学术投稿

当归ISSR-PCR反应体系的建立优化及引物筛选

李硕;李敏;卢道会;李文博;邓元宝

关键词:当归, ISSR, 反应体系, 引物筛选
摘要:目的 建立并优化当归的ISSR-PCR反应体系,并进行引物筛选.方法 以当归基因组DNA为模板,通过单因素实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Taq DNA聚合酶、dNTP、模板、引物)以及热循环参数(退火温度、退火时间、变性时间、延伸时间、循环数)对扩增结果的影响.结果 找出了各自的适条件,建立了适合当归ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在20μl反应体系中,内含10×Taq Buffer(含1.5 mmol·L-1MgCl2)、1.25U TaqDNA聚合酶、250 μmol·L-1dNTP、40 ng模板、0.25 μmol· L-1引物.扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸150 s,循环结束后72℃延伸7 min,-4℃保存.结论 以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出17条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物.该研究为当归药材DNA鉴定、种质资源研究以及优良品种选育奠定了基础.
时珍国医国药杂志相关文献
  • 中西医结合补救治疗幽门螺杆菌感染的临床研究

    目的 探讨中西医结合补救治疗幽门螺杆菌感染临床效果,以期提高临床治疗水平.方法 选取2011年1月至2013年4月130例三联疗法失败的幽门螺杆菌感染患者为研究对象,分成2组,对照组65例,继续三联疗法治疗4周,观察组根据中医对幽门螺杆菌感染的辨证分型予以辨证用药,在对照组基础上加用中药治疗,观察治疗后临床效果情况.结果 在总临床效果上,对照组治愈率36.92%,总有效率为78.46%,观察组治愈率为63.08%,总有效率为90.77%;在溃疡面愈合上,对照组治愈率20%,总有效率70.77%,观察组治愈率55.39%,总有效率89.23%;在幽门螺杆菌转阴率上,对照组为69.23%,观察组为86.15%;在满意度上,对照组非常满意43.08%,总满意度为81.54%,观察组非常满意为66.16%,总满意度93.85%.以上情况两组比较有明显差异性(P<0.05),有统计学意义.结论 中西医结合补救治疗幽门螺杆菌感染临床效果,有助于提高临床效果和患者满意度.

    作者:尚品杰;柳静;夏永欣 刊期: 2015年第02期

  • 红景天抗氧化作用对阿尔茨海默病干预机制研究进展

    阿尔茨海默氏症是一种以严重认知和记忆功能减退为临床表现的退行性病变,近年来阿尔茨海默氏症的氧化应激致病学说受到关注.红景天具有抗氧化损伤、清除自由基的独特功效,对阿尔茨海默氏症有较好疗效.该文综述红景天及其有效成分对阿尔茨海默氏症的抗氧化作用机制研究进展,进一步研究、开发和利用红景天治疗阿尔茨海默氏症提供参考.

    作者:何黎黎;顾健;林芸竹 刊期: 2015年第02期

  • 逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响

    目的 观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响.方法 将160只雌性小鼠随机分为4组:疏肝高、低剂量组;COH组和空白对照组,每组40只;健康雄性小鼠80只,每组20只.应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein-6,BMP-6)蛋白和mRNA的表达,并比较各组获卵数、优质卵泡率、妊娠率及子宫胚胎数.结果 疏肝高低剂量组及空白对照组妊娠率均高于COH组(P<0.05);疏肝高低剂量组卵母细胞BMP-6蛋白及mRNA表达均高于空白对照组和COH组(P<0.05),其中疏肝高剂量组表达高于疏肝低剂量组(P<0.05).结论 逍遥丸可在促性腺激素应用的基础上增加小鼠妊娠率,其作用机制可能与调控卵母细胞BMP-6的表达,提高卵母细胞质量相关.

    作者:杨丽芸;杜惠兰;白静;孙晓换;范丽洁 刊期: 2015年第02期

  • 感冒灵水提工艺的正交试验法优选

    目的 确定感冒灵佳水提工艺参数,为感冒灵水提工艺的大生产提供参考.方法 以蒙花苷提取率、水提液蒸干残渣65%浸出物为评定指标,采用正交实验设计优化感冒灵水提工艺参数.结果 感冒灵水提佳工艺条件为:以7倍量水提取3次,每次提取2h.结论 该提取工艺稳定、合理,对大生产具有指导意义.

