学术投稿

肿瘤细胞3H-葡萄糖代谢测量方法的建立

张昊文;刘建军;冯爽;徐媛媛;蒋昕;刘芬菊

关键词:肿瘤细胞, 葡萄糖代谢率测定, 3H定位标记葡萄糖
摘要:目的 检测肿瘤细胞在单位时间内的葡萄糖利用率.方法 将数量为2.5×105的HCT116结肠癌细胞培养至贴壁,在培养基中加入3H定位标记(5位碳原子)的葡萄糖,30 min后终止反应,采用阴离子交换树脂滤去大分子代谢产物,通过液体闪烁计数法测量流出液中氚水的每分放射性计数,计算得到单位数目的 HCT116细胞在30min 内的葡萄糖代谢率.结果 当层析柱内的层析液体积大于5.0 ml时,层析柱对3H-葡萄糖标准液内葡萄糖的吸附率几乎达到100%(99%);30 min内3.7×105的HCT116细胞的葡萄糖代谢率约为1.23%.结论 该方法通过在细胞培养液中加入同位素3H定位标记的葡萄糖,可以准确定量测定肿瘤细胞的葡萄糖代谢率,从而为研究不同种类肿瘤细胞糖代谢及能量供给提供可靠的实验方法.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 七氟烷预处理对缺氧/复氧损伤的心肌细胞H9c2LC3蛋白表达的影响

    目的 观察七氟烷预处理对缺氧/复氧(H/R)损伤的H9c2大鼠心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响,探讨自噬在七氟烷预处理延迟性保护中的作用.方法 H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组(CON);缺氧/复氧组H/R(缺氧2 h,复氧1 h);七氟烷预处理组(SEVO)予2.5%七氟烷预处理1 h,24 h后进行H/R;3-MA+SEVO组,七氟烷预处理前15 min 在培养液内加入3-MA(10 mmol/L),24 h后进行H/R;3-MA组,即在培养液内加入3-MA(10 mmol/L),25 h后进行H/R.取复氧后心肌细胞,MTT法检测各组H9c2心肌细胞存活率,Western blot 法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达.结果 与CON组相比H/R组和SEVO组细胞存活率均降低(均P<0.05);与H/R组相比SEVO组、3-MA组和3-MA+SEVO组细胞存活率均增高(均P<0.05).Western blot结果显示,与CON组相比SEVO组、H/R组自噬蛋白LC3-Ⅱ表达均上调(均P<0.05),与H/R组相比SEVO组LC3-Ⅱ蛋白表达均下调(均P<0.05),而3-MA组和3-MA+SEVO组表达均显著下调(均P<0.01).结论 七氟烷预处理对H/R损伤H9c2心肌细胞具有延迟性保护作用,自噬可能参与了七氟烷预处理的延迟性保护机制.

    作者:刘琴;李凌云;乔世刚;魏兴;谢红;王琛 刊期: 2011年第01期

  • 环孢素A壳聚糖纳米微粒抑制兔结膜成纤维细胞增生的作用

    目的 研究自制的环孢素A壳聚糖纳米微粒[CS(CsA)-NP]对兔结膜成纤维细胞(RCFs)增生的抑制作用.方法 取第4~6代培养的兔结膜成纤维细胞,分别加入CS(CsA)-NP、环孢素A(CsA)原药、壳聚糖纳米微粒(CS-NP)及平衡盐溶液,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测对RCFs的抑制作用.结果 CS(CsA)-NP、CsA原药、CS-NP以质量浓度和时间依赖方式抑制RCFs的增生.对RCFs的抑制作用CS(CsA)-NP组显著强于CsA原药组及CS-NP组(均P<0.01).结论 CS(CsA)-NP可缓慢释放药物,能有效抑制RCFs的增生,随时间延长,作用显著强于CsA原药,可作为缓释药物载体.

    作者:徐学东;管怀进;顾海鹰;陈惠英;兰小川 刊期: 2011年第01期

  • 肿瘤放射增敏是当今放射医学的研究热点

    放射医学是研究电离辐射损伤机制、诊断、治疗和防护的一门综合性交叉学科.放射生物学主要研究辐射损伤响应过程和生物学后果的分子事件和调控机制,是放射医学的基础和前沿.随着微束照射、基因组学与蛋白质组学和生物信息、干细胞技术以及活细胞分子影像和实时动态成像等新技术的应用,放射医学研究取得了显著进展和突破,部分研究领域已经位于生命科学和临床医学的前沿.而放射生物学中许多基础研究与生命科学前沿的结合更加密切,放射医学与肿瘤放疗学等临床医学的结合也更加紧密,已经形成了放射医学的转化医学.

