学术投稿

端粒酶逆转录酶基因修饰对人骨髓间质干细胞端粒酶活性的影响

李克;何炜;邢莹;樊青霞

关键词:间质干细胞, 端粒酶, 端粒酶逆转录酶, 转染
摘要:目的:观察外源性端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的异位表达对人骨髓间质干细胞(MSCs)端粒酶活性的影响.方法:无菌条件下,抽取健康志愿者骨髓2 mL,经离心、洗涤及传代培养后备用.取第5代人MSCs接种至6孔培养板中,待其融合达90%~95%时,用脂质体法对其进行转染,转染共分4组:正常对照组、脂质体组、pEGFP-C1质粒组、pEGFP-hTERT质粒组.选用G418进行抗性克隆的筛选.30 d后,正常对照组﹑脂质体组细胞全部死亡,而pEGFP-C1质粒组、pEGFP-hTERT质粒组则获得抗性克隆;将获得的抗性克隆进一步扩增后,选用pEGFP-C1质粒组、pEGFP-hTERT质粒组和未转染的人骨髓MSCs分别进行RT-PCR,检测转染前后hTERT mRNA的表达情况,并通过PCR-ELISA检测上述细胞的端粒酶活性.结果:未转染组和pEGFP-C1质粒组的人骨髓MSCs hTERT mRNA表达阴性,且端粒酶呈阴性;pEGFP-hTERT质粒组的人骨髓MSCs hTERT mRNA表达阳性,且端粒酶呈阳性.结论:外源性hTERT基因可以在人骨髓MSCs中获得异位表达,并能诱导人骨髓MSCs的端粒酶活性.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 转化生长因子-β1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

    目的:研究转化生长因子;GAAB2;β1;(TGF;GAAB2;β1)对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达结缔组织生长因子(CTGF) 的影响.方法:体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为对照组:无血清培养基(FSM) 培养; 实验组:分别用含1 μg /L,2 μg /L,4 μg /L TGF-β1的FSM培养,24 h后,分别用RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果:对照组CTGF mRNA和蛋白表达均为阴性;实验组CTGF mRNA和蛋白表达皆呈阳性,且随着TGF-β1质量浓度的增加,2者的表达量有增高的趋势(F=80.889和200.300,P均<0.01).结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞中CTGF的表达.

    作者:李彤;袁彬;邹飞 刊期: 2008年第01期

  • 胃癌组织中多巴胺受体亚型D4和c-fos mRNA的表达

    目的:检测胃癌组织中多巴胺受体亚型D4和癌基因c-fos mRNA的表达,探讨2者在胃癌发生、发展中的作用.方法:应用原位杂交技术检测42例胃癌和35例正常胃黏膜组织中的D4和c-fos mRNA的表达,并分析2者与临床病理指标的关系及2者的相关性.结果:与正常胃黏膜比较,胃癌组织中D4阳性率明显降低(P<0.01),c-fos阳性率明显升高(P<0.01).D4在肿瘤直径≥5 cm组中的阳性率明显低于<5 cm组(P<0.05),但与肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移无关(P>0.05);c-fos在高中分化及肿瘤直径≥5 cm胃癌组中的阳性率分别高于低分化组(P<0.01)和<5 cm组(P<0.05),而与肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移无关(P>0.05);胃癌组织中D4和c-fos的表达呈负相关(P<0.05),D4表达阳性的胃癌组织中c-fos阳性率明显低于D4阴性组.结论:D4和c-fos在胃癌发生及癌细胞增殖中起重要作用,且c-fos与胃癌分化密切相关.胃癌组织中D4低表达与c-fos高表达可能协同参与了胃癌的发生发展.

    作者:郭长青;张冬红;刘国永 刊期: 2008年第01期

  • 2005年河南省学生身体形态、机能发育调查

    目的:掌握河南省学生发育现状及趋势,为政府部门制定相关政策提供依据.方法:依据全国学生体质调研细则的统一要求和标准,分层整群抽取河南15市154所中小学、4所大学,按照<2005年全国学生体质健康调研工作手册>的要求,对学生进行身体形态、机能指标测定(监测指标:身高、体质量、胸围、肺活量、脉搏、血压、握力等).获有效卡46 801张,其中城市学生23 392人,乡村学生23 409人;男生23 405人,女生23 396人.结果:①多数形态发育指标较往年有所增长,少数指标呈负增长.城市男生身高比2000年增高0.11 cm,城市女生比2000年降低0.24 cm,城市男、女生体质量分别比2000年增加0.79 kg和0.27 kg; 乡村男生、乡村女生身高比2000年分别增高0.23 cm和0.45 cm,乡村男生体质量减轻了0.03 kg,乡村女生增加了0.22 kg.②体质量指数(BMI,kg/m2)比2000年增加了0.05至0.37.③肺活量平均下降了170 mL.④乡村学生的多数形态指标低于城市学生,特别是6~11岁男女生身高分别比同龄同性别城市学生低3.0~4.5 cm、2.5~3.5 cm.结论:河南学生的形态发育水平较往年有所提高,营养状况进一步改善;但机能指标下降.乡村小学生的发育水平远低于城市小学生.

