学术投稿

重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应

张丰经;何红云;邓仪昊;杨开明

关键词:重组卡介苗, IL-12p70, TB10.4, 免疫效应
摘要:目的 将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据.方法 将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4 (rBCG-IT).将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后3、6、9和12周,用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平,XTT检测脾细胞增值反应,流式细胞仪检测脾CD4+T、CD8+T细胞亚型的比例,ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生.结果 在免疫后3~12周,rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其他各组(P<0.01),该组IFN-γ诱生量及CD4+T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组(P<0.01).IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答.结论 重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答,可对其免疫保护作用进行深入研究.
基础医学与临床杂志相关文献
  • 熊果酸减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤

    目的 探讨熊果酸减轻脂多糖诱导的THP-1细胞损伤的作用及其机制.方法 以脂多糖诱导的THP-1炎性细胞为模型,MTT法检测不同浓度的熊果酸(0.1、1、5、10、20、40和80 μmol/L)对细胞增殖的影响,RT-PCR法检测TLR4、MCP-1和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测MCP-1和IL-6表达,Western blot法检测P65、磷酸化P65蛋白表达,荧光素酶报告系统检测核转录因子κB (NF-κB)活性.结果 与对照组比较,LPS作用组能显著增高MCP-1、TLR4、IL-6 mRNA和MCP-1、IL-6、P65、磷酸化P65蛋白的表达并上调NF-κB活性(P<0.05);与LPS单独作用组比较,熊果酸(1和5μmol/L)干预组能够显著降低MCP-1、TLR4、IL-6mRNA和MCP-1、IL-6表达水平并下调NF-κB活性(P<0.05).结论 熊果酸可能是通过下调NF-κB活化减轻脂多糖诱导的THP-1细胞的损伤.

    作者:孙爱平;孙书明;张国俊;王艳华;宋向凤 刊期: 2014年第01期

  • 食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡

    目的 观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响,并初步探讨其机制.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用,MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测BCL-2、BAX、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达.结果 食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖,其中1.0 μmol/L食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用强,抑制率为65.32% ±2.51% (P <0.01);食欲素A组可见较多凋亡细胞:胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光,有明显的核固缩,SB408124干预后,凋亡细胞数量明显减少(P<0.05);食欲素A作用后,凋亡率为59.52%±1.38%,而SB408124干预后,凋亡率降至38.96% ±1.82%(P<0.05);食欲素A可上调凋亡相关蛋白BAX、Cyt c及活化caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白BCL-2的表达(P<0.05),SB408124干预后,食欲素A作用减弱.结论 食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用;食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的.

    作者:高之峰;张建福;费素娟;汪诗卉;董秋菊;韩红霞 刊期: 2014年第01期

  • 福建泉州地区2371例手足口病的病原学检测分析

    手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)具有传染性强、传播快,主要发生在儿童的特点,极易造成暴发流行,严重威胁婴幼儿的生命健康,其主要病原体为柯萨奇病毒A组16型(Coxsachievirus A 16,CoxA 16)和肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71).泉州市近几年来手足口病病例逐年增多,据泉州市CDC统计数据显示,2008年52.12/10万、2009年126.05/10万、2010年上半年298.91/10万,呈快速上升趋势.本研究对泉州地区2011年11月至2012年10月手足口病病例采用ELISA方法进行病原学分类检测,旨在探讨其流行规律,制定有效的防控策略提供依据.