    作者:邓海欣;闫海杰;陈周全;张跃飞;王龙虎 刊期: 2015年第02期

  • 乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响

    目的 观察乌梅丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠上皮细胞Notch信号通路的影响,揭示该方治疗UC的作用机制.方法以SD大鼠为研究对象,采用TNBS/乙醇灌肠诱导UC形成,通过乌梅丸灌胃给药,Q-PCR法检测各组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1、Math-1mRNA的表达.结果与空白组比较,模型组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1mRNA表达显著增强,Math-1mRNA表达明显降低(P<0.05);乌梅丸方给药后,大、中、小剂量组大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1 mRNA表达明显降低,Math-1 mRNA表达显著增高(P<0.05).结论乌梅丸可通过Notch信号通路调节结肠上皮细胞的增殖和分化,对溃疡性结肠炎起治疗作用.

    作者:闫曙光;惠毅 刊期: 2015年第02期

  • 贯叶金丝桃中苯并二蒽酮类成分的超声提取和大孔树脂的吸附研究

    目的 研究贯叶金丝桃中苯并二蒽酮类成分的超声提取以及大孔吸附树脂纯化工艺.方法 采用单因素实验研究超声提取条件,以每克药材中金丝桃素和伪金丝桃素提取量之和为指标,考察了超声提取中影响苯并二蒽酮类成分提取量的因素.通过静态吸附和动态吸附实验选择分离介质,并对所选树脂的分离工艺进行研究.结果 贯叶金丝桃中苯并二蒽酮类成分优提取条件为:15倍量70%的乙醇超声提取2次,每次40min.选取D101大孔树脂为分离介质,上样流速为0.5 BV/h,以6BV 70%乙醇以2BV/h流速洗脱目标物,终产品中含苯并二蒽酮类成分约6.3mg/g.结论 该贯叶金丝桃中苯并二蒽酮类成分的超声提取和大孔树脂分离富集工艺操作条件温和,稳定可靠.

    作者:胡坪;蔡璠璠;李飏;章弘扬;王月荣;张敏 刊期: 2015年第02期

  • 何洪阳教授治疗股骨头坏死临床经验管窥

    总结何洪阳教授治疗股骨头坏死的经验,治疗的方法主要包括中药内服、理筋推拿、患髋练功和自我保健,主要体现了内外兼治、筋骨并重、养血通络和医患合作的治疗特点,阐明了痰瘀阻络是主要病机,扶正通络和综合治疗强壮关节的学术观点.

    作者:罗详飞;何洪阳;肖清清;吕泽斌 刊期: 2015年第02期

  • 焦虑症的针灸临床治疗及选穴特点分析

    回顾2005年以来针灸治疗焦虑症的相关文献,总结针灸治疗焦虑症的优势及选穴特点及规律,为今后焦虑症针灸治疗方案标准的建立提供依据.从传统针刺疗法、电针疗法、针药结合疗法、针刺结合心理疗法、其他疗法及焦虑症的针灸选穴特点进行综述.文献资料归纳显示,焦虑症针灸临床治疗选择多见的是百会、神门、印堂、内关、三阴交、足三里等穴.焦虑症的针灸治疗选穴突出了辨病论治、专病专穴的选穴方法,强调了中医脏腑辨证及情志疾病“从心、脑、肾论治”的治疗特点.

    作者:程新慧;刘奇;张承舜;余曙光 刊期: 2015年第02期

  • 冠心病痰瘀衍变与心脏彩超指标关系浅析

    目的 应用超声技术评价左心收缩功能,探讨冠心病痰瘀衍变左心室结构和左心室收缩功能变化的特异性及其相互关系,以指导临床治疗.方法 选择冠心病患者267例作为研究对象,其中非痰非瘀证组118例,痰凝心脉证组72例,痰瘀痹阻证组77例,对3组研究对象进行超声检测并作对比分析.结果 由非痰非瘀证组、痰凝心脉证组到痰瘀痹阻证组IVSd、LVPWd、EF、FS和二尖瓣(MV)EF斜率值总体上呈递减趋势,痰瘀痹阻证组与痰凝心脉证、非痰非瘀证组比较EF和FS值明显降低,呈显著差异(P<0.01),而三组间IVSd、LVPWd和二尖瓣(MV) EF斜率值没有明显差异.结论 冠心病痰瘀衍变与左心室收缩功能损害程度有一定关系.

    作者:喻松仁;艾志福;周丽;丁成华;袁肇凯 刊期: 2015年第02期

  • 山莓叶成分的高效液相色谱-串联质谱分析

    目的 分析湘西常用于医治腹泻的苗药山莓叶的成分.方法 采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)联用技术分析山莓叶甲醇提取物,根据紫外光谱、负离子模式下的一级和二级质谱信息,与文献数据和部分对照品对照,推测化合物的结构.结果 推测了山莓叶中7种化合物的结构,其中3种为黄酮苷类化合物.结论 对山莓叶化学成分有了进一步认识,为山莓叶资源的开发提供了依据.