    作者:曹建平 刊期: 2011年第01期

  • 重症肺炎支原体脑炎15例临床分析

    目的 探讨重症肺炎支原体脑炎的临床特点.方法 分析15例重症肺炎支原体脑炎患儿的临床资料.结果 15例患儿除综合治疗外,予阿奇霉素、甲基强的松龙或丙种球蛋白治疗治愈好转10例,有后遗4例,1例自动出院.结论 重症肺炎支原体脑炎是支原体肺外感染的危重并发症,早期给予阿奇霉素、甲基强的松龙和/或丙种球蛋白冲击疗法可较好改善临床症状,减少后遗症的发生.

    作者:张兵兵;汤继宏;戚月凤;张利亚;顾琴 刊期: 2011年第01期

  • 抗增殖蛋白TOB1影响乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移的作用研究

    目的 研究抗增殖蛋白家族成员TOB1对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭与转移的生物学作用与机制.方法 采用脂质体介导的质粒转染和G418筛选培养法获得稳定高表达TOB1的高转移性乳腺癌细胞系MDAMB-231.通过人工基底膜侵袭实验和划痕实验检测TOB1过表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力和转移能力的影响.采用super array 基因芯片法检测TOB1引起的肿瘤转移相关基因表达的变化.结果 与对照组相比,外源性TOB1 高水平表达使MDA-MB-231 的体外侵袭能力显著降低(P<0.05),同时抑制MDA-MB-231的体外迁移能力;TOB1 表达水平的增加引起MDA-MB-231细胞中肿瘤转移抑制基因BRMS1表达的明显增加,同时显著抑制肿瘤转移相关基因HSP90、FXYD5、RHOC、S100A4等的表达(均P<0.05).结论 TOB1过表达抑制乳腺癌细胞MDAMB-231 的体外侵袭、转移,涉及的机制可能与TOB1对多种重要的肿瘤转移相关基因的表达调控有关.

    作者:焦旸;胡旭东;徐加英;张玉松;王利利;樊赛军 刊期: 2011年第01期

  • 辐射敏感性新基因 UHRF1真核表达载体的构建及鉴定

    目的 构建UHRF1的真核表达载体,并验证其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.方法 采用RTPCR方法,从乳腺癌细胞MCF-7的总cDNA中扩增出2.3kb 的 UHRF1基因的cDNA片段,经限制性内切酶Kpn I与Xho I双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pcDNA3(+)-UHRF1,利用限制性内切酶双酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;构建成功的重组质粒,经脂质体Lipofactamin2000介导转染MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆,以RT-PCR 和 Western blot 检测 UHRF1 的mRNA和蛋白的表达.结果 获得全长约为2.3kb的UHRF1基因片段;重组质粒经限制性内切酶Xho I和Kpn I酶切、电泳后显示2.3kb的UHRF1目的片段和5.4kb的pcDNA3载体片段,即UHRF1基因的cDNA已正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中;UHRF1转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后的RT-PCR和Western blot的结果显示:UHRF1的mRNA和蛋白水平均呈现高表达.结论 成功构建UHRF1基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定基础.

    作者:李新莉;孟庆慧;朱然;朱巍;樊赛军 刊期: 2011年第01期

  • 多模式镇痛在骨科术后管理中的作用

    目的 探讨多模式镇痛在骨科术后管理中的作用.方法 观察335例全关节置换和股骨干、胫腓骨骨折内固定术后患者多模式镇痛效果及疼痛管理的作用.结果 患者术后6h时疼痛评分升高(P<0.001),经及时处理后,疼痛评分均显著下降(P<0.001);使用不同镇痛方法,其副作用的发生率亦不同.结论 围手术期多模式镇痛的实施中,疼痛管理起着重要的作用.

    作者:顾美珍;艾红珍;姜习凤 刊期: 2011年第01期

  • 动脉粥样硬化患者血液中基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的基因表达

    目的 通过检测动脉粥样硬化(AS)患者血液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)的基因表达水平,探讨AS发生的分子机制及预测因子.方法 AS患者120例为动脉硬化组,72例正常体检者为对照组.用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测其血液中MMP-9和TIMP-1 mRNA表达水平.结果 MMP-9和TIMP-1的RT-PCR产物序列与GenBank上人MMP-9 mRNA和TIMP-1基因片段完全一致.动脉硬化组的MMP-9基因表达水平高于对照组MMP-9基因表达水平,但差异无统计学意义(P>0.05).动脉硬化组的TIMP-1基因表达水平低于对照组TIMP-1基因表达水平,差异有统计学意义(P<0.05).MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值,动脉硬化组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 AS患者TIMP-1基因表达水平的降低与MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值升高可能是AS发生的分子机制之一,二者一起可以作为AS发生的预测因子.

