学术投稿

人乳头瘤病毒11型E7蛋白基因重组腺病毒载体的构建及表达

王飞;毕志刚;李光富;吴海玮;王群;刘丰;王新军;张兆松

关键词:尖锐湿疣, 乳头状瘤病毒, 人, 基因病毒, 遗传载体, 基因表达
摘要:目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7蛋白基因腺病毒载体,并在真核细胞表达.方法用PCR法,扩增出HPV11E7基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体形成重组质粒TOPO-E7.TOPO-E7与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DESTTM重组反应,E7基因被重组到腺病毒载体上.该载体经PacI酶切,脂质体法转染人胚肾293A细胞,获得重组腺病毒载体pAD-E7.pAD-E7转染人HaCaT细胞,激光共聚焦显微镜分析E7蛋白表达情况.结果经酶切及序列分析鉴定,重组质粒TOPO-E7成功构建.重组子一D-E7转染293A细胞后,获得滴度为1.4×107 pfu/mL的重组腺病毒载体.该载体转染HaCaT细胞,48 h后激光共聚焦显微镜下可见细胞内E7蛋白表达.结论重组腺病毒载体能有效介导HPV11E7基因在真核细胞的表达.
中华皮肤科杂志相关文献
  • 梅毒合并疑似软下疳性横痃一例

    患者男,33岁,近来有嫖娼史.因外生殖器疼痛性溃疡伴淋巴结溢脓1个月而就诊.患者于1个月前出现外生殖器疼痛性溃疡,当时未引起注意,继而溃疡面积扩大,腹股沟淋巴结肿大,疼痛逐渐加剧,淋巴结穿孔流脓.

    作者:薛华忠;邵长庚 刊期: 2005年第05期

  • 含HPV16 E7的病毒样颗粒诱导小鼠产生特异性CTL反应

    目的探讨含BPVL1/HPV16 E7嵌合型乳头瘤病毒样颗粒(VLPs)在动物小鼠体内的免疫学特性.方法将HPV16 E7基因分为(a)、(b)、(c)3段,与BPVL1连接后表达的BPVL1/HPV16 E7(a)、(b)、(c)嵌合型VLP分别免疫小鼠C57BL/6J,对其淋巴结淋巴细胞进行细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)分析.结果接受嵌合型VLP BPVL1/HPV16 E7(b)免疫的小鼠淋巴结淋巴细胞可以引发很强的对C-2细胞(HPV16 E7aa47-59转染的EL-4细胞)的特异性CTL反应,但不能对EL-4细胞产生细胞毒性作用.结论含BPVL1/PV16 E7嵌合型VLP作为抗原输送系统致敏小鼠T淋巴细胞并引发抗原特异性CTL反应,可能为HPV疫苗的设计提供一个新手段.

    作者:程浩;叶俊;周健 刊期: 2005年第05期

  • 咪喹莫特对BALB/c小鼠细胞因子生成的影响

    目的探讨咪喹莫特的免疫调节机制.方法ELISA检测经咪喹莫特灌胃(30 mg/kg)后不同时间点的BALB/c小鼠血清干扰素α(IFN-α)、白介素12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素4(IL-4)浓度的变化.ELISA检测喂食咪喹莫特的BALB/c小鼠脾细胞在与0.25μg/mL刀豆素A共孵育时分泌IFN-γ、IL-4的能力.结果咪喹莫特体内诱导BALB/c小鼠生成IFN-α、IL-12,在诱导后2 h达高峰;咪喹莫特体内无诱导BALB/c小鼠生成IFN-γ、IL-4的作用;接受咪喹莫特灌胃的BALB/c小鼠脾细胞体外受ConA诱导时,分泌IFN-γ和IL-12的能力增强.结论咪喹莫特诱导BALB/c小鼠分泌IFN-α、IL-12等前炎症因子,并由此促进机体获得性免疫.

    作者:周小勇;李新宇;郑家润 刊期: 2005年第05期

  • 超声治疗尖锐湿疣临床观察

    2003年3-12月,我们对55例尖锐湿疣患者进行了超声治疗,并以CO2激光治疗53例尖锐湿疣患者作为对照,现将结果报道如下.

    作者:王苏平;李成志;刁庆春;田耘博;梁成萍 刊期: 2005年第05期

  • 连接酶链反应检测性病患者沙眼衣原体感染

    目的评价连接酶链反应(LCR)诊断性病患者尿道/宫颈中沙眼衣原体(Ct)的意义.方法STD门诊尿道(宫颈)炎患者276例,取尿道/宫颈拭子,以LCR分析法检测Ct.采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,其中56例患者同时进行尿道/宫颈拭子Ct细胞培养.差异性结果由PCR法扩增Ct的主要外膜蛋白基因来进行确认,确定LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性.结果LCR分析法检测尿道/宫颈拭子Ct的敏感性、特异性分别为96.7%和100%.采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,与单独用每份标本逐一进行LCR检测比较,结果完全一致,符合率为100%.结论以尿道/宫颈拭子为标本,LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性高.适用于诊断泌尿生殖道Ct感染.用标本相混合的方法LCR分析检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,适用于Ct感染的普查.

