徐锡金；刘晓瑜；梁晓；霍霞
背景:既往评价手术治疗下肢慢性静脉功能不全的效果时,往往只注重于评估症状、体征的改善,而忽视患者生活质量所得到的改善.目的:评估下肢慢性静脉功能不全患者手术前后生活质量的变化.设计:对比观察,量表评估,1年追踪随访.单位:上海第二医科大学仁济医院血管外科.对象:选择2001-07/2003-12在上海第二医科大学仁济医院血管外科经手术治疗并完成1年随访的下肢慢性静脉功能不全患者169例(209侧下肢),男89例,女80例;平均年龄(56±13)岁;平均病程(11±3)年.均对治疗方案和评估项目知情同意.方法:依据逆流涉及的范围及是否存在深静脉瓣膜功能不全,分别施行3种术式:浅静脉术式组行大隐静脉高位结扎与剥脱术,46例56侧肢体;交通静脉术式组行大隐静脉高位结扎与剥脱术+交通静脉结扎术,73例87侧肢体;深静脉术式组行大隐静脉高位结扎与剥脱术+交通静脉结扎术+股浅静脉壁环形缩窄术50例66侧肢体.于手术前1周和手术后1年,采用生活质量调查表评价患者生活质量,内容包括疼痛、体能、社会活动和精神心理4个方面共20个问题.每个问题答案由轻至严重5个等级,分别记为1,2,3,4,5分,20题评分之和是总得分,设定100分为理想的生活质量.主要观察指标:手术前后下肢慢性静脉功能不全患者生活质量评分的变化.结果:下肢慢性静脉功能不全患者169例均进入结果分析.①生活质量调查表评分的性别差异:患者手术后1年生活质量调查表总分有明显提高(P＜0.05).术前男女性生活质量调查表总分相近(P＞0.05),手术后均有明显提高(P＜0.05).②生活质量调查表评分与术式关系:浅静脉术式组、交通静脉术式组、深静脉术式组术后生活质量调查表总分3组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).而在术前深静脉组生活质量调查表总分明显低于浅静脉术式组和交通静脉术式组(P＜0.05).结论:合理的术式可以提高下肢慢性静脉功能不全患者的生活质量,生活质量提高无性别差异.
作者：张岚；张柏根；张纪蔚 刊期： 2007年第36期
目的:观察大鼠脊髓损伤后垂体腺苷酸环化酶激活肽表达的变化,分析其在脊髓损伤中的意义,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法:实验于2005-10/2006-09在汕头大学医学院生殖医学研究中心完成.①实验分组:选择清洁级健康成年雌性SD大鼠66只,随机抽签法分为损伤后1,3,7,14,28 d组以及正常对照组,每组11只.②实验方法:改良的NYU装置制备脊髓损伤模型,对照组不做手术.损伤后1,3,7,14,28 d麻醉取材.逆转录-聚合酶链反应扩增垂体腺苷酸环化酶激活肽.③实验评估:采用苏木精-伊红染色观察脊髓损伤后的病理变化,免疫组织化学检测阳性细胞计数,逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹方法检测脊髓组织中垂体腺苷酸环化酶激活肽蛋白及mRNA的表达情况.结果:纳入66只大鼠,均进入结果分析.①在蛋白和mRNA水平垂体腺苷酸环化酶激活肽表达呈时间相关性,正常对照组可见垂体腺苷酸环化酶激活肽mRNA和蛋白的少量表达,脊髓损伤后1 d表达开始增加,7 d时表达明显增加,与3 d时比较差异有显著性意义(P＜0.05).②苏木精-伊红染色结果可见脊髓灰质出血水肿坏死,神经细胞变性死亡,免疫组织化学显示正常对照组神经元中有垂体腺苷酸环化酶激活肽阳性表达,损伤后垂体腺苷酸环化酶激活肽的表达逐渐增高,损伤7 d时垂体腺苷酸环化酶激活肽表达明显增加(P＜0.05),至28 d时表达仍较高.结论:损伤后垂体腺苷酸环化酶激活肽表达增加,内源性垂体腺苷酸环化酶激活肽的增加可能有利于受损脊髓神经元的存活与再生.
作者：徐锡金；刘晓瑜；梁晓；霍霞 刊期： 2007年第36期
目的:检测转化生长因子β1在腹膜透析大鼠腹膜内表达,并探讨其在腹膜纤维化中的意义.方法:实验于2005-06/2006-03在中南大学湘雅二医院肾内科实验室完成.①实验材料:雄性SD大鼠,体质量180～240 g,由中南大学湘雅二医院动物实验中心提供.②实验方法:将28只大鼠按随机数字表随机分为4组,每组7只.正常对照组不予任何干预;生理盐水组腹腔注射20 mL生理盐水;低糖透析液组腹腔注射20 mL 1.5%葡萄糖透析液;高糖透析液组腹腔注射20 mL4.25%葡萄糖透析液,均为1次/d.4周后,向大鼠腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液20 mL,4 h后于大鼠右下腹缓慢插入带有多个侧孔的10号静脉留置针,缓慢低位引流腹透液,量取引流液.③实验评估:取大鼠壁层腹膜组织,以苏木素-伊红染色,镜下测量腹膜厚度,采用免疫组织化学方法检测大鼠腹膜中转化生长因子β1及纤连蛋白.结果:28只大鼠均进入结果分析.①高糖透析液组、低糖透析液组超滤量均明显低于正常对照组与生理盐水组,并且高糖透析液组超滤量明显少于低糖透析液组(P均＜0.05).②高糖透析液组腹膜明显增厚,表面粗糙,间皮细胞肿胀,脱落,间皮下有大量血管生成以及胶原纤维沉积,还可见单核细胞等炎症细胞浸润,与其他组比较,腹膜厚度明显增加(P＜0.05).③高糖透析液组转化生长因子β1、纤连蛋白表达量均明显高于其他组;低糖透析液组转化生长因子β1、纤连蛋白表达量均明显高于正常对照组与生理盐水组(P＜0.05).④大鼠腹膜组织转化生长因子β1蛋白与纤连蛋白表达量、腹膜厚度之间呈明显的正相关(r=0.86,0.83,P＜0.05).结论:葡萄糖透析液可诱导腹膜组织转化生长因子β1明显上调,腹膜转化生长因子β1高表达与腹膜透析腹膜纤维化密切相关.