    作者:张德甫;李岚;郭蔚蔚;娄晓民;杨汴生;李然;宋长安 刊期: 2008年第01期

  • 奥曲肽对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用

    目的:探讨奥曲肽对于人肺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察奥曲肽作用48 h后对于人肺癌细胞株生长的影响.以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响.结果:MTT法结果显示奥曲肽作用48 h可抑制A549的生长, 并呈剂量依赖性, IC50=1.62 mg/L.流式细胞仪测定结果显示:G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,且奥曲肽质量浓度增高到1.60 mg/L以上时,G2/M期比例均降为0,细胞周期直接阻滞在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:奥曲肽可抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,机制可能是将肺癌细胞阻滞于G0/G1期.

    作者:田春桃;韩利艳;范慧娟 刊期: 2008年第01期

  • Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立

    目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性.方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene 3 000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素.结果:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等.结论:基于Rotor-Gene 的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选.

    作者:莫耀南;赵贵森;郑海燕;刘良;杨渝珍 刊期: 2008年第01期

  • 经典型苯丙酮尿症家系8例产前诊断

    目的:建立一种利用苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因内含子3中短串联重复序列(STR)多态性连锁分析进行经典型苯丙酮尿症(PKU)产前诊断的方法.方法:提取8例经典型PKU家系成员外周血DNA,提取4例胎儿羊水DNA,采用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳.银染法进行连锁分析.结果:8例家系中4例可使用连锁分析方法进行精确产前诊断,4例胎儿为经典型PKU患者的可能性较小,出生后经新生儿筛查,证实为健康个体.2例家系仅能进行50%的排除诊断,2例家系无法进行产前诊断.结论:采用单个STR位点连锁分析能对部分经典型PKU家系有效进行产前诊断.

    作者:孔祥东;史惠蓉;常青;郭红军;魏振玲 刊期: 2008年第01期

  • 经胸超声心动图在房间隔缺损封堵术中的应用

    房间隔缺损(ASD) 是常见的先天性心脏病.经胸超声心动图(TTE)评价ASD经济、无创、操作简便,在ASD的介入性治疗中逐渐得到重视和肯定.2003年1月至2006年1月,作者在45例ASD封堵术中应用了TTE,现将TTE在ASD封堵术前病例筛选、术中监测以及疗效评价中的价值总结如下.

    作者:张瑞芳 刊期: 2008年第01期

  • 脑血管疾病失语症患者78例Schuell法语言训练效果观察

    脑血管疾病后的失语症(aphasia)是常见的临床症状之一,其主要原因是患者语言中枢及其传导的受累[1].作者对78例失语症患者进行了Schuell训练,并观察了不同失语程度、治疗介入时间、文化程度等因素对失语症治疗效果的影响,报道如下.

    作者:熊华春;滕军放;郭钢花;李哲 刊期: 2008年第01期

  • DDD模式起搏器植入患者二尖瓣反流的二维及实时三维超声心动图观察

    目的:探讨房室顺序双心腔起搏、感知触发和抑制型(DDD)模式起搏器植入患者二尖瓣反流(MR)的发生率及其机制.方法:应用二维及实时三维超声心动图检测20例DDD模式起搏器植入患者(病例组)和20例正常人(对照组)MR发生率、程度及左心室收缩同步性,测算MR面积与左房面积之比(MRA/LAA)、左心室舒张末期容积(VLED)、收缩末期容积(VLES)、每搏输出量(VS)、射血分数(LVEF)、17节段心电图QRS波起始点至左心室小容积点时间的平均值 (Tmean)及其标准差(T-SD)、17节段心电图QRS波起始点至左心室小容积点时间的大时间差( Tmax ).结果:病例组与对照组MR发生率分别为90%和36%.与对照组相比,病例组MRA/LAA、VLES增大(P<0.01),LVEF减小(P<0.05),T-SD、Tmax延长(P<0.05); 2组年龄、心率、VLED、Tmean差异均无统计学意义(P>0.05);病例组中MRA/LAA与T-SD、Tmax呈正相关(r分别为0.797和0.818,P<0.05).结论:DDD模式起搏器植入患者MR发生率明显增高,推测其发生机制可能主要与该类患者左心室收缩失同步有关.

