鞠传广；马庆军；党耕町；王晓英
目的:观察别嘌呤醇对兔心肌梗死后血浆和心肌细胞因子水平及心功能、心室重构的影响.方法:实验于2004-09/2005-06在南昌大学第二附属医院动物试验室完成.①分组和造模:18只新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组和别嘌呤醇组,每组6只,后2组采用液氮冷冻法制造心肌梗死模型.②给药:术后别嘌呤醇组每日给予别嘌呤醇(广州彼迪药业有限公司)40 mg/kg,另2组给予等量安慰剂.③观察指标:梗死后4周进行超声检查和血流动力学测定;同时采用酶联免疫法检测各组血浆及心肌组织白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平;VG染色检测各组兔心肌间质胶原含量.结果:经补充后18只兔进入结果分析.①心脏超声检查结果:与假手术组相比,其他2组兔室腔明显增大(P＜0.01),室壁运动明显减弱,左室射血分数明显降低(P＜0.01);别嘌呤醇组和模型组相比,室腔明显减小(P＜0.01),室壁运动明显增强,左室射血分数明显升高(P＜0.01).②血流动力学检测结果:与假手术组相比,其他2组兔左室舒张末压显著升高(P＜0.01),左室收缩末压及左室内压上升/下降大速率显著降低(P＜0.01);别嘌呤醇组和模型组相比其左心室的舒、缩功能均等到明显改善(P＜0.01).③细胞因子检测结果:其他2组血浆及心肌组织和白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平都显著高于假手术组(P＜0.01),而别嘌呤醇组低于模型组(P＜0.01).④心肌间质胶原含量检测结果:模型组和别嘌呤醇组含或不含小血管视野胶原容积百分比都显著高于假手术组(P＜0.01),而别嘌呤醇组低于模型组(P＜0.01).结论:别嘌呤醇可以改善兔心肌梗死后血浆及心肌组织细胞因子水平,别嘌呤醇改善心功能和抑制心室重构可能与其降低细胞因子水平的作用相关.
作者：王曾庚；吴清华；刘燕娜；程晓曙；苏海；吴延庆；李菊香 刊期： 2007年第32期
目的:扫描电镜观察正常兔膝关节表面的结构,为研究关节软骨表面结构提供正常参照.方法:实验于2001-01/09在四川省骨科医院完成.日本大耳白兔8只,10～12个月龄,雌雄各半,体质量(3.5±0.2)kg.通过扫描电镜对8只实验兔股骨髁、胫骨髁的软骨表面进行观察,其中4个髁用锐器划伤.结果:纳入日本大耳白兔8只,均进入结果分析.每个正常髁的表面都显示有大量的浅坑,有锐器划伤的髁则出现了垄沟及隆突.软骨表面在高倍镜下呈现一种均匀多孔状结构.结论:软骨表面唯一呈现的结构是浅坑,垄沟和隆突可能是标本的采集、制作过程中形成的赝象.
作者：戴国钢；刘波；罗小兵；彭雪梅 刊期： 2007年第32期
目的:观察富血小板血浆对体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响,探讨富血小板血浆促进骨修复的细胞学机制及其有效浓度.方法:实验于2004-09/2006-10在河北医科大学第二医院外科实验室完成.①实验动物:出生24 h内的SD乳鼠10只,体质量400～500 g的健康雄性SD大鼠10只.②实验方法:取出生24 h内的SD乳鼠颅骨进行成骨细胞分离与培养.从健康雄性SD大鼠腹主动脉抽血制备富血小板血浆.将体外培养并扩增的第3代SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞与不同浓度富血小板血浆复合培养.③实验分组:实验分为空白对照、12.5%富血小板血浆组、25%富血小板血浆组和50%富血小板血浆组.④实验评估:通过相差显微镜观察细胞生长情况,培养后1,3,5和7 d应用四甲基偶氮唑盐法、碱性磷酸酶活性检测和钙结节染色检测成骨细胞的增殖和分化情况.结果:①各组细胞生长情况:相差显微镜下见富血小板血浆组细胞增殖旺盛,与空白对照组相比,富血小板血浆能明显促进成骨细胞的增殖,其作用随富血小板血浆浓度的增加而增强.其中,50%富血小板血浆组细胞增殖为显著,且细胞达到汇合的时间也相应缩短.②成骨细胞增殖情况:在各时间段,各种浓度的富血小板血浆组中成骨细胞的增殖活性均高于空白对照组(P＜0.05),且与富血小板血浆浓度成正比.50%富血小板血浆对成骨细胞增殖刺激作用强,3,5和7 d时与其他富血小板血浆组相比差异有显著性(P＜0.05).③各组细胞碱性磷酸酶活性检测结果:富血小板血浆组中成骨细胞的碱性磷酸酶活性均高于空白对照组(P＜0.05),且与富血小板血浆浓度成正比.以50%富血小板血浆组的成骨细胞碱性磷酸酶活性高,3,5和7 d时均显著高于其他富血小板血浆组(P＜0.05).④钙结节茜素红染色结果:不同浓度的富血小板血浆组的矿化结节数量均显著高于空白对照组(P＜0.05),其中50%富血小板血浆组的矿化结节数量多,显著高于其他浓度的富血小板血浆组(P＜0.05).结论:富血小板血浆能明显促进体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化,其作用效果与富血小板血浆的浓度成正比.
