陈书艳；颜雪芸；王飞；周卿；荣烨之
目的 研究特异小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒(human pap-illomavirus,HPV)18型E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响.方法 针对 HPV18 E6基因设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,利用 Lipofectamine TM2000脂质体转染HeLa细胞,在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA.针对转染后不同时间点采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR测定HPV18 E6 mRNA变化.结果 转染siRNA后细胞活力受到显著抑制(P＜0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,72 h的凋亡率达到55.8%.RT-PCR结果显示,细胞转染24、48和72 h后HPV18 E6 mRNA分别减少了57%、78%和40%,而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著.结论 siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa细胞内HPV18 E6基因的表达,从而可诱导肿瘤细胞凋亡.
作者：危敏；马文丽；张宝；孙朝晖；郑文岭 刊期： 2006年第10期
抵抗素(resistin)是近年发现的由脂肪组织特异分泌的一种多肽类激素,它可以导致胰岛素抵抗,与2型糖尿病关系相当密切.近有文献报道,肝脏也是抵抗素重要的靶器官,抵抗素可以明显损害肝胰岛素的敏感性,促进肝糖输出,升高血糖[1].但是抵抗素参与肝胰岛素抵抗的发生发展机制尚不明了.本文通过观察抵抗素对肝细胞糖酵解关键酶-葡萄糖激酶活性及mRNA表达水平的影响,初步探讨抵抗素在胰岛素抵抗形成中的作用及机制.
作者：李超林；龚明；肖谦 刊期： 2006年第10期
人类胚胎干细胞(hES细胞)对于疾病的治疗,尤其在器官移植和组织修复方面存在着广泛的应用前景.近来研究表明,虽然目前进行hES细胞的临床治疗为时尚早,但已获得令人瞩目的效果.本文就hES细胞在疾病治疗方面的进展以及存在的问题作一综述.
作者：寇毅；YE Wei-san；叶惟三 刊期： 2006年第10期
目的 构成BCL-2基因表达的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞模型.方法 质粒pcDNA3-BCL-2 经酶切鉴定后,以脂质体法转染人胃黏膜上皮细胞GES-1,经G418筛选获得细胞克隆,荧光免疫组化法鉴定BCL-2基因表达阳性细胞.结果 经酶切鉴定为携带BCL-2基因的质粒pcDNA3-BCL-2,荧光免疫组化结果显示7个克隆中,均有不同程度的BCL-2基因表达.BCL-2主要表达在胞质及细胞核膜.结论 GES-1细胞为BCL-2表达阳性的细胞,为进一步研究BCL-2基因与胃癌的关系提供了理想的细胞模型.
作者：ZHU Li-hua；朱丽华；甄永占；李淑英；习瑾昆；章广玲；周天戟；赵红 刊期： 2006年第10期
目的 以自发性高血压(SHR)大鼠为对象,研究硫化氢(H2S)对血管中胶原堆积的影响.方法 SHR大鼠17只,随机分为SHR组(n=6),SHR+H2S(n=6)组和SHR+PPG组(n=5).WKY大鼠5只为对照组(n=5).SHR+H2S组每日腹腔注射0.25 mL H2S供体NaHS(56 μmol/kg),SHR+PPG组每日腹腔注射0.25 mL PPG(37.5 mg/Kg),连续用药5周.WKY对照组及SHR组注射等量注射用水.连续混合喂养5周后测定动脉血压;以胸主动脉组织为对象,用酶促反应法测定CSE活性;用高温裂解法测定羟脯氨酸含量.用酶联免疫法(ELISA)测定Ⅰ型胶原含量.用免疫组化法检测转化生长因子β3(TGF-β3)表达.结果 与WKY对照组相比,SHR组大鼠血压升高52%(P＜0.01);CSE酶活性降低55%(P＜0.01);羟脯氨酸含量增加87%(P＜0.01);Ⅰ型胶原含量增加28%;TGF-β3表达增加10%(P＜0.05).给予H2S后缓解了上述指标的变化.结论 给SHR大鼠补充外源性H2S能够降低动脉血压,而且使主动脉组织中羟脯氨酸和Ⅰ型胶原含量减少,从而改善SHR大鼠血管中胶原的堆积.
