方志辉；谭金海；简超
目的 观察红花对HSC-T6细胞基质分解素-1(MMP3)及其抑制因子基因表达的影响.方法 以不同浓度的红花(1.0、0.5 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MMP3及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达水平.结果 MMP3基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为2.80±0.36、2.52±0.32,而空白对照组为2.13 ±0.30.TIMP-1基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为1.66±0.23、2.04±0.30,而空白对照组为4.03±0.56.结论 红花可增强HSC-T6细胞MMP3的基因表达,并显著抑制HSC-T6细胞TIMP-1的基因表达,且与剂量有关.
作者：王爱民；阴赪宏；张莉；马雪梅；耿焱；王宝恩 刊期： 2012年第11期
近年来研究表明组蛋白甲基转移酶SET-和MYND-结构域含有蛋白(SMYD3)在多种肿瘤中均呈高表达,可能与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路及其下游原癌基因c-myc有关.我们通过microRNA沉默SMYD3基因,探讨其分子机制.
作者：张怡；王娟娟；郭宇；戴永平；柯孔亮 刊期： 2012年第11期
目的 检测死亡相关蛋白激酶(DAPK1)在肿瘤组织中的表达,探讨DAPK1表达与肿瘤患者临床特征间的关系及其意义.方法 通过Western blot法检测DAPK1在人肿瘤组织中的表达,高清晰度彩色图文分析系统(HPIAS)分析各组样本相对吸光度(A)值.结果 DAPK1在部分宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌组织中表达,相对A值分别为0.64±0.04和0.36±0.03,两者间差异有统计学意义(P＜0.05)；DAPK1在正常宫颈组织均有表达(相对A值为0.89±0.03),且明显高于宫颈CNI和宫颈癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05)；无淋巴结转移宫颈癌组织DAPK1表达(相对A值为0.39±0.03)明显高于有淋巴结转移组织(0.16±0.04),差异有统计学意义(P＜0.05).而DAPK1的表达与患者年龄、肿瘤大小无明显相关.结论 DAPK1表达降低可能与肿瘤的发生有关；DAPK1基因可能参与宫颈癌的侵袭与转移.
作者：舒晓燕；袁明；王冬花；陈华明 刊期： 2012年第11期
目的 观察X射线损伤修复交叉互补基因(XRCC1)基因多态性与吸烟的交互作用对胰腺癌易感性的影响.方法 对210例胰腺癌患者和213例对照者提取外周血DNA,应用SNaPshot技术对XRCC1基因7个单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型,比较不同基因型联合吸烟与胰腺癌易感性的关系.结果 胰腺癌患者rs25487位点A等位基因频率高于对照(P＜0.05)；携带突变等位基因A(GA、AA或GA +AA)的个体发生胰腺癌的风险增高(P＜0.05)；携带突变等位基因A(GA+ AA)且累积吸烟量≥20包/年的个体胰腺癌的发病风险增高了1.718倍(P＜0.05).胰腺癌患者rs1799782位点T等位基因频率高于对照(P＜0.05)；携带突变等位基因T(CT、TT或CT +TT)的个体胰腺癌的发病风险增高(P＜0.05)；携带突变等位基因T(CT+ TT)且累积吸烟量≥20包/年的个体胰腺癌的发病风险增高了1.905倍(P＜0.05).结论 XRCC1基因rs25487、rs1799782位点的SNP可能与胰腺癌相关,其多态性联合吸烟对胰腺癌的发病风险有一定影响.
