学术投稿

大鼠成骨细胞的原代培养与鉴定

陈筠;尹美珍;李世普

关键词:成骨细胞, 原代培养, 大鼠, 体外研究
摘要:目的:针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞.方法:本实验用新生1~2 d大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养. 倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定. 结果:所培养细胞具有体内成骨细胞的生物学行为.结论:本实验原代培养成骨细胞的方法切实可行,为体外研究提供了一种客观而有效的实验手段.
武汉大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 大鼠成骨细胞的原代培养与鉴定

    目的:针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞.方法:本实验用新生1~2 d大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养. 倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定. 结果:所培养细胞具有体内成骨细胞的生物学行为.结论:本实验原代培养成骨细胞的方法切实可行,为体外研究提供了一种客观而有效的实验手段.

    作者:陈筠;尹美珍;李世普 刊期: 2005年第05期

  • 大鼠海马CA1区星形胶质细胞对突触的影响

    目的:研究发育期大鼠海马CA1区星形胶质细胞与突触数量和成熟度的关系.方法:取健康初生(<24 h)、幼年(28~30 d)和成年大鼠(90~100 d)各20只,分别用免疫组织化学方法和电子显微镜观察海马CA1区星形胶质细胞数量和突触超微形态结构特点,用高压液相色谱法检测其胆固醇含量.结果:在各组大鼠海马CA1区,初生组存在大量神经元,但星形胶质细胞少,末见突触结构;幼鼠组可见星形胶质细胞和不成熟的突触结构;成鼠组可见大量星形胶质细胞和远比幼鼠丰富的成熟突触结构(P<0.01);胆固醇含量为初生组(2.92±0.03) g·kg-1, 幼鼠组(11.20±3.41) g·kg-1,成鼠组(12.91±1.25)g·kg-1, 相互间差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大鼠发育过程中海马CA1区星形胶质细胞数量可能影响突触数量和成熟度, 此影响可能与胆固醇有关.

    作者:谭来勋;段申汉;王细林;孙圣刚 刊期: 2005年第05期

  • 可溶性CD44v6和Ⅳ型胶原酶在恶性腹水中的诊断价值

    目的:检测恶性腹水可溶性CD44v6(sCD44v6)、Ⅳ型胶原酶,为临床恶性腹水诊断提供依据.方法:收集各种类型腹水,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法检测sCD44v6含量,用明胶酶谱法检测Ⅳ型胶原酶活性. 结果:恶性腹水sCD44v6水平为(89.22±38.20) ng·ml-1,明显高于肝硬化、结核性腹水(P均<0.01), 而后二者间比较sCD44v6水平差别无显著性(P>0.05).肝硬化、结核性腹水不能检出基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9),而恶性腹水MMP-2检出率为87.0%,MMP-9检出率为78.3%,且MMP-2活性高于MMP-9活性(P=0.022).结论:恶性腹水 sCD44v6显著升高且Ⅳ型胶原酶阳性.sCD44v6、Ⅳ型胶原酶对良、恶性腹水的鉴别诊断有重要价值.

    作者:吴建红;孙晓敏 刊期: 2005年第05期

  • 银杏叶提取物对雌性阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力影响

    目的:研究银杏叶提取物对雌性阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响.方法:以D-半乳糖和三氯化铝建立老年痴呆动物模型,用不同浓度的银杏叶提取物分别灌胃AD大鼠,利用Y-型迷宫进行被动回避反应和辨别性学习能力的测试,观察AD大鼠学习记忆能力及辨别性学习能力的改变.结果:实验组大鼠学习能力和记忆保持率均显著优于模型对照组(P<0.01).结论:银杏叶提取物能有效改善阿尔茨海默病大鼠的学习和记忆能力.

    作者:李红枝;陈伟强 刊期: 2005年第05期

  • 艾司洛尔静脉注射治疗围麻醉期心动过速的临床观察

    艾司洛尔是一种超短效的β受体阻滞剂,能明显降低心率,改善心肌缺血,因副作用小,效果明显,在临床应用较广.全麻期间,由于气管插管、拔管、及术中血流动力学的改变,可引起心动过速,对患者特别是有心血管疾病的老年患者造成不利影响.本文旨在观察艾司洛尔治疗围麻醉期心动过速的效果.

