各植入微螺钉种植体1枚,共32枚。种植体颈部缠绕正畸橡皮圈及4-0缝合线以诱导炎症。选左侧为实验组,右侧为对照组。实验组用镍钛拉簧在2种植体间即刻施加1.96N的水平力,对照组不加力。分别于种植体植入后1、2、4和8周处死动物。采用HE染色法观察种植体-骨界面的组织学变化。结果:观察期内实验组2枚种植体松动,未脱落。1周时种植体周围牙龈黏膜组织均出现明显的红、肿等炎性反应。实验组1周时种植体出现大量的急慢性炎症细胞,毛细血管增生扩张,有少许新生纤维组织,越接近尖部炎性反应越轻;2周时中部压力侧骨质连续性破坏;4周时颈部见少量骨质破坏,同时有片状的新生骨形成;8周时颈部骨质破坏吸收,中部压力侧见纤维增生,排列杂乱。对照组骨质破坏较实验组轻。结论:微螺钉种植体在感染状态下,骨质的吸收由颈部向尖部进行;加力较不加力对骨质破坏严重。

    作者:崔淑霞;LIU Jinzhong;ZHANG Yuelan 刊期: 2010年第06期

  • 河南省卢氏县2009年度克山病监测结果分析

    为掌握河南省克山病病情现状和消长趋势,科学评估防控效果,作者按照2008年中央补助地方公共卫生专项资金河南省地方病防治项目实施方案和技术方案的内容与要求,于2009年4月至2009年5月在三门峡市卢氏县开展了克山病监测工作,现将监测结果分析报道如下。

    作者:崔才磊;于红阳;岳义田 刊期: 2010年第06期

  • 儿童过敏性紫癜相关病原体检测

    过敏性紫癜也称亨一舒综合征(Henoch—Schon—lein purpura,HSP),是一种儿童常见的系统性血管炎性综合征,多发于学龄前和学龄儿童,其发病呈逐年增多趋势。HSP的发病机制目前仍未明确,感染常常是HSP的诱发因素。为探讨HSP与病原体感染的关系,指导临床治疗,作者检测了50例HSP患儿和50例健康对照儿童9种病原体的感染情况,现报道如下。

    作者:李晓红;盛光耀 刊期: 2010年第06期

  • 利用常染色体STR多态性进行同胞鉴定5例

    目前可应用于亲缘关系鉴定的检测技术手段有染色体短串联重复序列(STR)、单核苷酸多态性(SNP)分析及线粒体测序等。Y-STR呈父系连锁遗传,仅适用于男性间的鉴别;SNP检测技术方法复杂,费用昂贵;线粒体DNA存在高突变率和异质性[1],因此,实际应用受限。常染色体STR具有多态性高、分型简便、检出灵敏度高及特异性好等特点,且可进行多位点复合扩增,目前已成为国内外DNA亲子鉴定的主要检测手段。

    作者:宋丽君;郭嘉林;陈辉;周军卫;李晓文 刊期: 2010年第06期

  • 狼疮肾炎患者肾组织中Toll样受体9的表达

    目的:探讨Toll样受体9(TLR9)在狼疮肾炎(LN)患者肾组织的表达及其临床意义。方法:选取57例LN患者(病理分型:Ⅱ型8例,Ⅲ型12例,Ⅳ型20例,Ⅴ型17例)和11例正常对照的肾组织,应用免疫组织化学SP法检测TLR9表达情况,并对LN患者肾组织TLR9与肾脏病理和临床实验室指标相关性进行分析。结果:各型LN患者肾组织中肾小球、肾小管间质TLR9表达与正常肾组织比较差异均有统计学意义(F=19.016和17.731,P〈0.001)。LN患者肾小球TLR9表达水平与肾脏病理活动指数(AI)、肾小球细胞增殖程度、24h尿蛋白定量呈正相关(r/rs=0.891、0.563和0.417,P均〈0.001),与肾小球滤过率(eGFR)呈负相关(r=-0.525,P〈0.001);肾小管间质TLR9表达水平与AI、肾小管间质损害程度、24h尿蛋白定量呈正相关(r/rs=0.726、0.609和0.354,P均〈0.001),与eGFR呈负相关(r=-0.515,P〈0.001)。结论:LN患者肾小球和肾小管间质中TLR9表达增高,并与肾脏病理活动程度相关。

    作者:史晓飞;赵占正;刘升云;高冠民 刊期: 2010年第06期

  • 低出生体质量儿营养支持50例

    随着新生儿医学的不断进步,低出生体质量儿日渐增多,低出生体质量儿由于宫内营养储存不足和不能立刻适应宫外生存条件,如不能及时供给合理而足够的营养,会发生严重的营养缺乏。营养缺乏早期可增加低体质量儿的死亡率,远期则会导致身材矮小、智力下降及神经发育不良等,因此应注意加强低出生体质量儿的营养支持。福建医科大学第二临床医学院儿科自2003年起加强对低出生体质量儿的管理,采用早期静脉高营养、早期微量喂养及非营养性吸吮等方法治疗低出生体质量儿,取得较好的效果,报道如下。

    作者:汪勇芬;王玉芳 刊期: 2010年第06期

  • 阿藿烯对高脂血症大鼠血脂及抗氧化作用的影响

    阿霍烯(ajoene),又名大蒜烯,化学名为4,5,9-三硫代-9-氧-1,6,11-烯十二烷(4,5,9.thiene-9-OX-ide),是大蒜中没有辛辣味和蒜臭味、性质较为稳定的有机硫化物,具有抗血栓形成、抗肿瘤及抗菌消炎等多种功效,但其对高脂血症的独立作用研究较少,在体动物实验的报道也不多[1]。作者利用大鼠高脂血症动物模型,

    作者:张晓林;翁闪凡;杨安平;刘爱平;张相年;赵树进 刊期: 2010年第06期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主管:河南省教育厅

主办:郑州大学