作者：范志勇；张英泽；马维；张华；张爱民；史正亮 刊期： 2007年第32期
目的:骨形态发生蛋白与骨延长关系的报道很少.为观察其对于牵拉骨再生延长区骨愈合的作用,将重组人骨形态发生蛋白2经皮注射到兔胫骨延长区,行组织学验证.方法:实验于2004-06/2005-03在吉林大学基础医学院实验动物中心完成.①实验材料:雄性日本大耳白兔30只;重组人骨形态发生蛋白2(由美国哈佛医学院分子骨科中心Oliver博士馈赠).②实验干预及分组:制作日本大耳白兔延长区骨再生不良动物模型24只,行快速延长,2次/d,1 mm/次,2 mm/d,共延长10 d,共2 cm.将兔子随机分为2组,每组12只.对照组,延长结束后延长区注射醋酸盐缓冲液;重组人骨形态发生蛋白2组,延长结束后延长区注射醋酸盐缓冲液溶解的重组人骨形态发生蛋白2.③实验评估:延长结束后2周、4周时2组各取4只兔,麻醉后处死,进行延长区拍摄X射线片及延长区骨标本组织学光镜检查.结果:术中兔死亡及针道处骨折6只,24只进入结果分析.①延长区X射线片评价:延长结束后2周和4周时,显示重组人骨形态发生蛋白2组新生骨痂明显多于对照组,延长结束后4周时重组人骨形态发生蛋白2组髓腔开始形成.②延长区组织学观察结果:延长结束后4周时,对照组延长区周新生软骨、骨增多,融合成片,出现编织骨.重组人骨形态发生蛋白2延长区软骨细胞吸收矿化,转化为编织骨,并逐渐向皮质骨改建塑形.结论:牵拉骨再生延长结束后,延长区经皮注射重组人骨形态发生蛋白2,经间接X射线及组织学直接验证,对延长区骨愈合有促进作用.
作者：徐鹏；王丹辉；李长胜；张新 刊期： 2007年第32期
目的:观察牵张成骨修复颅骨缺损过程中硬脑膜组织力学性能的变化.方法:实验于2006-03/12在武汉大学人民医院外科实验室完成.①实验材料:选用健康清洁级山羊30只,18～24个月龄,体质量18～20 kg,性别不限,由武汉大学医学院实验动物中心提供(SCXK(鄂)2003-2004).②实验方法:将山羊单纯随机分为6组:7d组(牵张第7天),固定0,2,4,8周组,正常对照组,每组5只.取实验组山羊25只,切开颅顶,暴露颅顶区骨面,裂钻行10 mm×25 mm颅骨切开,仔细分离硬脑膜,移去骨块,形成骨缺损,建立颅骨缺损牵张模型.延迟7 d后开始牵张,牵张速率为0.8 mm/d,2次/d,每次0.4 mm,间隔12 h,总牵张距离10 mm.分别于牵张中(牵张第7天)、牵张结束当天(固定期第0周)、固定期第2,4,8周处死动物,处死后将各组动物沿牵张区外5 mm切取硬脑膜组织20 mm×30 mm.正常对照组5只动物不实施手术,取同样大小颅顶区硬脑膜组织.③实验评估:标本修整后分别沿牵张方向和垂直牵张方向切成长宽比为5:1的窄条形试件,浸入人工脑脊液直接送实验室,进行单向拉伸实验和拉伸蠕变实验,观察硬脑膜弹性模量和在相同载荷条件下应变值变化.结果:30只山羊全部进入结果分析.①不同时期两个方向硬脑膜组织弹性模量变化:不同时期两个方向硬脑膜组织弹性模量:沿牵张方向硬脑膜弹性模量在牵张期逐渐增加,至固定期第2周大,以后逐渐下降,至固定期第8周接近正常;在垂直牵张方向上,硬脑膜弹性模量值无明显变化.②不同时间硬脑膜在相同载荷条件下的应变值变化:当突然加载荷时有一初始变形,随后在该载荷作用下标本的变形随时间变形缓慢增加,但幅度很小.正常对照组初始应变值ε约为0.03,牵张中、末应变值变化与正常对照组一致,固定第2,4周ε增加,至第8周趋于正常.结论:硬脑膜组织在牵张过程中出现适应性改建,牵张成骨修复颅骨缺损对硬脑膜组织力学性能无不良影响.