    作者:高文英;向小芳 刊期: 2005年第05期

  • 低氧对骨髓间质细胞表达VEGF的影响

    目的:研究低氧对骨髓间质细胞(MSCs)分泌VEGF及促血管内皮细胞(VECs)增殖的影响.方法:用VEGF ELISA试剂盒和Micro BCA蛋白质定量试剂测定正常氧和低氧培养的MSCs的上清液中VEGF与总蛋白的含量的比值(pg·μg-1).用不同成份配制的1%FBS的DMEM培养基培养VECs,实验分成5组:低氧MSCs组(低氧培养的MSCs的上清液)、VEGF组(与低氧MSCs组等浓度VEGF)、antibody-低氧MSCs组(低氧MSCs组中加入10 μg·ml-1 anti-VEGF)、antibody-VEGF组(VEGF组中加入10 μg·ml-1 anti-VEGF)和对照组(不加其它成份).用MTT法检测VECs的增殖程度.结果:在低氧条件下培养的MSCs分泌的VEGF明显高于正常氧条件下培养的MSCs分泌的VEGF(P<0.01).促进VECs增殖的程度依次为低氧MSCs组>VEGF组>antibody-低氧MSCs组>antibody-VEGF组=control组.结论:MSCs在低氧条件下比在正常氧条件下具有更强的分泌VEGF的能力.MSCs可分泌VEGF和其它细胞因子共同促进VECs增殖,但VEGF发挥主要作用.

    作者:陈锋;谭最 刊期: 2005年第05期

  • 吡格列酮对2型糖尿病患者血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

    目的:探讨吡格列酮对2型糖尿病(T2DM)患者血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响.方法:70名T2DM患者,随机双盲分为安慰剂组(A组,35例)和吡格列酮组(B组,35例),治疗3个月后,检测两组患者服药前后空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、糖基化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),并计算胰岛素敏感指数(ISI).结果:治疗后吡格列酮组FBG、FINS、HbA1c、TG、PAI-1明显下降(P<0.01),HDL-C、ISI显著升高(P<0.01),t-PA无明显变化,且PAI-1与FINS、TG呈正相关(r=0.437,r=0.342, P<0.05),与ISI呈负相关(r=-0.552,P<0.01);安慰剂组各参数于治疗前后无显著性差异.结论:吡格列酮能够显著降低T2DM患者的PAI-1.

    作者:郝亚荣;张黎军;何小俊;韩其蔚;邬松林 刊期: 2005年第05期

  • 非霍奇金淋巴瘤中枢神经系统侵犯的治疗

    目的:研究化疗+全脑全脊髓放疗治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)中枢神经系统(CNS)侵犯的临床疗效.方法:回顾性分析18例合并中枢神经系统侵犯的非霍奇金淋巴瘤患者(15例为系统治疗后复发,3例为首程治疗前合并发生)的治疗情况,总结全脑全脊髓放疗治疗中枢神经系统侵犯的临床疗效.结果:326例病理诊断的NHL患者18例继发CNS侵犯,继发CNS侵犯多发生于B细胞性侵袭性淋巴瘤.经采用包括全脑全脊髓放疗在内的综合治疗,有效率77.8%(14/18),症状缓解率88.9%(16/18).发生CNS侵犯的中位时间为诊断NHL后11.5月(0~40月);发生CNS侵犯后中位生存时间为9月(3~36月);诊断NHL后总生存中位生存时间为19.5月(3~74月).发生CNS侵犯后1年生存率为45.1%,患者5年生存率为36.7%.未增加治疗相关死亡和毒性.结论:全脑全脊髓放疗是治疗非霍奇金淋巴瘤中枢神经系统侵犯的有效方法.

