刘立强；焦安贵；李森恺；范金财；李养群；刘元波
目的 探讨二种分别携带神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS)在脑缺血时抑制神经细胞凋亡的作用机制.方法 运用MACO法建立脑缺血模型,闭塞1 h后分别经右侧颈内动脉缓慢注入重组病毒载体(rAAV-AsnNOS、rAAV-AsiNOS和rAAV-LacZ),继续闭塞大脑中动脉,每只转染病毒滴度为1×1010个病毒颗粒/ml,并于分别缺血早期(缺血5 h)和缺血晚期(缺血25 h)时处死模型,流式细胞术(FCM)检测硝基酪氨酸(NT)阳性细胞百分比和细胞凋亡率,逆转录反应系统(RTPCR)分析nNOS、iNOS,p38MAPK,Caspase-3 mRNA的表达.结果 在脑缺血早期,rAAV-AsnNOS组的NT阳性百分比、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组的低均降低,差异有统计学意义;在脑缺血晚期,rAAV-AsiNOS组的NT阳性百分率、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LaeZ组和rAAV-AsiNOS组低,差异有统计学意义.结论 在体内缺血动物模型中,rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS重组病毒载体能够分别在缺血早期和晚期通过抑制NOS表达,从而抑制p38MAPK和Caspase-3基因的表达,抑制缺血后神经细胞凋亡的发生.
作者：石松生；杨卫忠；陈春美；王春华；易海波；陈晓斌；蔡冬生；杨意堃 刊期： 2008年第04期
目的 运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中1条基因进行初步研究.方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对681F05克隆子进行Northern blot,原位杂交和生物信息学分析.结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达.原位杂交得到相同的结果.BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%.cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因(命名为cyclophilin-like gene (PPll3))的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPll3b).结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性.681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因.
作者：祁震宇；惠国桢；李瑶；顾少华；谢毅 刊期： 2008年第04期
目的 检测肿瘤内皮标记物(TEM-8)、血管皮皮生长因子(VEGF)-D在结、直肠癌中的表达及其意义.方法 用实时定量PCR方法分析30例结、直肠癌标本中TEM-8、VEGF-D的表达,并结合病理学分期,淋巴结转移等肿瘤特点进行分析.结果 VEGF-D在肿瘤组织中的表达较正常组织中升高(含量分别为0.006 72±0.003 05、0.000 41±0.000 23,P＜0.05),并与淋巴结转移相关(P＜0.05),而与肿瘤分期无明显相关性(P＞0.05),TEM-8在正常组织中基本无阳性表达,而在结、直肠癌组织中阳性表达率为90%,TEM-8与肿瘤分期(Dukes B,Dukes C样本中的含量分别为0.0278±0.0141、0.0375±0.0162,P＜0.05),淋巴结转移情况(在有淋巴结转移和无淋巴结转移的样本中的含量分别为0.0415±0.0137、0.021 30±0.005 84,P＜0.05).结论 TEM-8,VEGF-D均可作为结、直肠癌的标记物,并可反映淋巴结转移状况,TEM-8更可作为肿瘤特异性标记物.
作者：许毓敏；王文跃；贾振庚 刊期： 2008年第04期
我们通过选择性切断运动、感觉神经,并在手术过程中考虑到了脊神经节的影响作用,而把节前切断和节后切断分别进行实验分组,观察不同性质神经损伤后骨折愈合的情况,探讨不同性质神经纤维对骨组织的生理作用.一.材料与方法
作者：梁庆元；王小健；苏云星；范亚龙 刊期： 2008年第04期
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导的成骨细胞和肾血管内皮细胞直接共同培养的细胞相容性,并探索两者共同培养的合适比例.方法 成骨细胞和血管内皮细胞按1:0、3:1、2:1、1:1、0:1比例分为5组直接共同培养,观察各组细胞形态并计数细胞比较增殖能力,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,研究共同培养后成骨细胞成骨能力的改变.结果 共同培养后细胞增殖及成骨细胞ALP染色阳性率高于单一细胞培养,成骨细胞与内皮细胞按2:1比例培养优于按3:1和1:1比例培养,增殖快,ALP阳性率高.结论 成骨细胞和血管内皮细胞体外直接共同培养具有良好的相容性,可促进成骨细胞的增殖、分化及ALP的分泌,提高其成骨能力.两者按2:1混合是较佳比例.