    作者:郭依俐;黄红兵;刘韬;唐青涛;赵志敏 刊期: 2015年第02期

  • 一种新型小动物脾虚高脂血症模型的建立

    目的 探索脾虚高脂血症实验动物模型的构建方法.方法 60只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组、脾虚高脂血症组.空白对照组予普通颗粒饲料喂饲,高脂血症组予高脂饲料喂饲,脾虚高脂血症组采用饥饱失常加运动控制及结合高脂饲料喂饲造模.4周后采用一般体征评分标准对大鼠进行评价,间苯三酚法测定尿D-木糖排泄率,全自动生化分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清淀粉酶(AMY)水平,HE染色观察肝脏形态变化,油红0染色观察肝脏脂质沉积,电镜观察大鼠肝脏超微结构变化.结果 与空白对照组相比,高脂血症组及脾虚高脂血症组在一般状态、毛发体表、肛周和总分均得分较高(均P<0.01);血清TC、LDL-C水平显著升高(均P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05);肝细胞形成大量脂质沉积,核周间隙增大,胞质内线粒体嵴减少,粗面内质网明显扩张.与高脂血症组相比,脾虚高脂血症大鼠在肛周和总分方面均明显升高(均P<0.01);血清AMY和尿D-木糖排泄率显著降低(均P<0.01).结论 饥饱失常加运动控制及结合高脂饲料喂饲造模,可以构建大鼠脾虚高脂血症动物模型.

    作者:李静;贾连群;李宁;朱美林;王俊岩;杨关林 刊期: 2015年第02期

  • 雷公连与混淆品穿心藤的薄层色谱和紫外-可见光谱鉴别研究

    目的 建立雷公连与穿心藤的薄层色谱、紫外-可见光谱鉴别方法.方法 利用紫外分光光度计测定雷公连、穿心藤的水、无水乙醇、氯仿和石油醚(60 ~90℃)4种溶剂的浸泡液的紫外-可见吸收图谱,采用紫外-可见谱线组的吸收峰数及峰位置对其结构特征进行分析鉴别;采用水、正丁醇、石油醚(60~90℃)依次超声提取雷公连、穿心藤,以石油醚-丙酮(8∶2)、石油醚-丙酮(9∶2)、石油醚-氯仿(3∶2)为展开剂,用硅胶G预制薄层板,以10%的硫酸乙醇液为显色剂,进行薄层色谱分析.结果 雷公连、穿心藤的紫外-可见光谱图的大吸收峰数及峰位置有差异,其薄层色谱主斑点位置及颜色有明显差异,且集中、分离度好.结论 所建立的方法快速、简便、可靠、灵敏、重现性好、专属性强,可为雷公连、穿心藤的药材鉴别提供参考.

    作者:吴向莉;吴红梅;陈丽;王祥培 刊期: 2015年第02期

  • 从“虚”“瘀”防治糖尿病骨质疏松症的方药研究探讨

    分析了糖尿病骨质疏松的中医病机,认为与脾肾亏虚和血瘀关系为密切.查阅了近十余年中医药防治本病的动物实验研究文献,从“虚、瘀”角度探讨了防治糖尿病骨质疏松的择药规律及所用方剂的现代医学内涵.提出对糖尿病性骨质疏松的方药研究应依据其主要病机遣药组方,从药效和作用机制方面深入开展实验研究,注意要探查针对不同病机环节所用中药之间的相互影响的关系,为临床用药提供依据.

    作者:李环宇;张林 刊期: 2015年第02期

  • 高等中医药院校大学生创新创业实践基地的建设与研究

    以长春中医药大学创新创业实践基地的建设为例,通过建立第一课堂的相关课程群、第二课堂各类竞赛、专题培训以及“科学商店”等大学生创新创业实践基地的建设,探讨高等中医药院校大学生创新创业教育模式,为提高我国创新创业中医药人才培养提供参考.

    作者:韩世伟 刊期: 2015年第02期

  • 千草脑脉通合剂活血作用研究

    目的 考察千草脑脉通合剂的活血作用.方法 建立大鼠动静脉旁路血栓模型和大鼠血瘀模型,观察药物对于血栓形成、血液粘度和凝血四项的影响.结果 千草脑脉通对于ADP(二磷酸腺苷)诱导的血小板聚集无抑制作用,但是可以抑制血栓形成,降低血液粘度,延长活化部分凝血酶时间,减少血浆纤维蛋白原含量.结论 千草脑脉通合剂可以显著改善血液流变学和凝血四项参数,具有较好的活血作用.