作者：张春雨；杜军保；闫辉；唐朝枢 刊期： 2006年第10期
目的 探讨抑制人肺癌相关抗原基因ALT04-AG表达对细胞生长特性及相关基因表达的影响.方法 重组反义ALT04-AG RNA真核表达质粒,经脂质体介导转染人肺癌细胞株(L78),以MTT、FCM法分析转染细胞生长特性,以Northern blot免疫组化染色及基因芯片技术检测相关基因的表达.结果 构建了重组表达反义ALT04-AG RNA的真核表达质粒[pALT04-AG(as)],经该质粒转染及二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)处理的L78细胞均引起ALT04-AG表达下调及细胞的增殖抑制,后者还导致细胞凋亡比例增加.结论 pALT04-AG(as)转染L78细胞或用DFMO抑制多胺生物合成,可通过对相关基因表达的调控促使L78细胞恶性表型逆转,而后者的作用更为广泛.本结果为探索肿瘤的诊断与治疗提供了有意义的线索.
作者：李红艳；陈志华；徐波；徐梅；向青；房青；范慕贞 刊期： 2006年第10期
目的 研究NO/PKG介导Ca2+/钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的调控.方法 植块法原代培养Wistar大鼠VSMCs.Western blot测定CaN表达,定磷法测定CaN活性.MTT法测定VSMCs的增殖,丫啶橙/溴化乙锭荧光染色法测定VSMCs的活性.结果 SNAP和Sp-8-pCPT-cGMPS使苯肾上腺素(PE)诱发的VSMCs吸光度分别降低,而Rp-8-pCPT-cGMPS则可使吸光度增加.维拉帕米预处理VSMCs后,PE诱发的VSMCs吸光度降低,并且上述吸光度可以被SNAP或Sp-8-pCPT-cGMPS进一步抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMPS轻微升高.环胞素A预处理VSMCs后,PE诱发的VSMC吸光度降低,但是这一数值不能被SNAP、Sp-8-pCPT-cGMPS或Rp-8-pCPT-cGMPS进一步抑制或升高.SNAP和Sp-8-pCPT-cGMPS抑制PE诱发的CaN表达与活性.结论 NO/PKG抑制血管SMCs增殖,但并不影响SMCs存活率;NO/PKG这一作用是介导SMCs内游离钙/CaN信号通路实现的.
作者：李世军；孙宁玲 刊期： 2006年第10期
目的 研究含分泌型人酸性成纤维细胞生长因子(sp-haFGF)基因的重组腺相关病毒(rAAV)感染内皮祖细胞(EPCs)的可行性.方法 用PCR法将FGF-4的信号序列与原始的aFGF基因连接,形成sp-haFGF基因.将此目的基因克隆到AAV载体质粒pAAV-IRES-hrGFP中,并与包装质粒(pAAV-RC)和辅助质粒(pHelper)共转染HEK293细胞,获得编码sp-haFGF的重组腺相关病毒.用浓缩的病毒感染体外培养的EPC,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白情况,并用RT-PCR和Western blot方法鉴定sp-haFGF在EPC中的表达.结果 获得含有sp-haFGF的重组腺相关病毒,将其感染EPC后,约20%～30%的细胞出现绿色荧光.用RT-PCR法从被感染细胞中扩增出一条长约560 bp的基因条带,通过Western blot检测到被感染细胞中haFGF蛋白的表达.结论 编码sp-haFGF的重组腺相关病毒能够有效地感染EPC,并在EPC中表达haFGF,为进一步研究转基因的内皮祖细胞移植促血管新生奠定基础.
作者：陈书艳；颜雪芸；王飞；周卿；荣烨之 刊期： 2006年第10期
骨髓有2个重要的功能:造血和成骨.骨髓中存在造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)(CD34+细胞)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs).这2种干细胞共同存在于骨髓腔中,MSC对HSC不仅有空间位置的机械支持作用,还分泌多种造血因子支持其造血功能,有助于HSC未分化状态的维持.这2种干细胞之间是否存在着某种联系或交叉呢?我们分离了脐血CD34+细胞,并在体外培养扩增,探讨其中是否含有成骨细胞的前体细胞.
作者：郭若霖；贾雷鸣；程瑞芳；温学红；谈志龙；王学谦 刊期： 2006年第10期
目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清脂联素与肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度及其临床意义.方法 用放射免疫法测定50例GDM 孕妇和36例正常孕妇(NGT)的血清脂联素浓度,ELISA法检测血清TNF-α浓度,电化学发光法测胰岛素浓度,葡萄糖氧化酶法测血糖浓度.结果 ①GDM孕妇血清 TNF-α(4.6±1.5)μg/L水平明显高于NGT(3.3±1.6)μg/L,且GDM组TNF-α与血糖、胰岛素浓度呈正相关关系(P＜0.01).②GDM孕妇血清脂联素浓度(10.3±2.4)mg/L明显低于NGT孕妇(15.6±3.2)mg/L,GDM组脂联素浓度与血糖、胰岛素浓度呈负相关关系(P＜0.01).结论 GDM患者血清低脂联素浓度与高TNF-α浓度不仅反映了母体体脂状况和胰岛素的抵抗状态,更反映了糖代谢受损的严重程度,是代谢综合征的重要预测因子.