作者：王明海；董有海；洪洋；吴俊国；童文卿；钱光 刊期： 2008年第04期
目的 建立稳定表达红色或绿色荧光的人肝癌裸鼠转移模型.方法 用带红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒感染人高转移潜能肝癌细胞HCCLM3,获得稳定表达红色或绿色荧光的新细胞系HCCLM3-R和HCCLM3-G.1×107细胞皮下接种、2 mm3组织块原位移植裸鼠,建立稳定表达荧光的人肝癌裸鼠转移模型.结果 皮下接种5只裸鼠和肝脏原位移植10只裸鼠肿瘤全部生长,经180 d裸鼠体内连续6次传代肿瘤荧光表达稳定,肝内播散、肺转移和腹腔转移检出率分别为100%、100%和90%.结论 采用HCCLM3-R、HCCLM3-G细胞所建立的荧光表达人肝癌裸鼠转移模型,是一个较理想的研究肝癌生长和转移的动物模型.
作者：杨毕伟；夏景林；吴伟忠；梁英；孙惠川；王鲁；张巨波；肖春丽；刘康达；汤钊猷 刊期： 2008年第04期
目的 探讨Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌中的表达及它们与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系.方法 应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测20例胃癌患者的癌组织及相应胃切缘正常胃黏膜Sema6D及其受体PlexinA1的mRNA和蛋白表达;免疫组织化学方法检测50例胃癌组织和20例胃正常黏膜中Sema6D、PlexinA1、肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)和第Ⅷ因子(微血管密度MVD)的表达.结果 PT-PCR和Western blot示胃癌组织中的Sema6D mRNA和蛋白的表达明显高于胃正常黏膜[(0.24±0.06)比(0.19±0.07),P＜0.05,和(0.45±0.16)比(0.29±0.08),P＜0.01];同时PlexinA1 mRNA和蛋白的表达亦明显高于胃正常黏膜[(0.71±0.37)比(0.60±0.25),P＜0.05,和(0.47±0.16)比(0.21±0.08),P＜0.01].肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)随着Sema6D和PlexinA1表达的增高而增高(r=0.5996,P＜0.01和r=0.5024,P＜0.05);胃癌组织中MVD与Sema6D和PlexinA1存在明显正相关(r=0.5759,P＜0.01和r=0.7286,P＜0.01).结论 Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌发生发展中发挥重要作用,与促进肿瘤细胞增殖和调节血管生成有关.
作者：赵向阳；陈凛；许倩；李玉红；徐迎新 刊期： 2008年第04期
肝细胞癌(HCC)的恶性生物学特征使得手术切除为主的综合治疗效果仍不理想,对其侵袭转移机制的研究显得尤为重要[1].凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在调节肿瘤细胞的多种生物学行为中发挥重要作用[2].本研究旨在探讨TSP-1对肝癌细胞株体外侵袭的作用及其可能的作用途径.
作者：薛建锋；刘颖斌；李江涛；王建伟；彭淑牖 刊期： 2008年第04期
血管内皮生长因子(VEGF)-C和VEGF-D是VEGF家族新成员,被称为淋巴管生成因子,具有促进肿瘤细胞经淋巴途径转移的作用[1].为探讨颅外肿瘤通过淋巴途径向颅内的可能性,我们观察脑转移癌、星形细胞瘤、髓母细胞瘤中VEGF-C、VEGF-D的蛋白表达.
作者：高宇飞；李淼；夏春冬；杨占泉；田宇 刊期： 2008年第04期
目的 观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响.方法 针对Cyr61 mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人脑胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blot检测其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法观察U251细胞体外增殖活性的变化;用Transwell 小室法检测U251细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测U251细胞凋亡并用透射电镜观察凋亡后的细胞形态学变化.结果 pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyi61基因表达,抑制率分别高达到74.87%和78.23%;U251细胞的体外生长抑制率高达68.15%,侵袭细胞数下降至(46.00±2.82)个;U251细胞凋亡率高达53.16%.结论 pRNAT-Cyt61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡.
作者：付锴；袁先厚；江普查；文志华 刊期： 2008年第04期
垂体腺瘤约占颅内肿瘤的10%～15%,而其中侵袭性垂体腺瘤又占垂体腺瘤的5%～85%.相对一般垂体腺瘤而言,侵袭性垂体瘤常侵犯海绵窦、蝶窦、鞍上、斜坡等周围结构,无法做到彻底切除,且易复发[1].我们对人垂体腺瘤细胞进行了体外原代培养,利用无血清培养技术得到了纯化的垂体腺瘤细胞.