作者：周海孝；余墨声；胡静；戚孟春 刊期： 2007年第32期
背景:骨小梁微构筑在骨质疏松中的变化已引起广泛关注,骨质疏松后骨小梁的节点数减少,游离末端数增加,但机制尚不明确.目的:观察卵巢切除大鼠骨质疏松模型骨小梁重建的电镜变化,分析骨小梁节点数减少而游离末端数增加的原因.设计:随机对照动物实验.单位:北京大学第三医院骨科.材料:实验于1999-09/2000-02在北京大学第三医院动物实验室完成.选用36只3月龄雌性Wistar大鼠,体质量240～280 g.采用随机摸球法分为卵巢切除组和对照组,每组18只,分别于术后4,8,12周3个时间点进行观察,每时间点6只.方法:卵巢切除组饲养1周后双侧卵巢切除.对照组不切除卵巢.于术后4,8,12周采用扫描电镜观察胫骨近干骺端骨小梁各区形态结构的变化;采用透射电镜对术后12周胫骨近干骺端骨小梁表面破骨细胞、成骨细胞及细胞器的结构变化进行观察.主要观察指标:①通过电镜对骨小梁微构筑的分区观察分析去卵巢后骨的重建过程.②观察骨小梁的形态结构变化.结果:①扫描电镜显示:骨小梁骨重建活动分布于骨小梁微构筑各个部位,但以St,Nd-St区显著;卵巢切除后骨小梁穿孔、断裂多见于水平骨小梁,骨小梁网状结构4周时完整,第8周和第12周后逐渐被破坏,12周严重;卵巢切除后骨小梁表面的胶原纤维逐渐变得杂乱、稀薄.②透射电镜显示:卵巢切除后12周大鼠胫骨破骨细胞的形态结构观察发现,功能活跃的破骨细胞较多见.破骨细胞对骨质进行吸收时,紧紧贴附于骨质表面,将指状突起伸向骨质深处,指状突起形状、大小相差悬殊.指状突起周围可见透亮区.破骨细胞多核,胞浆丰富,胞浆内含有发达的高尔基复合体、滑面内质网和大量的线粒体.细胞体内见大小不等、电子密度不均的溶酶体包含物.成骨细胞少见,胞体边缘不光滑,周围出砚骨陷窝轮廓.结论:卵巢切除后骨小梁St,Nd-St区骨重建活跃,这可能是骨质疏松时骨小梁节点数减少而游离末端数增加的原因.
作者：鞠传广；马庆军；党耕町；王晓英 刊期： 2007年第32期
目的:观察骨髓基质干细胞与异种脱蛋白松质骨复合修复尺骨缺损的可行性.方法:实验于2006-01在辽宁医学院附属第一医院外科实验室(省级重点实验室)完成.①实验材料:取12月龄健康杂种犬18只,体质量(15.0±2.2)kg.②实验方法:将所有动物的双侧尺骨制备成中断20 mm骨-骨膜缺损模型,骨髓基质干细胞与脱蛋白松质骨于体外复合培养后,将其植入其中16只犬的右侧缺损处作为实验组,左侧植入单纯脱蛋白松质骨作为对照组,另2只犬不植入任何材料为空白组.③实验评估:在4,8,12周分别行大体标本、扫描电镜和组织学观察,比较3组骨缺损修复的能力.结果:纳入健康杂种犬18只,均进入结果分析.4周时实验组支架材料部分吸收,植入物表面有纤维骨痂形成,对照组支架材料少量吸收,植入物表面有少量骨样组织形成;8周时,大体标本及组织学观察,实验组中的支架材料已完全降解,骨缺损部分修复,对照组中植入物两端少量新骨形成,材料中为纤维骨样组织;12周时,实验组骨缺损完全修复,对照组植入物两端有新骨包绕,与骨端连接紧密.12周时空白组骨缺损未修复.结论:利用体外扩增培养的骨髓基质干细胞与异种骨组合,具有较强的骨传导和骨诱导活性.
作者：李晖；刘丹平 刊期： 2007年第32期
背景:反义药物的研究仍然是当前生物医学领域较为活跃的热点之一,其具有高效特异的优势,作为基因治疗的途径已受到许多研究者的关注.目的:观察脂质体介导角蛋白14反义寡核苷酸对人角质形成细胞K14基因和蛋白表达及体外增殖活性的影响.设计:单一样本观察.单位:解放军第四军医大学西京医院皮肤科.材料:人表皮角质形成细胞、K14寡核苷酸基因片段(全硫代修饰,以上序列均由上海生工生物工程公司合成).反转录酶、TaqDNA聚合酶均购自Invitrogen公司,K14单抗购自Antibody公司,SABC试剂盒购自博士德.EPICS-PRO-FILEⅡ流式细胞仪(美国Coulter).方法:人表皮角质形成细胞原代培养,3～10代用于实验,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导人角质形成细胞,并设空白组作对照.应用流式细胞仪、反转录聚合酶链式反应和免疫组化方法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响.主要观察指标:寡核苷酸转染人角质形成细胞后对角质形成细胞增殖和K14表达的影响.结果:①反转录聚合酶链反应产物电泳显示:各组均出现特异的K14基因条带,反义组基因表达明显低于正义组、错义组和空白组.正义组、错义组和空白组K14/β-actin比值相近(P＞0.05);而反义组明显低于前述3组(F=47.554,P＜0.01).②免疫组化法检测K14蛋白表达:培养的角质形成细胞均表达一定水平的K14,加入反义寡核苷酸(ASODN)后,K14表达明显减少,20 μmol/L浓度的反义寡核苷酸即可显著抑制K14的表达;而对照细胞组K14的表达没有明显变化.③流式细胞仪检测DNA含量变化:经K14反义寡核苷酸处理细胞48 h,可见细胞处于G1期细胞比例明显上升(74.6%),S期细胞比例明显下降(19.4%),而正义组,错义组及空白组均无此变化.结论:反义寡核苷酸可特异地抑制K14的合成,从而抑制人角质形成细胞的增殖.
