陈方敏；石家齐；谷江；贾本忠；李登宝
目的:用目前常用的干细胞分离方法对正常SD大鼠的胰腺成体干细胞进行分离、培养和鉴定,为胰腺癌干细胞的进一步研究奠定基础.方法:选取正常SD大鼠胰腺用胶原酶P消化分离,并用低血清无糖培养基纯化胰腺细胞,以RT-PCR,免疫组化和Western blot方法鉴定胰腺成体干细胞标志物巢蛋白(nestin)并通过RT-PCR证明细胞中存在ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2).结果:成功分离到所需胰腺成体干细胞,并通过以上3种方法证明分离所得细胞表达巢蛋白.结论:以胶原酶P作为消化液,低血清无糖培养作为分离方法能够成功的从正常胰腺中分离得胰腺成体干细胞.
作者：张烨；任华健；卫积书；吴峻立；徐泽宽；苗毅 刊期： 2009年第04期
目的:研究β2肾上腺素受体阻滞剂对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响.方法:将不同浓度的β2肾上腺素受体阻滞剂(ICI118551)加入含雌激素(17β-E2)培养的第2代大鼠成骨细胞中,分别于培养3、6、9、12天时,使用PNPP法和放免方法检测成骨细胞培养基中的碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素含量,并用MTT法检测成骨细胞的增殖率.结果:ICI118551可提高雌激素刺激成骨细胞培养上清中碱性磷酸酶浓度促进细胞增殖,尤其当其浓度为10-5及10-6mol/L时,但对成骨细胞培养上清中骨钙素水平的影响不显著.结论:β2肾上腺素受体阻滞剂能够显著促进雌激素刺激大鼠成骨细胞的释放和增殖作用.
作者：程庆华；余利鹏；刘锋；胡安全 刊期： 2009年第04期
目的:通过试制半固体脱钙体系,建立在坚硬、透光性差的骨性材料内部观察、研究荧光基因标记细胞的方法.方法:靶细胞以携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒载体标记后,接种于骨性生物支架材料内部;负载荧光细胞的生物材料经多聚甲醛固定后,研究不同脱钙剂对细胞荧光的影响;负载荧光细胞的生物材料经自创的半固体脱钙体系脱钙后,制备冰冻切片,并与塑料包埋切片、常规石蜡切片比较.结果:荧光倒置显微镜可以观察到在生物材料内部生长的绿色荧光细胞.骨性材料在半固体脱钙过程中,荧光倒置显微镜可以观察到,材料中不透光的坚硬钙质成分逐渐消失,而细胞在原位保持形态和荧光;以不脱钙塑料包埋切片为对照,半固体脱钙和随后的冰冻切片可原位精细保持细胞的荧光和形态,且可适用于大块骨性组织.结论:本研究采用自行试制的半固体脱钙体系,可原位保留骨性材料内部生长细胞的位置、形态和荧光,为进行骨性材料内部结构及功能的相关研究提供依据.
作者：江汕；江千里；裴国献；赵培冉 刊期： 2009年第04期
目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.
作者：胡爱平；游娜；徐家蓉；蒋秀琴；缪珩；鲁一兵 刊期： 2009年第04期
目的:评价氟比洛芬酯超前镇痛联合异丙酚、瑞芬太尼静脉麻醉在小儿疝修补术中的麻醉效果.方法:年龄3～7岁、拟择期行疝修补术的患儿90例,ASA I级,随机分为氯胺酮组(K组)、丙泊酚复合瑞芬太尼组(P组)和氟比洛芬酯超前镇痛联合异丙酚、瑞芬太尼组(F组),每组30例.记录术前、切皮、缝合皮肤时的心率(HR),记录患儿停药后清醒时间,随访术后2 h烦躁发生率.结果:K组患儿切皮和缝合皮肤时心率较切皮前增高,同时亦高于同时点的P组和F组心率(P<0.05).停药后P组、F组苏醒时间短于K组(P<0.05).在术后2 h,P组烦躁发生率较K组、F组增高(P<0.05).结论:氟比洛芬酯超前镇痛联合异丙酚、瑞芬太尼麻醉用于小儿疝修补术,苏醒快,术后烦躁发生率低,可以常规使用.