    作者:郑和义;曹经江 刊期: 2005年第05期

  • 吸烟和嗜酒与银屑病关系的Meta分析

    近年来有关吸烟、嗜酒与银屑病关系的研究报道逐渐增多,但迄今为止国内外对于这一问题仍存在争议.我们对吸烟和嗜酒2个因素,采用荟萃(Meta)分析方法,对国内外公开发表的文献进行系统性评价,为银屑病的预防和卫生决策提供科学依据.

    作者:庞春坤;刘云霞;刘建平 刊期: 2005年第05期

  • 六种抗菌药物治疗非淋菌性尿道(宫颈)炎的疗效分析

    沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)和解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)是引起非淋菌性尿道(宫颈)炎的两种主要病原体.有学者报道Ct和Uu对抗菌药物治疗的疗效较好[1],然而近年来,我们发现治疗泌尿生殖道Ct和Uu感染患者疗效并不令人满意.为此,我们总结了2001年1月至2003年8月符合条件的随访病例878例进行回顾性分析.

    作者:齐蔓莉;张楠;刘全忠 刊期: 2005年第05期

  • 我国梅毒流行和临床特点

    2001年统计全国梅毒发病率为6.11/10万,在8种监测性病中构成比由1991年1.08%上升到2000年的933%[1].众所周知,梅毒对人体危害严重,传染性强,潜伏期长,临床表现复杂,诊疗有一定的困难等,历来为人们重视,是性病防治中的重点.拟纵观当代梅毒流行和临床情况,复习建国前后防治梅毒经验,从流行病学、临床医学等方面进行分析对比,了解我国近期梅毒的特点,旨在更好地指导我们开展防治梅毒的工作.

    作者:韩国柱;邵长庚 刊期: 2005年第05期

  • 生殖器部位皮损的单纯疱疹病毒检测及分型

    目的探讨生殖器疱疹部位皮损的不典型表现及其与单纯疱疹病毒型别的关系.方法对外生殖器部位及其周围有硬结或疖肿、裂隙、毛囊炎等非水疱性皮肤黏膜损害的患者进行临床资料采集和分析,并对皮损标本进行单纯疱疹病毒的分离培养、PCR检测和病毒分型.结果105例有外生殖器部位非水疱性皮损的患者入选本研究,在硬结(或疖肿)、裂隙、毛囊炎、类似擦破、单个溃疡、非特异性红斑和红肿渗液性包皮龟头炎皮损中,PCR检测HSV的阳性率分别33.3%(6/18)、20%(3/15)、37.5%(6/16)、28.6%(2/7)、33.3%(4/12)、20%(5/25)和50%(6/12),总的检出阳性率为30.5%(32/105).分离培养法检测HSV的阳性率分别为22.2%(4/18)、13.3%(2/15)、25%(4/16)、14.3%(1/7)、33.3%(4/12)、8%(2/25)和41.7%(5/12),总的检出阳性率为21%(22/105).两种方法检测HSV的总检出率差异无统计学意义(κ=0.095,P=0.114).HSV-PCR分型结果与荧光单克隆抗体分型结果相符.在所有HSV阳性者中,HSV-1感染占9.4%(3/32),HSV-2感染占90.6%(29/32).结论生殖器HSV感染的皮肤黏膜损害多样,可为外生殖器部位的硬结(疖肿)、裂隙、毛囊炎、类似擦破、单个溃疡、非特异性红斑和红肿渗液性包皮龟头炎等不典型表现,而且主要由HSV-2感染引起.

    作者:赖伟红;韩国柱;姜文华;苏晓红;薛华忠 刊期: 2005年第05期

  • 尖锐湿疣皮损中人乳头瘤病毒基因分型研究

    目的采用反向杂交研究尖锐湿疣皮损中人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况.方法提取尖锐湿疣新鲜标本的HPV DNA,采用PGMY09/11引物系统进行聚合酶链反应(PCR).PCR产物在标记有37种HPV型特异性探针的尼龙膜条带上进行HPV DNA杂交分型.所有DNA模板采用HPV6和11型特异性引物进行PCR检测验证.数据经SPSS11.0统计软件分析.结果杂交结果显示201例标本HPVDNA均为阳性,共发现31种HPV基因型,其主要的HPV基因型名称及所占比例分别如下:HPV11(53.7%,108/201)、HPV6(43.8%,88/201)、HPV16(6.5%,13/201)、HPV52(6.0%,12/201)、HPV33和HPVcp6108(均为5.5%,11/201)、HPV42(5.0%,10/201)等.60.2%(121/201)的标本由单一型HPV感染,39.8%的标本由混合型HPV感染.HPV6和11型特异性引物PCR结果显示HPV6和11的阳性率分别为45.8%和56.2%,与杂交结果比较,一致性分别为98.5%和96.5%,κ值分别为0.97和0.93,P值均<0.001.结论至少有31种HPV基因型与尖锐湿疣相关.HPV11阳性率高,HPV68、40、54、67、73、82、35、64和83在尖锐湿疣中少见,HPV cp6108在尖锐湿疣中首次发现,且阳性率较高(与HPV33并列第5位).HPV26、69、70、71、72和IS39可能与尖锐湿疣不相关.尖锐湿疣中单一型和混合型HPV阳性率分别为60.2%(121/201)和39.8%(80/201).