作者：晏冬；王喜艳；李海军；徐新建；朱功兵；何铁英 刊期： 2012年第11期
目的 观察小型猪肝硬化门脉高压症动物模型建立远端脾静脉-肝总动脉分流术(脾肝分流术)后门脉血流动力学变化及影响.方法 15头动物模型建立脾肝分流术,肝外门脉分割成胃脾静脉区和肠系膜上下静脉区,各自独立不相通.实验猪术后饲养30 d.结果 (1)脾肝分流术后门脉主干压为(23.49±1.10) cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa),术后30 d为(21.53±1.26) cm H2O(P＞0.05)；脾静脉压为(35.45 ±2.88) cmH2O,术后30 d为(23.09 ±1.36) cmH2O(P＜0.05)；压力差为(17.90±3.31) cm H2O,术后30 d为(9.55 ±1.32) cm H2O(P ＜0.05).(2)胃脾区静脉血经脾肝分流通道人肝,脾静脉注射亚甲蓝肝染色良好.结论 脾肝分流术后肝外门脉血流通道发生了变更,但门脉血流动力学整体没有受到影响,反而建立了一种新的平衡机制来维持血流动力学的稳定,压力差是维护这种新平衡机制的原动力.
作者：廖清华；林伟箭；田磊；吴向华；张海添；黄理哲 刊期： 2012年第11期
目的 探讨胆囊良恶性病变组织中环氧合酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学法检测44例胆囊腺癌、10例胆囊腺瘤组织中COX-2与VEGF-C的表达.结果 胆囊腺癌和胆囊腺瘤组织中COX-2表达阳性率分别为72.7％和40.0％,胆囊腺癌COX-2的表达率明显高于胆囊腺瘤(P＜0.05).VEGF-C在胆囊腺癌组织中的表达明显高于胆囊腺瘤(63.6％比20.0％,P＜0.05).COX-2与VEGF-C的表达与胆囊腺癌的Nevin分期和淋巴结转移相关.COX-2与VEGF-C表达显著相关.结论 COX-2与VEGF-C表达与胆囊腺癌的发生和生物学行为密切相关.
作者：穆宏凌；吕海涛；王文斌；刘三光；张树彬 刊期： 2012年第11期
目的 观察大鼠脊髓来源的少突胶质前体细胞(OPCs)在衰老过程中基因组DNA甲基化总体调控模式的变化.方法 原代培养新生大鼠、4周大鼠和32周大鼠脊髓组织来源的OPCs细胞,并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物A2B5及NG2；采用酶联免疫吸附法检测各组细胞基因组甲基化水平及总体DNA甲基转移酶(DNMTs)活性；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测各组细胞DNMTs的3种主要亚型DNMTl、DNMT3a及DNMT3b的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫荧光染色结果显示,本研究培养的OPCs纯度达95％以上.新生组、4周组和32组细胞基因组DNA甲基化水平分别为0.87±0.12、0.79 ±0.14和0.37±0.07,其中32周组与新生组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；各组细胞总体DNMTs活性呈下降趋势,差异有统计学意义(P ＜0.05);DNMTs的3种亚型DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的变化趋势为:与新生组比较,4周组DNMT1的表达下降43％,DNMT3a和DNMT3b的表达分别增高56％和36％；32周组DNMT1的mRNA表达下降69％,DNMT3b表达增高104％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠脊髓源性OPCs在衰老过程中,其基因组甲基化水平及总体DNMTs活性呈下降趋势,而在此过程中DNMT1活性的下降发挥了主要作用.
作者：吴斌；吴永超；潘海涛；郭晓东；郑启新 刊期： 2012年第11期
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)对胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法 利用siRNA技术抑制VEGF及bFGF表达,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞株VEGF表达变化.结果 Panc-1及PCT-3细胞VEGF mRNA表达受到显著抑制,Panc-1为0.20 ±0.05,PCT-3为0.23±0.02.sw1990及PCT-3分泌VEGF受到显著抑制,sw1990为(1940.67 ±93.84) ng/L,对照组为(2560.67±181.79) ng/L；PCT-3为(174.00±98.73) ng/L,对照组为(779.33 ±317.52) ng/L.结论 bFGFsiRNA能够抑制胰腺癌细胞VEGF核酸及蛋白水平表达.