    作者:苏伟;高枫;龚少愚;魏慧渊;朱红俊;周春刚;陆曙 刊期: 2011年第01期

  • 高危型人乳头状瘤病毒检测用于宫颈病变筛查的评价

    目的 探讨高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)检测在官颈病变筛查中的价值.方法 分析380例同时行HR-HPV 检测、液基细胞学检查和活组织病理学检查的宫颈病变筛查患者的临床资料.结果 以活检宫颈上皮内瘤样变Ⅰ级(CINI)及CINI以上判定为活检阳性,活检阳性组HR-HPV感染率(85.4%)与阴性组(39.1%)相比,差异有高度统计学意义(P<0.01),CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ和宫颈癌组HR-HPV感染率分别为77.5%、85.3%、91.9%和100%.细胞学检查为宫颈上皮内病变阴性(NILM)病例中,HR-HPV阳性组活检阳性率(47.4%)与阴性组(28.1%)相比;意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)病例中,HR-HPV阳性组活检(阳性率65.1%)与阴性组(23.4%相比;低度和高度鳞状上皮内病变(LSIL,HSIL)病例中,HR-HPV阳性组活检阳性率(88.6%)与阴性组(15.8%)相比;以上各组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 HR-HPV感染率与宫颈病变严重程度呈正相关,HR-HPV检测在宫颈病变筛查中有很重要的临床价值.

    作者:刘洁;平静;王俊利;常正义;庞广福;黄海玲 刊期: 2011年第01期

  • 跨损伤DNA 合成通路中关键基因在食管鳞癌中的表达研究

    目的 研究跨损伤DNA合成通路中的关键基因RAD6、RAD18、PCNA和UBC13在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异.方法 采用 SYBR Green实时定量PCR技术检测60例食管鳞癌患者癌组织和其中的24例癌旁组织中RAD6、RAD18、PCNA和UBC13基因表达情况.结果 RAD6和UBC13在食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异均无统计学意义(均P>0.05);RAD18和PCNA的表达在食管鳞癌中均显著上升,与癌旁组织相比差异均有高度统计学意义(均P<0.01).结论 RAD18和PCNA的表达升高可能是食管鳞癌的一个特征.RAD18和PCNA表达的升高可能与食管鳞癌中跨损伤DNA合成途径作用增强有关.

    作者:朱孝中;俞力超;施舜缤;邱鹏;钱永跃;陈勇兵 刊期: 2011年第01期

  • LCBD术后胆管一期缝合与T管引流疗效比较

    目的 探讨内镜逆行胰胆管造影/内镜括约肌切开(ERCP/EST)取石失败后即行腹腔镜胆总管探查术(LCBDE),胆总管一期缝合的可行性.方法 35例ERCP/EST取石失败的胆总管结石患者,行LCBDE,其中16例行胆总管一期缝合(缝合组);19例留置T管引流(T管组),比较两组疗效.结果 与T管组相比,缝合组在减少术后胆汁引流量、进食时间、带管时间具有优势(P<0.05);两组在术中失血量、手术时间、术后住院时间及近期并发症方面无显著差异(P>0.05).结论 ERCP/EST取石失败后,LCBDE术中胆管一期缝合是安全可行的,有利于患者的恢复.

    作者:周勇;王浩炜;蒋国勤 刊期: 2011年第01期

  • Sina 基因同源类似基因1在大鼠脊髓损伤过程中的表达变化

    目的 观察 Sina 基因同源类似基因1(SIAH1)在大鼠脊髓损伤过程中的表达情况,分析它们与神经元存活和死亡、胶质细胞活化增殖等生物学的关系,探讨它们在脊髓损伤和修复过程中的生物学功能.方法 制作脊髓损伤模型,利用Western blot、免疫组织化学、免疫荧光技术观察SIAH1在损伤脊髓中的表达变化、组织分布与细胞定位,在此基础上探讨SIAH1在脊髓损伤后的病理生理意义.结果 Western blot结果显示SIAH1经历了在损伤后8 h、1 d和2 d的增加后开始下降,直到损伤后14 d仍没有明显上调的变化趋势.免疫组化结果显示在脊髓损伤后1 d,SIAH1的阳性信号在临近损伤中心的脊髓中明显增加,而在脊髓损伤后7 d,SIAH1阳性的细胞数明显减少.免疫荧光结果显示SIAH1与神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞存在共定位.结论 脊髓损伤后脊髓中SIAH1的表达上调可能参与神经元的凋亡过程以及星形胶质细胞和小胶质细胞的活化的病理生理过程.