作者：李建飞；温黎青；刘伏友；刘虹；彭佑铭；赵勤 刊期： 2007年第36期
背景:关于缺氧性肺动脉高压发病过程中缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶在肺动脉壁内的动态变化尚需探讨.目的:观察不同缺氧时间点肺动脉壁内缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶基因表达,探讨其在缺氧性肺动脉高压发病机制中的作用.设计:对比观察的动物实验.单位:南华大学附属第二医院呼吸内科.材料:选用健康雄性Wistar大鼠40只,清洁级,6～8周龄,体质量(220±10)g.按随机表法分为对照组(n=8)和缺氧组(n=32),其中缺氧组又分为缺氧后3,7,14,21 d 4个时间点进行观察,每个时间点8只.方法:实验于2004-08/2005-12在南华大学肿瘤研究所完成.缺氧组大鼠按李启芳报道的方法进行干预.对照组大鼠置于同一室内,除不缺氧外,余同缺氧组.按照观察时间点将大鼠麻醉后,右颈外静脉插入微导管,连接多导生理记录仪,检测大鼠肺动脉平均压.将大鼠处死取出心脏称量右心室、左室加室间隔的质量,以右室肥大指数反映右心室肥厚程度.取大鼠右上肺组织,进行苏木精-伊红染色和弹性纤维染色.用病理图像分析软件测定肺动脉管壁面积/管总面积、管腔面积/管总面积、肺细小动脉中膜平滑肌细胞密度、肺细小动脉中膜厚度作为肺小血管重塑指标.对肺小血管壁缺氧诱导因子1α,诱导型一氧化氮合酶进行原位杂交和免疫组织化学检测,以肺细小动脉管壁平均吸光度值作为mRNA表达和蛋白水平的相对含量.主要观察指标:①大鼠肺动脉平均压、右心室肥厚程度和肺小血管重塑指标的变化.②缺氧诱导因子1和诱导型一氧化氮合酶的表达及其与肺动脉平均压,肺血管重塑的关系.结果:共纳入Wistar大鼠40只全部进入结果分析.①缺氧7 d时肺动脉平均压明显高于对照组(P＜0.05),14 d达到高水平,之后维持于此水平.②缺氧14 d右心室肥大指数高于对照组(P＜0.05).③缺氧7 d肺小动脉管壁增厚,管腔变窄,肺动脉管壁面积/管总面积、管腔面积/管总面积与对照组比较,差异明显(P＜0.05);缺氧14 d可见肺小动脉中膜和肺细小动脉中膜平滑肌细胞密度增高,肺细小动脉中膜厚度明显增加(P＜0.05).21 d管腔进一步变窄,平滑肌增生明显.④缺氧诱导因子1和诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达:对照组大鼠呈弱阳性表达;缺氧3 d和7 d缺氧诱导因子1α mRNA相对量无明显变化,14 d时明显增高,此后维持于高水平.诱导型一氧化氮合酶mRNA在缺氧3 d明显高于对照组,7 d达到高峰,14 d接近对照组水平,21 d再次升高,但低于缺氧3 d时.⑤缺氧诱导因子1α主要表达于血管内膜和中膜,而诱导型一氧化氮合酶表达涉及血管全层.诱导型一氧化氮合酶在对照组肺血管内膜和中膜均弱阳性表达,缺氧3 d与对照组差异不明显,7 d中膜、内膜表达明显,14 d血管中膜增厚,表达增强.在血管外膜,对照组诱导型一氧化氮合酶为阴性,各缺氧组均阳性表达.⑥mPAP与肺血管重塑正相关(r=0.976,P＜0.01),缺氧诱导因子1α mRNA与诱导型一氧化氮合酶蛋白正相关(r=0.927,P＜0.05).结论:缺氧诱导因子1α和诱导型一氧化氮合酶均在大鼠缺氧性肺动脉高压的发病过程中发挥作用,且缺氧诱导因子1α与诱导型一氧化氮合酶基因表达可能存在相互调控.
作者：何振华；戴爱国；张秀峰；谭小武 刊期： 2007年第36期
背景:丹参已被广泛用于治疗心绞痛、缺血性脑卒中等缺血性心血管疾病,但丹参对去卵巢大鼠的作用尚须进一步明确.目的:观察口服丹参水煎剂对去卵巢大鼠体质量、进食量、血脂及丙二醛的影响.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:兰州大学基础医学院生理学与心理学研究所.材料:实验于2005-11/2006-12在甘肃省新药临床前研究重点实验室和兰州大学基础医学院生理学和心理学研究所实验室完成.选用健康雌性SD大鼠24只,3月龄,体质量(220±2)g.丹参水煎剂由甘肃省药检所鉴定并提取,相当于每毫升含生药1 g.丙二醛试剂盒购于南京建成生物工程研究所.方法:①实验干预:将SD大鼠按随机抽签法分为3组,每组8只:假手术组,去卵巢组和丹参组.去卵巢组及丹参组大鼠行双侧去卵巢术,假手术组进行同样的手术过程,双侧切除与卵巢等大的脂肪,但保留卵巢.假手术组和去卵巢组大鼠术后自由饮水,丹参组大鼠术后自然喂饲1%浓度的丹参水煎剂,到第8天浓度逐渐增至12%,持续到实验结束,共55 d.②实验评估:每天称各组大鼠的摄食量,每5 d称各组大鼠的体质量.实验结束时,股动脉取测定血清中血脂水平,并按丙二醛试剂盒说明测定其血清水平.主要观察指标:各组大鼠体质量、摄食量、血脂水平、血清丙二醛水平.结果:大鼠24只全部进入结果分析.①体质量:手术前3组大鼠体质量相近(P＞0.05).术后10,20,25,55 d去卵巢组大鼠体质量明显高于假手术组(P＜0.01),术后20,25,55 d丹参组明显低于去卵巢组(P＜0.01).②摄食量:去卵巢组大鼠术后15,40,55 d摄食量均大于假手术组(P＜0.05～0.01),丹参组大鼠3个时间点摄食量均小于去卵巢组(P＜0.05～0.01).③血脂、丙二醛水平:实验结束时,去卵巢组大鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油水平均高于假手术组(P＜0.05～0.01),丹参组三酰甘油和丙二醛水平明显低于去卵巢组(P＜0.01,0.05).结论:丹参能明显降低去卵巢大鼠的体质量,降低三酰甘油和丙二醛水平.