作者：陈玉欣；郑淑云；李巍；刘玉峰 刊期： 2007年第32期
目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferators-actived receptor-alpha,PPARα)激动剂对体外培养的肾小球系膜细胞的作用.方法:实验于2005-12/2006-05在泸州医学院附属医院传染免疫实验室完成.实验分组:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,将高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素.分别设①正常组:5.6 mmol/L葡萄糖.②高糖组:30 mmol/L葡萄糖;③高糖+10,100,500 μmol/L WY14643组:30 mmol/L葡萄糖+10,100,500 μmol/L WY14643.④高糖+WY14643溶剂组:30 mmol/L葡萄糖+250 μmol/L二甲亚砜+250 μmol/L无水乙醇.实验评估:①采用反转录-聚合酶链反应半定量法测定各组肾小球系膜细胞PPARα mRNA和血管紧张索Ⅱ mRNA表达.②采用免疫细胞化学法检测各组转化生长因子β1蛋白表达.结果:①肾小球系膜细胞PPARα mRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞PPARα表达低于正常组(分别为0.21±0.14,0.97±0.25),差异有显著性意义(t=7.742,P＜0.05);10,100,500 μmol/L WY14643组肾小球系膜细胞PPARα表达高于高糖组(分别为0.52±0.06,0.92±0.22,0.94±0.34,0.21±0.14),差异有显著性意义(t=4.438,7.182,7.213,P＜0.05).②转化生长因子β1表达和血管紧张素Ⅱ mRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ mRNA表达高于正常组(分别为25.76±0.24,16.43±0.38;0.79±0.23,0.46±0.13),差异有显著性意义(t=4.029,3.563,P＜0.05);10,100,500 μmol/LWY14643组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ mRNA表达低于高糖组(分别为20.18±0.15,18.59±0.37,16.46±0.31,25.76±0.24;0.43±0.16,0.21±0.09,0.19±0.05,0.79±0.23),差异有显著性意义(P＜0.05).结论:转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ是糖尿病肾病发病的重要致病因子;PPARα激动剂减少转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ的表达可能与其增加PPARα的表达有关.
作者：钟海花；万沁；徐勇 刊期： 2007年第32期
目的:构建针对人血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果.方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成.①实验材料:小干扰RNA表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGC7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子C基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152 bp)由上海生工生物公司合成.②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子C基因的两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒.经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGC-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株.③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测血管内皮生长因子C mRNA和蛋白水平的表达.结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,建立了稳定转染细胞株.②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子C mRNA和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子C表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-C1尤为明显,抑制血管内皮生长因子C表达,不影响细胞的生长.结论:成功构建了血管内皮生长因子C小于扰RNA表达载体及稳定转染的胃癌细胞株.
作者：周慧聪；张艳；亢春彦；李继昌 刊期： 2007年第32期
目的:创面微环境中许多细胞都能不同程度的产生活性氧等自由基.观察氧化应激对大鼠真皮成纤维细胞生物学行为的影响,有利于认识创面愈合的机制.方法:实验于2005-09/2006-03在上海市烧伤研究所完成.①实验材料:体质量为200～220g的清洁级雄性SD大鼠,由中科院上海动物实验研究所提供.②实验方法:取SD大鼠背部皮肤组织,消化分离表皮真皮,剪成0.1 cm×0.2 cm真皮块,置于含体积分数为0.10 FBS的DMEM培养瓶中,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,每周换液2次.约7～10 d后,成纤维细胞逐渐从真皮块中迁移出来,并且大量增殖,待原代培养成纤维细胞生长融合成片,用0.05%胰酶-EDTA消化,用含体积分数为0.10 FBS的DMEM终止消化,离心后,按1:3分装传代.取对数生长期的成纤维细胞,培养24 h后,分别以20,50,100,150 μmol/L H2O2干预成纤维细胞,另设空白对照(不加H2O2)及凋零组(只加Hank's液不加细胞).③实验评估:采用MTT法观察细胞活力,流式细胞仪观察细胞凋亡,荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测,脂质过氧化物测试盒测试细胞丙二醛含量.结果:①MTT法观察细胞活力:随着H2O2浓度增加,成纤维细胞活力明显降低,各H2O2干预组吸光度值均较空白对照组低(P＜0.01).②流式细胞仪测定细胞凋亡:与空白对照组相比,20 μmol/L H2O2干预组细胞凋亡无明显变化,100 μmol/LH2O2干预组细胞凋亡明显升高(F=47.78,P＜0.01).③细胞内活性氧的测定:与空白对照组相比,20,100 μmol/L H2O2干预组细胞活性氧产生明显升高(F=166.557,P＜0.01,P＜0.01).④细胞内脂质过氧化物测定:与空白对照组相比,20 μmol/L H2O2干预组细胞脂质过氧化产物丙二醛含量无明显变化,100 μmol/L H2O2干预组细胞脂质过氧化产物丙二醛含量明显升高(F=5.756,P＜0.01).结论:氧化应激能导致大鼠真皮成纤维细胞细胞活力下降,凋亡增加,抗氧化治疗可以作为难愈性创面的治疗策略.
