熊华；于世英；袁响林；邹燕梅；庄亮
目的 探讨hSavl(human salvador 1)和Mstl(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mstl的功能及相关机制奠定基础.方法 以Mstl cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mstl,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mstl相互作用的蛋白.然后构建初步筛选出的蛋白hSavl的载体pCMV-HA-hSavl,与蛋白Mstl的载体peDNA/4TO-Flag-Mstl共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSavl和Mstl之间的相互作用.其次构建pEGFP-hSavl质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位.结果 以Mstl为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSavl在内的与之存在相互作用的蛋白.免疫共沉淀结果 显示,hSavl蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSavl抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mstl.免疫荧光的结果 显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合.结论 蛋白hSavl与Mstl在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mstl的功能及相关机制提供了线索.
作者：罗学来；李兆明；严群；李小兰；陶德定；龚建平；胡俊波 刊期： 2008年第06期
目的 探讨脂氧素A4[5(S),6(R)-Lipoxin A4,LXA4,]对同种异体心脏移植物存活的影响.方法 通过Heron法建立小鼠颈部同种异体心脏移植模型.移植鼠30只随机分为两组:生理盐水对照组(对照组)和LXA4用药组(LXA4组),检测术后第5天移植心肌细胞凋亡指数和血清中IL-12含量,观察移植心存活时间和病理变化.结果 与对照组相比,LXA4组显著降低了移植心急性排斥期心肌细胞凋亡和IL-12的含量.延长了移植物的存活时间,减轻了移植物炎症细胞的浸润.结论 LXA4可以减轻移植心心肌细胞凋亡,延长移植心的存活时间.
作者：柯有力；肖诗亮；刘成硅；肖雅琼；杨超；彭岚刚 刊期： 2008年第06期
目的 探讨羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂氟伐他汀对急性心肌梗死后心衰大鼠内皮素-1(ET-1)表达变化的影响.方法 雌性SD大鼠急性心肌梗死(AMI)术后6 h随机分为心力衰竭对照组和氟伐他汀组,另设假手术组.直接灌胃给药8周后行高频多普勒超声、血流动力学、心脏重塑指标、左室非梗死区心肌ET-1 mRNA表达的测定.结果 与假手术组比较,心力衰竭对照组左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、E峰、E峰减速度、E/A、左室舒张末压(LVEDP)、左右心室心肌肥厚指数、非梗死区胶原容积分数(CVF)和ET-1 mRNA表达均显著增加(均P<0.01),左室短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)均显著降低(均P<0.01).与心力衰竭对照组比较,氟伐他汀组的LVEDD、LVEDV、E峰、E峰减速度、E/A、LVEDP和左、右心室心肌肥厚指数、CVF和ET-1 mRNA表达均显著降低(均P<0.01),FS和EF显著升高(均P<0.01).结论 ET-1参与了心肌梗死后的心肌纤维化和心衰进展,氟伐他汀抑制心肌梗死后心肌纤维化和心衰进展的作用机制至少部分与其下调ET-1表达有关.
作者：刘宇宏；刘启云；曾秋棠 刊期： 2008年第06期
目的 研究标准化粉尘螨滴剂舌下含服免疫治疗,对尘螨过敏变应性鼻炎患者的疗效及安全性.方法 73例尘螨过敏为主的变应性鼻炎患者,随机分为舌下含服免疫治疗(sublingual immunotherapy,SLIT)+药物组及单纯用药组.SLIT+药物组以标准化粉尘螨滴剂舌下含服免疫治疗,辅以对症药物治疗;单纯用药组以糠酸莫米松鼻喷剂及氯雷他定片对症治疗.每月回访1次共随访半年.观察并记录治疗后症状得分、药物评分及不良反应情况.半年后综合评价患者主观症状、用药及治疗满意度情况.结果 SLlT+药物组与单纯用药组相比,其半年后症状得分、药物评分改善情况均明显高于单纯用药组.患者主观评价症状、用药及治疗满意度亦明显高于单纯用药组.同时,SLIT+药物组有部分患者出现了一定程度的不良事件.结论 标准化粉尘螨滴剂舌下含服免疫治疗对尘螨过敏变应性鼻炎患者症状得分及药物评分改善极为显著,但对治疗中的不良反应应给予充分关注.SUT长期疗效及不良反应情况尚需进一步观察.