作者：岳嘉；常燕琴；朱家恩；蔺美玲；张小郁；卫玉玲；郑天珍 刊期： 2007年第36期
目的:采用淀粉样β蛋白诱导种植在人工基底胶上的血管平滑肌细胞损伤,观察利福平对血管平滑肌细胞的保护作用.方法:实验于2005-09/2006-09在武汉协和医院神经科实验室进行.①实验材料:100～150 g清洁级SD大鼠;淀粉样β蛋白(1-40)(北京博奥森生物工程公司);利福平(华北制药厂).②实验干预及分组:体外培养大鼠颈动脉平滑肌细胞;实验前所有的细胞培养板孔底经人工基底胶预处理.实验分为2组,实验组细胞培养板孔底沉积淀粉样β蛋白(1-40),对照组细胞培养板孔底无淀粉样β蛋白(1-40)沉积,实验组和对照组根据利福平终浓度不同分别分为7组(0,0.1,1,2,5,10,20 g/L).③实验评估:在显微镜下观察给药前后平滑肌细胞的形态学变化,用四甲基偶氮唑盐比色实验检测平滑肌细胞活性,依据乳酸脱氢酶漏出率检测平滑肌细胞膜的损伤程度.结果:①血管平滑肌细胞形态学变化:对照组内不同浓度利福平下细胞形态均基本正常,实验组细胞形态均异常,但经利福平处理后均有改善,并成剂量依赖关系.②细胞活性:对照组内四甲基偶氮唑盐染色吸光值无明显变化,实验组四甲基偶氮唑盐染色吸光值下降但经利福平处理也呈剂量依赖性上升.③乳酸脱氢酶漏出率:对照组中乳酸脱氢酶漏出率在利福平低浓度时无改变,高浓度时有所增加;实验组中乳酸脱氢酶漏出率均增加,在利福平浓度≤2 g/L时,随利福平浓度增加,成剂量依赖关系的下降;在利福平浓度＞2 g/L时,乳酸脱氢酶漏出率又开始增加.结论:利福平在一定浓度范围内对淀粉样β蛋白(1-40)诱导的大鼠血管平滑肌细胞损伤有保护作用.
作者：陈义书；刘嘉；安俊；刘昌勤 刊期： 2007年第36期
目的:探讨慢性骨筋膜间隔综合征所致比目鱼肌损伤后的肌纤维病理改变及再生能力.方法:实验于2005-08/2006-04在上海市第六人民医院中心实验室完成.①实验动物:20周龄新西兰白兔102只,取6只作为正常对照组,其余96只随机数字表法分为4组:80 mm Hg压迫3 d组、120 mm Hg压迫3 d组、80 mm Hg压迫14 d组、120 mm Hg压迫14 d组,24只/组.②实验方法:除正常对照组外,各组按其对应的压力强度和压迫时间建立骨筋膜间隔压力模型,采用充气式血压计袖带于每只兔的右小腿给予间断、重复性的压迫,2次/d,2 h/次,中间休息30min.③实验评估:压迫试验结束后1,7,14,28 d,选取比目鱼肌损伤重区域制作标本,光镜及透射电镜下观察肌纤维组织病理学变化,同时以计算机图像分析系统检测骨骼肌细胞坏死纤维化面积.结果:102只兔均进入结果分析.①骨骼肌组织病理学变化:80 mm Hg压迫3 d组、120 mm Hg压迫3 d组解除压迫后1 d,骨骼肌局灶坏死,基底膜完整;解除压迫后7 d大量肌卫星细胞增殖,可见肌管融合;解除压迫后14 d骨骼肌恢复较完全,仅少量纤维化;至解除压迫后28 d与正常对照组无明显区别.80 mm Hg压迫14 d组、120 mm Hg压迫14 d组解除压迫后1 d,大面积肌纤维坏死与间质纤维化,基底膜大部分崩解,可见肌卫星细胞增殖;解除压迫后7 d于残存基底膜附近可见片灶状卫星细胞增殖;解除压迫后14 d肌卫星细胞已停止大量增殖;解除压迫后28 d仍可见大面积纤维化,且面积已趋稳定.②骨骼肌细胞坏死纤维化程度:正常对照组骨骼肌细胞坏死纤维化面积为(1.0±0.5)%.压迫试验结束后1 d,120 mm Hg压迫3 d组骨骼肌细胞坏死纤维化面积明显高于80 mm Hg压迫3 d组(P＜0.05);压迫试验结束后7,14 d,两组基本相似,至28 d均恢复至正常对照组水平(P＞0.05).压迫试验结束后各时间点120 mm Hg压迫14 d组骨骼肌细胞坏死纤维化面积均明显高于80 mm Hg压迫14 d组(P＜0.05).③骨骼肌内压力情况:骨骼肌内压的变化与血压计压力呈正比,血压计压力为80,120 mm Hg时,骨骼肌内压分别为(45.5±1.0),(68.3±2.1)mm Hg.结论:当压迫时间较短、损伤较轻、基底膜完整时,比目鱼肌可完全恢复;当压迫时间较长、损伤较重、基底膜崩解时,比目鱼肌恢复较差.提示慢性骨筋膜间隔综合征所致比目鱼肌损伤后,其恢复与压力强度和压迫时间有关.