作者：杨国志；王润秀；林源；陆树良；梁自乾；刘达恩；葛奎；乔亮；宋振强；黄飞 刊期： 2007年第32期
目的:探讨将小肠黏膜下层粘接交联制作小口径血管支架的可行性.方法:实验于2006-04/12在上海交通大学附属第六人民医院中心实验室和四肢显微外科研究所完成.①实验材料:小肠黏膜下层膜按Abraham法制备;清洁级雄性新西兰大白兔24只,2.8～3.2 kg.②实验过程:以胶原蛋白-硫酸软骨素共混溶液将猪小肠黏膜下层膜粘接成小口径(内径3.0 mm)管型支架,并用碳化二亚胺交联,得到粘接交联小肠黏膜下层管.取24只兔,手术造成颈总动脉缺损,随机平分为2组,对照组采用缝制小肠黏膜下层管桥接修复缺损;实验组采用粘接交联小肠黏膜下层管桥接修复缺损.③实验评估:通过爆破压测定检测支架的粘接强度、通过体外溶血试验和细胞毒性试验检测支架的生物相容性;于术后1,2周和1,2个月做血管彩色多普勒超声检测其通畅性;以组织学苏木精-伊红染色、Masson染色观察组织生长情况,评价支架的血液相容性和组织再生能力.结果:①粘接交联的小肠黏膜下层血管支架爆破压:在湿润状态的爆破压可达22.1 kPa;溶血率为1.4%;细胞毒性评级为0～1级.②支架溶血率和细胞毒性:体外溶血及细胞毒性试验均表明碳化二亚胺交联小肠黏膜下层管具有良好的生物相容性,完全符合医用生物材料的应用要求.③植入兔体内后支架通畅性和组织学表现:植入替代兔颈总动脉缺损后2个月,粘接交联支架的通畅率为83.3%(10/12),明显高于缝制支架的33.3%(4/12)(P＜0.05);在通畅血管中动脉瘤样扩张的发生率,缝制支架为100%(4/4),粘接交联支架仅为20%(2/10).所有通畅的血管在术后1个月时均有完整平滑的内膜形成和平滑肌细胞长人;2个月时平滑肌细胞增多,小肠黏膜下层的胶原纤维也明显减少;无炎症反应、血管破裂发生.结论:粘接交联法可用于小肠黏膜下层小口径血管支架的制作,可保持支架的良好生物相容性并改善血管重建过程中小肠黏膜下层的力学性质,从而显著提高小肠黏膜下层用于修复小口径血管缺损的成功率.
作者：刘生和；王建广；范存义；莫秀梅 刊期： 2007年第32期
背景:采取反义基因治疗技术控制血管内皮细胞生长因子基因表达,遏止血管生成,是脑血管外科中治疗人脑动静脉畸形的崭新课题.目的:观察血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对人脑动静脉畸形血管内皮细胞增殖的抑制作用.设计:观察对比实验.单位:解放军沈阳军区总医院神经外科.材料:实验于2006-08/2006-12在解放军沈阳军区总医院的全军神经医学研究所完成.收集2006年解放军沈阳军区总医院神经外科18例脑动静脉畸形患者手术切除的完整人脑动静脉畸形新鲜标本.男12例,女6例;平均40岁.脑动静脉畸形按Spetzler分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级8例.全部病例术前均经全脑血管造影证实.人脑动静脉畸形标本获取术前经患者或其家属知情并签同意书.内皮细胞生长添加剂(ECGS;美国Sigma),391型DNA自动合成仪(上海生工利用美国PE公司),厌氧培养箱(浙江产DY-1型),人血管内皮细胞生长因子酶联检测试剂盒购于北京TBD公司,进口分装,96E酶标仪(ERMA,INC).细胞周期分析试剂盒(BD公司),流式细胞仪(FACS Calibur,BD公司).方法:①实验过程:采用组织块贴壁法培养人脑动静脉畸形血管内皮细胞,实验用传至3代细胞,随机分成反义组、正义组和对照组,每组4瓶细胞.反义组、正义组分别采用人工合成血管内皮细胞生长因子正义、反义硫代脱氧寡核苷酸,经阳性脂质体包裹后转染体外培养的人脑动静脉畸形血管内皮细胞,对照组不予处理,将各组细胞置于37 ℃、体积分数0.95 N2、0.05 CO2厌氧培养箱分别孵育2,4和8 h.②实验评估:测定细胞周期.测定细胞血管内皮细胞生长因子蛋白含量.检测细胞血管内皮细胞生长因子mRNA表达.主要观察指标:各组细胞缺氧不同时间点血管内皮细胞生长因子mRNA和蛋白表达及细胞增殖指数.结果:①血管内皮细胞生长因子mRNA表达:对照组细胞缺氧2,4,8 h后血管内皮细胞生长因子mRNA水平高于缺氧前(P＜0.05),反义组缺氧2,4,8 h后血管内皮细胞生长因子mRNA水平低于对照组(P＜0.05).②血管内皮细胞生长因子蛋白含量:对照组缺氧2,4,8 h后血管内皮细胞生长因子蛋白含量高于缺氧前(P＜0.05),反义组缺氧2,4,8 h后血管内皮细胞生长因子蛋白低于对照组(P＜0.05).③细胞增殖指数:对照组人脑动静脉畸形内皮细胞缺氧4,8 h后细胞增殖指数(P＜0.05).反义组缺氧4,8 h后低于对照组(P＜0.05).结论:缺氧可能在基因转录水平诱导血管内皮细胞生长因子表达,反义血管内皮细胞生长因子能够显著抑制缺氧诱导的人脑动静脉畸形内皮细胞血管内皮细胞生长因子基因表达和细胞增殖.
