学术投稿

腺病毒介导尿激酶型纤溶酶原激活剂转染内皮细胞的纤溶活性变化

周为民;吴浩荣

关键词:腺病毒, 尿激酶型, 纤溶酶原激活剂, 体外转染, 人脐静脉内皮细胞, 病毒载体, 纤溶活性, 系统构建, 基因治疗, 体内, 检测, 基础
摘要:我们采用pAD/CMV/V5-DEST Gate-way Vector腺病毒载体系统构建尿激酶型纤溶酶原激活剂( uPA)腺病毒载体,并将腺病毒介导的uPA基因体外转染人脐静脉内皮细胞,检测其纤溶活性及表达,为uPA的体内基因治疗奠定基础.
中华实验外科杂志相关文献
  • 尼莫司汀局部应用于大鼠正常脑组织对其血象的影响

    尼莫司汀( ACNU)是治疗脑胶质瘤的主要药物[1],以往采用浸有ACNU的明胶海绵材料为载体、于胶质瘤切除后术中直接铺布于瘤腔壁[2],对ACNU接触局部正常脑组织后影响的报道尚少.我们以大鼠血象为主要评估指标,观察不同剂量ACNU接触局部大鼠正常脑组织后,大鼠血象包括白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)的变化,探讨大鼠正常脑组织对ACNU的大耐受剂量.

    作者:虞云;张卫华;张继平;陈保忠;郑志;张宏敏 刊期: 2012年第08期

  • 丹参川芎嗪对重症急性胰腺炎大鼠胰腺微循环及血液流变学的影响

    本研究旨在观察丹参川芎嗪对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺微循环的影响,现报道如下.一、材料和方法:1.材料:将Wistar大鼠随机分为A、B两组.A组采用多普勒血流仪测定测定胰腺微循环血流、采用keiji等的方法检测微血管通透性;B组测定血液流变学及病理评分.

    作者:刘立涛;张爱民;李广波;胡光;何运良;靳小石;杨季红;程树杰 刊期: 2012年第08期

  • 乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义

    目的 探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1( BCAR1)在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2010年2月至2011年1月间46例食管鳞癌患者和25例正常人血清BCAR1水平;应用组织芯片和免疫组织化学方法检测2004年2月至2006年7月间106例食管鳞癌和癌旁正常组织中BCAR1表达.结果 食管鳞癌组BCAR1血清水平显著高于正常对照组(P<0.01);晚期食管鳞癌BCAR1血清水平显著高于早期食管鳞癌组和正常对照组(P<0.01);切除肿瘤后,血清BCAR1水平有逐渐下降趋势.BCAR1蛋白在食管鳞癌组织中阳性率为97%( 103/106),癌旁正常食管组织中有16例弱阳性,阳性率为15% (16/106),两者差异有统计学意义(P<0.01);BCAR1阳性表达与食管鳞癌的分化明显相关(P<0.05),与年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期明显无关(P>0.05).生存分析提示BCAR1高表达组生存时间少于低表达组(P<0.01);经COX模型多因素生存分析,显示BCAR1表达和淋巴结转移为独立预后因素.结论 食管鳞癌血清和组织中BCAR1水平显著高于正常对照组,并与疾病进展、治疗效果、分化程度和预后相关,可作为食管鳞癌诊断和判断预后重要新的肿瘤分子标记.

    作者:黄伟;邓波;王如文;蒋耀光;谭群友;范小清 刊期: 2012年第08期

  • X-盒结合蛋白1、血管内皮生长因子C在肝癌中的表达及意义

    目的 检测X-盒结合蛋白1(XBP1),血管内皮生长因子C(VEGF-C)在肝癌组织中的表达,探讨在肝癌发生发展过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测术中取的新鲜42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1 、VEGF-C的mRNA表达,应用Western blot法检测57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBP1、VEGF-C在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1 mRNA相对表达量分别为0.4396±0.0241、0.4152±0.0252、0.4095±0.0149,XBP1 mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P<0.05);肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF-C mRNA相对表达量分别为0.4447±0.0335、0.4195 ±0.0334、0.4019±0.0259,VEGF-C mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P<0.05). 在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 肝癌组织中XBP1、VEGF-C mRNA和蛋白的表达一致,均为高表达.

    作者:吕海涛;刘三光;穆宏凌;闫长青;刘建华 刊期: 2012年第08期

  • 反义B7-1质粒载体的构建与鉴定

    目的 构建反义B7-1质粒载体,为研究阻断B7-1/CD28共刺激分子通路提供基础.方法 设计含有Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的1对引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增获取质粒载体pcDNA3-B7-1上的目的片段B7-1( 118~ 530 nt,426 bp),克隆入PMD18-T中间载体.PMD18-T-B7-1经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,B7-1片段与pcDNA3B(-)连接,pcDNA3B(-)的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点与B7-1全基因序列所含酶切位点相反,构建反义B7-1表达载体.结果 反义基因重组体经过酶切和PCR检测,得到426 bp左右的目的基因片段.测序证明插入的目的片段碱基序列与Genebank报道的B7-1基因序列(G1:111038144)中的B7-1片段100%同源,且反方向插入载体.结论 成功构建大鼠B7-1反义真核表达载体,为阻断B7-1/CD28共刺激通路抑制排斥反应奠定了基础.