作者：寿雪飞；李士其；沈明；苏建光；夏鹰；汪洋 刊期： 2008年第04期
目的 探讨γ干扰素(IFN-γ)对梗阻性肾积水肾间质纤维化的抑制作用及其可能的机制.方法 将65只雄性SD大鼠随机分成4组:治疗组(20只)、模型组(20只)、药物对照组(20只)、假手术组(5只).在建模和给药后的第3、7、14、21、28天,每组各随机处死动物4只(假手术组1只).采用苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察病变肾脏间质纤维化的情况;采用聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的mRNA表达情况;免疫组织化学法观察以上三种蛋白的变化.结果 模型组大鼠术后肾间质逐渐出现纤维化改变,并随梗阻时间的延长逐渐加重,TGF-β1、α-SMA和Col-Ⅰ的mRNA和蛋白表达亦逐渐升高.第14天,模型组TGF-β1和α-SMA的表达量达到高峰,28 d时各指标的表达均达到高,TGF-β1、α-SMA和Col-Ⅰ分别为51.84%、72.59%和68.73%.治疗组各指标在不同时间点均低于模型组,第28天时,三项指标依次为33.84%、32.59%和48.73%,与模型组比较P＜0.05.Banff评分显示治疗组间质纤维化程度明显减轻(P＜0.01).其余两组未见肾间质纤维化改变.结论 IFN-γ具有减轻积水后肾间质纤维化程度的作用,该作用与其下调TGF-β1的表达、抑制肌成纤维细胞(MyoF)激活和减少Col-Ⅰ生成有关.
作者：刘刚；姚颐；张杰；谭大清；彭建平 刊期： 2008年第04期
Burne-Taney等[1]研究表明造成肾脏缺血组织损伤的T淋巴细胞功能减退起到了类似缺血预处理样作用,提出T淋巴细胞中可能存在对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)起保护作用的亚群,其中造成缺血组织损伤的免疫细胞主要是表达CD28+的CD4+T细胞、NKT细胞等,而起保护作用的T细胞亚群尚不清楚.我们在建立大鼠肾脏热IRI模型的基础上通过对外周血免疫抑制性细胞CD8+CD28-T的检测探讨其在肾脏缺血预处理(IP)中的作用.
作者：李令勋；苏泽轩；梁忠平；陈厚名 刊期： 2008年第04期
目的 观察Treg细胞对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗胃癌效应中释放穿孔素、干扰紊的影响.方法 构建CTL细胞对MFC胃癌细胞有效杀瘤体系,加入0.5×105到50.0×105不同剂量的Treg细胞,观察CTL杀瘤活性抑制并检测穿孔素、干扰素浓度.结果 Treg数量达到5.0×105后CTL杀瘤活性受明显抑制,穿孔素、干扰素浓度明显降低(P＜0.05).结论 Treg可通过降低CTL细胞分泌穿孔素、干扰素而抑制其杀瘤活性.
作者：曾冬竹；雷晓；石彦；郑峻松；罗华星；余佩武 刊期： 2008年第04期
目的 观察抗原致敏树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养体内外抗胃癌(SCC-7901)的效应.方法 取健康供者外周血体外诱导培养DC和CIK,应用噻唑蓝(MTT)法测定比较(每组n=3)单纯CIK(CIK组)、DC诱导CIK(DC-CIK组)和经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK(抗原-DC-CIK组)体外对SGC-7901的杀伤活性,并利用SGC-7901建立胃癌裸鼠模型,设立PBS对照组,比较各组(每组n=5)瘤体体积、抑瘤率和肿瘤坏死面积评分.结果 成熟DC与CIK共培养第7天时,DC-CIK扩增倍数为17.8±2.0,约为单纯CIK扩增倍数(10.9±1.8)的1.63倍(P＜0.05);抗原-DC-CIK组、DC-CIK组、CIK组,体外实验中效靶比为20:1时对SGC-7901的杀伤活性分别为:(72.3±0.5)%、(53.9±0.7)%、(46.4±0.4)%(P均＜0.01);体内动物实验中抑瘤率分别为30.02%、18.11%、15.94%(P均＜0.01).结论 SGC-7901抗原致敏DC能增加CIK的扩增数量,增强CIK对SGC-7901的杀伤作用.