    作者:刘琳;张连仲;张娜;楚英杰 刊期: 2008年第01期

  • 妊娠期肝病50例临床分析

    妊娠期肝病是产科高危妊娠之一,母婴死亡率高,孕产妇的死亡率在80%以上.常见的妊娠期肝病有妊娠期病毒性肝炎、妊娠期肝内胆汁淤积综合征(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)、妊娠期急性脂肪肝(acute fatty liver in pregnancy,AFLP)和妊娠高血压疾病肝损害[1-3].作者对本院2000年以来收治的50例妊娠合并肝病的病例进行回顾性分析,探讨妊娠合并肝病对母婴的影响.

    作者:韩丽萍;尤小燕 刊期: 2008年第01期

  • 幽门螺杆菌感染14C-尿素呼气试验检测体会

    幽门螺杆菌(Hp)是一种寄生在胃黏膜上皮与黏膜间微需氧的革兰阴性杆菌,通过黏液性足突,牢固地附着在胃黏膜细胞表面,破坏细胞,引起炎症反应.Hp感染是慢性活动性胃炎、十二指肠溃疡的病因,也是胃腺癌的第一类致癌因子[1].

    作者:汪群英;李建生 刊期: 2008年第01期

  • 表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱在甲状腺癌诊断及临床分期中的应用

    目的:用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析正常人和甲状腺癌患者血清蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别正常人和甲状腺癌及Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型.方法:应用SELDI-TOF-MS技术检测72例血清标本的蛋白质质谱,其中甲状腺癌 40 例(Ⅰ-Ⅱ期 26 例,Ⅲ-Ⅳ期14 例),正常人32例.应用支持向量机和判别分析的方法分析质谱数据,建立甲状腺癌诊断模型并留一法交叉验证.结果:区分甲状腺癌和正常人的诊断模型交叉检验敏感性为100%,特异性为86%,总的符合率为93%;区分Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌和Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌患者的诊断模型对Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌检出的敏感性为77%,特异性为86%,对Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌检出的敏感性为86%,特异性为77%,总的符合率为80%.结论:应用SELDI-TOF-MS技术平台和生物信息技术建立的诊断模型为甲状腺癌的早期诊断及临床分期提供了新的手段.

    作者:张静;卢秀波;刘洋;徐桂安;李振宇 刊期: 2008年第01期

  • 婴幼儿双肾积水110例治疗体会

    婴幼儿双肾积水在临床上比单肾积水少见,但有逐年增加趋势,治疗上也较复杂[1],2000年1月至2006年1月,本院共收治婴幼儿双肾积水110例,现分析报道如下.

    作者:毕慧萍;张春英;范应中;张谦;华峰;李泸平;杨玉齐 刊期: 2008年第01期

  • 河南省汉族IgA肾病患者外周血白细胞内皮细胞固有型一氧化氮合酶基因多态性检测

    目的:研究河南省汉族人内皮细胞固有型一氧化氮合酶(ecNOS)基因多态性与IgA肾病的关联性.方法:采用聚合酶链反应法对河南省198例IgA肾病患者和206例正常人群的ecNOS基因第4内含子的可变串联重复序列(VNTR)4a/b多态性进行基因型分析,比较2组间基因频率、等位基因频率分布情况.结果:2组患者ecNOS基因的可变串联重复序列表现为ecNOS4a/4a,ecNOS4b/4b,ecNOS4a/4b 3种基因型.IgA肾病患者组和正常对照组之间的ecNOS基因的基因型和等位基因频率差异无统计学意义.结论:ecNOS基因第4内含子的VNTR多态性与IgA肾病血管病变的发生无明显关联.

    作者:程根阳;李建生;刘章锁 刊期: 2008年第01期

  • 河南某县中学生预防艾滋病健康教育现状调查

    目的:了解河南某县中学生预防艾滋病健康教育的现状.方法:采取分层整群抽样方法,抽取某县2所初中和2所高中学生进行问卷调查.调查内容主要包括艾滋病知识、态度和行为.比较不同性别、级别及村别调查结果的差异.结果:共发放问卷3 620份,收回有效问卷3 611份(99.7%).AIDS基本知识5个问题的回答正确率总计为30.8%,AIDS 4种主要传播途径的回答正确率均在80%左右,非传播途径的回答正确率相对较低,男生普遍高于女生,高中生明显高于初中生.有性行为、吸烟及吸毒等不良行为者分别占0.6%,7.2%,1.0%,对婚前性行为持反对态度者占65.1%.愿意与HIV感染者一起学习与进餐者分别占64.3%和56.1%,会主动关心和帮助及对关心帮助HIV感染者的行为表示赞同者分别占88.3%和93.8%.AIDS高发村学生对AIDS基本知识的知晓率及对HIV感染者持正向态度者均明显高于低发村.获得AIDS知识的3种主要途径分别为电视、报刊及公益广告,91.9%的学生认为有必要了解AIDS相关知识.结论:部分中学生对AIDS相关知识还有误解,存在今后可能感染AIDS的不良行为和不正确的人生态度.建议教育部门及早采取有效措施对中学生开展广泛、深入的预防AIDS健康教育及性健康教育.