作者：刘增娟；李艳；裴凤敏；丁金云；张峰 刊期： 2006年第10期
目的 通过分析2例尿毒症维持性血液透析(HD)患者冠状动脉搭桥术(CABG)围手术期资料,探讨维持性血液透析患者行CABG的安全性.方法 回顾性分析2例尿毒症维持性血液透析患者行冠状动脉搭桥术的临床资料.结果 手术前一天均给予无肝素透析,术后均行持续床旁血液滤过透析(CHDF).1例患者经完善的围手术期处理,手术成功,患者存活,生活质量明显改善;1例患者术后第3天于血液透析后死于心包填塞.结论 维持性血液透析患者经过积极、周密的术前准备,术中及术后处理,可以接受冠状动脉搭桥术,可达到改善症状、提高生活质量、延长生命的目的.CHDF是慢性肾功能衰竭患者围手术期有效维持水、电解质平衡的透析方式.
作者：马玲玲；孙阳；苗齐；任华；李学旺 刊期： 2006年第10期
目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在人脑星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤临床病理分级的关系.方法 通过免疫组化SP法测定COX-2和VEGF在50例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织中的表达.结果 COX-2、VEGF在人脑星形细胞瘤中的表达高于正常脑组织(P＜0.001).COX-2和VEGF与人脑星形细胞瘤临床病理分级显著相关(P＜0.05).人脑星形细胞瘤中COX-2与VEGF的表达存在相关性.结论 COX-2和VEGF参与人脑星形细胞瘤的发生、发展且与其恶性表型有关;COX-2可能与人脑星形细胞瘤的血管形成有关.
作者：徐滨；宋来君；徐国本；张智峰 刊期： 2006年第10期
目的 探讨C-ERBB2对小鼠卵母细胞成熟的影响及对表皮生长因子在卵母细胞成熟调控中的作用.方法 采用卵母细胞体外培养法,研究反义C-ERBB2寡脱氧核苷酸(C-ERBB2 ASODN)对卵母细胞体外自发成熟及对表皮生长因子(EGF)促卵母细胞成熟的影响;利用RT-PCR检测卵母细胞中C-ERBB2 mRNA的表达及在不同处理因素作用下卵母细胞成熟过程中C-ERBB2 mRNA表达的变化.结果 C-ERBB2 ASODN能呈剂量依赖方式抑制卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PBⅠ)排出率,并且能抑制EGF对卵母细胞的促成熟作用.卵母细胞中存在C-ERBB2 mRNA,EGF可以增强其表达,C-ERBB2 ASODN可减弱EGF促表达的作用.结论 C-ERBB2与卵母细胞的成熟密切相关.EGF可直接促进裸卵的成熟分裂,其机制可能与上调卵母细胞C-ERBB2的表达有关.
作者：郑莉萍；汪小浪；吴磊；郑月慧；高凤兰；肖秋香；李芳 刊期： 2006年第10期
目的 构建RNA干扰真核表达载体pSUPER-NRF2,并在结肠癌细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否受到抑制.方法 设计特异性针对NRF2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,分别构建重组载体并转染人结肠癌Caco-2细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光来监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48 h后G418筛选稳定表达的细胞.利用RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞NRF2 基因的表达.结果 成功构建RNAi真核表达载体.转染pEGFP-N1后48 h达转染效率高峰.瞬时及稳定转染pSUPER-NRF2-A2、B2重组质粒NRF2 mRNA的表达无差异;转染48 h后,pSUPER-NRF2-A1、B1可显著抑制NRF2 mRNA的表达;pSUPER-NRF2-B1稳定转染后,NRF2 mRNA的表达也显著降低.瞬时和稳定筛选后NRF2蛋白表达亦显著降低.结论 成功构建了NRF2的RNAi表达载体,可有效抑制靶基因表达,共转染带有筛选标记的pEGFP-N1质粒,筛选可获得低表达NRF2的稳定克隆,为进一步研究NRF2在结肠癌发生、发展中的作用提供了重要的实验材料.