作者：姚乃修；颜学军 刊期： 2009年第04期
目的:观察运动训练对脊髓损伤后大鼠运动功能的影响,以及脊髓内脑源性神经营养因子(BDNF)、诱导轴突分化因子Slit2、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达规律,研究康复训练对损伤后脊髓微环境的影响.方法:雄性成年SD大鼠70只,随机分为10个实验组和4个对照组,每组5只.以改良Allen's撞击法制作脊髓损伤模型.从损伤后7天起,实验组分别进行1-4周活动平板训练,对照组不训练.训练结束时(即损伤后14、21、28、35天)分别进行运动功能评估,免疫组织化学二步法结合图像平均光密度分析观察大鼠脊髓内BDNF、Slit2以及GFAP的表达.结果:各不同训练时程后,大鼠运动功能评分均有改善(P<0.05);训练后,大鼠脊髓内BDNF以及Slit2的表达较对照组均有明显增加(P<0.05),GFAP的表达高峰延迟.结论:康复训练可能通过上调脊髓内BDNF和Slit2的表达水平,延迟星型胶质细胞的增生,使脊髓内神经元再生微环境朝有利方向变化来促进神经通路重建,改善运动功能.
作者：雷晓婷；刘兴波；王红星；徐冬晨；王彤；丁新生 刊期： 2009年第04期
目的:观察较长期酒精处理及戒断后,大鼠背侧纹状体突触可塑性的变化.方法:在大鼠慢性饮酒10、20、30天及戒断后1、3、7天用脑片记录场电位的方法观察背侧纹状体长时程增强(long-term potentiation,LTP)诱导的变化,用透射电镜(TEM)观察突触超微结构的变化.结果:慢性饮酒不同时期对大鼠背侧纹状体LTP的诱导均有阻抑,饮酒10天阻抑作用强(P<0.05),饮酒20、30天的阻抑作用逐步减弱(P>0.05),戒断7天LTP较对照组有反跳性增强(P<0.05);戒断7天突触界面活性区长度变长、饮酒20、30大组突触间隙宽度变窄、饮酒30天组和撤酒7天组突触后膜致密物质(post synaptic density,PSD)变薄(以上差异均为P<0.05).结论:慢性酒精刺激可导致大鼠背侧纹状体突触传递效能和结合特性的改变.
作者：王慎军；谢桂琴；崔胜忠；李菁；周蓉；陈玲；袁孝如 刊期： 2009年第04期
目的:研究局部表面麻醉在逆行输尿管硬镜治疗输尿管结石中的可行性.方法:收集逆行硬性输尿管镜治疗输尿管结石3 637例.分为采用持续硬膜外麻醉、骶麻或腰麻称为椎管内麻醉(IA)阶段和基本采用局部麻醉(LA)辅以镇痛剂(盐酸哌替啶)阶段.回顾性分析两者在1次手术成功率、手术并发症、麻醉并发症、疼痛评分、麻醉耐受(有效性)、手术时间,疾病治疗时间、可比的治疗费用等并进行比较.结果:在麻醉耐受度、手术成功率、手术时间、手术并发症等方面二者无明显差异(P>0.05).而在疼痛评分、疾病治疗时间、可比的治疗费用有显著差异,LA组的疼痛评分较IA组高(P<0.05),麻醉并发症发生率、治疗时间和可比治疗费用LA组远低于IA组(P<0.01).结论:局部表面麻醉下逆行输尿管硬镜治疗输尿管结石町以作为一种较为安全、有效、可行、治疗费用低廉的方法,术中疼痛可一定程度降低手术并发症.