    作者:蒋明军;王书崎;龚向东;余艳华;陈强;高省;尹跃平;韩国柱;孙建方 刊期: 2005年第05期

  • 以骨骼损害为主要表现的早期胎传梅毒一例

    患儿女,5个月.因左上臂活动受限15 d于2003年11月27日来我院就诊.患儿母亲15 d前给其穿衣时发现其左上臂抬高时哭闹不安,并发现左肩部肿胀,遂到乡医院就诊,用草药外敷症状无好转,且渐加重,甚至左上肢呈瘫痪状态,仅手部尚有活动,当地镇卫生院X线检查诊断考虑骨髓炎故而转诊我院.患儿自患病后无发热,第一胎足月顺产,定期进行预防接种,无其他特殊病史.父母体健,非近亲结婚,否认皮肤病史、外生殖器溃疡史及其他性病史.但其母亲婚前曾与另一男友有非婚性生活史,患儿就诊日查其母快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)1:16阳性,梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)阳性.

    作者:林德儒;黄少英 刊期: 2005年第05期

  • 人乳头瘤病毒感染中细胞生长分化标志分子的表达

    角蛋白10(K10)、角蛋白17(K17)、角蛋白16(K16)、角质形成细胞转谷酰胺酶(TGK)、细丝聚集素是表皮细胞增生分化的重要标志分子.在病理情况下伴随着表皮角质形成细胞的生长分化异常,这些分子可有异常表达[1,2].我们通过免疫组化LAB法,以银屑病和正常人皮肤为对照,原位检测了K17、K16、TGK、细丝聚集素、K10在扁平疣、寻常疣、尖锐湿疣中的表达情况,现报道如下.

    作者:訾绍霞;刘玮;吴延芳;蔡瑞康 刊期: 2005年第05期

  • 手术联合微波治疗男性巨大尖锐湿疣11例

    男性生殖器的巨大尖锐湿疣因疣体过大,常合并组织器官畸形,尤其是发生于包皮龟头处者,由于治疗不及时或处理不得当,导致病情复杂化,使临床治疗难度较大.近年来,我们收治了一些男性巨大尖锐湿疣合并包皮龟头畸形,甚至并发巨大溃疡、感染的患者,经采用手术加微波为主的综合治疗,取得了满意的疗效,报道如下.

    作者:梁刘萍;江丽芬;于娜沙;彭学标;曾抗 刊期: 2005年第05期

  • 嘉瑞有奖征文通知

    作者: 刊期: 2005年第05期

  • 头孢曲松治疗孕妇早期梅毒

    头孢曲松为第三代半合成头孢菌素,具有血浆有效浓度高、维持时间长、组织穿透力强、能通过胎盘屏障、对孕妇及胎儿危害小等特点.虽然一些研究发现头孢曲松可有效治疗神经梅毒和早期梅毒[1-3],但其治疗孕妇梅毒是否有效尚未见报道.1997年5月至2001年5月,我们用头孢曲松治疗了11例有青霉素过敏史或皮试阳性的早期梅毒孕妇,现将结果报道如下.

    作者:周平玉;顾志英;徐金华;王侠生;廖康煌 刊期: 2005年第05期

  • 微波与药物联合治疗带状疱疹后遗神经痛50例

    带状疱疹是一种常见病,可发生于各个年龄段,但以中老年为多见,因免疫力低下是一个重要诱因.其中老年患者可并发带状疱疹后遗神经痛.目前对于带状疱疹后遗神经痛的治疗较为棘手,单纯药物治疗疗效不令人满意.我们在临床上用微波联合药物治疗带状疱疹后遗神经痛,疗效明显好于单纯药物治疗.

    作者:詹旭辉 刊期: 2005年第05期

  • 以口腔黏膜损害为首发表现的二期梅毒二例

    例1女,19岁.因舌尖部破溃10 d就诊.患者10 d前无明显诱因舌背前缘出现一片状糜烂面,无自觉症状.患者未婚,半年前有性接触史,否认有口交史.

    作者:袁定芬;肖德奇 刊期: 2005年第05期

  • 全国医学真菌学学习班办班通知

    作者: 刊期: 2005年第05期

  • 全国皮肤美容激光与光子治疗学习班通知

    作者: 刊期: 2005年第05期

  • 系统性红斑狼疮患者生活质量调查与分析

    本研究采用国内外通用的生活质量(quality of life,QOL)测量工具,测量系统性红斑狼疮(SLE)患者的生活质量,筛选对生活质量的影响因素,为临床有针对性地采取措施和合理治疗提供依据.

    作者:陈欢;谢红付 刊期: 2005年第05期

中华皮肤科杂志

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