作者：陈建军；孔维佳；项济生；舒宏；施秋梅；檀慧芳；周月 刊期： 2008年第06期
目的 研究大鼠体神经-内脏神经吻合以及体神经-体神经吻合术后生长相关蛋白(GAP-43)与微管相关蛋白(TAU)在脊髓前角运动神经元中的表达变化规律与差异,进一步探讨影响异类神经元再生的相关因子.方法 建立大鼠人工体神经-内脏神经吻合动物模型(模型组)和体神经-体神经吻合动物模型(模型对照组),用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别观察正常组和模型对照组、模型组术后3、7、14、28、60和90 d时脊髓腰4(L4)运动神经元的GAP-43与TAU的mRNA表达水平变化.结果 模型组和模型对照组大鼠L4运动神经元中GAP-43和TAU mRNA表达水平术后第3天时开始均较正常动物增高.7 d时模型组GAP-43 mRNA达高峰,持续高表达状态至28 d后逐渐降低,至90 d降至正常水平,而模型对照组在14 d时达高峰.持续高表达,90 d降至正常水平.TAU在正常动物Lt运动神经元中表达较少,在模型组14 d时表达达高峰,模型对照组在28 d达高峰,90 d时降至正常水平.结论 大鼠人工体神经-内脏神经反射弧建立后脊髓L4前角运动神经元GAP-43及TAU持续高表达状态,提示异类神经元再生和突触重建过程的进行,其表达变化过程与异类神经元成功再生的过程极为吻合.而大鼠人工体神经-内脏神经及体神经-体神经吻合后GAP-43和TAU表达趋势上的差异可能与神经再生过程中的微环境差异和支配靶器官的改变有关.
作者：李迪；肖传国；李兵；陈朝辉；韩晓敏 刊期： 2008年第06期
目的 探讨纳米羟基磷灰石(nHAP)的表面修饰及其与DNA结合的可行性.方法 采用均相沉淀法制备nHAP;透射电镜观察纳米粒结构;经超声分散及碳酸钠预处理后,在pH值7.4的环境下应用多聚赖氨酸(PLL)修饰nHAP;对修饰前后的纳米粒行Zeta电位检测;采用离心后测上清DNA浓度检测PLL修饰后的nHAP(nHAP-PLL)结合DNA的能力;应用DNA抗核酸酶保护实验测定nHAP-PLL保护DNA的能力.结果 透射电镜下nHAP呈针状颗粒,粒径较均匀,约(15～20)nm×(60～80)nm左右,分散程度良好;nHAP的Zeta电位为(-42.4±7.5)mV,nHAP-PLL的Zeta电位为(8.5±1.5)mV,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);DNA结合及抗核酸酶保护实验显示nHAP-PLL和DNA质量比达20:1时,nHAP-PLL可有效结合并保护相应DNA.结论 nHAP经PLL表面修饰后可成为一种有效的DNA结合载体.
作者：郑庆丰；王建军；应敏刚；柳硕岩；韩颖超 刊期： 2008年第06期
毛细支气管炎是婴幼儿常见的下呼吸道感染,病情多较严重,其心肌钾水平的相关研究报道较少.
作者：黄小力；文红霞；陆小霞 刊期： 2008年第06期
目的 通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PBMCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用.方法 采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度.并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定.采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较.在体外,用3H-TdR摄入法检测人PBMCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PBMCs共同培养,连续4 d检测人PBMCs的增殖变化.结果 采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%.光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征.经Annexin-V/PI染色.流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%.高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09士0.75)%(P<0.01).并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义.结论 采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞.在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用.
作者：谢林；尹注增；胡枫；王璐；朱珉；向莹；陈刚；陈实 刊期： 2008年第06期
目的 探讨颈椎骨龄定量分期常用的敏感参数.方法 从901位中小学生中挑选87位(女55,男32)正常(牙合)个体,每年定期拍摄头颅侧位片及手腕骨片,连续6年,组成8～18岁混合纵向资料.不参照Lamparski图谱,而是以当今国际上广泛公认的Fishman手腕骨龄分期法(SMI)为金标准,研究第2～5颈椎形态变化的特征.结果 通过对相关的颈椎参数进行非参数曲线拟合、相关系数比较和变量聚类,选择出具代表性的颈椎骨龄定量分期参数.结论 颈椎骨龄分期参数的选择,对临床定性定量评价颈椎骨龄提供了重要的参考.
