学术投稿

当归ISSR-PCR反应体系的建立优化及引物筛选

李硕;李敏;卢道会;李文博;邓元宝

关键词:当归, ISSR, 反应体系, 引物筛选
摘要:目的 建立并优化当归的ISSR-PCR反应体系,并进行引物筛选.方法 以当归基因组DNA为模板,通过单因素实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Taq DNA聚合酶、dNTP、模板、引物)以及热循环参数(退火温度、退火时间、变性时间、延伸时间、循环数)对扩增结果的影响.结果 找出了各自的适条件,建立了适合当归ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在20μl反应体系中,内含10×Taq Buffer(含1.5 mmol·L-1MgCl2)、1.25U TaqDNA聚合酶、250 μmol·L-1dNTP、40 ng模板、0.25 μmol· L-1引物.扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸150 s,循环结束后72℃延伸7 min,-4℃保存.结论 以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出17条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物.该研究为当归药材DNA鉴定、种质资源研究以及优良品种选育奠定了基础.
时珍国医国药杂志相关文献
  • 市售桂附地黄丸质量的高效液相指纹图谱法评价

    目的 为市售桂附地黄丸的质量控制和评价提供依据.方法 建立桂附地黄丸的HPLC指纹图谱,在此基础上评价市售桂附地黄丸的质量异同.结果 大部分厂家生产的桂附地黄丸质量一致性较好,也有部分存在一定差异.结论 所建立的桂附地黄丸HPLC指纹图谱以及不同的数据处理方法,可以为桂附地黄丸的质量控制和评价提供参考.

    作者:刘晓晴;孙磊;乔善义 刊期: 2015年第02期

  • 中医临床督导刍议

    讨论了院校教育和中医师承在中医人才培养中的优缺点.在此基础上,引入临床心理督导制度的概念,并对临床心理督导与中医师承的相似性及各自的特点进行了对比,进而建议构建中医临床督导制度,并提出了基本的原则与框架.

    作者:孙越异;徐光兴;刘娜;王蓓;殷忠勇;司群英;高玥 刊期: 2015年第02期

  • 血必净注射液治疗糖尿病足的临床分析

    目的 探索血必净注射液治疗糖尿病足的临床效果.方法 选取糖尿病足患者84例,随机分为治疗组与对照组,两组均在常规治疗基础上治疗组加用血必净注射液,观察两组患者的临床疗效、血常规变化并进行比较.结果 治疗组患者的临床疗效、血象下降显著,治疗总有效率90.48%,效果满意.结论 血必净注射液配合内外综合治疗糖尿病足提高了临床疗效,值得临床推广.

    作者:苏文博;李志悦;刘香春;蒲蔚荣 刊期: 2015年第02期

  • 马尾松树皮提取物对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用

    目的 体外探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)对四氯化碳(CCl4)损伤人正常肝细胞(L-02)的保护作用及其对血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,细胞形态观察、荧光染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,对细胞内丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、培养上清液中谷草转氨酶(AST)和丙谷转氨酶(ALT)水平分别进行检测,酶联免疫吸附法(ELISA)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及Western免疫印迹法检测细胞内HO-1活性、HO-1 mRNA及蛋白表达情况.结果 与CCl4损伤组比较,PMBE预处理组细胞存活率、GSH含量和相关抗氧化酶类水平升高,细胞凋亡和坏死比率、MDA含量及上清液中AST和ALT活性降低,HO-1活性、HO-1 mRNA和蛋白表达水平均上调,但与CCl4损伤组无明显差异.结论 PMBE对CCl4损伤L-02细胞有保护作用,其机制可能与HO-1的表达密切相关.