作者：赵明光；吕博川；李彦彬；梁勇；薛洪利；王丹玲；赵丽萍 刊期： 2007年第32期
目的:了解和掌握体质综合指数落后地区成年女性的体质现状,客观评价该人群的健康水平.方法:①调查对象:实验于2005-06/08在体质综合指数落后的贵州省六盘水市钟山区和水城县抽取20～59岁女性成年人,意识清晰、无明显生理缺陷、具备生活自理能力,在了解试验目的和程序后均志愿加入进行体质调查.按年龄段分组,5岁为1组,105人/组,共840人.②实验方法:严格按照<2005年国民体质监测工作手册>的要求确定测试指标,以身高、体质量、胸围、腰围、臀围、上臂皮褶厚度、肩胛皮褶厚度、腹部皮褶厚度作为形态类指标;以安静脉搏、收缩压、舒张压、肺活量、台阶指数作为功能类指标;以握力、背力、纵跳、1 min仰卧起坐、坐位体前屈、闭眼单脚站立、选择反应时作为素质指标.同时对测试对象进行询问访谈,内容包括工作生活方式、习惯、体育锻炼现状等.结果:840人均进入结果分析.①体质综合指数落后地区与全国成年女性形态指标的比较:与全国均值比较,体质综合指数落后地区成年女性各年龄段身高均降低,除50～54岁年龄段外,其他各年龄段均存在显著差异(P＜0.01);胸围均降低,除25～29岁、35～44岁年龄段外,其他各年龄段均存在显著差异(P＜0.01);腰围除45～59岁年龄段升高外,其他各年龄段均降低(P＜0.01);臀围均降低,除40～44岁年龄段外,其他各年龄段均存在显著差异(P＜0.05,0.01);体质量及上臂、肩胛、腹部皮褶厚度均明显低于全国均值(P＜0.05,0.01).②体质综合指数落后地区与全国成年女性机能状况的比较:与全国均值比较,体质综合指数落后地区成年女性各年龄段心率、肺活量、台阶指数均低于全国均值(P＜0.05,0.01);除55～59岁年龄段外,其他各年龄段收缩压均显著升高(P＜0.05,0.01);20～29岁年龄段舒张压显著升高(P＜0.01).③体质综合指数落后地区与全国成年女性素质状况的比较:与全国均值比较,体质综合指数落后地区成年女性各年龄段握力、纵跳、仰卧起坐均低于全国均值(P＜0.01);背力均低于全国均值,除20～24岁年龄段外,其他各年龄段均存在显著性差异(P＜0.01);坐位体前屈均低于全国均值,20～44岁年龄段存在显著性差异(P＜0.01);20～39岁年龄段闭眼单脚站立时间短于全国均值(P＜0.01),45～59岁年龄段闭眼单脚站立时间长于全国均值,但差异无显著性意义(P＞0.05);选择反应时所需时间均长于全国均值(P＜0.05,0.01).结论:体质综合指数落后的贵州省六盘水地区成年女性体质整体水平低于全国均值,主要影响因素为缺乏体育锻炼、饮食习惯、落后经济等.
作者：张龙；王静；卢锋；余涛 刊期： 2007年第32期
目的:探讨单基因遗传自然发病型(db/db)糖尿病小鼠颌下腺转化生长因子β1和血管内皮生长因子表达变化与糖尿病性神经病变关系.方法:实验于2003-09/2004-05在承德医学院中心实验室和承德医学院附属医院病理科完成.①实验材料:引进日本C57BL/ksj-db/+m表型正常隐性基因小鼠80只.②实验干预及分组:小鼠近亲(兄妹)交配,得到纯合子和非纯合子后代.纯合子后代为单基因遗传自然发病型糖尿病小鼠,即db/db型,相当于人类Ⅱ型糖尿病;非纯合子后代,即db/+m型,为糖尿病和肥胖基因携带者.生后4周起,平均血糖值升高达10 mmol/L以上且同时伴发肥胖者确定为糖尿病鼠,选取3,4,6,8,10个月龄db/db型,血糖＞10 mmol/L的雄性小鼠作为实验组;相应月龄的雄性同种db/+m型小鼠为对照组,每组5只动物.③实验评估:动物麻醉多聚甲醛灌注固定后,取3,4,6,8,10个月两组小鼠颌下腺,采用SP免疫组织化学染色,观察颌下腺的组织学改变和转化生长因子β1、血管内皮生长因子阳性表达的变化.结果:除去死亡和造模失败的小鼠外,正常对照组16只、实验组25只进人结果分析.①两组小鼠内皮细胞生长因子的表达变化:内皮细胞生长因子在正常鼠及糖尿病鼠颌下腺的血管内皮细胞中均有表达,实验组与对照组内皮细胞生长因子阳性细胞表达随月龄增加而增多.在月龄相同时,实验组的表达均强于同龄对照组(P＜0.05或0.01).②两组小鼠转化生长因子β1的表达变化:转化生长因子β1在正常及糖尿病鼠颌下腺的腺泡细胞、颗粒曲管及纹状管细胞中均有表达,阳性颗粒位于胞浆内.对照组阳性细胞数随月龄变化不大,实验组阳性细胞表达数随月龄增加而增多.在月龄相同时,实验组的表达均高于同龄对照组(P＜0.01).结论:db/db糖尿病小鼠颌下腺转化生长因子β1表达增强,同时有间质纤维增强,转化生长因子β1表达上调与糖尿病间质纤维增生密切相关.db/db糖尿病小鼠颌下腺血管内皮生长因子表达随病程延长表达增加,与糖尿病病程呈正相关.