    作者:许幼仕;许荣海;黄美虹;傅清流;彭维林;黄秋生 刊期: 2014年第01期

  • 苯丙酸诺龙促进胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌

    目的 探讨雄性激素苯丙酸诺龙在氧化应激条件下对胰岛细胞的作用,为2型糖尿病治疗提供理论依据.方法 将培养的NIT-1细胞按不同葡萄糖浓度(5.6、11.1、16.7和27.6 mmol/L)分为4组,分别用10 μg/mL苯丙酸诺龙处理48 h,之后用流式细胞仪检测细胞周期;用Western blot检测Nampt和FOXO1蛋白表达和用放射免疫法测定细胞胰岛素分泌.结果 用苯丙酸诺龙处理48 h后,1)低糖条件下细胞G0/G1期阻滞明显改善(P<0.01);2)高糖条件下细胞G2/M期阻滞得到缓解(P<0.01);3)高糖氧化应激状态下,苯丙酸诺龙促进胰岛细胞Nampt表达(P<0.05)和抑制非磷酸化的FOXO1蛋白表达(P<0.01),细胞分泌胰岛素增加.结论 苯丙酸诺龙能够在高浓度葡萄糖条件下改善胰岛细胞生存状况和促进胰岛素分泌,这些效应可能与促进细胞内Nampt表达和抑制FOXO1密切相关.

    作者:陈洁润;吴雅婷;冯乔;沈旺;冯乐平 刊期: 2014年第01期

  • 无效造血与铁过载

    铁过载是指体内铁负荷过量,可伴或不伴器官功能障碍.在继发性铁过载疾病中,除外输血,一组表现为无效造血的贫血性疾病,即使无输血依赖,也可发生铁过载.目前发现铁调素等分子在铁过载的发生中发挥重要作用.本文参考目前国内外新研究,主要阐述无效造血导致铁过载的机制及新进展.

    作者:王璐;张倩;韩冰 刊期: 2014年第01期

  • NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达

    目的 分析宫颈癌移植瘤小鼠的癌与癌旁组织中miR-15b和miR-16的表达状况以及NF-κB信号通路在宫颈癌癌旁组织活化情况,为宫颈癌的诊断和治疗提供新思路.方法 建立小鼠宫颈癌移植瘤模型,取癌组织与癌旁组织,以及正常的脂肪组织,用实时荧光定量PCR方法检测miR-15b和miR-16的表达,用免疫组化检测NF-κB(P65)蛋白的表达及定位.结果 移植瘤造模成功.miR-15b在宫颈癌组织中表达为32.21±3.67,明显高于癌旁组织的25.16±1.86和正常组织的1.00 ±0.12(P <0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P<0.05);miR-16在宫颈癌组织中表达为28.63±2.34,明显高于癌旁组织的22.16±1.76和正常组织的1.00±0.12(P <0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P<0.05).在正常脂肪组织中,NF-κB(P65)蛋白主要定位于胞质,而在癌组织与癌旁组织中,NF-κB (P65)蛋白主要位于胞核.结论 NF-κB通路及其相关的miR-15b和miR-16可能参与了宫颈癌发生的早期分子事件.

    作者:甘自立;谌模武;林红;李勇;熊秋迎;刘丝荪;郭菲 刊期: 2014年第01期

  • EGFR-TKI耐药后的治疗策略研究进展

    EGFR-TKI用药一段时间后出现的耐药现象是目前临床治疗的难题.本综述列举了EGFR-TKI耐药机制并介绍了多HER通路抑制、EGFR与VEGFR双通路抑制、作用于T790M突变靶点、抑制C-MET、促进PTEN(抑制PI3K)的表达及下游信号途径以及多种新型药物的抗EGFR-TKI耐药作用.

    作者:韩尚容;樊境朴;潘燕;李学军 刊期: 2014年第01期

  • N-乙酰半胱氨酸减轻香烟烟雾提取物所致的A549细胞损伤

    目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对香烟烟雾提取物(CSE)暴露后的A549细胞的影响.方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率;用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化;用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化;用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达变化.结果 CSE致A549细胞存活的A值为0.55 ±0.04,显著低于对照组的0.78±0.03(P<0.05),NAC处理使A值显著上升至0.67±0.04(P <0.05),并消除了G1期阻滞,降低细胞凋亡率等.IGFBP-3的表达在CSE刺激后,有所升高,在接受NAC保护后,其表达水平有所降低(P<0.05).结论 NAC可以抑制香烟烟雾提取物造成的A549细胞损伤,IGFBP-3可能在香烟烟雾提取导致细胞损伤的机制中发挥作用.