作者：陈莉莉；林久祥；许天民 刊期： 2008年第06期
目的 探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中存在血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的肿瘤组织E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)与无VM生成的肿瘤组织E-cad的表达情况,初步探讨恶性肿瘤VM的生成特点,存在VM结构的肿瘤易于复发和转移及与VM可能相关的原因.方法 收集手术切除的肝细胞肝癌标本40例,制作石蜡切片,进行Hepatocyte、CD31免疫组化染色,筛选出存在VM的肿瘤病例,并对40例病例标本进行E-cad免疫组化染色及进行吸光度分析.对存在VM结构的肿瘤标本进行连续切片,E-cad免疫组化染色,对管道状VM及血管不同层面行吸光度分析,观察VM表达E-cad的连续性特征.结果 17.50%(7/40)的HCC存在VM,VM阳性组较VM阴性组HCC的E-cad表达明显下降,其差异存在统计学意义(P<0.01).VM结构较内皮性血管周围HCC的E-cad表达亦明显下降,其差异亦存在统计学意义(P<0.05).结论 HCC E-cad表达的下降,使恶性肿瘤细胞更易经拟态血管发生血道转移,同时使肿瘤细胞间附着结构松散.细胞间更易发生解离及自身细胞变性,提示内皮性肿瘤血管与VM分属不同的形成机制.
作者：安丹；柴新群；冯贤松 刊期： 2008年第06期
目的 通过改进溶液Ⅱ配方,消除质粒DNA提取中的不可逆变性条带,提高质粒DNA提取的质量与得率.方法 取氨苄LB液体培养液中培养好的DH5α(pCDNA3),以NaOH系列梯度浓度/甘氨酸-NaOH缓冲液体系配制溶液Ⅱ,依据文献提供的方法 ,小量提取制备质粒DNA,以凝胶电泳、紫外分光光度计及酶切验证提取效果.结果 在NaOH浓度为0.10 mol/L下,不可逆变性条带基本得到消除,超螺旋DNA的提取纯度和得率均得到明显提高.结论 改变溶液Ⅱ的碱性条件,可以制备高质量的质粒DNA.
作者：黄南；程熠；连欢；张述；李卓娅 刊期： 2008年第06期
目的 建立海洛因成瘾者美沙酮维持治疗效果评价指标体系,为评价海洛因成瘾者参加美沙酮维持治疗效果提供技术支持.方法 运用文献分析法和专家咨询法进行指标的筛选,应用层次分析法计算各级指标的权重.结果 构建了海洛因成瘾者美沙酮维持治疗效果评价指标体系并确立了各级指标的权重.结论 在海洛因成瘾者美沙酮维持治疗效果评价指标体系研究中,专家咨询法和层次分析法是科学和可行的方法 .
作者：彭佳林；李翠；徐娟；方鹏骞 刊期： 2008年第06期
目的 探究蛋白激酶Cα-核因子κB(PKCα-NF-κB)级联对哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的调节作用及细胞增殖的影响.方法 用10%的哮喘患者血清被动致敏人气道平滑肌细胞(HASMCs),予以蛋白激酶C(PKC)激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)刺激.分别以PKCα反义寡核苷酸(PKCα-asODN)和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)抑制PKCα表达和NF-κB活化.用凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测HASMCs中NF-κB的活性,用RT-PCR法及Western blot法检测干预前后Cyclin D1的mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HASMCs增殖.结果 PMA刺激后磷酸化PKCα(P-PKCα)水平增高.NF-κB-DNA结合活性增强,Cyclin D1表达明显增强,HASMCs的增殖增强;而反义PKCα寡核苷酸转入细胞特异性地抑制PKCα表达后,p-PKCα水平下降,NF-κB-DNA结合活性明显减弱,Cyelin D1表达也明显下降,HASMCs的增殖减弱(P<0.05,n=4);用PDTC抑制NF-κB活性后,PMA刺激下p-PKCα水平仍然明显增高,但Cyclin D1的表达明显下降,HASMCs的增殖减弱(P<0.05,n=4).结论 NF-κB是PKCα的下游信号分子,PKCα-NF-κB级联参与了PMA所诱导的哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞Cyclin D1的表达上调及细胞增殖.