    作者:路娟;李宜航;房碧晗;陈哲;李光;陈曦 刊期: 2015年第02期

  • 益气化瘀清热方及其拆方影响体外培养大鼠MsC增殖、产生Col-Ⅰ的实验研究

    目的 观察益气化瘀清热方及拆方的含药血清对脂多糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)增殖、生成Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的影响.方法 MTT法检测MsC增殖;ELISA法检测Col-Ⅰ的含量.结果 各类含药血清均能抑制MsC增殖、减少Col-Ⅰ的生成,化瘀组与清热组作用强于益气组,中药复方组作用强于雷公藤组.结论 益气化瘀清热方及拆方后的各类中药均能抑制MsC增殖、减少Col-Ⅰ的生成.

    作者:翟文生;杨潆;李广;张建;张霞;郭庆寅;黄岩杰;丁樱 刊期: 2015年第02期

  • 吕光荣教授应用马钱子治疗痛证经验探析

    从适应证、炮制、配伍、剂量及煎服方法、使用注意事项等方面,总结了吕光荣教授应用马钱子治疗痛证的经验,顽痹痛证,不拘部位,无论寒证热证,都可使用马钱子;炮制用砂烫,剂量为1枚,配伍甘草、赤芍,入汤剂,间断服用;重视炮制,适用人群及服药后反应等.吕光荣教授在临床应用马钱子得心应手的原因为在正确的理论指导下,结合现代研究,立足多年的临床经验.

    作者:赵荣;宋勇 刊期: 2015年第02期

  • 松针提取物抑制病原菌作用研究及成分分析

    目的 研究松针不同提取物对病原菌的抑制作用,并初步分析其活性成分.方法 松针经水、乙醇、乙酸乙酯提取得到不同溶剂浸提液;采用牛津杯扩散法检测各浸提液的抗菌活性,采用琼脂稀释法测定低抑菌浓度、低杀菌浓度;使用GC-MS检测松针乙酸乙酯提取物的组成成分.结果 松针水、乙醇、乙酸乙酯提取物对9种供试病原菌均有良好的抑菌效果.对松针乙酸乙酯提取液的分析表明,醇类、烃类物质为其主要组成成分.结论 松针水、乙醇、乙酸乙酯提取液均有较强的体外抗菌活性,有较大开发潜力.

    作者:王经洋;李姝;杨小帆;李浩;于正洋;王敏;赵建 刊期: 2015年第02期

  • 冬虫夏草资源管理法规探讨

    通过对国内冬虫夏草资源管理现状的分析,尤其是对各地冬虫夏草管理法规现状的分析,总结出现行法规的优势与不足,为我国冬虫夏草管理法规的修订奠定了基础.结合草场生态保护,冬虫夏草生长特点,提出了冬虫夏草的可持续采集方案,以更好地实现冬虫夏草资源的可持续利用,实现草场与冬虫夏草协调可持续发展.

    作者:程元柳;邱乙;彭成;万德光;沈才洪;侯飞侠;国锦琳 刊期: 2015年第02期

  • 复方独正杆接骨膏促进家兔骨折愈合过程中VEGF表达的实验研究

    目的 观察复方独正杆接骨膏对家兔骨折愈合过程中VEGF表达的影响,从分子水平探讨复方独正杆接骨膏促进骨折愈合的作用机制.方法 成年健康家兔60只,左侧桡骨骨缺损模型复制成功后,将实验动物随机分为实验组与对照组,实验组外敷复方独正杆接骨膏治疗;对照组不予敷药.于造模术后第3、6、10周末处死两组动物各10只,行骨痂组织学检查和免疫组化检测VEGF.结果 在光学显微镜下观察,实验组与对照组比较,实验组骨折断端区域肉芽组织生长、骨皮质出现、钙盐沉积,骨改建较对照组早.免疫组化检测显示,实验组和对照组骨折断端VEGF表达在不同时期均呈阳性,造模后第3周末到第10周末,两组骨标本断端VEGF表达出现先增强后减弱的趋势,但两组MOD值在不同时期均有显著性差异(P<0.01).结论 复方独正杆接骨膏外敷治疗创伤性骨折,能促进骨折愈合过程中VEGF的表达,从而促进骨折愈合,缩短骨折愈合时间.接骨膏治疗创伤性骨折主要适用于骨折早期和中期.

    作者:田朝晖;黄琼;陈蓉;周建华;肖锋;高博 刊期: 2015年第02期

时珍国医国药杂志

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主管:湖北省黄石市卫生局

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