作者：安岗；毛伟征；代震波；牛兆建；刘希春；解西河；赵宝成 刊期： 2008年第04期
目的 探讨经颈动脉神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑出血(ICH)后遗症的适宜移植时间窗和疗效.方法 48只Wistar大鼠脑出血模型,随机分为实验组和对照组.分别于脑出血后第2、7、14、21、28天经颈动脉行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)体外标记的神经干细胞移植.对照组大鼠,仅接受颈动脉内注入等量DMEM培养液.每周测试大鼠行为功能评分;2个月后处死所有动物,行组织化学染色,观察神经干细胞在脑内的分布、分化,评定病灶体积大小.结果 与对照组比较,NSCs移植组大鼠行为功能改善明显(ANOVA,P＜0.05);脑出血第7天移植组在移植后第3周和ICH后第9周的行为功能评分显著优于其他时间移植组(SNK,P＜0.05).ICH后第7天和第14天移植组BrdU阳性细胞计数显著多于ICH后第2、21和第28天移植组.ICH后第2天移植的NSCs绝大部分分化为星形胶质细胞(84.5±7.6)%;而ICH后第21和28天移植的NSCs分化为神经元的比例明显增大(35.4±3.1)%、(37.2±4.1)%;然而,7～14 d移植组,分化为神经元的绝对数量显著高于其他治疗组(P＜0.01).结论 经皮颈动脉注射是一种可行的、微侵袭和高效的细胞移植方法.在脑出血后7～14 d期间进行神经干细胞移植,能显著提高细胞存活率和移植细胞分化为神经元,明显促进功能改善.
作者：李峰；刘玉光；朱树干；杨洪安；张源；吴承远 刊期： 2008年第04期
目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.
作者：王波涌；钱群；雷道雄；艾中立；张中林；黄梅 刊期： 2008年第04期
缺氧诱导因子-1(HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子,它通过对下游靶基因的调控,使细胞对缺氧产生适应性反应[1].有研究结果显示,脑组织缺血缺氧可导致脑缺血半暗带HIF-1α的表达增加,并诱导血管内皮生长因子(VEGF)过量表达,刺激血管新生,改善局部血供,减轻缺血后的脑损伤[2]1.本研究旨在观察去骨瓣减压术对局灶性脑缺血大鼠梗死灶周HIF-1α、VEGF表达的影响,探讨该手术脑保护作用的可能机制.
作者：冀建文；吴建梁；李彤；于利洁；扈玉华；邵恩得 刊期： 2008年第04期
心肌内心电图(IMEG)已经被证实是一项无创、安全、简便易行的监测心脏移植急性排斥反应的方法.本实验旨在观察IMEG于体液排斥反应发生时的变化.一、资料与方法以雄性杂种犬为实验对象,供体体重在10 kg左右,受体体重为20 kg左右.
作者：贾一新；孟旭；韩杰；史加海 刊期： 2008年第04期
目的 观察蛋白酪氨酸激酶Pyk2在胃癌组织中的表达,探讨Pyk2在胃癌中的作用机制.方法 应用Western blot和荧光定量PCR方法检测正常胃黏膜组织和胃癌组织中Pyk2表达的差异.应用质粒转染的方法,将质粒PKH3-Pyk2和PKH3-PKM(PKM,dominant-negative Pyk2 mutant)转染胃癌细胞系BGC-803,观察凋亡相关蛋白bcl-2和bax的变化,探讨Pyk2在胃癌中作用机制.结果 Western blot结果显示Pyk2蛋白在28例正常胃黏膜组织中均有表达,在胃癌组织中表达水平很低或几乎无表达,差异有统计学意义(t=3.53,P＜0.05).荧光定量PCR结果显示:胃癌组织中Pyk2 mRNA表达水平明显低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(t=8.02,P＜0.05).转染PKH3-Pyrk2质粒后,对凋亡抑制蛋白bcl-2影响不明显,而促凋亡蛋白bax的表达升高.结论 Pyk2在正常胃黏膜组织中高表达,在胃癌组织中低表达.Pylc2可能通过上调bax蛋白的表达而促进胃癌细胞凋亡.
作者：武颖超；郭宏杰；汪欣；刘玉村；万远廉；朱静 刊期： 2008年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