作者：闫长青；赵玉沛；刘三光；戚诚；张建生；王文斌 刊期： 2012年第11期
肿瘤的发生发展与基因的改变,尤其原癌基因的激活有着密切的联系.原癌基因通过促使细胞中某些增殖或抗凋亡等蛋白的过量表达使细胞向恶性转化[1],对原癌基因的研究可以进一步探索肿瘤特殊生物学行为产生的机制,并为将来可能的基因治疗提供理论基础.Gankyrin是Higashitsuji于2000年通过比较肝癌组织与正常肝组织的cDNA而新发现的癌基因,之后其翻译产物Gankryin蛋白陆续发现在肝癌、胰腺癌、结肠癌等多种肿瘤组织中高表达[2-4],并与肿瘤恶性程度相关,提示其在肿瘤发生发展中起到重要作用.现对其基因产物Gankryin蛋白与肿瘤相关性的研究进展做一综述.
作者：王逻逻；刘海涛；汲武广；宋宣；刘连新 刊期： 2012年第11期
目的 探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异.方法 采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养；选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线；酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量.结果 结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达；与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强；ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137) μg/L和(1.499±0.151) μg/L(P ＜0.01),TGF-β分别为(331.203±12.203) ng/L和(315.391±12.998) ng/L(P＜0.01),VEGF分别为(17.216±0.632) ng/L和(14.887 ±0.661) ng/L(P＜0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192) μg/L和(1.436±0.102) μg/L(P ＜0.01).结论 通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs；两者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义,这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌发生发展作用的生物学基础.
作者：乌新林；林凯金；苏秀兰；侯明星；董培德；施琳 刊期： 2012年第11期
目的 检测Yes相关蛋白(YAP)在人胃腺癌、胃腺瘤及正常胃黏膜组织中的表达,探讨YAP对胃癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测YAP在78例人胃腺癌、39例人胃腺瘤及46例正常人胃黏膜组织的表达.利用建立慢病毒小发夹RNA(shRNA)靶向YAP基因的胃癌SGC-7901细胞株,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白表达水平.噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell试验检测YAP下调对胃癌细胞增殖和转移的影响.结果 YAP在69.23％的胃腺癌组织中高表达,与正常胃黏膜(0.33 ±0.15)和胃腺瘤(0.42 ±0.20)比较,YAP mRNA在胃腺癌(1.74±0.46)的表达水平明显增高(P＜0.001).体外实验显示,YAP下调减少PCNA和MMP-2蛋白的表达,并抑制胃癌细胞增殖活性和转移能力.结论 YAP在人胃腺癌组织中高表达,并且YAP下调抑制胃癌细胞的增殖和转移.
作者：张靖；许志朋；朱金水；周洲；陈维雄；陈尼维 刊期： 2012年第11期
目的 观察聚乙烯亚胺(PEI)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)的效率,从而优化可用于转染实验的条件.方法 利用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测0.2％～2.0％ PEI的细胞毒性,利用荧光显微镜和流式细胞仪测定N/P 3.97～ 37.75的转染效率、培养液中的氯喹(0～100 μmol/L)、10％白蛋白、5％血清及0～ 20 mmol/L Mg2+对PEI转染BMSCs效率的影响.结果 当完全培养基内的PEI浓度低于0.8％,BMSCs存活率为70％；N/P 15时PEI转染BMSCs的效率为14.4％；溶酶体抑制剂氯喹可增加PEI的转染效率,培养液中的10％白蛋白、5％血清及Mg2+可降低PEI转染效率.结论 PEI是一种有效的BMSCs非病毒转染剂.