    作者:李蕊;米曰堂;杨玉秀;张颖慧 刊期: 2012年第08期

  • 远端脾静脉-肝动脉分流术治疗猪肝硬化门脉高压症

    目的 观察小型猪肝硬化门脉高压症动物模型建立远端脾静脉-肝总动脉分流术(下称脾肝分流术)后降低胃脾区静脉压力的效果.方法 对照组和实验组猪各15头分别建立脾肝分流术,对照组猪术后处死不饲养,实验组猪术后饲养30d处死.结果 脾肝分流术后胃脾区静脉血入肝亚甲蓝肝脏染色良好.维持静脉血入肝的脾静脉压力对照组为(20.51±0.74) cm H2O(1cm H2O=0.098 kPa),实验组为(23.09±1.36) cm H2O(P<0.05) 脾肝分流术建立后静脉和动脉两端形成压力差,对照组为(7.17±1.02) cm H2O,实验组为(9.55±1.32) cm H2O(P<0.05).术后实验猪无肝坏死及肝性脑病发生,脾肿大消失,肝功能等生化代谢指标术后7d波动大,14 d逐渐恢复,30 d恢复到成模时状态. 结论 压力差是维持静脉血入肝降低胃脾区静脉压力的原始动力.术后肝功能等生化代谢指标紊乱需要进一步治疗.

    作者:廖清华;林伟箭;陆云飞;田磊;张海添;吴向华 刊期: 2012年第08期

  • 甲基丙烯酸甲酯单体对A549肺癌细胞的不良反应

    目的 观察甲基丙烯酸甲酯(MMA)单体对A549肺癌细胞的不良反应.方法 设置实验组(5个单体浓度组:1、10、40、80、120 mg/L)及阴性对照组,用噻唑蓝(MTT)比色法测定单体与A549肺癌细胞接触后30 min、1、3、5d细胞吸光度(A)值.用膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染法检测接触单体1d后细胞凋亡、坏死百分比.结果 10mg/L组5 d以及40、80、120 mg/L组1、3、5d的A值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).10、40、80、120 mg/L组细胞凋亡百分比分别为(1.78±0.09)%、(3.97±0.22)%、(4.58±0.36)%、(5.27±0.14)%,坏死百分比分别为(3.43±0.08)%、(6.70 ±0.21)%、(7.93±0.40)%、(9.51±0.64)%,较对照组凋亡及坏死百分比(1.14±0.08)%、(1.24±0.09)%差异有统计学意义(P<0.05).结论 MMA单体对A549肺癌细胞有毒性作用.

    作者:李明明;倪才方;陈珑 刊期: 2012年第08期

  • 尾静脉注射质粒巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子诱导扩增小鼠肝脏CD11c+树突状细胞

    目的 探讨载粒巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因质粒在小鼠体内扩增肝脏CD11c+树突状细胞(DC)的方法.方法 采用快速尾静脉椎注法将含20 μg GM-CSF基因质粒的生理盐水2.0 ml导入小鼠肝脏内,对照组注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因.第7天取肝,胶原酶消化、密度梯度离心、磁珠标记等分选出DC.Giemsa染色作形态学观测,采用流式细胞术分析其免疫表型.结果 实验组小鼠肝脏非实质细胞(NPC)大量增殖,主要分布于门静脉及其周围区域,质粒处理组中CD11c+DC比例较对照组显著增多(29.31%比6.77%,P<0.05).Giemsa染色显示两组DC细胞核形状不规则,胞质无颗粒,然而实验组DC较对照组有明显凸起.流式细胞仪检测结果显示实验组DC较对照组明显成熟,CD40、CD80、CD86表达显著增高(P<0.05).结论 经快速尾静脉推注质粒GM-CSF的方法可显著可靠地扩增肝脏CD11c+DC的数量.

