柯新；郑启新；熊晓芊；赵明
目的 通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞.方法 通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jurl6-TG细胞.比较Jurkat细胞与Jurl6-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况.结果 在含20 μg/ml 6-TG的培养液中,Jurl6-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡.在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8 mol/L或8×10-8 mol/L时,Jurl6-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7～10 d.Jurl6-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jurl6-TG细胞与PBL融合.结论 突变筛选出的单克隆细胞株Jurl6-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞.
作者：翁秀芳；吴雄文；梁智辉；陆盛军；卢小玲；张彩娥；钟茂华；陈雪玲；龚非力 刊期： 2006年第06期
目的 观察青心酮对脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞的Toll样受体4(TLR4)及其下游分子核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠的药理作用机制及TLR4信号系统在病理妊娠中的可能作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脐静脉内皮细胞TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法检测TLR4、抑制性κB(IκBα)蛋白的表达.结果 10-7、10-6、10-5 mol/L青心酮可显著降低LPS诱导的内皮细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),抑制IκBα蛋白的降解(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 青心酮能够抑制LPS诱导的内皮细胞TLR4表达及其相关信号转导,这可能是青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠时活血化淤药理作用的通路之一.TLR4信号通路可能参与妊娠期高血压病的发病.
作者：寿华锋；黄艳君；吴萍；张力；叶笃筠；黄引平 刊期： 2006年第06期
目的 研究P物质(SP)对急性分离的大鼠三叉神经节神经元辣椒素受体亚型1(VR1)的调制作用,探讨SP对辣椒素在疼痛传导中作用的影响.方法 采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的三叉神经节神经元膜VR1介导的电流,并观察预加SP对VR1介导的电流的调制作用.结果 大多数三叉神经节细胞对辣椒素敏感,细胞外应用辣椒素(1×10-7～3×10-6 mol/L)后可引起缓慢激活无明显去敏感的内向电流,且呈浓度依赖性;分别预加1×10-9、3×10-9和1×10-8 mol/L SP 1 min后,辣椒素引起的电流幅值分别增加2.4%、20.8%和51.8%,增加的程度与SP的浓度和预加的持续时间有关.应用SP受体特异性阻断剂GR82334(1×10-6 mol/L)可以阻断SP对辣椒素激活电流的增强作用.结论 SP可增强三叉神经节神经元膜辣椒素受体介导的电流.
作者：罗加烈；胡旺平；樊友珍；甘志强；李之望 刊期： 2006年第06期
目的 探讨肺组织内高水平的转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白对基质金属蛋白酶(MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)表达的调节,以及MMPs/TIMPs表达紊乱与肺组织纤维化的关系.方法 8只TGF-β1转基因小鼠和8只正常对照小鼠在出生后8周经断头术处死,收集血浆及肺组织标本,测定血浆和肺组织中TGF-β1蛋白浓度,以及MMP-2、MMP-9、MMP-3、MMP-13、TIMp-1、TIMp-2和TIMP-3蛋白的表达,并通过Masson-Goldner染色法检测肺组织中胶原的沉积.结果 在转基因小鼠肺组织中,MMP-2的表达显著降低,TIMP-1、TIMp-2和TIMP-3的表达显著增加,并且转基因小鼠肺组织呈现明显纤维化.结论 转基因小鼠肺组织中高浓度的TGF-β1可能通过抑制MMP-2表达,以及增加TIMp-1、TIMp-2、TIMP-3表达,减少细胞外基质的降解,增加细胞外基质的沉积,促进肺纤维化的产生.
作者：杨坤禹；胡豫；刘莉；张涛；伍钢；Claudia Ruebe；Christian Ruebe 刊期： 2006年第06期
宫颈癌为影响妇女健康的重要疾病,对宫颈癌的病因学研究已经表明,人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的重要因素.目前已发现HPV有100余种,其中有27种可以从宫颈癌组织中发现[1].本研究采用通用引物PCR(GP PCR)和DNA测序方法分析宫颈癌、宫颈炎和宫颈上皮内高度病变(CIN)患者高危型HPV的感染状态,为临床宫颈癌的防治提供依据.
作者：巴瑞琪；丁晓华 刊期： 2006年第06期
经肝动脉化疗栓塞术(TACE)广泛用于治疗不能手术切除的肝癌,取得了较好的临床效果.但栓塞术后很多患者出现胸闷、呼吸受限、心悸、出汗等症状,部分患者血氧分压有不同程度的降低[1].本研究对行TACE治疗的肝癌患者术前、术后的血氧指标及肺功能进行检测,初步探讨低氧血症与肺功能障碍的关系,以指导临床治疗和护理工作.