作者：方志辉；谭金海；简超 刊期： 2012年第11期
目的 制备不同浓度的阿仑膦酸钠/磷酸钙骨水泥释放体系,观察阿仑膦酸钠对磷酸钙骨水泥结构的影响及复合释放体系体外释放的规律.方法 分别制备1wt％、3wt％和5wt％的载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥释放体系,分别采用傅氏转换红外线光谱分析仪、扫描电子显微镜和高效液相色谱仪研究载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥的结构和药物体外释放规律.结果 阿仑膦酸钠的载入没有改变磷酸钙骨水泥相成分的官能团；扫描电镜下各实验组微观结构相似,均呈珊瑚样状结晶体相互交织成网状结构；各组药物在同一时间点释放量(％)的差异无统计学意义(P＞0.05),各组药物的释放均分为48 h前的突释阶段和48 h后的缓释阶段,符合Higuchi机制扩散释放模型.结论 阿仑膦酸钠的载入对磷酸钙骨水泥的晶体结构基本没有影响,且在磷酸钙骨水泥释放体系中能够持续、稳定的释放.
作者：殷力；徐晨阳；李树山；韩奇财；娄超举；杜振宁；李红帅 刊期： 2012年第11期
目的 探讨腹腔镜辅助远端胃癌D2根治术的治疗效果.方法 分析2008年11月至2011年10月行腹腔镜辅助和开腹远端胃癌D2根治术患者的临床资料,其中腹腔镜组61例,开腹组37例作为对照.结果 56例顺利完成腹腔镜手术,5例中转,手术时间:腹腔镜组(178.00±15.51) min,开腹组(147.86±17.41) min；术中出血量:腹腔镜组(138.43±39.67) ml,开腹组(362.86±59.86) ml(P＜0.05)；平均切口长度:腹腔镜组(5.12±0.85)cm,开腹组(18.40±1.98) cm；两组在淋巴结清扫数量上差异无统计学意义(P＞0.05).开腹组术后发生5例肺部感染,腹腔镜组发生3例肺部感染,差异无统计学意义(P＞0.05).根据术后病检回报:两组均达到了癌肿的整块切除.规律随访得知所有患者均存活,未发现有远处转移.结论 腹腔镜辅助胃癌D2根治手术可以达到根治和微创的双重效果,其远期疗效有待进一步随访观察.
作者：徐钧；张瑞；董永红；范大光；陈智；武书胜 刊期： 2012年第11期
目的 探讨白花蛇舌草诱导胶质瘤U87细胞株凋亡的作用及机制.方法 采用不同浓度的白花蛇舌草含药培养基(0、100、200 ml/L)处理U87细胞48 h,流式细胞仪检测对照组与实验组细胞的凋亡率及线粒体膜电位差异,Western blot法检测两组细胞中抗凋亡基因[B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)]和促凋亡基因(bax)的表达水平改变.结果 经100、200 ml/L白花蛇舌草处理的U87细胞凋亡率明显增加,分别为(17.31±1.36)％、(41.23±0.72)％,明显高于对照组的(8.11±1.71)％(P＜0.01),呈显著的剂量依赖性；经JC-1染色法处理后,呈绿色荧光的U87细胞比率随含药培养基浓度升高而增多,分别为(11.90±0.20)％、(34.17±2.79)％,明显高于对照组的(5.53±1.20)％(P＜0.05),提示其线粒体膜电位受药物影响而逐步递减；白花蛇舌草能显著上调促凋亡蛋白bax基因的表达并降低bcl-2/bax比率.结论 白花蛇舌草通过线粒体依赖性途径诱导人胶质瘤U87细胞的凋亡.
作者：张焱；祝新根；程祖珏；沈晓黎；郭华；毛国华；朱健明；胡尚伟 刊期： 2012年第11期
目的 利用脂肪干细胞(ADSCs)检测不同混合比例静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混支架的生物相容性.方法 聚乳酸(PLA)和聚己内酯(PCL)按3∶1、2∶1、1∶1的重量比混合后经静电纺丝技术制成3种比例的纳米纤维支架(NFS).将兔皮下脂肪分离出的ADSCs接种于NFS上,显微镜观察培养1、3、7d时ADSCs在3种支架上的形态；噻唑蓝(MTT)比色法检测接种后1～7dADSCs在NFS上的增殖和接种后6、24 h的黏附细胞百分率；活死细胞染色比较接种7d时不同NFS上ADSCs的活死细胞数量.结果 3∶1、2∶1、1∶1支架纤维直径分别为(973±65)、(617 ±44)、(432±24) nm;1∶1 NFS上的ADSCs数量明显多于其他两种支架；ADSCs在1∶1 NFS上增殖较快,接种后第6、7天时,较3∶1 NFS及2∶1 NFS组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；1∶1 NFS上黏附的ADSCs数量多,较另外两组差异有统计学意义(P＜0.05)；ADSCs在3种支架上的活细胞百分率分别为(65.60±7.80)％、(69.16±8.30)％、(82.20 ±10.20)％.结论 PLA∶ PCL为1∶1的静电纺丝NFS具有较好的生物相容性.