    作者:张强弩;焦宗宪;常嘉琛 刊期: 2014年第01期

  • 癌症组织中miR-100的表达变化和靶点研究进展

    miR-100序列高度保守,在实体瘤的多数报道中,miR-100表达降低,调高miR-100的表达对肿瘤细胞起到抑制作用.但有报道miR-100表达升高与肿瘤的复发有关.miR-100表达量的多少与病理分期和病情进展的关系,也存在着分歧.目前已证实的miR-100的靶点有数种,对肿瘤细胞分别起到抑制增值、导致细胞周期停滞、促进调亡,增加癌细胞对放化疗的敏感性等作用.

    作者:周韶梅;盛望;曾毅;李泽琳 刊期: 2014年第01期

  • NOX4是肺纤维化的潜在治疗靶点

    肺纤维是一种高致死率的难治性疾病,TGF-β1可激活并上调NOX4 mRNA的表达,继而诱导机体产生大量ROS,而ROS可进一步激活Smad,参与介导TGF-β1/Smad信号通路,终促使肺纤维化的发生.而通过各种技术手段阻断NOX4基因表达可干扰TGF-β1/Smad信号通路从而阻断肺纤维化,所以NOX4可能是肺纤维化进程中具有前景的治疗靶点.

    作者:孙宝迪;聂时南 刊期: 2014年第01期

  • 人乳头瘤病毒的环介导等温扩增检测法

    人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是引起尖锐湿疣甚至癌变的病原体.PCR技术检测病毒DNA序列具有特异、敏感等特点,但对仪器设备及检测人员技术要求较高,不适合于基层医疗单位临床实验室的常规诊断方法.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术针对靶基因6个区域设计4条特异引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温条件下完成扩增,扩增效果可用凝胶电泳、比浊、染色等多种方法检测,具有反应时间短、肉眼可判断结果和不需要PCR仪等优点.国内外利用LAMP技术检测HPV的方法研究偶有报道[1-2],但针对HPV-6和HPV-11成功的方法研究未见文献报道.

    作者:罗永富 刊期: 2014年第01期

  • 创新驱动、服务科技——中国科技期刊的新挑战

    当前,党的十八大规划了“两个百年”的宏伟蓝图,对全面建成小康社会、加快推进社会主义现代化发出了新的号召.以习近平同志为总书记的党中央明确提出了实现中华民族伟大复兴的中国梦.实现中国梦,需要科学技术的强大支撑.科技期刊作为国家科技综合实力和自主创新水平的集中体现,在我国加快从科技大国迈向科技强国、科技助力实现中国梦的宏大进程中,迎来了新的挑战和广阔的发展空间.

    作者:《基础医学与临床》编委会;《基础医学与临床》编辑部 刊期: 2014年第01期

  • 睡眠时大脑可清除毒素

    一夜好觉确实可以使头脑清晰.一项由美国国立卫生研究院(NIH)神经疾病与脑卒中研究所(NINDS)资助的研究结果提示,睡眠使大脑中与神经退行性病变相关的有害分子得以清除.通过对小鼠进行实验,研究人员首次提出,睡眠时脑细胞之间的空隙可能增大,由此可使大脑清除清醒时产生的毒素.这项研究结果提示了睡眠在健康和疾病中的一个新作用.

    作者:韩桂芬 刊期: 2014年第01期

  • 共培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞

    目的 探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的佳比例.方法 分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性.在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例(hUC-MSCs:兔膝关节软骨细胞)共培养.倒置相差显微镜观察细胞的形态与增殖;甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色分别检测葡萄糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原(COL2A1)(蛋白水平定性);并对各组细胞爬片进行GAG、COL2A1定量检测;同时用实时定量荧光PCR(pPCR)检测GAG、COL2A1 mRNA表达,观察共培养前后细胞的基质分泌情况.结果 共培养21 d后,阳性对照组和实验组细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;GAG、COL2A1含量及mRNA表达量1∶4实验组均要高于其他实验组和阳性对照组.结论 hUC-MSCs和兔关节软骨细胞的共培养可明显促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化,且佳共培养比例为1∶4.