作者：陈方敏；石家齐；谷江；贾本忠；李登宝 刊期： 2009年第04期
目的:探讨在激素非依赖性前列腺癌(HRPC)PC3细胞中,内皮素-1(ET-1)刺激对环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,以及内皮素受体A(ETAR)与内皮素受体B(ETBR)在此调控通路中的作用.方法:用不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L)ET-1刺激前列腺癌PC3细胞相同时间(24 h);另外用BQ123(ETAR拮抗剂)、BQ788(ETBR拮抗剂)单独作用于PC3细胞或与100 nmoL/L ET-1联合作用于细胞24 h.均采用Western blot技术检测细胞中COX-2蛋白含量的变化:采用RT-PCR技术检测细胞中COX-2 mRNA的变化情况.结果:PC3细胞在0.1-100.0 nmol/L浓度的ET-1刺激后COX-2的蛋白及mRNA表达水平均显著上调,并显示有明显的浓度依赖性.BQ123在蛋白质和mRNA水平均显著抑制ET-1介导的COX-2的上调,与单纯应用ET-1组有显著差别(P<0.05),BQ788则对ET-1介导的COX-2的表达没有抑制作用(P>0.05).结论:在前列腺癌PC3细胞中,ET-1对COX-2的表达有上调作用;ETAR参与厂这一调控过程,ETBR可能未参与此过程.这为ETAR拮抗剂和选择性COX-2抑制剂联合应用于HRPC的治疗提供了分子生物学基础.
作者：苏琦；许露伟；李文成；王自正；朱金海；贾瑞鹏 刊期： 2009年第04期
目的:利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌(MTB)对链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药性的技术平台建立.方法:应用基因芯片法测定160株MTB临床分离株的SM和EMB耐药性,并与BAC了EC960法结果进行比较,分别对结果相符与不相符的菌株进行测序.结果:基因芯片法测定160株MTB临床分离株,结果显示SM敏感111株、耐药49株,以rpsL 43、88位aag突变为agg为主.芯片检测结果EMB敏感142株、耐药18株,耐EMB的MTB以embB 306位atg突变为gtg为主.基阅芯片法检测链霉素、乙胺丁醇耐药的敏感性、特异性分别为80.0%、99%和60.0%、100%.两种测定方法结果不符的菌株中,采用基因测序法测定,结果显示基因芯片法检测点突变具有高度的特异性.结论:基阅芯片法检测MTB对SM与EMB耐药性方法具有快速、简单,特异性高,准确性高,可作为MTB的SM与EMB耐药性快速筛选方法.
作者：石小华；景奉香；胡忠义；崔振玲；赵建龙；朱蕾 刊期： 2009年第04期
目的:探讨64排螺旋CT检查肾积水的评价.方法:对临床疑诊肾积水的52例患者行64排螺旋CT容积扫描及尿路三维重建.结果:52例患者均有不同程度肾盂积水及部分输尿管扩张,其中肾盂输尿管连接部良性狭窄4例,巨输尿管1例,腔静脉后输尿管4例,输尿管结石18例,输尿管结核3例,输尿管癌8例.腹膜后纤维化3例.CT图像不仅能清晰显示肾积水的程度,还可以明确输尿管梗阻的部位及原因.结论:64排螺旋CT是评价肾积水程度及梗阻原因的重要影像学方法.
作者：高丽媛；张玉花；葛欣然 刊期： 2009年第04期
目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用.方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Westem-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况.结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-87 24 h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72 h,抑制作用逐渐增强.流式细胞术结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感.Western-blot结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化.结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用.
作者：刘莹；朱祖安；崔涛 刊期： 2009年第04期
目的:观察安博立酸(Ambrolic acid,AmbA)对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响,初步探讨AmbA对胃癌的体外抗肿瘤活性.方法:将AmbA作用于SGC-7901细胞株,MTT法测定AmbA对SGC-7901细胞增殖的抑制率;光学显微镜观察AmbA作用引起的细胞形态变化;流式细胞仪检测AmbA作用后细胞凋亡情况及进行细胞周期分析.结果:MTT实验结果表明,AmbA对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖性;流式细胞仪检测分析表明.AmbA可使细胞阻滞于S期,其作用呈剂量依赖性.结论:AmbA对SGC-7901人胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用的主要途径可能是使细胞阻滞于S期并诱导细胞凋亡.