作者：马童；白跃宏；俞红 刊期： 2007年第36期
目的:观察中医经穴推拿对增龄性骨骼肌纤维的作用,分析不同手法处方之间的作用差异.方法:实验于2004-03/2005-08在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院国家中医药管理局三级实验室中心实验室完成.清洁级SD大鼠51只,体质量202～650 g,其中6月龄14只;18月龄37只.①实验分组:14只6月龄大鼠为青年对照组;按自然增龄方法造模18月龄的37只老年大鼠,根据随机数字表法分为老年对照组(n=13)、非经穴推拿组(n=12)和经穴推拿组(n=12).②实验方法:经穴推拿组采用阳明经穴为主进行推拿治疗,非经穴推拿组采用软组织推拿治疗,每次治疗10 min,3次/周,共6周;老年对照组和青年对照组不做处理,正常饲养.③实验评估:实验周期结束后,分离出大鼠肱二头肌,应用ATP酶染色法,采用pH 10.4、pH 4.5两种不同溶液进行染色,显微镜下观察骨骼肌肌纤维类型的变化.结果:①纳入SD大鼠51只,其中非经穴推拿组大鼠死亡2只,老年对照组、经穴推拿组大鼠各死亡1只,老年对照组大鼠1只生瘤未进入统计.死亡原因均为月龄过大引起,后47只进入结果分析.②pH 10.4和pH 4.5染色环境下,经穴推拿组和非经穴推拿组肌肉纤维情况均好于老年对照组,在肌肉纤维界限和直径方面更加接近于青年对照组;而且,经穴推拿组较非经穴推拿组Ⅱ型肌肉纤维比例要高,且更接近于青年对照组.结论:经穴推拿治疗可以提高Ⅱ型骨骼肌纤维的体积和比例.
作者：张宏；严隽陶；徐俊；王志超；李棣华 刊期： 2007年第36期
背景:肌钙蛋白I能抑制血管内皮细胞生长、抑制新生血管形成并通过阻断新血管的生长而抑制实体瘤生长与转移的物质.肌钙蛋白C与肌钙蛋白I类似,也存在于非肌肉组织中,其是否也具有肌钙蛋白I类似的抗肿瘤作用?目的:观察重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞生长及小鼠异体移植肿瘤生长的作用.设计:体外及体内对比观察.单位:重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所,重庆医科大学生化教研室.材料:实验于2003-03/2004-12在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所生物化学实验室完成.选用100只昆明种小鼠,雌雄不拘,体质量15～22 g,购自重庆中药研究院.表达人骨骼肌型肌钙蛋白C的大肠杆菌工程菌株由重庆康尔威药业股份有限公司提供;人脐静脉内皮细胞(购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所).方法:通过PCR技术从人胸腺cDNA文库中获取编码人骨骼肌型肌钙蛋白C的编码基因cDNA序列并克隆至大肠杆菌中获得表达人肌钙蛋白C的基因工程菌,用镍柱亲和层析纯化重组人肌钙蛋白C.①体外细胞实验:将人脐静脉内皮细胞以2×103 cell/孔的密度置于96孔平板培养,将1,5,10,50 mg/L的重组人肌钙蛋白C加入细胞培养液共同培养3 d,使用酶标仪在540 nm波长下测定A值,计算细胞生长抑制率,同时采用LOGIT法计算半数抑制率.②体内动物实验:取接种7～8 d腹水瘤,将瘤细胞稀释至1×1010L-1后,0.2 mL腋下及腹腔接种小鼠,每种接种方式各50只,次日采用随机摸球法将两种注射方式的小鼠分成5组,分别为重组人肌钙蛋白C 20,10,5 mg/kg组,环磷酰胺组及对照组,每组10只.重组人肌钙蛋白C 20,10,5 mg/kg组分别给予相应剂量重组人肌钙蛋白C 1次,连续给药7 d,环磷酰胺组间日给药50 mg/kg环磷酰胺1次,对照组给予相应体积生理盐水,末次给药后停药1 d,脱颈处死小鼠,称体质量,剖瘤称质量,按下列公式计算肿瘤抑制率:肿瘤抑制率=[(对照组平均瘤质量-药物组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量]×100%.主要观察指标:体外细胞实验重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞生长及小鼠异体移植肿瘤的生长抑制率.结果:①体外细胞培养显示,重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制,半数抑制率约7.5 mg/L.②与体外细胞实验结果类似,腹腔给药后,重组人肌钙蛋白C 5,10,20 mg/kg组肿瘤抑制率高于对照组(P＜0.01);腋下给药后,重组人肌钙蛋白C 5,10,20 mg/kg组肿瘤抑制率高于对照组(P＜0.05～0.01),腋下给药与腹腔给药的肿瘤抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制,其具有抑制血管内皮细胞生长作用与抗肿瘤作用.