    作者:姜松耀;施敏敏;闵得金;何美美;陈皓 刊期: 2012年第08期

  • 转染骨形态发生蛋白-2基因的人脐带间充质干细胞成骨研究

    目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对其成骨分化和体内异位成骨的影响.方法 实验分为3组,空白组:10%胎牛血清+ DMEM培养基,对照组:10%胎牛血清+DMEM培养基+空慢病毒载体转染,实验组:10%胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染,检测3组不同培养基培养后人脐带间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,蛋白印迹法检测骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、BMP-2的蛋白表达变化.yon kossa染色观察hUCMSC钙结节形成.大鼠肌袋内植入BMP-2转染hUCMSC/COL1,通过CT三维重建及苏木素-伊红(HE)染色观察其体内成骨能力.结果 hUCMSC BMP-2转染良好,转染率可达到(90.95±4.35)%,实验组细胞在第5天,ALP活性就由(26.492 ±7.105) U/g·蛋白增加至(38.625±11.592) U/g·蛋白,在第14天,实验组的ALP的活性可以高达(49.732±13.068) U/g·蛋白,对比空白组和对照组都有明显增加(P<0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1、BMP-2和OPN蛋白呈现高表达(P<0.05).转染BMP-2基因后,hUCMSC培养28 d可形成大量的钙结节.BMP-2转染hUCMSC/COL1在大鼠肌袋内可异位成骨.结论 转染BMP2基因可促进hUCMSC细胞成骨能力.

    作者:杨大志;罗惠莉;易伟宏;王尔天;王敏;刘东宁 刊期: 2012年第08期

  • 抗肿瘤活性生物衍生骨预防局部骨肿瘤复发

    骨肿瘤手术中肿瘤切除残留骨缺损,影响稳定性,需局部植骨内固定重建稳定性.局部肿瘤切除不彻底则容易出现局部复发.如能在植骨材料中复合化疗药物,在修复局部骨缺损重建稳定性的同时,以局部化疗手段杀灭残留肿瘤细胞,就能降低肿瘤局部复发率.

    作者:庄研;许卫红;林焱斌 刊期: 2012年第08期

  • 脐带间充质干细胞分离培养及其定向分化研究

    间充质干细胞( MSC)能够自我增殖,多向分化[1-2],且具有免疫调节等功能,在人类白细胞抗原( HLA)并不匹配的情况下输注同种异体MSC,一般不会引起宿主的免疫反应[3-4],使MSC作为临床治疗的一种手段成为可能.

    作者:卢兆桐;李福泉;王玉波 刊期: 2012年第08期

  • 应用蛋白质组学技术筛选Ⅰ期非小细胞肺癌的差异表达蛋白

    目的 筛选和鉴定Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)的血清差异表达蛋白.方法 分别收集经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者、7例肺部良性疾病患者和15例健康体检者的血清,利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对Ⅰ期NSCLC的差异表达蛋白进行分离、筛选和鉴定.结果 每一标本的3张2-DE图谱半均蛋白质点数约(323±11)个.共挖取51个差异蛋白质点,经MALDI-TOF-MS分析,成功鉴定出5种蛋白质,均为上调蛋白,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白及转甲状腺素蛋白A链.结论 应用蛋白质组学技术在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出5种差异表达蛋白,为开发NSCLC早期诊断标志物提供了重要的候选蛋白.

    作者:王冬滨;张逊;韩洪利;徐医军;石珍亮;沈玉光 刊期: 2012年第08期

  • Ras蛋白特异性DNA适配子的体外筛选与鉴定

    我们利用指数富集配体的系统进化技术( SELEX)体外筛选Ras蛋白的高特异性、高亲和力的DNA适配子,为冠心病术后再狭窄的防治提供新的策略.

    作者:吴红兵;王志维;毛志福;胡小平;张昊;柳亚奎;王杰 刊期: 2012年第08期

  • EN2在前列腺癌细胞株和正常前列腺上皮细胞中的表达及其意义

    目的 探讨同源异型盒基因EN-2在不同前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞中的表达差异及意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)和免疫荧光法检测前列腺癌PC3、DU145和LNCAP细胞以及人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中EN2mRNA和蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测上述细胞培养液中EN2蛋白的含量变化.结果 RT-PCR和ELISA检测结果显示:EN2 mRNA和蛋白水平在激素依赖性前列腺癌细胞LNCAP(1.65±0.19、8.74±0.34)和激素非依赖性前列腺癌细胞PC3中(1.08±0.12、3.07±0.24)及DU145 (1.15 ±0.53、2.86±0.26)均高于人正常前列腺上皮细胞(0.42 ±0.11、0.86 ±0.99) (P <0.05),其中LNCAP细胞中EN2mRNA和蛋白表达水平高于其余两种前列腺癌细胞(P<0.05).结论 EN2在前列腺上皮细胞中呈低表达,在各前列腺癌细胞株中表达增高,并为前列腺癌细胞所分泌.EN2的表达可能与前列腺癌发生发展有关.