作者：施建民；孙婧；张国铎；禹立霞；钱晓萍；刘宝瑞 刊期： 2009年第04期
目的:研究食管鳞癌中ITGA6(integrin α6)、CTHRC1(collagen triple helix repeat containing 1)基因的表达,并探讨其与食管鳞癌临床病理参数之间的关系.方法:应用免疫组化S-P法分析46例人食管鳞癌组织及10例食管正常组织中ITGA6、CTHRC1蛋白的表达情况.结果:①ITGA6、CTHRC1在食管鳞癌组织中有增强表达,表达率分别为71.7%(33/46)和56.5%(26/46),而在10例正常食管组织中均未见表达.②ITGA6、CTHRC1在淋巴结转移组中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05).③ITGA6、CTHRC1表达与年龄、性别、肿瘤大小及病理类型无明显相关性(P>0.05).结论:ITGA6、CTHRC1可能与食管鳞癌侵袭、转移相关,有望成为食管鳞癌新的治疗靶点.
作者：刘伟；施瑞华；朱宏；郝波 刊期： 2009年第04期
目的:研究新型ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林(IVT)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺动脉血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:雄性SD大鼠36只随机分成对照组、HPH模型组、IPT干预组,每组12只.IPT干预组给予IPT1.5 mg/(kg·d)灌胃,对照组及HPH模型组给予0.9%NaCl 5 ml/(kg·d)灌胃.HPH组及IPT干预组在(10.0 ±0.5)%氧浓度下饲养,每天8 h.每周6天,4周时测定平均肺动脉压(mPAP)、RV/(LV+S),逆转录聚合酶链式反应(Rr-PCR)和Western-blot技术检测各组肺动脉主干VEGF mRNA和蛋白的表达.结果:①HPH模型组大鼠mPAP和RV/(LV+S)显著高于对照组(P<0.01),IPT干预组mPAP和RV/(LV+S)较HPH模型组显著下降(P<0.01).②HPH模型组大鼠肺动脉VEGF mRNA及蛋白表达高于对照组,两者具有显著统计学意义(P<0.01),IPT干预组与HPH模型组比较,VEGF mRNA及蛋白表达均下降(P<0.01);IPT干预组与对照组比较,VEGF mRNA及蛋白表达差异无显著性(P>0.05).结论:HPH模型大鼠肺动脉VEGF mRNA及蛋白表达增加,IPT可明显抑制慢性低氧大鼠肺动脉VEGF mRNA和蛋白的表达.
作者：王珏；陈建波；解卫平；金宇；王虹 刊期： 2009年第04期
目的:探讨腔镜下深筋膜下交通静脉结扎术对较严重的慢性静脉功能不全患者治疗的效果.方法:较严重慢性静脉功能不全患者共122例,每位患者随访时间为3-4个月.其中58例单纯行大隐静脉高位结扎+抽剥术(B组),64例行大隐静脉高位结扎+抽剥术+腔镜下深筋膜下交通静脉结扎术(SEPS)(A组).结果:症状改善和分级提高的比较,两组无统计学差异(P>0.05).相关并发症的比较,除静脉曲张复发(P<0.05)以外,均无统计学差异(P>0.05).术后住院日的比较,两组无统计学差异(P>0.05).溃疡愈合率的比较,两组无统计学差异(P>0.05);愈合时间的比较,两者有显著差异(P<0.001);复发率的比较,两者有显著差异(P<0.05).结论:SEPS治疗效果满意、术后并发症少,具有较好的临床应用价值和推广前景.
作者：章希炜；杨宏宇；孙蓬；邹君杰；孙锋 刊期： 2009年第04期
目的:检测肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中波形蛋白(vimentin)的表达,研究其表达水平与肿瘤临床病理特征及临床转归的相关性.方法:收集行肾根治性切除术并经病理证实为肾细胞癌的103例病例(92例为透明细胞癌,11例为乳头状细胞癌),平均随访时间为51.2个月,通过Western Blot检测肿瘤标本中vimentin蛋白的表达情况,对肿瘤大小、分期、分级、转移及生存率等临床病理资料与vimentin表达水平的相关性行统计学分析.结果:肾癌中vimentin蛋白的表达水平与非肿瘤组织相比显著增加,并且与肿瘤大小(P=0.002)、转移(P<0.001)、pT分期(P<0.001)、分级(P<0.001)、存活率(95.8%vs72.7%,P=0.002)有相关性.单变量分析显示vimentin的表达水平对肾细胞癌发展及预后具有预测意义(P<0.05).结论:本研究的结果显示vimentin的高表达与肾细胞癌的进展呈正相关,检测vimentin表达水平可用于肾癌分期、分级及预后判断.