    作者:张俊红;邓涤;谢丛华;周云峰 刊期: 2005年第05期

  • 颅骨牵张术中新骨骨密度的定量评价

    目的:探讨颅骨牵张术修复骨缺损过程中新骨骨密度的评价方法.方法:成年健康山羊18只,颅顶区制备25 mm×10 mm全层颅骨缺损,随机分为实验组和对照组,实验组15只建立牵张术修复颅骨缺损的动物模型,于牵张结束后2, 4, 6周分别处死5只动物,对照组3只动物与实验组牵张后6周动物同期处死,QCT、DEXA两种方法测量新骨骨密度,比较两种测量方法骨密度值(BMD)及相关性.结果:实验组QCT测量牵张间隙各兴趣区BMD值较前一时段对应BMD值明显增加(P<0.05),同一牵张间隙内各固定时段两端(R2、R3)较中央(R1)BMD值明显高(P<0.05),R2、R3之间无明显差别(P>0.05);DEXA测量固定期4周,各兴趣区BMD值较固定2周对应BMD值明显增加(P<0.05),而固定期6周,仅牵张间隙中央(R1)较固定4周对应BMD值增加有统计学意义(P<0.05),同一牵张间隙内固定期2,4周两端(R2、R3)较中央(R1)BMD值明显高(P<0.05);两种检测方法测得平均骨密度值在各时段均存在正相关(P<0.005);对照组缺损区QCT、DEXA检测未显示有新骨形成. 结论:两种检测方法均能反映牵张过程新骨骨密度变化,QCT不受解剖结构和牵张器形状的影响,更适于颅面骨牵张术新骨形成的监测评价.

    作者:周海孝;丁俊清;李茂进;祝颂松;胡静 刊期: 2005年第05期

  • 心脏介入术中心包压塞的预防和处理

    心脏介入手术虽然具有创伤小、疗效显著等特点,但有时并发症是不可避免的.其中心包压塞是心脏介入手术中严重的并发症之一.我院自1992年9月至2004年12月共发生心包压塞7例,经及时诊断、积极处理避免了严重心脏事件的发生,全部病例均康复出院.现将其预防和处理经验介绍如下.

    作者:王晓红;刘华芬;夏豪;刘秀娟 刊期: 2005年第05期

  • 天然红心鸭蛋紫杉紫素对人胶质瘤细胞增殖、凋亡的干预作用

    目的:研究天然红心鸭蛋紫杉紫素对人星形胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的干预作用.方法:研究对象为U251人星形胶质瘤细胞系,细胞增殖采用MTT比色法检测,细胞凋亡采用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术法检测,U251细胞浆中钙离子浓度采用LSCM测定.结果:天然红心鸭蛋紫杉紫素对胶质瘤细胞的生长具有明显的抑制作用,使用小剂量(0.25 μmol·L-1)的紫杉紫素能有效地诱导胶质瘤细胞凋亡,并显著提高胶质瘤细胞内Ca2+浓度.结论:天然红心鸭蛋紫杉紫素可以显著抑制U251细胞增殖,且呈时间-效应和剂量-效应依赖关系,同时使U251细胞内Ca2+浓度升高,诱导U251细胞凋亡.

    作者:余振;黄书岚;陈健;张大兴;吴立权;刘刚 刊期: 2005年第05期

  • 还原型谷胱甘肽对大鼠隐睾生精上皮保护作用的实验研究

    目的:探讨单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和 Sertoli 细胞变化和还原型谷胱甘肽(GSH)对睾丸的保护作用.方法:30只SD雄性大鼠分为对照组(A组), 隐睾组 (B组),隐睾加 GSH组 (C组),每组各 10只.采用化学比色法测定双侧睾丸GSH、丙二醛(MDA)含量;生物素-dUTP/酶标亲和素法检测睾丸生殖细胞的凋亡;透射电镜观察Sertoli细胞的超微结构.结果:术后2周,与A组比较,B组双侧睾丸GSH明显降低,MDA和细胞凋亡明显增加(P<0.01), Sertoli细胞线粒体和滑面内质网扩张.C组这种变化则明显减轻(P<0.01),与A组比较无差别 (P>0.05).结论:外源性GSH对单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞有保护作用.

    作者:朱保平;郑新民;李世文;胡礼泉;张国辉 刊期: 2005年第05期

  • WAVE2与细胞骨架的研究进展

    细胞骨架是细胞内由蛋白质成分组成的三维网架状结构,在细胞变形、细胞运动、细胞迁移等多种生命活动中的作用至关重要.近年来,WAVE2作为一种新的肌动蛋白调节蛋白,其参与细胞信号的转导,调节肌动蛋白的聚合及细胞骨架的重排,在片状伪足的形成和细胞迁移中的作用备受人们关注,已在国际上形成一个新的研究热点.