    作者:陈向东;张烽;沈爱国 刊期: 2011年第01期

  • 帕瑞昔布钠复合丙泊酚靶控输注用于无痛人流的效应室半数有效浓度

    目的 研究帕瑞昔布钠复合丙泊酚靶控输注(TCI)用于不同孕产妇人流术时满足手术需求的丙泊酚效应室半数有效浓度(EC50).方法 孕期小于10周的早孕产妇180例,根据既往受孕情况分为3组:A组为无阴道生育史及人流术史组;B组为无阴道生育史但有人流术史组;C组为有阴道生育史组.每组随机分为实验组(A1、B1、C1)和空白对照组(A2,B2,C2),于术前30 min静脉注射帕瑞昔布钠40 mg,术中靶控输注丙泊酚行全身静脉麻醉.采用改良序贯法测定各组丙泊酚效应室EC50;于唤醒即刻、唤醒后15 min、唤醒后30 min行视觉模拟评分观察术后宫缩痛情况.结果 3组实验组(A1、B1、C1)丙泊酚效应室EC50及95%可信区间(CI)分别为6.15μg/ml[(6.04~6.25)μg/ml]、6.10μg/ml[(6.04~6.17)μg/ml]、5.80μg/ml[(5.70~6.08)μg/ml],与各自空白对照组(A2、B2、C2)比较差异均有统计学意义(均P<0.05);各实验组视觉模拟评分值均低于空白对照组(均P<0.05).结论 帕瑞昔布钠复合丙泊酚TCI可降低无痛人流术时的丙泊酚效应室EC50,减轻术后宫缩痛;对有无阴道生育及人流术史没有影响.

    作者:姜秀丽;王翠;邵芹;谢红;李华;韩奔宏;王琛 刊期: 2011年第01期

  • 胞外信号调节激酶及核因子-κB在胃腺癌组织中的表达及其意义

    目的 探讨胞外信号调节激酶(ERK)和核因子-κB(NF-κB)在胃腺癌及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系.方法 通过免疫组化及RT-PCR法,检测36例胃腺癌组织及癌旁正常组织中ERK和NF-κB的蛋白及mRNA表达情况,分析组织中蛋白的表达率及表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 (1)胃腺癌组织中ERK、NF-κB蛋白及mRNA表达显著高于癌旁正常组织(均P<0.01);(2)ERK及NF-κB在低分化、Ⅲ-Ⅳ期的胃腺癌组织中显著升高(均P<0.01),ERK在有淋巴结转移的胃腺癌组织中表达升高(P<0.05),而NFκB在胃腺癌组织中的表达与淋巴结转移无明显的相关性(P>0.05),ERK及NF-κB在胃腺癌组织中的表达与患者的性别、年龄、病变部位亦无相关性(均P>0.05);(3)ERK和NF-κB的表达之间呈正相关(r=0.653,P<0.01).结论 胃腺癌组织中ERK和NF-κB表达上调,两者的表达成正相关.两者在胃癌的发生发展中可能起重要作用,为临床早期诊断、预后判断及治疗胃癌提供了新的思路.

    作者:王翀;杨霞;李国华;吴平安 刊期: 2011年第01期

  • 112例先兆子痫患者凝血-纤维活性与血小板指标变化关系的探讨

    目的 探讨先兆子痫患者凝血-纤维活性与血小板指标变化的关化及其临床意义.方法 检测112例先兆子痫患者(先兆子痫组又分轻、重度先兆子痫组)、54例妊娠妇女(妊娠组)以及37例非妊娠妇女(非妊娠组)的凝血-纤维活性和血小板的相关指标,采用统计学方法进行比较.结果 重度先兆子痫凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)及抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)与其他三组比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),凝血酶时间(TT)与轻度先兆子痫组和妊娠组相比差有统计学意义(P<0.05或0.01);先兆子痫血小板计数(PLT)较妊娠组及非妊娠组明显减少(P<0.01),而血小板分布宽度(PDW)、血小板体积(MPV)增高(P<0.01).重度先兆子痫PLT、PDW与轻度相比,差异均有统计学意义(均P<0.05),重度先兆子痫组产科并发症的发生率显著增加.结论 先兆子痫患者血液的高凝状态和血小板指标远远超过妊娠妇女及非妊娠妇女,子痫前期患者的凝血-纤维活性平衡失调,失调的严重程度与患者病情程度直接相关.