    作者:刘玉峰;苏泽轩;赖彩永;袁道彰;唐晖;罗云;程云华;丁泓文;陈洁;都兴华;石利平 刊期: 2012年第08期

  • 应用自体心包为材料制作肺动脉狭窄模型

    目的 探讨自体心包条带制作肺动脉狭窄动物模型的可行性.方法 8头小型猪分别接受左侧第3肋间开胸,取自体心包条,用生理盐水浸泡30 min后,环缩左肺动脉至原始直径的30% ~ 40%,术后1个月正中开胸,应用心导管及造影检查测量左肺动脉环缩术后跨狭窄段收缩压差及狭窄处肺动脉内径,行肺动脉支架置入术,3个月后取材行组织病理检查.结果 左肺动脉环缩后即刻,左肺动脉内径从(16.0±0.4) mm减少到(6.4±0.2)mm(P<0.01),而术中环缩后跨狭窄段压差为35(18 ~52) mm Hg(中位数,极值,1mm Hg=0.133 kPa),环缩术后1个月与环缩后即时结果比较,动脉内径及跨狭窄段压差,差异均无统计学意义(P>0.05).环缩术后8只小型猪均存活,未出现环缩带松脱、断裂等并发症,也未出现左肺动脉发育不良或动脉闭锁.病理结果显示环缩处肺动脉未见钙化灶,周围肺动脉壁组织大致正常.结论 在动物肺动脉狭窄模型制作中,应用自体心包环缩带是切实可行的.

    作者:陈泽锐;王德;吴信;潘湘斌;洪亮;李守军 刊期: 2012年第08期

  • 纳米金对人微血管周细胞增殖的影响

    目的 观察纳米金(GNP)对人微血管周细胞增殖和G蛋白信号调节蛋白5(RGSS)表达的影响.方法 制备浓度为50 nmol/L直径分别为25、50、100 nm的GNP溶液;体外培养人微血管周细胞株HBVP-1200;光学显微镜观察GNP作用周细胞、在细胞中沉积;噻唑蓝(MTT)比色法检测周细胞增殖;原子力显微镜( AFM)观察周细胞表面形貌;Western blot检测周细胞RGS5蛋白表达.结果 (1)不同组间的GNP( 25、50、100 nm)及对照组,其周细胞增殖率分别为:(147.9±5.9)%、(121.7±3.4)%、(107.6±2.1)%及( 100.0±0.0)%;粒径越小,周细胞增殖率越高(P<0.05).(2)AFM观察到粒径越小的GNP处理后,周细胞表而形貌变化越明显.主要表现在细胞膜内陷、细胞表面出现较大孔洞,有细胞内吞现象. (3)Western blot检测到粒径越小的GNP,抑制RGS5蛋白表达越明显.结论 GNP促进人微血管周细胞增殖,抑制周细胞RGS5蛋白表达;并且GNP粒径越小,对周细胞影响越明显.当GNP粒径达到100 nm时,对周细胞增殖和抑制RGS5蛋白表达几乎无作用.

    作者:傅岳武;潘运龙;覃莉;巫青;刘英梅 刊期: 2012年第08期

  • 来沙木单抗和表柔比星联合诱导肾癌细胞协同性毒性

    来沙木单抗是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2( TRAIL-R2)的人源化单抗,对晚期癌症患者发挥良好的治疗效果.阿霉素能通过诱导TRAIL-R2表达增强来沙木单抗对癌细胞的活性抑制作用[1].

    作者:金星华;吴秀贤;张淑英;张洪泉;林春荣;李雪岩;笕善行 刊期: 2012年第08期

  • DC靶向性DNA疫苗在人小细胞肺癌细胞株中的抗肿瘤作用

    小细胞肺癌( SCLC)是肺癌中恶性程度高的一种,针对小细胞肺癌靶抗原的基因免疫治疗是其防治的方向.前胃泌素释放肽(PGRP)是SCLC的特异性肿瘤标志物[1].我们从人小细胞肺癌细胞中克隆了PGRP基因,构建具有DC靶向的DNA疫苗,免疫小鼠后得到了较理想的免疫效果.

    作者:沈海波;李克强;胡天军;杨峂 刊期: 2012年第08期

  • 膝关节置换伸屈闭式引流对术前术后相关指标的影响

    膝关节表面置换的患者逐年增多,我们搜集了临沂市人民医院骨科2009年6月至2012年4月单膝关节置换的患者,手术及护理方式相同,术后引流的体位不同,总结引流量和血常规内的指标进行相关分析.

    作者:杨玉宝;刘省臣;高忠礼;阚金庆 刊期: 2012年第08期

  • 食管癌患者凝血功能的变化及临床意义

    凝血异常在恶性肿瘤中有较高发生率,有报道95%肿瘤患者拥有一项或多项凝血异常,并且凝血因子同肿瘤的发展转移相关[1].我们通过检测2002年8月至2007年2月行食管鳞癌根治术的60例患者术前血浆中的血浆纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT),探讨其临床意义.

    作者:刘瑜;谢德耀;池闯;林晓铭 刊期: 2012年第08期

中华实验外科杂志

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