    作者:张利军;魏蕾 刊期: 2005年第05期

  • 真核细胞起始因子4E及c-myc在胃癌中的表达

    目的:探讨真核细胞起始因子4E(eIF4E)及c-myc的表达与胃癌发生发展的关系,两者表达的相关性及其临床意义.方法:应用免疫组化的方法检测91例胃癌及30例正常胃组织中eIF4E及c-myc的表达情况.结果:eIF4E、c-myc在正常胃组织中均为阴性表达,在胃癌组织中的阳性表达率分别为95.6%(87/91)和89.0%(81/91).eIF4E及c-myc表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移以及临床分期有关(P<0.05),但与肿瘤组织学分化程度、年龄、性别无关.胃癌中eIF4E与c-myc表达呈非常显著正相关(P<0.01).结论:胃癌组织中eIF4E和c-myc表达水平异常增高在胃癌的发生发展过程中起重要作用.胃癌中eIF4E高表达与c-myc表达水平增高密切相关.

    作者:方向明;熊碧芳;彭波;田霞;胡继军;龙焱华 刊期: 2005年第05期

  • 唑来膦酸治疗癌症溶骨性骨转移疼痛的Ⅱ期临床试验

    目的:观察唑来膦酸单次静脉滴注治疗恶性肿瘤溶骨性骨转移疼痛的有效性和安全性.方法:采用随机双盲双模拟、阳性药平行对照的研究方法.试验组:唑来膦酸+甘露醇冻干粉针;对照组:甘露醇冻干粉针+帕米膦酸二钠.结果:2003年10月至2004年10月共随机入组54例,试验组:27例,对照组:27例;两组用药前的疼痛强度(PI)分别为:6.7±1.25和6.2±1.17(P>0.05);治疗后第7 d和第14 d两组的疼痛强度分别为:4.1±1.36比 3.5±1.44和4.0±1.31 比 3.4±1.68;两组部分缓解(PR)率:75.0%比92.0%(P>0.05),总缓解率:100%比96%(P>0.05);中位部分缓解时间(d):5.2±2.01比4.9±1.76(P>0.05),部分缓解持续时间(d):12.8±1.90比13.1±1.96(P>0.05),两组间差异无统计学意义.不良反应主要包括发热、恶心、呕吐、乏力等,两组在发生率及反应程度等方面组间差异无统计学意义.结论:单次静脉滴注唑来膦酸治疗恶性肿瘤溶骨性骨转移疼痛的有效性和安全性与帕米膦酸二钠相似,且使用更方便.

    作者:张弓;戴静;周云峰;谢丛华;粱辰;高敏;韩定芬 刊期: 2005年第05期

  • CR系统自动曝光控制摄影参数与图像后处理

    目的:分析CR系统自动曝光控制(电离室)X线摄影特点,探讨图像后处理技术对影像质量的影响.方法:①以A、B、C 3组(每组180例)不同组合的kV、mAs、密度补偿、感速、探测野等,对胸部拟人水模及IP板自动曝光控制摄影;② 检测3种组合患者影像不同曝光条件、曝光指数、kV与mAs变化及照片密度值.结果:① A组125 kV与0.6~1.0 mAs组合,图像对比度差;低密度偏高;信噪比低;量子斑点多噪声大.② B组70~85 kV与5~30 mAs组合,图像对比度好;层次清楚;锐利度高;量子斑点少噪声小.A、B两组差异有显著意义,P<0.001. ③ C组42~52 kV与5~20 mAs组合,图像对比度高;层次清楚;锐利度高;量子斑点少噪声小.B、C两组差异没有统计学意义(P>0.05).④ 测量胸片、腰、颈椎等的密度值均在0.8~1.30范围内.结论:CR系统自动曝光控制不宜采用高kV或太低kV摄影,检测病灶细微结构应使用尺寸相对较小的成像板.数字化摄影图像信息后处理技术,保证了照片质量,提高了影像学诊断范围及准确率.

    作者:潘鄂武;杨福文;陈军;彭宙峰;唐兴桥;钱葵;容海峰;叶丽琼;刘昌盛;徐佑林 刊期: 2005年第05期

  • 从细胞阻滞模型来看流式细胞术中细胞周期分析的误区

    目的:探讨流式细胞术中细胞周期常规分析方法的误区和潜在的合理分析方法.方法:设立空白对照,观察MOLT-4细胞经0.1 μmol·L-1喜树碱诱导细胞周期阻滞7 h后细胞周期变化情况,并从常规DNA直方图分析法(方法一)和本实验意外发现的方法(方法二)进行细胞周期分析,并评价两种方法获得的结果.结果:方法一分析的细胞周期分布结果G0/G1期、S期和G2/M期分别为(65.42±4.73)%、(25.01±2.58)%、(9.57±1.96)%,方法二分析结果分别为(31.51±2.13)%、(59.32±5.92)%、(9.17±1.61)%.两种分析方法获得的结果存在显著差异(n=8,P<0.01).结论:流式细胞术常规细胞周期分析方法存在严重的误区.一种新的基于细胞周期特异性标志物的定量技术或形态学方法应用于细胞周期的分析较合理.