作者：肖书萍；张建初；郑传胜；周国锋；刘婷；陈冬萍；冯敢生 刊期： 2006年第06期
目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.
作者：熊维；吴萍；张力；周晓燕；李咏生；叶笃筠 刊期： 2006年第06期
目的 探讨准分子激光原位角膜磨镶术对视网膜厚度的影响.方法 分别于术前以及术后1 d、1周、4周,采用视网膜厚度分析仪对接受准分子激光原位角膜磨镶术的40例患者的视网膜厚度进行测量.结果 和术前比较,术后1 d视网膜厚度明显增加,术后约1周恢复至术前水平.结论 准分子激光原位角膜磨镶术对术后早期视网膜厚度有明显影响.
作者：李新宇；雷澄；刘磊；董洁玉 刊期： 2006年第06期
目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制人鼻咽癌CNE细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法 用5-Aza-CdR处理人鼻咽癌CNE细胞,应用MTT试验观察不同浓度的5-Aza-CdR对癌细胞生长增殖的影响.用甲基化特异性PCR(MSP)分析死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA、蛋白的表达情况及细胞凋亡和细胞周期的变化.结果 从CNE细胞生长曲线知各浓度的5-Aza-CdR对细胞生长均有抑制作用.未经5-Aza-CdR处理的CNE细胞中DAPK基因CpG岛过甲基化,且DAPK mRNA不表达.经5-Aza-CdR处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,用药组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强.免疫细胞化学结果显示,经药物处理后的CNE细胞中DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达.流式细胞分析结果显示,药物处理后细胞凋亡率明显增加,且G0/G1期细胞增加,G2/M期减少.结论 5-Aza-CdR对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因重新表达的结果.
作者：张松；孔维佳；郭长凯；王彦君；陈雄 刊期： 2006年第06期
目的 初步探讨细胞毒T细胞(CTL)对同种抗原的识别机制.方法 用负载特定肽的T2细胞与HLA-A2阴性个体的外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBL)共培养,激活同种反应性CTL,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法观察同种反应性CTL对不同载肽T2细胞的杀伤活性.结果 用负载特定抗原肽的T2细胞诱导所获得的同种反应性CTL对负载不同抗原肽的T2细胞及空载T2细胞具有同等杀伤效应.结论 同种反应性CTL对同种MHC分子的识别不依赖抗原肽.
作者：蔡蕾；翁秀芳；梁智辉；吴雄文 刊期： 2006年第06期
目的 探讨以甲壳胺为载体固定乙酰胆碱酯酶的佳条件及固定化酶的理化性质.方法 以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱酯酶固定在甲壳胺上,并分别测定固定化酶与溶液酶的活力.结果 固定化酶与溶液酶的适温度相同,均为37℃;固定化酶与溶液酶适pH分别为8.2、8.0;固定化酶在50℃仍有较高热稳定性,而溶液酶活力明显下降;固定化酶的米氏常数Km=0.84 mmol/L,溶液酶的Km=1.16 mmol/L;固定化酶活力回收为44.66%,在重复使用8次后仍能保持原有活力的50%.结论 该固定化酶与溶液酶相比,其热稳定性提高,与底物的亲和能力增大,且重复使用性较好.
作者：夏蓉；刘新云；马长清；胡文慧 刊期： 2006年第06期
目的 观察醛固酮对新生大鼠心肌细胞凋亡影响并探讨其机制.方法 取新生大鼠心肌细胞培养36 h后,加入不同浓度醛固酮(0.01～10.0 μrmol/L).分别用吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞术检测心肌细胞凋亡.用免疫组化法测定心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 醛固酮加入细胞24 h后,随着其浓度的增高,凋亡细胞所占比例逐渐增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达减弱,Bcl-2/Bax比值下降,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 醛固酮明显促进心肌细胞的凋亡,且具有浓度依赖性,这可能与醛固酮能下调Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达有关.