    作者:崔玉;钱志红;贾素红 刊期: 2011年第01期

  • 婴儿法洛四联症根治手术40例临床分析

    目的 总结婴儿法洛四联症(TOF)根治术的治疗经验,探讨提高手术成功率的措施.方法 回顾性分析40例婴儿法洛四联症根治手术的临床资料.结果 本组39例患儿治愈出院,围手术期死亡1例(2.5%),其余患者术后随访2~36个月,均恢复良好,紫绀消失.结论 小于1岁婴儿TOF根治术是安全可靠的,提高手术和体外循环技术水平、加强术后监护是确保手术成功的关键.

    作者:廖健毅;徐洪军;徐永根;曹鼎方 刊期: 2011年第01期

  • 常州市两次麻疹强化免疫效果比较

    目的 对比常州市两次麻疹减毒活疫苗(MV)强化免疫(SIA)的效果,探讨麻疹控制措施.方法 用描述流行病学分析方法,对比常州市两次麻疹SIA效果.结果 2007年11月MV SIA后,2008年麻疹报告发病率为24.13/10万,较2007年上升91.66%;SIA后8个月麻疹发病同比平均上升118.57%;<15岁年龄组发病构成比同比上升11.17%;SIA前后常住、流动儿童麻疹疫苗接种率差异无统计学意义(P>0.05).2009年4月开展MVSIA,SIA前麻疹发病同比平均上升221.30%;SIA后8个月麻疹发病同比平均下降88.69%,<15岁年龄组发病构成比同比下降50.03%;SIA后流动儿童麻疹疫苗接种率明显提高(P<0.05).结论 2007年MV SIA低覆盖是SIA后麻疹高发的主要原因,2009年开展的高质量MV SIA成功削平了麻疹发病高峰.政府参与、多部门配合是开展高质量MV SIA的基础.

    作者:林琴;郝超;张建陶;姚杏娟;卞琛;韩长磊;凌良健 刊期: 2011年第01期

  • 微柱凝胶法和凝聚胺法检测IgG抗体效价的比较

    目的 探寻检测IgG抗体效价的较佳方法.方法 所有血清标本均经2-巯基乙醇(2-Me)处理后分别用微柱凝胶和凝聚胺两种方法检测IgG抗A/B抗体效价,比较检测结果的差异性.结果 微柱凝胶法检测抗体效价IgG抗A/B结果较凝聚胺法更灵敏,两者差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 微柱凝胶法较凝聚胺法更适于孕妇血清IgG抗体效价检测的临床应用,且该法操作简便快速,结果易于观察,易于标准化.

    作者:祁琳;温会燕;林军 刊期: 2011年第01期

  • 中子急性损伤对GM-CSF转基因小鼠肝脏和肺中VEGF表达的影响

    目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)转基因小鼠经中子照后肺脏和肝脏中血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达变化.方法 BALB/C小鼠进行全身中子照射,吸收剂量为0.6Gy,分为未转基因组和转基因组,转基因组于照射前24 h进行hGM-CSF活体基因电转染.两组小鼠照射后1、14和28 d分批活杀,应用HE染色观察组织病理形态学变化,免疫组化法检测VEGF的蛋白表达及用Western blot研究VEGF在肺脏和肝脏中的表达变化.结果 转基因组小鼠在照后14~28 d,肺脏及肝脏病理损伤较轻,VEGF蛋白表达水平较未转基因组增高.结论 GM-CSF 基因活体转染对小鼠中子急性损伤极期和恢复期血管生成和恢复具有促进作用.

    作者:王彬;杨占山;王天昶;李娜;胡莉钧;杨斌俊 刊期: 2011年第01期

  • 米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗子宫瘢痕妊娠6例分析

    目的 探讨米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗子宫瘢痕妊娠的临床价值.方法 分析6例子宫瘢痕妊娠的保守治疗的临床资料.结果 6例子宫瘢痕妊娠患者使用米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗效果满意,均无阴道大出血及子宫破裂等严重并发症发生.结论 对确诊的子宫瘢痕妊娠患者使用米非司酮联合氨甲蝶呤保守治疗,对保留子宫的功能和提高患者的生存质量有着重大意义.

    作者:陈媛媛 刊期: 2011年第01期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学