作者：杨晓云；李延青；袁俊华；郭玉婷；张燕；朱强 刊期： 2006年第10期
目的 利用β-甘油磷酸盐处理牛主动脉平滑肌细胞(BASMC)制备体外血管钙化模型.方法 移植块法原代培养牛主动脉中膜平滑肌细胞,8代内的传代细胞添加10 mmol/L β-甘油磷酸盐培养10 d,Von Kossa染色、茜素红S 染色和电镜检查鉴定钙化,同时测量细胞层钙沉积、碱性磷酸酶活性及培养上清的骨钙素含量.结果 10 d后细胞层出现大量钙盐沉积,并且β-甘油磷酸盐时间依赖性增加钙沉积,碱性磷酸酶活性及骨钙素含量各时间点均较正常培养细胞显著增加(P＜0.01).结论 甘油磷酸盐能在短期内诱导出BASMC广泛钙化,用此方法制备的BASMC是一种良好的研究血管钙化的体外模型.
作者：刘立新；王士雯；丁秀云；王宇玫；赵玉生 刊期： 2006年第10期
目的 研究食管癌组织中HSP70的表达情况,探索HSP70-多肽复合物分离的可行性途径.方法 采用人HSP70基因探针P17与人食管癌组织中提取的RNA进行Northern杂交;用亲和柱层析法分离HSP70-多肽复合物.结果 癌组织提取物出现了比正常组织较强的杂交信号,从食管癌组织中提取蛋白质,经一系列层析柱(Con-Asepharose、ADP-agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱),分离到HSP70-多肽复合物.结论 HSP70基因在食管癌组织中的高表达,为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了可行性方法.
作者：赵安芳；高富荣；张玉焕；李新利；陈兰英；张志谦 刊期： 2006年第10期
骨肉瘤肺转移是临床患者死亡的主要原因,近年来对骨肉瘤预后相关基因的发现、研究增进了人们对骨肉瘤转移机制的认识,对于骨肉瘤的个体化治疗和患者预后有一定的指导意义,本文就几个与骨肉瘤预后相关的热点基因进行综述.
作者：曲国蕃；孙志海；李佳慧 刊期： 2006年第10期
现代科学技术的进步对教学任务提出了更高的要求.PBL(problem based learning)适应于这一要求,鼓励学生以问题为中心,在学习过程中探索问题,解决问题.将PBL灵活运用于生理学课堂教学,通过精心设计课堂提问、组织基于问题的专题讨论以及结合实验示教等多种方式,活跃课堂教学气氛、激发学生的探索热情,并充分培养学生的创造性思维能力,从而提高课堂教学质量.
作者：唐晓露；倪鑫 刊期： 2006年第10期
目的 研究新药心肌肽素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的影响及其在离子通道水平的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的心肌肽素对Ito的影响.结果 心肌肽素呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ito,心肌肽素浓度(mg/L)为10、50、100、250和500时分别使Ito降低(%)4、13、22、32和38.心肌肽素50 mg/L使Ito电流密度-电压曲线下移,但不改变曲线的形状,也不改变Ito稳态激活曲线.结论 心肌肽素抑制大鼠心室肌细胞Ito,可能是其抗心律失常作用的机制之一.
作者：吴辉；李立环；陈雷；黄爱杰 刊期： 2006年第10期
目的 探讨尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠中的变化.方法 SD雄性大鼠随机分为慢支组、COPD 组、戒烟组和对照组.用放免法测定血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆中U-Ⅱ含量,测定肺功能并观察气道病理改变.结果 各组血浆U-Ⅱ含量无明显变化;BALF中U-Ⅱ含量显著高于各组血浆含量的1.7、2.2、4.7和4.9倍(均P＜0.01).慢支组、COPD组、戒烟组BALF中U-Ⅱ含量分别较对照组升高50%、225%和225%(均P＜0.01).肺组织匀浆U-Ⅱ含量亦显著高于对照组(均P＜0.05).BALF中U-Ⅱ含量与BALF中性粒细胞数呈正相关(P＜0.01);与气道炎细胞浸润、气道壁平滑肌增生、气道纤维结缔组织增生病理评分均呈正相关(均P＜0.01);与呼气峰流速成负相关(P＜0.01).结论 U-Ⅱ可能参与COPD气道重塑的发病.
作者：路明；姚婉贞；陈亚红；盖小燕；常春；唐朝枢 刊期： 2006年第10期
基础医学与临床杂志
主管:北京市科学技术协会
主办：北京生理科学会