    作者:冯冬茹;蒋婷;蔡懿;谢衡;李若达;郑光耀;王金发;王宏斌 刊期: 2015年第02期

  • 姜黄素联合MMC对胃癌MGC-803细胞的生长抑制及细胞周期的影响

    目的 比较姜黄素分别联合低浓度和中浓度丝裂霉素C(MMC)与高浓度MMC单用对胃癌MGC-803细胞的生长抑制及增殖周期的影响,为临床上应用姜黄素作为化疗药物MMC的增效剂治疗胃癌提供实验依据.方法 将姜黄素与低浓度和高浓度MMC联合作用或高浓度MMC单独作用于体外培养的胃癌MGC-803细胞24h,采用MTT方法检测药物作用对MGC-803细胞的生长抑制效应;采用流式细胞技术检测药物作用对MGC-803细胞周期的影响.结果 姜黄素联用低剂量MMC对MGC-803细胞的生长抑制作用与中剂量MMC单用时无显著差异(P>0.05);姜黄素联用中剂量MMC对MGC-803细胞的抑制作用与高剂量MMC单用时无显著差异(P>0.05),提示姜黄素能增强MMC的作用效果.此外,姜黄素单用、MMC单用将MGC-803细胞分别阻滞于G2/M期和S期,姜黄素与MMC联用将MGC-803细胞阻滞于G2/M和S期.结论 姜黄素与MMC联用对胃癌细胞MGC-803具有明显的生长抑制作用,其可能的机制之一是姜黄素与MMC联用将MGC-803细胞阻滞于S和G2/M期.

    作者:刘骥;魏雯;贺彬;赵刚 刊期: 2015年第02期

  • 基于细胞力学加载装置的推拿(衮)法行气活血作用机制研究

    目的 通过细胞力学加载装置,观察推拿(衮)法对体外培养人脐静脉血管内皮细胞血管活性物质的影响,探索(衮)法的行气活血效应机制.方法 培养HUVEC细胞,建立缺氧细胞模型,分别将正常细胞和缺氧细胞分为对照组、推拿组、推拿+维拉帕米组.除对照组外另两组均进行(衮)法干预,推拿方法在已建立的HUVEC细胞力学加载模型上进行,用Griess 还原法分别检测各组HUVEC细胞NO的合成与释放量,采用实时荧光定量PCR技术分析推拿(衮)法对HUVEC细胞eNOSmRNA相对表达量的影响.结果 缺氧可导致HUVEC合成和释放NO量显著降低(P<0.01),eNOSmRNA相对表达量显著降低(P<0.01);与对照组细胞相比,不论正常还是缺氧HUVEC细胞,推拿组NO合成和释放量显著增加(P<0.01),eNOSmRNA相对表达量显著增强(P<0.01,)推拿+Ver组NO及eNOSmRNA相对表达量并未显著增加,提示Ca2+拮抗剂Ver能显著抑制手法的这种促进作用.结论 (衮)法能够激活HUVEC的分泌功能,促进内源性血管舒张因子NO的合成和释放,引发血管舒张,这是其实现行气活血效应的主要机制.但该作用可能与Ca2有关,尚需进一步研究.

    作者:马惠昇;张宏;严隽陶;沈国权 刊期: 2015年第02期

  • 清热利胆解毒方中药对铜负荷大鼠学习记忆和海马区ERK表达的影响

    目的 观察清热利胆解毒方中药对铜负荷饮食大鼠空间学习记忆和海马区ERK表达的影响.方法 100只雄性大鼠分为空白组,模型组,中药组,中西药合用组,西药组.Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力,免疫组化方法检测海马区ERK阳性细胞表达.结果 定位航行实验中模型组大鼠的平均潜伏期较空白组明显延长(P<0.01),中药组较模型组显著减少(P<0.05),空间探索试验中模型组大鼠的穿越平台较空白组明显减少(P<0.01),中药组较模型组穿越平台显著增加(P<0.05).ERK阳性细胞表达模型组表达较空白组显著减少(P<0.01),中药组较模型组显著增加(P<0.01).结论 清热利胆解毒方中药可能通过对ERK表达的增加而发挥改善学习记忆功能的作用.

    作者:方向;金珊;鲍远程;陈怀珍 刊期: 2015年第02期

  • 大柴胡汤方证机制探索

    目的 探索大柴胡汤方证的可能机制,为进一步研究提供思路.方法 通过文献研究确定大柴胡汤主治疾病谱,应用ARROWSMITH系统分析大柴胡汤方证涉及的病因及病理生理过程.结果 大柴胡汤方证的病因可能与心理因素相关,涉及的器官主要是消化系统,其他常见的有脑和下丘脑.涉及的生理过程及活性物质很多,如前列腺素、免疫反应、组织胺等等.结论 此研究提示了大柴胡汤方证的可能涉及的病因、病位及病理生理过程.