作者：刘先俊；周辉云；邓显锋 刊期： 2007年第36期
背景:双膦酸盐在临床绝经后妇女骨质疏松症防治中疗效显著,而伊班膦酸钠作为新型双膦酸盐制剂正逐渐成为研究热点.目的:通过观察卵巢切除大鼠骨量丢失的相关指标,探讨伊班膦酸钠干预卵巢切除大鼠骨质疏松的有效性,并与尼尔雌醇比较.设计:完全随机分组,对照动物实验.单位:复旦大学医学院骨代谢研究室.材料:选用SD雌性大鼠40只,鼠龄10～12个月.伊班膦酸钠由江苏原子医学研究所国家重点实验室提供.尼尔雌醇由上海第十二制药厂生产.方法:实验于1996-08/1998-06在上海医科大学放射医学研究所骨代谢研究室完成.采用随机抽签法分为4组,每组10只.假手术组:仅切除卵巢周围小块脂肪组织,手术3个月后每天灌胃生理盐水1 mL/只;卵巢切除组、卵巢切除+伊班膦酸钠组、卵巢切除+尼尔雌醇组:均行双侧卵巢切除,3个月后分别开始灌服生理盐水、伊班膦酸钠0.5 mg/(kg·d)水溶物、尼尔雌醇混悬液1 mg/(kg·次).给药组均于给药第1周灌药2次,以后每周1次,均给药90 d.主要观察指标:取左侧股骨,测其干重、灰重,采用PE23110型原子吸收分光光度计测定骨钙含量.采用DPX-L型骨密度测定全身骨密度;采用SPA型单光子大鼠骨密度仪测右侧股骨全长1/2交界处的骨密度.采用AG22020 KNA型万能材料试验机测定股骨抗弯力.采用动力学法由ENCORⅡ型自动生化分析仪测定血碱性磷酸酶活性,采用EDTA滴定法测定尿钙,采用苦味酸法测定尿肌酐;采用改良血尿羟脯氨酸测定法测定尿羟脯氨酸.计算骨小梁面积.结果:大鼠40只均进入结果分析.①骨干重、灰重和钙含量的改变:卵巢切除组大鼠骨干重、灰重和钙含量明显低于其他3组(t=13.58～52.98,P＜0.05).②股骨骨密度、抗弯力和全身骨密度的改变:卵巢切除组大鼠股骨骨密度和全身骨密度明显低于其他3组(t=3.31～5.61,P＜0.05),而抗弯力与其他3组相近(P＞0.05).③血碱性磷酸酶及尿羟脯氨酸与肌酐、钙与肌酐比值的改变:卵巢切除+伊班膦酸钠组和卵巢切除+尼尔雌醇组大鼠尿钙与肌酐比值明显低于卵巢切除组(t=4.04,3.30,P＜0.05),其他2项指标在各组间比较,差异无显著性意义(P＞0.05).④椎骨、胫骨骨小梁面积的改变:卵巢切除组大鼠椎骨骨小梁面积明显小于其他3组(t=2.22,2.41,3.45,P＜0.05),而胫骨骨小梁面积仅卵巢切除+尼尔雌醇组明显大于卵巢切除组(t=2.45,P＜0.05).结论:SD大鼠卵巢切除3个月后出现明显的骨质疏松,伊班膦酸钠对卵巢切除骨质疏松模型大鼠骨量的丢失有显著抑制作用,且与尼尔雌醇作用相当.
作者：姚吉龙；王洪复；黄敏丽；金慰芳；高建军；魏道林 刊期： 2007年第36期
目的:观察小鼠胚胎发育过程中背主动脉胎肝激酶1、α-平滑肌肌动蛋白的表达时相,初步探讨背主动脉内皮和平滑肌细胞的形成及其可能起源.方法:实验于2006-01/2007-01在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科完成.①实验材料:昆明种小白鼠50只,体质量20～22 g,其中雌鼠30只.②实验方法:将雌鼠分别放入公鼠笼内过夜、交配,从怀孕第8.5天开始获取胚胎,在雌鼠怀孕第8.5～18.5天,每一时间点取10个小鼠胚胎.③实验评估:对胎鼠组织切片分别行苏木精-伊红染色,观察背主动脉形态学变化;免疫组织化学染色法观察内皮细胞标志物胎肝激酶1、CD31、Ⅷ因子相关抗原,α-平滑肌肌动蛋白表达变化及其相互关系.结果:①胚胎8.5～9.5 d胎鼠背主动脉由单层细胞构成,呈胎肝激酶1、CD31阳性,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原阴性.②胚胎10.5 d胎鼠背主动脉仍为单层细胞,但胎肝激酶1、CD31、Ⅷ因子相关抗原、α-平滑肌肌动蛋白均呈阳性.③胚胎11.5 d背主动脉管壁发育为多层,内层细胞呈胎肝激酶1阳性、α-平滑肌肌动蛋白阴性,外层细胞呈胎肝激酶1阴性而α-平滑肌肌动蛋白阳性,血管与周围间充质无明显分界,背主动脉管壁周围可见散在α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞.④11.5 d之后,背主动脉管壁平滑肌细胞数量增多且由不规则型转变为纺锤型,内层内皮细胞继续呈胎肝激酶1阳性、α-平滑肌肌动蛋白阴性,外层平滑肌细胞胎肝激酶1阴性、α-平滑肌肌动蛋白阳性,血管与周围间充质分界清楚,背主动脉血管周围无散在α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞.结论:胚胎背主动脉的平滑肌细胞可能早起源于胎肝激酶1、CD31阳性细胞,后期可能来源于周围间充质细胞的募集分化.