作者：杜金凯；王春艳；高福禄；葛志华 刊期： 2007年第32期
目的:通过长骨干骨折脂肪栓塞综合征患者内固定植入物及其方式的合理选择,以大限度减少手术创伤及减少对骨折端的刺激,有效避免脂肪栓塞综合征的复发.方法:①对象:选择1998-02/2006-03唐山市第二医院创伤科收治长骨干骨折行内固定植入的脂肪栓塞综合征患者26例.②方法:采用非扩髓髓内钉固定股骨干、胫骨干中段骨折及多段骨折、微创经皮钢板内固定股骨干远端骨折及胫骨干远近端骨折、钢板固定肱骨干、桡骨骨折;术后早期进行系统的康复治疗;并接受随访.术后定期复查X线片,并观察材料及宿主反应.结果:①术后随访:16例患者术后随访12～24个月,10例患者随访25～108个月.②X线摄片评定骨折愈合结果:长骨干骨折髓内钉固定于术后10～17周临床愈合;微创经皮钢板固定,于术后9～19周临床愈合;钢板固定,于术后13～20周临床愈合.无髓内钉松动及断钉、断板等并发症,肌力5级,未发现脂肪栓塞综合征后遗症.③植入物与组织的生物相容性能评估:术后无切口感染、局部炎症反应、排异反应.结论:对于长骨干骨折的脂肪栓塞综合征患者,非扩髓髓内钉、微创经皮钢板及钢板3种内固定植入物及植入方式均可满足不同部位及类型长骨干骨折的需要,植入物与人体具有良好的生物相容性,不增加脂肪栓塞综合征复发率及后遗症.
作者：王宏伟；王晓敏；苏立新；李冀；贾庆灵；王志强 刊期： 2007年第32期
目的:观察葛根素对去卵巢骨质疏松性骨折大鼠胰岛素样生长因子1表达的影响.方法:实验于2005-02/2006-01在解放军第四五四医院骨科和南京医学院完成.实验材料:葛根素购自中国生物药品鉴定所.SD雌性大鼠40只,8月龄,体质量(280±19)g,由南京医学院实验动物中心提供.实验方法:将大鼠用4%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔内麻醉,在无菌条件下行双侧卵巢摘除术,术后继续饲养2个月,借助骨折器建立股骨闭合性骨折模型.按随机排列表法分为对照组和治疗组,每组20只.治疗组术后给予灌胃20 mg/(kg·d)剂量的葛根素,对照组给予2 mL生理盐水处理.于骨折后第2周利用Western-blot和RT-PCR方法检测胰岛素样生长因子1蛋白与胰岛素生长因子1 mRNA表达,观察葛根素对胰岛素生长因子1表达的影响.结果:40只大鼠全部进入结果分析.①Western-blot检测胰岛素生长因子1蛋白:与对照组相比,治疗组胰岛素生长因子1蛋白表达明显升高(1.40±0.09,3.2±0.31,P＜0.05).②RT-PCR分析胰岛素生长因子1 m RNA表达:与对照组相比,治疗组胰岛素生长因子1 mRNA表达明显升高(12.3±2.09,23.1±1.32,P＜0.05).结论:葛根素可以通过调节胰岛素生长因子1的表达,从而可能加快去卵巢大鼠骨质疏松性骨折的愈合.
作者：周强；付庭斌 刊期： 2007年第32期
目的:观察阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者认知功能及血清胰岛素样生长因子1水平的变化,并分析其相关性.方法:试验于2005-11/2006-04在中南大学湘雅二医院老年病科睡眠实验室完成.80例受试者进行多导睡眠监测,应用包含11个亚组的简易智能状态量表评价认知功能,同时检测血清胰岛素样生长因子1水平.采用SPSS13.0统计软件,对以上各指标间的相关性进行线性相关、Spearman秩相关及多元逐步回归分析.结果:①分组:80例受试者根据呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻度组14例(5≤AHI＜15),中度组12例(15≤AHI＜30),重度组44例(AHI≥30),对照组10例(AHI＜5).②组间比较:OSAHS患者慢波睡眠时间、快动眼睡眠时间、低血氧饱和度和血清胰岛素样生长因子1水平均低于对照组(P＜0.05).③认知功能损害:OSAHS患者简易智能状态量表中短时记忆、注意与计算、语言复述、时间定向、地点定向、言语表达6个亚组分值低于对照组(P＜0.01).④多导睡眠图各指标与其他指标相关性:简易智能状态量表总分及血清胰岛素样生长因子1与AHI负相关(P＜0.01),与慢波睡眠时间、快动眼睡眠时间和低血氧饱和度正相关(P＜0.01);不同受累认知功能亚组与多导睡眠图各指标相关性不全一致,但均与睡眠结构紊乱及低氧相关.⑤简易智能状态量表总分及血清胰岛素样生长因子1相关性:两者呈显著正相关(r=0.778,P＜0.01).结论:①患者存在认知功能受损,主要表现在总体认知功能以及短时记忆、注意与计算、语言复述、时间定向、地点定向、言语表达领域的损害,随着病变严重程度的加深,认知功能受损的范围增加.②总体认知功能与夜间低氧、睡眠结构紊乱以及血清胰岛素样生长因子1水平降低相关.③患者血清胰岛素样生长因子1水平降低,与夜间低氧、睡眠结构相关.