    作者:罗二梅;张家文;胡笑轲;唐明乔;宇丽 刊期: 2014年第01期

  • 系统性红斑狼疮患者外周血miR-7的表达及其意义

    目的 研究microRNA-7(miR-7)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血的表达及其意义.方法 20例SLE患者和20例性别年龄匹配的健康对照者,荧光定量PCR检测PBMC、B细胞、T细胞和单核细胞中miR-7的表达以及靶基因PTEN的mRNA水平,通过电转染方法将miR-7的前体Pre-miRTM-miR-7 Precursor/抑制剂anti-miRTM-miR-7抑制剂转染至SLE患者B细胞中,流式细胞检测B细胞增值功能.应用生物信息学方法及双荧光素酶报告基因系统预测并验证miR-7的靶基因.结果 SLE患者PBMC及B细胞中miR-7的表达显著高于健康对照(P<0.01).PTEN是miR-7的一个靶基因,转染miR-7的前体至SLE患者B细胞可抑制PTEN表达(P<0.05),促进B细胞增殖(P<0.05),转染miR-7抑制体则可以促进PTEN表达(P<0.05),抑制B细胞增值(P<0.05).结论 miR-7参与了SLE的发病机制,调控PTEN的表达,并介导了SLE患者B细胞的增殖,是SLE潜在的治疗靶点.

    作者:李扬;沈濂;叶燕霞;张烜 刊期: 2014年第01期

  • IFITM1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性

    目的 探讨IFITM1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性以及早期诊断的可行性,分析IFITMI基因甲基化对mRNA表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR方法和HPV16、HPV18特异的PCR方法分别检测了40例正常子宫颈组织和40例新疆维吾尔族妇女子宫颈癌组织的IFITM1基因启动子甲基化情况和高危险性HPV的感染情况,并分析两个指标的相关性.用RT-PCR方法检测10例甲基化阳性和10例甲基化阴性的组织IFITM1基因的mRNA表达情况.结果 31例子宫颈癌组织IFITM1基因启动子甲基化,3例子宫颈正常组织发生甲基化,在子宫颈癌中高危险性HPV的感染例数为27例,在正常组织中为5例.40例子宫颈癌组织中,HPV16、HPV18感染阳性的组织IFITM1基因甲基化的发生率增高(P<0.05),在10例甲基化阳性的组织中IFITM1基因mRNA的表达水平明显低于10例甲基化阴性的组织(P<0.01).结论 IFITM1基因启动子甲基化是子宫颈癌发生的关键分子标志物,具有大规模临床筛选试验的价值.

    作者:左强强;郑威楠;张金莉;李玉华;刘引引;龙海晨;潘泽民 刊期: 2014年第01期

  • 全麻苏醒拔管期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注可改善苏醒拔管质量

    目的 探讨丙泊酚联合瑞芬太尼全凭静脉麻醉患者全麻苏醒期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注对苏醒拔管质量的影响.方法 择期脊柱侧弯后路矫形手术患者40例,随机分为对照组(全麻苏醒期间停用所有药物,n=20)和瑞芬太尼组(全麻苏醒期间维持瑞芬太尼小剂量靶控输注,n =20).记录两组患者苏醒时间、拔管时间,并观察苏醒拔管质量评分.结果 对照组患者苏醒时间为(12.76±3.56) min,拔管时间为(13.98 ±4.06) min;瑞芬太尼组患者苏醒时间为(13.14 ±3.87) min,拔管时间为(14.21 ±4.77) min,组间比较无显著差异.但对照组患者苏醒拔管质量评分为1、2、3、4和5分的患者例数分别为1、10、5、3和1例;瑞芬太尼组患者苏醒拔管质量评分为1、2、3、4和5分的患者例数分别为5、12、3、0和0例,组间比较有显著差异(P<0.05).结论 丙泊酚联合瑞芬太尼全凭静脉麻醉全麻苏醒拔管期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注可以改善苏醒拔管质量,且不延长苏醒拔管时间.