作者：韩雅玲；李颖佳；齐岩梅；康建；闫承慧 刊期： 2007年第36期
背景:类风湿关节炎的发病与细胞凋亡过程异常密切相关,其滑膜细胞过度增生源于滑膜细胞凋亡的相对不足,诱导滑膜细胞凋亡对治疗类风湿关节炎有积极意义.青蒿素及其衍生物可诱导多种细胞凋亡.目的:观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas/FasL及Bcl-2/Bax表达的影响.设计:随机对照观察.单位:三峡大学第一临床医学院.材料:实验于2005-09/2005-11在三峡大学免疫实验室及形态动物学实验室完成,选用50只生后8周雄性Wistar大鼠,体质量(150±21)g,清洁级,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供.完全Freud佐剂为美国SIGMA公司产品,青蒿琥酯注射液购自桂林南药股份有限公司.兔抗鼠Fas(SC-716)、兔抗鼠FasL多抗(SC-834)、山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体、兔抗鼠P53(M3566)多抗、Bcl-2(sc-7382)多抗、兔抗鼠Bax(sc-7480)多抗以及ABC复合物试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国Santa Cruz公司产品;甲氨蝶呤由上海华联制药有限公司生产;德国Leica生物应用显微镜及图象分析系统;德国Leica切片机.方法:摸球法随机将大鼠分为6组:空白组(n=8),模型组(n=8),青蒿琥酯高剂量组(n=10),青蒿琥酯低剂量组(n=8),青蒿琥酯加甲氨蝶呤组(n=8),甲氨蝶呤组(n=8).①实验干预:按照文献叙述的模型构建方法,除空白组外,余5组每只右足跖处给予注射0.1 mL完全Freud佐剂,致炎成佐剂性关节炎模型,空白组注射生理盐水0.1 mL.致炎后第13天开始给药,青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组分别注射40.20 mg/(kg·d)青蒿琥酯注射液,青蒿琥酯加甲氨蝶呤组注射20 mg/(kg·d)青蒿琥酯注射液,0.4 mg/(kg·3 d)甲氨蝶呤注射液.甲氨蝶呤组给予注射0.4 mg/(kg·3 d)甲氨蝶呤注射液,模型组腹腔注射1 mL/d生理盐水.各组给药方式均为腹腔注射.②实验评估:给药前及给药后13 d分别评价大鼠关节肿胀指数;免疫组织化学法检测给药后13 d大鼠滑膜组织中Fas/FasL、Bcl-2及Bax的表达情况.主要观察指标:各组关节肿胀指数及滑膜组织中凋亡相关因子Fas/FasL,Bcl-2/Bax的表达.结果:纳入大鼠50只均进入结果分析.①给药后13 d,各实验组关节肿胀指数明显低于给药前,差异有统计学意义(P＜0.01),各实验组关节肿胀指数均明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01).②青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组和青蒿琥酯加甲氨蝶呤组滑膜组织中FasL及Fas均上调,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01),甲氨蝶呤组与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05);青蒿琥酯高剂量组、青蒿琥酯低剂量组、青蒿琥酯加甲氨蝶呤组及甲氨蝶呤组Bcl-2表达下调,Bax上调,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:实验证实青蒿琥酯具有诱导佐剂性关节炎病情缓解的作用,上调滑膜组织中Fas/FasL及Bax,下调Bcl-2的表达而诱导滑膜细胞凋亡可能是其机制之一.
作者：宋兴福；袁红纲；陈先国 刊期： 2007年第36期
目的:观察丹参对缺血再灌注损伤提睾肌模型碱性成纤维细胞生长因子变化的影响,以及丹参干预后血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛浓度的变化.方法:实验于2006-02/09在福建中医学院骨伤系创伤修复与重建实验室及福建师大生命科学院实验室完成.实验分组:选用清洁级雄性SD大鼠84只,手术造成左提睾肌缺血再灌注损伤模型,按随机数字表法分为丹参组(n=42)与生理盐水组(n=42),缺血再灌注前30 min腹腔分别注射相同剂量的丹参注射液(正大青春宝制药厂,主要成分:丹参,含生药1.5 g/mL,批号:0408113,给药量按人剂量与大鼠剂量之间的换算方法,1.809 g/kg)、生理盐水.分别于缺血再灌注后10,20,30,40,50,60,90 min时抽取腹主动脉血,每个时相点6只.实验评估:①采用考马斯亮兰蛋白法和酶链免疫吸附法测定提睾肌碱性成纤维细胞生长因子含量.②采用黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶活性.③采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛浓度.结果:纳入大鼠84只,均进入结果分析.①提睾肌碱性成纤维细胞生长因子含量:再灌注10,20 min丹参组与生理盐水组无明显差别,再灌注30,40,50,60,90min丹参组单位蛋白中碱性成纤维细胞生长因子含量高于生理盐水组,差异有显著性意义(t=2.415,2.292,4.605,3.595,5.196,P＜0.05,0.01).②血清超氧化物歧化酶活性:再灌注开始10 min时,丹参组与生理盐水组超氧化物歧化酶活性无明显差异;再灌注20,30,40,50,60,90 min丹参组超氧化物歧化酶活性高于生理盐水组,差异均有显著性意义(t=2.949,2.327,4.050,2.958,9.142,6.188,P＜0.05,0.01).③血清丙二醛浓度:再灌注10,20 min时,丹参组与生理盐水组丙二醛浓度无明显差异,再灌注30,40,50,60,90min丹参组丙二醛浓度低于生理盐水组,差异有显著性意义(t=3.164,2.697,4.461,2.587,3.002,P＜0.05,0.01).结论:丹参能促进再灌注损伤中骨骼肌碱性成纤维细胞生长因子的表达,减少骨骼肌缺血再灌注损伤过程中产生的丙二醛并促进血清中超氧化物歧化酶的分泌,这可能亦是丹参防治缺血再灌注损伤的机制之一.
作者：张俐；蔡碰德 刊期： 2007年第36期
目的:利用激光共聚焦显微镜共定位检测整合素β4结合蛋白与P311蛋白在细胞内的分布,进一步证实它们在细胞内产生相互作用的可能性.方法:实验于2006-03/12在解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.先分别构建能在哺乳动物细胞中表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体,经酶切鉴定正确后,利用脂质体介导法共转染人胚肾293细胞后,激光共聚焦显微镜进行共定位观察.结果:表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体经双酶切鉴定正确,转染293细胞后,荧光显微镜下能观察到绿色和红色荧光.激光共聚焦显微镜下观察两者主要分布在293细胞的胞浆和胞核中,并且存在着共定位现象.结论:表达整合素β4结合蛋白的绿色荧光融合蛋白和表达P311的红色荧光融合蛋白的重组载体在空间分布上两者存在相互作用的物质基础.