作者：李普；秦超；殷长军；孟小鑫；杨健；朱建 刊期： 2009年第04期
目的:微小RNA(microRNA)异常在肿瘤发生发展中起重要作用,本研究探讨microRNA mir219在肝细胞癌中的异常甲基化和异常表达,可能参与肝细胞癌的发生发展过程.方法:采用pyrosequence、TA克隆测序等方法检测正常肝组织、肝细胞癌细胞株和肝癌标本中mir219上游预测启动子区域甲基化,Taqman实时定量Rt-PCR测定肿瘤组织表达.结果:与正常肝脏组织相比,肝癌细胞株、肝癌标本中mir219上游预测启动子区域中茎环区和上游1kb区域的CpG岛存在高度甲基化.肝癌细胞株、肝癌标本中mir219表达显著下调,与其异常甲基化相关.结论:肝癌中微小RNA mir219茎环序列上游1094 bp区域存在启动子区异常甲基化,表达下调,提示mir219异常可能在肝细胞癌发生发展巾起重要作用,是潜在的抑癌基因.
作者：韩蓓；钱祝银；高文涛 刊期： 2009年第04期
目的:建立了一种单管等位基因特异性扩增法同时测定多重单核苷酸多态性(SNP).方法:以TYP基因外显子1上的3个SNP位点(71G>A、425A>T和758G>A)为例,首先采用PCR预扩增得一段含所有待测SNP位点的长片段;然后用限制性内切酶将其消化成短片段,在连接酶的作用下与设计的DNA适配器相连;以此连接产物为模板,在单个PCR管中加入一种适配器特异性通用引物和所有等位基因特异性引物进行PCR扩增;后用琼脂糖凝胶电泳法分离检测PCR扩增产物,并根据扩增片段的大小判断SNP的类型.结果:采用该法成功测定了30名健康中国人的TYP基因中的3个SNP位点,与限制性片段长度多态性法(RFLP)测定结果完全一致.结论:该方法特异性高、结果准确、检测成本低,可用于同时测定多个SNP位点.
作者：汪维鹏；李融；王森 刊期： 2009年第04期
目的:观察比索洛尔对老年高血压患者舒张性心力衰竭(DHF)的临床疗效.方法:入选老年高血压患者83例,按纽约心脏协会(NYHA)心功能分级Ⅱ～Ⅳ级,主要表现为舒张功能不全,随机分成比索洛尔干预组42例及对照组41例,两组患者均给予抗高血压及抗心力衰竭(CHF)的常规治疗,但对照组不用β受体阻滞剂.比索济尔干预组患者加用比索洛尔1.25～10.00mg/d,疗程6个月.比较两组患者治疗前后NYHA心功能分级及左室超声舒张功能指标改善情况.结果:比索洛尔干预组总有效率为95%:对照组总有效率为80%,两组比较有显著性差异(P<0.05).治疗后左室等容松弛减慢指标等容舒张时间(IVRT);左室早期充盈减慢指标二尖辦舒张早期血流大速度E峰、舒张早期和晚期充盈速度比值(E/A),E峰减速时间(DT);以及左室前后径(LAD),收缩压、舒张压、心率(HR)等左心室舒张功能指标明显优于治疗前(P<0.01);比索洛尔干预组IVRT、E、E/A、DT、LAD、HR等改善明显优于对照组.结论:比索洛尔治疗老年高血压患者的舒张性心力衰竭可显著降低心率、降压,改善心功能分级和左室舒张功能.
作者：刘爱军 刊期： 2009年第04期
南京医科大学学报（自然科学版）杂志
主管:江苏省教育厅
主办：南京医科大学