作者：龙元；曾秋棠 刊期： 2006年第06期
目的 研究不同基因型Na-K-2Cl联合转运子1(NKCC1)小鼠的耳蜗和前庭器官的超微形态特点及其与听觉平衡功能的关系.方法 采用电子显微镜对NKCC1+/+野生型鼠、NKCC1+/-杂合子鼠和NKCC1-/-基因敲除鼠的耳蜗基底膜和前庭椭圆囊进行观察,并应用听觉脑干反应(ABR)检测各基因型鼠的听力和观察平衡表现.结果 电镜观察显示NKCC1-/-鼠的边缘细胞体积明显缩小,边缘细胞与中间细胞之间空隙扩大成空泡样,并可见前庭膜贴附于边缘细胞的顶膜边缘上.NKCC1-/-鼠外毛细胞呈现为点状缺失,椭圆囊毛细胞仅有少许残留.NKCC1+/+鼠听力和平衡正常,ABR检测的短声阈值为23.13±3.78(dB SPL);NKCC1+/-鼠听力低于NKCC1+/+鼠,ABR短声阈值为38.49±12.29(dB SPL).NKCC1+/+和NKCC1+/-鼠ABR的阈值在各个频率的差异均有极显著性意义(均P＜0.01).NKCC1-/-鼠呈现全聋并有平衡失调,ABR的各个频率在100 dB SPL均无反应.结论 NKCC1基因在内耳表达的不同可以影响小鼠的听觉平衡功能并导致内耳形态改变;内耳形态改变也可作为基因缺失小鼠听觉平衡的形态学基础.
作者：褚汉启；熊浩；周良强；崔永华；孔维佳 刊期： 2006年第06期
目的 探索利用干细胞体外培养技术构建小鼠肠干细胞群.方法 取孕17 d昆明系小白鼠的胚胎鼠肠组织,剪碎后采用酶消化法分离肠干细胞群;将通过离心获得的细胞溶于选择性培养液并种于一次性培养瓶中;利用角蛋白18亚型抗体行免疫组织化学染色鉴定细胞.结果 细胞培养48 h后,开始贴壁生长.镜下可见,上皮样细胞呈集落状生长,其中,由典型上皮构成的克隆约占30%,由扁平上皮细胞构成的克隆约占20%,混合生长的克隆约占50%.培养出的肠干细胞群在第3、4代达到生长分化的顶峰;而后干细胞逐渐减少,成熟的肠上皮细胞逐渐增多,直至终凋亡.培养出的肠干细胞群角蛋白18亚型抗体染色阳性.结论 在现有技术条件下,体外构建肠干细胞群是完全可以实现的.
作者：叶章群；刘冠琳；陈志强；孔德波；姚林方；余虓；郭辉 刊期： 2006年第06期
目的 观察硒对砷致HepG2细胞DNA损伤的影响.方法 以人肝肿瘤细胞HepG2为靶细胞,分别以亚硒酸钠(2.5、5.0和10.0 μmol/L)和亚砷酸(1.56、3.125、6.25、12.5和25.0 μmol/L)为受试物处理HepG2细胞,再以亚硒酸钠与亚砷酸联合处理HepG2细胞,应用单细胞凝胶电泳试验检测亚硒酸钠、亚砷酸单独及联合染毒对HepG2细胞DNA的损伤作用.结果 与溶剂对照相比,10.0 μmol/L亚硒酸钠使HepG2细胞DNA的Olive尾矩显著增加(P＜0.05),2.5、5.0 μmol/L亚硒酸钠使Olive尾矩有减少的趋势,但差异无显著性意义.6.25、12.5和25.0 μmol/L亚砷酸均使HepG2细胞DNA的Olive尾矩显著增加(P＜0.01或P＜0.05),且呈现剂量依赖关系.25.0 μmol/L亚硒酸钠与12.5 μmol/L亚砷酸联合作用与12.5 μmol/L亚砷酸单独作用相比,Olive尾矩减小,差异有极显著性意义(P＜0.01).5.0 μmol/L亚硒酸钠与25.0 μmol/L亚砷酸联合作用与25.0 μmol/L亚砷酸单独作用相比,Olive尾矩增加,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 亚硒酸钠对亚砷酸诱导的HepG2细胞DNA损伤的减弱或增强作用与亚硒酸钠和亚砷酸浓度有关.
作者：来瑞平；魏巍；余日安；杨成峰；鲁文清 刊期： 2006年第06期
目的 检测磷脂酰肌醇3激酶-视网膜母细胞瘤基因(p55PI3K-Rb)信号传导途径在胃肠道正常组织、癌旁组织及癌组织中的表达,并阐述其意义.方法 收集20例胃肠道肿瘤患者(胃癌6例,结肠癌5例,直肠癌9例)手术切除标本,每例均包括癌组织、相应的癌旁组织及正常组织.应用免疫沉淀(Rb单克隆抗体)和Western blot方法(p55PI3K多克隆抗体)检测p55PI3K与Rb在组织中的相互作用.结果 8例胃肠道肿瘤标本(胃癌2例,结肠癌2例,直肠癌4例,均为腺癌)Rb与p55PI3K相互作用为阳性,阳性率为40%(8/20),且正常组织、癌旁组织及癌组织三者之间p55PI3K-Rb作用强弱差异无显著性意义(P＞0.05).结论 在胃肠道肿瘤形成过程中,p55PI3K-Rb信号传导通路是存在的.通过阻断p55PI3K-Rb通路可能阻断肿瘤的发生,有望为临床胃肠道肿瘤的治疗开辟一条新的途径.
