杜氏盐藻硝酸盐还原酶5'端cDNA片段的快速扩增

谢华；许培荣；姜国忠；吕玉民；郭玉忠；薛乐勋

关键词：杜氏盐藻, 硝酸盐还原酶, cDNA, RACE

摘要：目的:根据已扩增的杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA的部分序列,利用5'RACE的方法扩增其5'上游未知片段.方法:根据盐藻硝酸盐还原酶cDNA已知的部分序列,设计一条磷酸化反转录引物、2对特异性反向PCR引物.提取盐藻细胞mRNA,利用5'RACE的方法反转录成cDNA,然后利用PCR方法扩增5'上游序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析.结果:在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为431 bp,编码143个氨基酸.推导的氨基酸序列与下列物种的硝酸盐还原酶进行同源性比较:Dunaliellatertiolecta为83%,衣藻为68%,团藻为66%,小球藻为64%.结论:所克隆的序列为杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段.

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作者：孙玉梅；王淑芹刊期： 2004年第01期
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作者：郑若昆刊期： 2004年第01期
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作者：吕玉民；姜国忠；牛向丽；谢华；张贵星；薛乐勋刊期： 2004年第01期