    作者:支玉红 刊期: 2008年第01期

  • 子痫前期患者胎盘组织中细胞间黏附分子1的表达

    目的:检测子痫前期患者和正常孕妇胎盘组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平,探讨其在子痫前期发病机制中的作用.方法:采用免疫组化PV-9000法检测50例子痫前期患者(其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期30例)和30例正常孕妇子宫胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达情况.结果:重度子痫前期患者胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达明显高于正常孕妇组和轻度子痫前期组(P<0.05),轻度子痫前期组与正常孕妇组ICAM-1的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:重度子痫前期患者胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达增强,可能通过引起母胎界面炎症反应而参与子痫前期的发病.

    作者:袁恩武;赵明耀;张曦;贾莉婷;张展 刊期: 2008年第01期

  • 非缺失型Duchenne型肌营养不良症家系16例产前诊断

    目的:探讨使用Duchenne型肌营养不良症(DMD)基因区域多态性位点在非缺失型DMD家系产前诊断的价值.方法:用DMD基因非编码区4个(CA)n重复序列多态性结合染色体核型分析,对16例非缺失型DMD家系进行产前诊断.结果:产前诊断发现4例男胎、2例女胎获得风险X染色体,余1例女胎和9例男胎均未携带风险X染色体.且检测结果的可靠性经出生婴儿DNA分析及临床症状检测得到证实.结论:胎儿性别鉴定结合基因连锁分析的方法,在规范的检测程序和有效的质量控制下,能准确地对非缺失型DMD进行产前遗传学诊断,可有效预防患儿出生.

    作者:孔祥东;孟晓燕;史惠蓉;郭红军;江淼 刊期: 2008年第01期

  • 重症肌无力患者胸腺组织中天冬氨酰氨基葡糖苷酶基因mRNA的表达

    目的:探讨重症肌无力(MG)患者胸腺组织中天冬氨酰氨基葡糖苷酶(AGA)基因mRNA的表达情况.方法:利用荧光定量聚合酶链反应方法检测比较39例不同临床分型MG患者和10例正常人胸腺组织的AGA mRNA表达情况.结果:MG患者和正常人胸腺组织中AGA基因mRNA的表达水平分别为0.67±0.14和0.61±0.08,差异有统计学意义(P<0.05).不同临床分型的MG患者之间胸腺组织中AGA mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:MG患者胸腺组织中AGA基因的转录水平表达异常,其可能是MG的致病基因或相关基因.

    作者:郭亮;张清勇;赵国强;高峰;崔新征;李静孟 刊期: 2008年第01期

  • 知母中总皂苷提取工艺的优化

    目的:考察知母中总皂苷的提取工艺.方法:以知母中菝葜皂苷元为定量检测指标,HPLC法测定菝葜皂苷元的含量; 通过正交实验考察了3个因素(提取溶剂的浓度,固液体积比和提取时间)对知母中总皂苷提取率的影响.结果:标准曲线线性范围为0.10~1.10 g/L(r=0.999 8),平均回收率(98.00±3.43)%.采用索氏提取法筛选的知母中总皂苷的佳提取工艺为:提取剂为体积分数50%的乙醇,固液体积比为1GA6FA10,提取时间为4 h.结论:所确定的知母总皂苷的提取工艺合理可行,值得进一步向工业化生产推广.

    作者:胡玉荣;郭新红;蔡中琴;刘世龙;张振中 刊期: 2008年第01期

  • 反相高效液相色谱法测定帕马溴原料及氨酚帕马溴片中帕马溴含量

    目的:建立测定帕马溴原料及氨酚帕马溴片中帕马溴含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).方法:采用RP-HPLC,Diamonsil C18色谱柱(5 μm, 150 mm×4.6 mm),流动相为0.005 mol/L磷酸二氢铵溶液-甲醇(65GA6FA25),检测波长为280 nm,流速1.0 mL*min-1.结果:帕马溴线性范围为4.98~79.7 mg/L(r=0.999),平均回收率为100.4%,RSD为0.96%.结论:该方法简便、准确、灵敏,适用于帕马溴的含量测定.

    作者:陈志红;闻京伟;李建军;屈凌波 刊期: 2008年第01期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主管:河南省教育厅

主办:郑州大学