作者：易绍萱；袁顺宗；马兵；贺伟峰；陈希炜；胡晓红；张小容；彭旭；周丽娜；罗高兴；吴军 刊期： 2007年第36期
目的:血管内皮生长因子能促进血管内皮细胞增生和血管形成,而RNA干扰技术可高效特异地导致转录后基因沉默现象.实验针对人血管内皮生长因子基因化学合成小分子干扰RNA,观察其对胶质瘤U251细胞的体外干扰效应.方法:实验于2006-09/2007-02在中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室完成.①实验材料:人类U251胶质母细胞瘤细胞株由上海市肿瘤研究所朱景德教授惠赠.非特异性小分子干扰RNA,绿色荧光标记的FAM negative control siRNA(上海吉玛公司).②实验方法:选择基因序列号为NM0033761的血管内皮生长因子基因cDNA序列上的3个位点设计3条不同序列的小分子干扰RNA,并应用BLAST技术排除其他同源基因.采用脂质体法转染U251细胞,以200 hmol/L进行转染,以转染非特异性小分子干扰RNA作为阴性对照组,以未加入小分子干扰RNA作为空白对照组.48 h后RT-PCR筛选佳小分子干扰RNA,将抑制率高的小分子干扰RNA再分别按50,100,200,300 nmol/L进行转染.③实验评估:荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR法半定量检测浓度梯度下小分子干扰RNA对U251细胞血管内皮生长因子mRNA表达的抑制效果.结果:①荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率:镜下可见胞质内的绿色荧光,同一视野下细胞核呈蓝染,转染效率达95%以上.②RT-PCR检测血管内皮生长因子mRNA的表达水平:不同序列的小分子干扰RNA以200 nmol/L转染细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达水平均有所下调,以小分子干扰RNA1转染组为明显(P＜0.01),抑制率大于70%,选为佳特异性小分子干扰RNA.U251细胞转染50,100,200,300 nmol/L的小分子干扰RNA1 48 h后,随着转染浓度的升高,小分子干扰RNA1的抑制效果逐渐增强,各浓度转染组血管内皮生长因子mRNA的表达水平可下调16%～73%.结论:以血管内皮生长因子为靶基因、化学修饰合成的特异性小分子干扰RNA,在体外可有效抑制目的基因mRNA的表达.
作者：王佳佳；胡锦；董万利；金由辛 刊期： 2007年第36期
目的:观察糖尿病引发股骨头缺血性坏死的基本病理过程.方法:实验于2006-03/12在西安交通大学医学院附属第二医院骨病研究所实验室完成.①实验分组:70只日本大耳白兔随机分为对照组18只,实验组52只.②实验方法:对照组18只给予生理盐水5 mL耳缘静脉注射.实验组52只造模前再次称重后,按130mg/kg四氧嘧啶耳缘静脉快速推入,建立速发型糖尿病动物模型.造模成功48只.实验组及对照组动物分别于第4周、第8周、第12周分批麻醉后处死,对照组每次6只,实验组每次16只.股骨头标本于采血后立刻解剖留取.③实验评估:不同时期光镜下观察组织病理学变化;透射电镜超微形态变化;测定血流变学指标;测定血液生化指标;测定血小板功能指标.结果:①光镜下组织病理学观察:实验组第4周时2只动物出现骨小梁结构紊乱,空缺骨陷窝数增多为14%;第8周时3只动物出现骨小梁结构部分断裂、消失,空缺骨陷窝数增多为28%;第12周时5只动物出现骨小梁结构断裂消失更明显,空缺骨陷窝计数高达56%.②透射电镜超微形态观察:透射电镜下观察骨细胞内出现大小不等的脂滴,骨细胞呈不同程度的坏死.骨髓组织增生减低,脂肪细胞增多、增大.③血流变学指标测定结果:实验组血液流变学各指标含量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).④血小板功能指标测定结果:血浆血小板聚集试验、α-颗粒膜蛋白含量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).⑤血液生化指标测定结果:第8、12周时血清钙含量低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).血清磷含量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).钙磷乘积在12周时下降明显(P＜0.05).血清总胆固醇、三酰甘油含量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论:糖尿病引起血液高黏滞和血液高凝导致严重微循环障碍、引起骨质疏松、高脂血症、早期发生血流变异常及血小板功能的异常.随着糖尿病病程的延长,这些因素共同作用下终导致股骨头的病理变化.
作者：张开放；刘军；刘涛；闫宏伟；姚永锋；李政 刊期： 2007年第36期
目的:观察高正加速度环境对猴翼外肌组织病理学及c-jun表达的影响.方法:实验于2005-12/2006-12在解放军第三○六医院和航天医学工程研究所完成.①实验动物:健康雄性恒河猴9只,随机数字表法分为4组:+1加速度300 s对照组2只、+15加速度200 s组2只、+18加速度165 s组2只、+21加速度140 s组3只.②实验方法:采用改造后的五八型动物离心机模拟飞船升空和返回时产生的超重,各组动物分别承受相应的胸-背向超重作用及持续时间.③实验评估:离心超重作用结束后,解剖取猴翼外肌组织,光学显微镜下观察翼外肌组织病理学变化.采用免疫组化PicTureTM两步法观察翼外肌细胞c-jun的表达,细胞核呈棕色为c-jun阳性反应.结果:9只恒河猴均进入结果分析.①+1加速度300 s对照组翼外肌无明显变化,表现为正常的肌组织特征.其余3组翼外肌组织局部间质充血和出血.②+1加速度300 s对照组翼外肌细胞核不着色或呈淡黄色,为c-jun阴性或弱阳性表达,细胞质着色不明显.其余3组翼外肌细胞核和细胞质均呈深棕色,为c-jun强阳性表达,3组间无明显差别.结论:超过+15加速度环境可引起猴翼外肌组织局部间质充血和出血,增强肌细胞c-jun基因的表达.