作者：杜春玲；徐永健；刘先胜；谢俊刚；张珍祥；张建；乔礼芬；倪望；陈士新 刊期： 2008年第06期
目的 研究内皮素-3(ET-3)对A375人类恶性黑素瘤细胞株骨桥蛋白(OPN)基因表达的影响.方法 体外培养A375细胞株,分别设立对照组,ET-3不同浓度(1、10、100 nmol/L)实验组和ET-3同一浓度(100 nmol/L)不同时间(6、12、18、24、30、36 h)实验组.采用RT-PCR和Western blot结合吸光度分析技术检测骨桥蛋白基因表达情况.结果 不同浓度的ET-3能显著上调A375细胞株骨桥蛋白基因表达,与对照组比较差异有统计学意义,并且这种上调效应呈剂量依赖性,不同浓度干预组组间比较差异有统计学意义.在100 nmol/L ET-3浓度条件下,随着培养时间的延长,OPN的表达逐渐增加,24 h达到高峰,随后缓慢下降,RT-PCR结果 吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),6、12、18、24 h实验组组间比较除6 h和12 h组间差异无统计学意义外,其余各组组间差异均有统计学意义,24、30、36 h实验组组间比较差异有统计学意义.Western blot吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异有统计学意义,6、12、18、24 h实验组组间以及24、30、36 h实验组组问比较差异有统计学意义.结论 ET-3能时间和剂量依赖性地上调A375细胞株骨桥蛋白基因的表达.
作者：田进；黄长征；刘业强；李延；陶娟；李家文；涂亚庭；沈关心 刊期： 2008年第06期
目的 观察Rhobtb2基因在人胃癌组织中的突变情况,探讨Rhobtb2基因突变与胃癌发生的关系.方法 采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法 对58例胃癌组织以及癌旁正常组织的Rhobtb2基因进行突变检测,采集1例正常人抗凝血作为正常对照.结果 58例胃癌组织中发现1例位于外显子5的错义突变.结论 胃癌组织中存在Rhobtb2基因突变,其突变可能与胃癌的发生有关.
作者：陈旭；陈剑英 刊期： 2008年第06期
目的 研究丹参酮对拟人类阿尔茨海默病(AD)和血管性痴呆(VD)2种模型大鼠学习、记忆功能障碍的改善作用.方法 ①实验动物随机分成5组:痴呆(AD/VD)模型组、丹参酮治疗组、假造模对照组和正常对照组,VD模型组:应用改良的大脑中动脉线栓塞(MCAO)法建模;AD模型组:应用D-半乳糖腹腔注射和海马内注射β-淀粉样肽蛋白片段1-40(Aβ1-40)复合造模方法 建模.丹参酮治疗组:VD大鼠造模完成后或AD大鼠造模24 h后给予丹参酮[50 mg/(kg·d)3,溶于5 ml玉米油中灌胃14 d.假造模对照组:与VD大鼠同法.但不做插线、结扎;与AD大鼠同法注射等量溶媒.正常对照组:大鼠不做任何处理.②采用水迷宫行为学实验,以单位时间逃避潜伏期及其频率为指标,测定大鼠空间学习、记忆功能.结果 ①AD/VD大鼠逃避潜伏期明显延长,逃生错误频率高,与两个对照组比较差异均有显著性意义.②丹参酮治疗组大鼠较痴呆模型组逃避潜伏期明显缩短,逃生错误频率减低,差异有统计学意义.结论 ①2种痴呆大鼠模型具有较好仿真人类AD/VD的特点.②丹参酮对AD/VD具有一定的治疗作用.
作者：李林；夏保芦；茹立强 刊期： 2008年第06期
目的 探讨建立紫杉醇致大鼠外周神经病理性疼痛模型的可行性.方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为4组,各组均在第1、3、5、7天腹腔注射紫杉醇,剂量分别为0、0.5,1.0、2.0 mg/(kg·d).分别于用药前和用药后第3、5、7、12、16、20和25天测定大鼠的机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),用药后第20天采用透射电镜观察坐骨神经超微结构.结果 腹腔注射紫杉醇1.0 mg/kg组大鼠早在用药的第5天出现机械痛敏和热痛敏,机械痛阈在用药的第12天达到小.而热痛阈在用药的第16天达到小.腹腔注射紫杉醇1.0 mg/kg组大鼠的坐骨神经纤维髓鞘板层结构松散、肿胀变形、排列紊乱、厚薄不均.结论 使用SD大鼠重复腹腔注射1.0 mg/kg紫杉醇的方法 可以成功建立紫杉醇致大鼠外周神经病理性疼痛模型.