作者：高霞；龙浩成；刘双又；罗学来；李小兰；陶德定；胡俊波；龚建平 刊期： 2006年第06期
目的 探讨甘氨酸对离体大鼠心脏缺血再灌注引起的心脏损伤的拮抗作用及其机制.方法 采用Langendorff心脏灌流技术.正常对照组持续灌流90 min;缺血再灌注组平衡30 min,停灌30 min,再灌30 min;甘氨酸组从停灌前15 min开始加入3 mmol/L甘氨酸,其他同缺血再灌注组.结果 甘氨酸处理使缺血再灌注所致心律失常持续时间缩短85%,丙二醛(MDA)含量降低61%,心肌凋亡细胞减少65%,Bcl-2表达增加140%,Bax表达减少68%.结论 甘氨酸减轻缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,此作用可能与其抗自由基、调节Bcl-2和Bax的表达有关.
作者：廉洪；陈欢；杜景霞；胡燕；金满文 刊期： 2006年第06期
目的 建立检测党参药材中党参含量和有关物质的方法.方法 采用水蒸气蒸馏法提取10种不同来源党参药材,其中2号为标准对照药材,应用毛细管气相色谱法分离提取物,并用聚类分析比较.结果 建立的分析方法有较好的重现性,确定了党参药材的9个共有特征峰,9个党参样品的相似度达到0.9以上.结论 该方法准确可靠,可用于党参药材的质量评价.
作者：向一；祁智；马长清；高磊；周漠炯；尹恒 刊期： 2006年第06期
目的 建立脊髓损伤后中枢性疼痛的动物模型.方法 选用成年SD大鼠45只,分为正常组、脊髓损伤组、假手术组,每组15只.用自制Allen氏打击装置,以400 gcm(下落重物的质量与下落高度的乘积)的打击力度撞击L1节段脊髓造成大鼠脊髓损伤,分别在损伤前后T12节段记录刺激胫神经引起的体感诱发电位,假手术组大鼠仅打开椎板而不损伤脊髓.术后4、8、12、16、24 h及此后每天对大鼠的机械性痛敏压力阈值(paw withdrawl pressure threshold,PWPT)和热痛敏潜伏期(paw withdrawl latency,PWL)进行测量,同时观察大鼠自发痛的行为学变化,共观察3个月.结果 脊髓损伤组大鼠对机械刺激和热刺激均发生痛觉过敏,与正常组和假手术组比较,其PWPT和PWL均显著下降(P＜0.05),且出现自发痛现象;而假手术组PWPT、PWL与正常组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).结论 用Allen氏重物坠击法建立的脊髓损伤后中枢性疼痛动物模型具有较好重复性和临床相关性.
作者：谢永刚；张小洺；姚尚龙 刊期： 2006年第06期
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比例增高中发挥的作用.方法 采用酶消化法培养原代肺癌细胞,将培养的肺癌细胞及肺癌细胞培养上清液分别与自身来源的外周血单个核细胞共培养,不同浓度(2、5、10 ng/ml)的TGF-β1进行干预后,检测各组CD4+CD25+调节性T细胞标志物FOXP3 mRNA的表达.结果 肺癌细胞与外周血单个核细胞共培养组FOXP3 mRNA的表达呈阳性,且随着TGF-β1干预浓度的增加,FOXP3 mRNA的表达强度逐渐增高,两者呈正相关(r=0.663,P＜0.05);外周血单个核细胞经肺癌细胞培养上清液孵育后亦有FOXP3 mRNA的表达,TGF-β1干预后,FOXP3 mRNA的表达虽有上调但与干预前相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论 TGF-β1能上调外周血单个核细胞中FOXP3的表达,即增加CD4+CD25+调节性T细胞的比例,从而参与肺癌免疫逃逸机制.
作者：张晓菊；田拥军；丁静民；辛建保；陶晓南；白明 刊期： 2006年第06期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