作者：施生根；汤楚华；张建中；牛忠英；李冬 刊期： 2007年第36期
目的:课题以往的研究已证实,葛根素在体外能够抑制破骨细胞的骨吸收活性,促进骨生长,实验将进一步验证葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,并评价其对骨形成的作用.方法:实验于2003-03/2004-03在武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行.①实验材料:葛根素(Puerarin)购自中国药品生物制品检定所,雌酚酮购自浙江仙居制药厂.大鼠由解放军军事医学科学院实验动物中心提供.②实验方法:实验分5组:雌酚酮阳性对照组、空白对照组(不加药,只加等量细胞悬液和培养基)、0.01,0.1,1μmol/L葛根素组.由新生24 hSD大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,调整成骨活细胞密度为0.9×107L-1,接种于24孔培养板,每组12个复孔,分别于第1,3,5天每组取3孔计数,绘制细胞生长曲线.③实验评估:分别于第1,3,5天采用四唑盐法测定吸光度,计算平均增殖率,采用硝基苯基质动力学法测定各组细胞内外碱性磷酸酶活性.结果:①与空白对照组相比,0.1,1μmol/L葛根素干预组与雌酚酮阳性对照组第3,5天细胞增殖速度均加快,差异有显著性意义(P＜0.01).②经1μmol/L葛根素处理的第1,3,5天,细胞内、外碱性磷酸酶活性均明显高于空白对照组(P＜0.01).经0.1μmol/L葛根素处理第3,5天,细胞内、外碱性磷酸酶活性明显高于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01).经0.01μmol/L葛根素处理后第5天,细胞外碱性磷酸酶活性明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:葛根素对骨形成的作用:①通过影响碱磷酸酶活性,而促进成骨细胞分化.②通过雌激素受体介导促进成骨细胞的骨形成效应.
作者：王久亮；郑忠志；李灵芝；张永亮；龚海英 刊期： 2007年第36期
目的:乐脉颗粒在缺血性心脑血管病的治疗中具有较好的效果,其是否通过促进血管生成而发挥作用还不清楚.观察乐脉颗粒对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.方法:实验于2005-03/08在江西省重点实验室南昌大学第二附属医院分子中心完成.①实验材料:新西兰大白兔8只,体质量2～2.5 kg;新鲜白皮种蛋70只,质量50～60 g.②实验方法:种蛋在(37.5±0.5)℃条件下孵育,种蛋受精率90%以上.第7天开窗暴露鸡胚绒毛尿囊膜建立鸡胚绒毛尿囊膜模型.将60枚存活鸡胚随机分为生理盐水组、正常血清组、乐脉血清组、内膜损伤血清组、内膜损伤乐脉治疗组以及血管内皮生长因子(20 mg/L)组,每组10枚鸡胚.新西兰大白兔腹主动脉用球囊导管损伤建立血管内膜损伤模型,乐脉血清组及内膜损伤乐脉治疗组给予乐脉颗粒25 mg/(kg·d)喂饲,各组7 d后取血清.第8天,在鸡胚绒毛尿囊膜上放一直径为5 mm的滤膜作为载体,分别加样5μL,1次/d,连续3 d,③实验评估:第11天取鸡胚绒毛尿囊膜,数码相机拍照后平铺于载玻片上,计数载体周围血管数目及滤膜周围0.5 cm范围内的血管分支点数并进行比较.结果:纳入大白兔8只,存活鸡胚60枚,均进入结果分析,无脱落.与正常血清组相比较,乐脉血清组鸡胚绒毛尿囊膜周围血管总数明显增多,血管以载体为中心呈辐辏状生长,差异具有显著性意义(P＜0.05);与正常血清组相比较,内膜损伤血清组血清载体周围血管数量明显增多,差异具有极显著性意义(P＜0.01);与内膜损伤乐脉治疗组相比较,血管总数差异无显著性.结论:①兔乐脉颗粒血清能够明显促进鸡胚绒毛尿囊膜上血管生成.②血管内膜损伤7 d后的血清能够促进鸡胚绒毛尿囊膜上血管生成.
作者：钟志英；苏海；唐昱；王伶；涂荣祖 刊期： 2007年第36期
目的:确定在端脑发育中同源域转录因子胰岛素基因增强子蛋白1的表达是否受骨形态发生蛋白4的调节,探讨胰岛素基因增强子蛋白1控制端脑腹侧胆碱能神经元发生的可能性.方法:实验于2005-03/2006-03在吉林大学白求恩医学院组织学与胚胎学教研室细胞培养室、免疫组织化学实验室和分子生物学实验室完成.①实验材料:清洁级Wistar大白鼠18只,雌性12只,体质量(220±10)g,雄性6只,体质量(250±10)g,按常规方法将雌雄大鼠合笼交配.②实验过程:采用胚胎16 d大鼠端脑细胞无血清原代培养(为对照组);分别在培养液中加入终浓度为10,20和40μg/L骨形态发生蛋白4(为实验组).③实验评估:细胞培养4 d时,利用反转录-聚合酶链反应分析胰岛素基因增强子蛋白1 mRNA含量是否随着骨形态发生蛋白4浓度变化而变化(β-肌动蛋白作为内参对照标准);同时对20μg/L骨形态发生蛋白4组和对照组实施免疫荧光细胞化学双重染色,以观察胆碱能神经元标志蛋白乙酰胆碱转移酶阳性细胞是否表达胰岛素基因增强子蛋白1.结果:①端脑细胞原代培养3,4 d时,各组细胞均聚集成团贴壁生长,实验组与对照组相比细胞团较大,突起粗而长,相互连接成网.②实验组与对照组大多数乙酰胆碱转移酶阳性细胞复合表达胰岛素基因增强子蛋白1,两组间未见明显差异.③10 μg/L骨形态发生蛋白4组与对照组相比胰岛素基因增强子蛋白1 mRNA水平差异无显著性意义;20μg/L骨形态发生蛋白4可上调端脑胆碱能前体细胞胰岛素基因增强子蛋白1 mRNA水平;40 μg/L骨形态发生蛋白4可下调胰岛素基因增强子蛋白1 mRNA水平.结论:在端脑培养体系中胆碱能前体细胞胰岛素基因增强子蛋白1 mRNA水平随着骨形态发生蛋白4的浓度变化而变化,提示骨形态发生蛋白4可能与胰岛素基因增强子蛋白1共同作用控制端脑腹侧胆碱能神经元的发生.
作者：周莉；陈瑶；李娜；赵慧；李树蕾 刊期： 2007年第36期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