    作者:钟以胜;潘长穿;金昌男;熊共鹏;沈关心 刊期: 2005年第05期

  • 并发糖尿病肺结核住院患者临床特征分析

    目的:了解武汉市并发糖尿病肺结核住院患者临床特征,为制订我市结核病防治措施提供依据.方法:对确诊的并发糖尿病肺结核患者456例临床特征进行分析.结果:并发糖尿病肺结核患者随着年龄的增大,其占总患病人数的构成比显著增加,发病人数主要集中在45岁以上人群,占89.04%;地区间存在显著性差异( P<0.01),其构成比市区高于城区,城区高于郊区.就发病特征而言,有典型糖尿病症状(之一)者仅为22.18%,并发2型糖尿病者占92.98%;与一般肺结核患者比较,并发糖尿病肺结核患者咯血、发热、痰菌阳性率、继发型肺结核、空洞形成、病灶≥2个肺野、复治肺结核等比例分别高达49.78%, 41.45%, 56.80%, 87.94%, 42.54%, 89.25%, 35.96%,存在显著性差异( P<0.01).在疗效特征上,并发糖尿病肺结核规则治疗者中,痰菌2月末阴转率、空洞缩小率、病灶明显吸收率高;细菌学复发/失败率、放射学恶化率分别仅为5.64%、6.90%,与一般肺结核规则治疗者无显著性差异(P>0.05),与不规则治疗者比较均存在显著性差异( P<0.01);并发糖尿病肺结核不规则治疗者中,痰菌2个月末阴转率、空洞缩小率、病灶明显吸收率极低,细菌学复发/失败率、放射学恶化率高达26.28%,29.93%,与一般肺结核患者比较,均存在显著性差异( P<0.01).结论:糖尿病对武汉市结核病疫情已产生了一定的影响,应重点加强城市中老年肺结核病患者的糖尿病诊断,做到早发现,及时规则治疗,大限度地降低肺结核病的复发率、致残率和病死率.

    作者:郑春兰;胡永峰;孙学智 刊期: 2005年第05期

  • 苯并[a]芘作用下HSP70、P53在人胚肺细胞中定位及共表达的研究

    目的:探讨苯并[a]芘(BaP)作用下HSP70、P53在人胚肺细胞(HEL)中的定位及共表达.方法:培养正常人胚肺二倍体细胞,分别以0,10,50,100,200 μmol·L-1BaP染毒3 h,用双重免疫荧光组织化学法和激光扫描共聚焦显微镜检观察HSP70、P53的表达.结果:HEL细胞经不同浓度的BaP染毒3 h后,HSP70在胞浆、胞核均有表达,随BaP染毒浓度的增加,逐渐由细胞浆表达向核转移;而P53表达在胞浆、胞核均呈增加趋势(除200 μmol·L-1BaP外),胞核中P53蛋白表达水平略高于胞浆;小于50 μmol·L-1BaP处理的HEL细胞,HSP70和P53以细胞浆共表达为主,而BaP 浓度大于50μmol·L-1时,主要表现为胞核共表达.结论:BaP染毒的人胚肺细胞HSP70、P53的分布及定位方式具有浓度依赖的趋势,表现为随BaP染毒浓度的增加,HSP70与P53由胞浆共表达转变胞核共表达.

    作者:徐增光;文冠华;高雅娟;杨晓波;邬堂春 刊期: 2005年第05期

  • 腰椎肿瘤的切除与重建

    目的:探讨腰椎肿瘤的诊断和治疗.方法:对13例腰椎肿瘤患者的临床表现、手术方式、治疗效果进行分析.结果:术后随访6月~5年,12例近期疗效满意,局部疼痛和神经症状改善.结论:根据肿瘤侵犯的部位、性质,选择前路、后路或前后路联合手术.椎管减压、神经根松解、瘤体切除及脊柱稳定性重建能减轻或消除患者的疼痛,维持或改善神经功能,从而提高患者的生活质量.

    作者:明江华;周庞虎;周剑鹏 刊期: 2005年第05期

武汉大学学报(医学版)杂志

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