作者：白轶；陈亮；彭鄂军；吴柏霖；王玉玺；曾晓勇；叶章群 刊期： 2012年第11期
目的 观察胃癌与上皮内瘤变(GIN)的差异基因表达.方法 利用基因芯片技术,筛选12例胃癌与12例GIN胃镜病理标本的差异表达基因.结果 通过t检验和SAM检验筛选差异基因185个,它们与细胞黏附、血管生成、细胞增殖与凋亡等有关,与Wnt信号通路,血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,酪氨酸蛋白激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路,p53信号通路等细胞通路密切相关,而这些细胞通路可能与胃癌的发生有关.结论 胃癌与GIN差异基因的筛选为后续胃癌分子机制的研究提供前期试验基础.
作者：董平；吴文广；丁琦晨；杨佳华；毕建威；刘颖斌 刊期： 2012年第11期
目的 观察吗啡、芬太尼对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响.方法 将含0.1、10.0、1000.0μmol/L吗啡及0.0001、0.0100、1.0000 μmol/L芬太尼的细胞培养液,分别与胃癌MGC-803细胞一同孵育48 h,同时设空白对照组.应用划痕试验检测细胞迁移能力,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中磷酸酶基因(PTEN) mRNA和蛋白的表达.结果 划痕损伤48 h后,各吗啡组及各芬太尼组细胞的愈合率均低于对照组,细胞迁移能力下降(P＜0.05)；RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡或芬太尼均使胃癌MGC-803细胞PTEN mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 吗啡和芬太尼可通过促进PTEN的表达而使胃癌MGC-803细胞的迁移能力降低.
作者：管恩健；覃怡；利莉；谢玉波 刊期： 2012年第11期
目的 观察豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中胆囊组织Cajal样间质细胞(ICLCs)及胆囊动力的变化.方法 将100只豚鼠随机分为实验组与对照组,每组50只,实验组给予致石饲料(胆固醇含量2％),对照组给予正常颗粒饲料,8周造模结束后,利用胆囊全层铺片免疫荧光化学染色及激光共聚焦显微镜观察各组ICLCs数量的变化,利用透射电镜观察各组胆囊组织中ICLCs的超微结构特征,利用在体胆囊收缩素(CCK-8)激发实验评价胆囊动力的变化.结果 对照组豚鼠胆囊ICLCs平均阳性面积为(18.37±0.64)％,实验组为(2.47±0.28)％,较对照组明显降低(t=21.122,P＜0.01)；对照组豚鼠胆囊胆汁时间-流量曲线下面积为(31.58 ±2.26)μl,实验组为(15.02±1.98)μl,较对照组明显降低(t=8.586,P＜0.01).结论 饮食诱导的豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中,胆囊ICLCs明显减少,同时胆囊动力受损,对外源性CCK反应下降.胆囊动力受损可能与ICLCs减少有关.
作者：范莹；吴硕东；殷振华；付倍蓓 刊期： 2012年第11期
小肠移植外科技术、早期排斥反应等仍是现今备受关注的热点问题[1-2].在小肠移植动物模型中,血管吻合技术历来都备受关注,同时也是建模手术成功的关键[3].本研究旨在探讨小肠移植中常见的血管吻合技术.
作者：张文；宋红丽；沈中阳 刊期： 2012年第11期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