作者：陈治军；田玉科；罗放；曹菲；王平 刊期： 2008年第06期
目的 应用应变率成像技术研究糖尿病及糖尿病前期患者的左室收缩功能.方法 确诊为糖尿病的患者49例;糖尿病前期者43例;正常对照组55例.启用定量组织多普勒及应变率功能,测量心肌各节段收缩期运动速度(Sa)及应变率(SRs),反映心肌收缩功能.结果 3组患者中各节段心肌的Sa与SRs成正相关(P<0.05).糖尿病组及糖尿病前期组心肌收缩功能较正常组降低(均P<0.05).糖尿病患者心肌的受损程度较糖尿病前期组高(P<0.05).糖尿病发展到了晚期,心脏整体收缩功能才会发生改变.结论 应变率成像具有较高的敏感性,可早期预测糖尿病心肌收缩功能的受损.
作者：陆永萍；邓又斌；黄燕玲；张华莉；于飞；吕燕芬；朱昆生 刊期： 2008年第06期
目的 初步探讨辐射效应诱导下乏氧人宫颈癌细胞系HeLa细胞乏氧诱导因子-lα(HIF-lα)和DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)表达相关性及其调控机制.方法 免疫印迹法检测乏氧状态下HeLa细胞接受射线照射后HIF-lα和DNA-PK(包括DNA-PKcs及Ku80)表达情况;运用靶向抑制HIF-lα或DNA-PKcs的小发卡样干扰RNA(shRNA)表达质粒分别转染乏氧HeLa细胞,经辐射诱导后检测不同时间点各自DNA-PKcs或HIF-lα表达的变化.结果 乏氧HeLa细胞经辐射诱导后0、12、24、48 h时间点检测到HIF-lα、DNA-PKcs和Ku80表达随时间增加逐渐增高,其中HIF-lα和DNA-PKcs的相对表达量呈正相关(r=0.816,P=0.041);运用HIF-lα-shRNA表达质粒明显抑制乏氧HeLa细胞内HIF-lα表达,检测到细胞经照射后12、24、48 h时间点DNA-PKcs的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05);而pDNA-PKcs-shRNA表达质粒抑制DNA-PKes表达后检测各时间点HIF-lα的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比均明显减少(P<0.05).结论 辐射诱导乏氧HeLa细胞内HIF-lα表达与DNA-PKcs的表达水平相关;通过抑制DNA-PKcs的表达能显著降低乏氧HeLa细胞HIF-lα表达水平,对HIF-lα的调控机制提出新的思路.
作者：熊华；于世英；袁响林；邹燕梅；庄亮 刊期： 2008年第06期
目的 探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)小干扰RNA对缺氧/复氧诱发的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 分离的大鼠心肌细胞在PTP-1B小干扰RNA转染后培养24 h.然后缺氧处理4 h,再复氧6 h(4H/6R).心肌细胞的凋亡用TUNEL染色法测定;Western blot检测心肌细胞PTP-1B和磷酸化Akt的表达水平;比色法衡量凋亡酶Caspase 3和Caspase 8的活性;共免疫沉降法检测与Fas受体结合的PTP-1B的数量.结果 缺氧/复氧的处理不仅严重损伤了培养的大鼠心肌细胞,同时也上调了心肌细胞PT-lB蛋白的表达水平;PTP-1B小干扰RNA显著地减少了缺氧/复氧诱发的心肌细胞凋亡,PTP-1B小干扰RNA组与阴性对照组的凋亡指数分别为:(12.1±1.4)%和(23.2±1.6)%,P<0.05;与阴性对照组比较,PTP-1B小干扰RNA显著增加了Akt的磷酸化水平.抑制了Caspase 3和Caspase 8的酶活性,同时降低了PTP-1B与Fas受体的结合.结论 PTP-1B是一个缺氧/复氧(4H/6R)诱发的心肌细胞凋亡的关键调节因子,针对PTP-1B的小干扰RNA可有效地抑制心肌细胞的损伤.其机制可能与增加的Akt磷酸化水平,凋亡酶Caspase 3和Caspase 8的酶活性被抑制,以及PTP-1B与Fas受体结合的减少相关联.
作者：宋慧文 刊期： 2008年第06期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