    作者:刘志刚;柴程芝;黄煌 刊期: 2015年第02期

  • 基于代谢组学技术探讨脾主运化统血等脾脏象理论科学内涵

    目的 介绍代谢组学技术及其在中医脾部相关病证研究中的应用,进而探讨脾脏象理论科学内涵.方法 通过检索中国知网数据库近年来代谢组学在脾部病证研究中的多篇文献,分别从理论以及实践研究两个方面进行归纳总结.结果 代谢组学技术能够揭示在治疗疾病过程中机体所发生的代谢物及代谢途径的改变,强调从整体角度来研究机体的功能水平,与中医理论的“整体观”相一致.通过总结举例,选用文献对中医脾部相关病证的诊断或评价指标进行了定性、定量的表达,发现了样本的代谢物图谱呈现出不同于正常组的分布图谱、以及某些可能成为揭示脾部疾病本质的生物标志物,进一步揭示了中医脾病本质.结论 将中医的辨病、辨证与代谢组学方法相结合,应用于脾部相关疾病证候,对于揭示脾主运化、统血等脾脏象理论的科学内涵,具有重要意义.

    作者:甄毕贤;贾连群;杨关林 刊期: 2015年第02期

  • 古今理论结合谈耳穴治疗失眠的选穴规律

    以耳穴治疗失眠的临床资源为切入点,通过系统检索和严格筛选,终纳入404篇耳穴治疗失眠症的中英文文献进行数据分析.提取所有研究的选穴结果并运用针灸数据挖掘技术从单穴选用频次、配伍关联及辩证选穴三个方面分析现阶段耳穴治疗失眠症选穴规律的临床证据.从传统中医脏腑经络理论、现代神经解剖学以及全息生物医学的角度,综合众家之言阐释耳穴疗法的选穴原则和作用机制.一方面为科研设计和临床选穴提供客观的选穴依据,另一方面为耳穴理论的统一和发展作引玉之砖.

    作者:兰颖;吴曦;吴利;张瀚丹;梁繁荣 刊期: 2015年第02期

  • 复方独正杆接骨膏促进家兔骨折愈合过程中VEGF表达的实验研究

    目的 观察复方独正杆接骨膏对家兔骨折愈合过程中VEGF表达的影响,从分子水平探讨复方独正杆接骨膏促进骨折愈合的作用机制.方法 成年健康家兔60只,左侧桡骨骨缺损模型复制成功后,将实验动物随机分为实验组与对照组,实验组外敷复方独正杆接骨膏治疗;对照组不予敷药.于造模术后第3、6、10周末处死两组动物各10只,行骨痂组织学检查和免疫组化检测VEGF.结果 在光学显微镜下观察,实验组与对照组比较,实验组骨折断端区域肉芽组织生长、骨皮质出现、钙盐沉积,骨改建较对照组早.免疫组化检测显示,实验组和对照组骨折断端VEGF表达在不同时期均呈阳性,造模后第3周末到第10周末,两组骨标本断端VEGF表达出现先增强后减弱的趋势,但两组MOD值在不同时期均有显著性差异(P<0.01).结论 复方独正杆接骨膏外敷治疗创伤性骨折,能促进骨折愈合过程中VEGF的表达,从而促进骨折愈合,缩短骨折愈合时间.接骨膏治疗创伤性骨折主要适用于骨折早期和中期.

    作者:田朝晖;黄琼;陈蓉;周建华;肖锋;高博 刊期: 2015年第02期

  • 刺激太溪穴的功能性核磁共振成像研究进展

    太溪穴(K13)为临床常用穴,太溪穴的具体作用机制是功能性核磁共振成像(fMRI)的研究热点,分析现有的国内外相关太溪穴的fMRI研究文献,发现关于太溪穴的fMRI研究主要集中在太溪穴特异性和不同刺激方式与刺激参数的影响,结果是受试者的不同状态、太溪穴不同刺激方式与刺激参数均会影响成像结果.但刺激太溪穴的具体作用机制还未完全清楚,今后研究中需排除研究中干扰因素,增加太溪穴不同刺激方式和参数的研究,加强fMRI、正电子断层发射技术(PET)、脑电图(EEG)和经颅磁刺激(TMS)的结合使用,并研究多种状态下的受试者.

    作者:孙忠广;张剑;邹军 刊期: 2015年第02期

  • 路绍祖运用奇穴结合十四经穴治疗慢性盆腔炎的疗效观察

    路绍祖(1936-),男,全国第二批老中医药专家学术师承工作导师,贵州省针灸名家.路老行医五十余年,医术精湛,在临床诊治中重视中医整体观念进行辨证论治,擅长应用针灸多种方法治疗各科疾病,疗效显著.笔者有幸于2013年参加了贵州省名老中医工作室跟师学习,师从路绍祖先生.在跟师学习过程中,笔者观察到路老运用奇穴治疗慢性盆腔炎颇有疗效.2013年3月至2013年12月笔者跟从路老使用董氏奇穴结合十四经穴治疗慢性盆腔炎患者30例,效果显著,现报道如下.