    作者:王静捷;陈广俊;罗爱伦;黄宇光 刊期: 2014年第01期

  • 基于IPA@生物信息平台筛选维吾尔族宫颈癌前病变患者血浆预警蛋白

    目的 依托IPA@在线生物信息学平台探讨维吾尔族患者宫颈癌前病变的发生与癌变机理,寻找血浆预警蛋白.方法 运用IPA@在线生物信息学软件,针对前期研究中通过蛋白质组学方法筛选出的在维吾尔族妇女癌前病变宫颈内上皮瘤样病变CINⅡ和Ⅲ级患者血浆中31个差异蛋白进行生物学功能注释、调控网络分析、典型通路分析和生物标志物筛查分析.结果 IPA@分析发现CINⅡ/Ⅲ患者血浆中的差异蛋白的生物功能主要集中在炎症反应、细胞与细胞之间信号与作用和细胞生长与增殖,涉及的通路主要是急性期反应通路、JAK/Stat通路和IL-4通路,并且筛选出2种生物标志性蛋白,它们是代谢相关蛋白(ApoA Ⅰ)、信号传导相关蛋白(mTOR).结论 ApoA Ⅰ和mTOR可作为宫颈癌及癌前病变的候选血浆预警蛋白.

    作者:郭霞;伊力努尔·沙比提;玛依拉·卡米力江;刘开江;阿仙姑·哈斯木;哈丽丹·热依木;武贵臻;Abulizi Abudula 刊期: 2014年第01期

  • 基于问题的学习(PBL)在医学教育中的利与弊

    基于问题的学习(PBL)已成为国际上较流行的一种教学方法.它强调通过学习者的合作和自主学习来解决隐含在问题背后的科学知识.对于激发学生的学习兴趣,培养学生发现问题、解决问题的能力大有裨益,但PBL在教学中也存在一定的弊端,如果在教学的实际操作中不加以避免,会极大影响PBL教学真谛的体现.本文主要针对PBL在教学中利与弊以及如何克服其弊端加以阐述.

    作者:高雪 刊期: 2014年第01期

  • 重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响

    目的 构建并筛选小鼠RARγ基因的siRNA腺病毒载体,并探讨抑制RARγ表达对小鼠肝脏祖细胞分化的影响.方法 设计3对特异性针对小鼠RARγ基因的siRNA序列,体外退火形成双链,与SfiⅠ酶切后的pSES-HUS质粒连接,随后在BJ5183中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组获得pAd-siRARγ重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装腺病毒Ad-siRARγ.腺病毒感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d,real-time PCR及Western blot检测RARγ的表达,1 μmol/L ATRA诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色检测肝脏细胞分化的状态.结果 PCR、酶切鉴定均证实siRNA正确克隆至腺病毒质粒中,测序结果与设计的siRNA序列一致.腺病毒在HEK293细胞中包装10 d可见红色荧光细胞的云雾状扩增,HP14.5d细胞的48 h腺病毒感染率为60%.其中,Ad-siRARγ2、3可有效抑制小鼠HP14.5d细胞中RARγ的表达(P<0.05).ATRA可诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色阳性细胞明显高于对照组,Ad-siRARγ2,3可显著抑制ATRA诱导的小鼠HP14.5d细胞的ALB表达和糖原合成能力(P<0.05).结论 成功构建并筛选出能有效抑制RARγ表达的siRNA腺病毒,感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d能显著抑制ATRA诱导的肝细胞成熟分化.

    作者:周建武;何昀;龚梦嘉;毕杨 刊期: 2014年第01期

基础医学与临床杂志

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主管:北京市科学技术协会

主办:北京生理科学会