作者：许琰；罗荧荃；杨宇 刊期： 2007年第32期
背景:有报道1型糖尿病可导致骨再生与修复障碍,局部注射成纤维细胞因子2可明显促进骨折愈合,但其对2型糖尿病的影响尚不十分清楚.目的:观察重组人成纤维细胞生长因子2和可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体蛋白联合治疗2型糖尿病引起的骨再生及其修复障碍的作用.设计:随机对照实验.单位:中南大学湘雅三医院骨科.材料:选择雄性Zucker糖尿病大鼠(ZDF/Gmi-fa/fa)20只,10周龄,购自美国查尔斯河实验室.重组人成纤维细胞生长因子2购自美国Orquest公司,可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体蛋白购自美国Amgen公司.方法:实验于2006-09/11在中南大学湘雅三医院中心实验室完成.①实验分组:将20只大鼠随机分为对照组和治疗组,每组10只.②实验方法:检测大鼠体质量,血糖、尿糖和尿酮.1周后,接受左胫骨中上段低能截骨,安置外延长固定架.第2天起开始胫骨延长0.2 mm/次,2次/d,共14 d.期间治疗组大鼠接受截骨处血肿内重组人成纤维细胞生长因子225 μg/kg注射1次,可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体蛋白8 mg/kg皮下注射隔日1次,共14 d;对照组仅接受载体和生理盐水注射.③实验评估:测定血液生化指标、胫骨延长间隙中新生骨量及增殖细胞数量.主要观察指标:两组血液生化指标、胫骨延长间隙中新生骨量及增殖细胞数量比较.结果:纳入大鼠20只,全部进入结果分析.①两组血糖、尿糖、尿酮、血清胰岛素和骨钙素比较,差异不明显(P＞0.05).②治疗组大鼠左胫骨延长间隙内新生骨的面积、密度和骨内膜成骨、骨膜成骨均明显高于对照组(P＜0.05～0.01).治疗组大鼠的胫骨牵引间隙中的纤维间区和初始骨基质前沿增殖细胞核抗原阳性细胞及百分比均明显多于对照组(P＜0.05～0.01).结论:2型糖尿病可引起骨再生与修复障碍,重组人成纤维细胞生长因子2和可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体蛋白联合治疗可促进成骨细胞增殖,加快牵引成骨速率,有利于2型糖尿病合并骨折的愈合障碍.
作者：刘振东；钟杰林；徐诣；苗杰 刊期： 2007年第32期
背景:由于中枢神经损伤后局部微环境病理生理机制极其复杂,尤其急性期炎性反应及继发胶质瘢痕形成对有效轴突再生、局部神经细胞再生排列及局部干细胞增殖迁徙影响极大,成为早期阻碍神经修复的根本原因,故如何有效拮抗损伤区急性期炎性损伤因素,优化神经再生微环境是目前脊髓损伤修复的重要策略之一.目的:应用大鼠脊髓损伤模型,设计构建并筛选佳白细胞介素6受体α表达抑制shRNA腺病毒表达载体.设计:重复测量实验.单位:深圳市第二人民医院脊柱外科.材料:选用健康Wistar大鼠40只,雌雄不拘,鼠龄8～10周.兔抗鼠GFAP一抗购自Santa Cruz公司,siRNA构建真核表达质粒pGenesil(携带绿色荧光表达系统)购自武汉晶赛生物工程技术公司.方法:实验于2006-11在武汉同济医学院基础医学部免疫教研室开放实验室及深圳市第二人民医院医学实验中心完成.针对白细胞介素6受体α基因编码序列设计并合成三对9 bp茎环结构19 bp干扰序列特异性shRNA模板,体外构建带绿色荧光蛋白的重组腺病毒表达载体;并建立大鼠急性脊髓损伤模型,损伤后12 h局部注射编码shRNA重组腺病毒,通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术,观察RNA干扰后损伤脊髓局部白细胞介素6R表达抑制效果,筛选佳抑制白细胞介素6R表达的腺病毒表达载体.主要观察指标:RNA干扰后损伤脊髓局部IL-6RRNA表达、蛋白表达水平抑制效果.结果:序列测定证实白细胞介素6R-shRNA重组腺病毒表达载体构建成功,通过实时荧光定量RT-PCR,Western blot技术筛选出佳白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在mRNA及蛋白表达水平抑制白细胞介素6R基因表达效率分别为49%和56%.结论:构建并筛选成功的白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在大鼠急性脊髓损伤模型中能高效抑制白细胞介素6R基因表达.
作者：高明勇；肖建德；李振宇；闫洪印；余铮；田长庆；陈扬；顾洪生 刊期： 2007年第32期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