    作者:张小珊;江瑜;冯麟;吴高鑫;陈盼碧;赵旭青 刊期: 2015年第02期

  • 红景天抗氧化作用对阿尔茨海默病干预机制研究进展

    阿尔茨海默氏症是一种以严重认知和记忆功能减退为临床表现的退行性病变,近年来阿尔茨海默氏症的氧化应激致病学说受到关注.红景天具有抗氧化损伤、清除自由基的独特功效,对阿尔茨海默氏症有较好疗效.该文综述红景天及其有效成分对阿尔茨海默氏症的抗氧化作用机制研究进展,进一步研究、开发和利用红景天治疗阿尔茨海默氏症提供参考.

    作者:何黎黎;顾健;林芸竹 刊期: 2015年第02期

  • 瑶药酸吉风质量标准初步研究

    目的 对酸吉风质量标准进行初步研究.方法 通过原植物鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别四大经典鉴别法对酸吉风进行鉴别;按2010年版《中国药典》附录方法对酸吉风的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定.结果 四大鉴别均具显著特征可确定酸吉风药材鉴别方法,并确定其检查限量.结论 建立的方法可为酸吉风药材质量标准的制定提供实验基础.

    作者:蔡毅;谢凤凤;颜萍花;朱华 刊期: 2015年第02期

  • 土鳖虫仿生酶解法提取工艺研究

    目的 研究土鳖虫的仿生酶解法提取工艺.方法 采用正交实验优选仿生酶解的佳工艺条件.结果 土鳖虫仿生酶解佳工艺条件为:药材粉碎过80目筛,加10倍量水煮沸15 min,待冷至40℃,以稀盐酸溶液调节pH1.5~2.0,加入1%土鳖虫量的胃蛋白酶,40℃保温酶解1h,以20%氢氧化钠溶液调节pH7.5 ~ 8.0,加入1%土鳖虫量的胰蛋白酶,40℃保温酶解3h,加热煮沸15 min,即得.结论 优选出的提取工艺条件合理、可行、提取效率高.

    作者:丛竹凤;高鹏;代龙 刊期: 2015年第02期

  • 浅谈针灸在双心医学中的应用

    从双心医学的现状、中医对于双心疾病的认识以及针灸治疗双心疾病的特点及前景三方面探讨针灸在双心医学中的应用,发挥中医针灸优势治疗双心疾病将有更广阔的前景.

    作者:杨婧;周旭井;张捷 刊期: 2015年第02期

  • 基于5-HT信号系统的痛泻要方治疗腹泻型肠易激综合征作用机制探讨

    肠易激综合征是一种常见的功能性胃肠病,在肠易激综合征的中医分型中,肝郁脾虚是较常见的征候,痛泻要方是治疗腹泻型肠易激综合征的基础方.5-HT信号系统在肠易激综合征的肠道功能紊乱、内脏感觉异常等机制中发挥重要作用.从5-HT信号系统角度能很好地诠释痛泻要方治疗腹泻型肠易激综合征的作用机制.

    作者:冯文林;伍海涛;周思韵 刊期: 2015年第02期

  • 臧堃堂教授创扶正抑癌汤治疗癌症经验

    扶正抑癌汤为南方医科大学臧堃堂教授所创的抗癌基础方,临床加减运用以治疗各种癌症疗效显著.

    作者:邱钰芹;袁立霞 刊期: 2015年第02期

  • C-myc基因及蛋白在木脂素对人胃癌MGC-803细胞抗增殖过程中的作用

    目的 研究木脂素对胃癌细胞抗增殖过程中c-myc基因及蛋白的作用.方法 实验所用细胞为人胃癌MGC-803细胞,实验分为实验组和对照组,MTT法检测细胞生存率,免疫细胞化学、RT-PCR及Western检测c-myc基因及蛋白的表达.结果 实验组人胃癌MGC-803细胞生存率时间和浓度依赖性降低(P<0.01).在24,48和72 h实验组胃癌细胞c-myc蛋白的表达均呈阴性,而对照组均呈强阳性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果,c-myc基因及蛋白的表达在对照组胃癌细胞中随时间的延长逐渐增强,而实验组胃癌细胞中逐渐降低(P<0.05).结论 木脂素对胃癌细胞具有明显的抗增殖作用,其机制之一是通过下调c-myc基因和蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖和调控细胞周期.

    作者:冯海一;张友波;李柱虎 刊期: 2015年第02期

时珍国医国药杂志

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