陈慧；高华方；马雪梅；杨渝珍
目的构建含有融合自杀基因FCU1的真核细胞表达载体pEGFP-FCU1,并转染肝癌细胞SMMC7721,初步探讨FCU1/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统对体外培养细胞的生长抑制作用.方法用SmaⅠ,XhoⅠ两种限制性内切酶分别切割质粒pEGFP-C1和pCIneoFCU1,所得载体片断和目的基因片断连接后转化,阳性重组子转染肝癌细胞SMMC7721,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验.结果酶切鉴定重组子阳性克隆率约为60%,转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光;转染的细胞在5-FC作用下其生长抑制率明显高于未转染细胞的生长抑制率,且旁观者效应显著.结论自杀基因FCU1真核表达载体构建正确,转染细胞成功并获稳定表达,FCU1/5-FC系统对肝癌细胞SMCC7721具有实验性的基因治疗作用.
作者：谢娜；林菊生；吴斌文；黎培员；孔心涓；宋东坡 刊期： 2004年第04期
目的为进一步探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用.方法选用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(coriaria 1actone,CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细咆,将上述两种条件培养基提取液(astrocytic conditioned medium,ACM)10 μ1分别注入正常Sprague-Dawley(SD)大鼠侧脑室,观察动物行为与脑电图的变化;用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid,GABA)表达水平的改变,并做显微图像分析.结果①侧脑室注射TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘-慢波癫痫样脑电图表现,大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值均明显低于对照组;②侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液,大鼠无癫痫样行为发生,大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值与对照组无显著性差异.结论①激活的星形胶质细胞分泌的TNF α可诱导大鼠癫痫发作.②GABA表达的变化可能与癫痫发作有关.
作者：彭俊忠；朱家祥；朱长庚；刘庆莹；童逸龄；魏瑛 刊期： 2004年第04期
目的了解凋亡素-2配体(又称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,TRAIL)对人胰腺癌细胞株Pancl、PC3凋亡作用的影响.方法采用MTT法、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞仪方法检测TRAIL对Pancl和PC3体外增殖的影响.结果 TRAIL可诱导胰腺癌细胞Pancl和PC3的凋亡,并呈时间和浓度依赖性,PC3的凋亡率明显高于Pancl.结论 TRAIL可以诱导胰腺癌细胞的凋亡,胰腺癌细胞系对TRAIL的敏感性有差异,TRAIL可能为胰腺癌的生物学治疗提供一种新途径.
作者：陈鑫；王春友；余康敏 刊期： 2004年第04期
目的评价神经内镜对脑积水的治疗作用.方法回顾性分析内镜下行不同治疗方式的32例不同类型脑积水患者的临床资料.结果随访3月～2年,9例梗阻性脑积水采用内镜下脑室造瘘术(7例行三脑室底造瘘术即ETV,2例行透明隔造瘘),8例治疗有效,1例ETV后脑积水无明显改善,改行脑室腹腔分流术(V-P分流);23例交通性脑积水采用内镜下引导V-P分流(10例)或内镜下引导V-P分流加内镜下脑室造瘘术(12例行ETV,1例行透明隔造瘘),脑积水均获得改善.结论梗阻性脑积水采用神经内镜脑室造瘘术,交通性脑积水采用内镜引导V-P分流或内镜引导V-P分流加脑室造瘘术,均可获得满意疗效.
作者：蒋太鹏；高永忠；邓志刚；廖宇钦；林恒洲；纪涛 刊期： 2004年第04期
目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核细胞U937酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)mRNA表达和蛋白质翻译的影响.方法 U937细胞培养到足够数量后,细胞计数传代分组:①对照组:加等量的培养基;②TNF-α组:加入TNF-α,使其终浓度为10 ng/ml;③ox-LDL组:加入ox-LDL,终浓度为100μg/m1.应用RT-PCR检测ACAT1 mRNA表达,蛋白定量应用免疫印迹法.结果与对照组相比,TNF-α组ACAT1 mRNA表达显著增加(0.573±0.032 vs 0.990±0.022,P＜0.01),而ox-LDL组ACAT1 mRNA表达水平(0.554±0.026)无显著变化.3组之间ACAT1酶蛋白含量差异无显著性意义.结论TNF-α能促进ACAT1 mRNA表达,但未见TNF-α和ox-LDL对ACAT1酶蛋白表达有任何影响.
作者：成蓓；王毅；何平；吴剑萍；狄鸣；王洪星 刊期： 2004年第04期
目的探讨胰腺癌组织中P53蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达及其与临床病理学特征之间的关系.方法采用SP免疫组织化学方法,对46例胰腺癌组织中P53蛋白、VEGF及VEGF-C的表达进行检测.结果 P53、VEGF与VEGF-C阳性表达率分别为58.7%、65.2%和43.5%.P53表达与胰腺癌远处转移显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小,病理学分级及淋巴结转移无关,VEGF表达与胰腺癌淋巴结转移(P＜0.05)和远处转移(P＜0.01)显著相关,而与肿瘤大小,病理学分级无关,P53表达与VEGF表达呈明显正相关(P＜0.05).VEGF-C表达与胰腺癌淋巴结转移显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小,病理学分级及远处转移无关.结论在胰腺癌中,VEGF与P53表达呈正相关,在胰腺癌的淋巴结转移和远处转移中起重要作用.VEGF-C表达与胰腺癌淋巴结转移呈正相关,在胰腺癌的淋巴结转移中起重要作用.
作者：刘进；薛新波 刊期： 2004年第04期
目的探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏Smad7蛋白表达的影响.方法诱导大鼠糖尿病后,随机分为对照组及治疗组,比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量、肾脏病理改变及Smad7的免疫组化.结果糖尿病大鼠内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(mAlb)排泄量较正常鼠增多,系膜基质增生,Smad7表达明显下降;姜黄素治疗能明显降低Ccr(P＜0.05),减少Alb排泄量(P＜0.05),抑制系膜基质增生,上调Smad7的表达(P＜0.05).结论姜黄素对糖尿病肾病具有明显疗效,其机制至少部分是通过上调Smad7的表达,拮抗转化生长因子-β的作用,从而抑制肾脏纤维化.
作者：陈丽；刘晓城；宁勇 刊期： 2004年第04期
目的构建抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体原核表达载体,为进一步研究其效应奠定基础.方法从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体pGEM-T-VHVH和pGEM-T-VL中扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用重叠延伸PCR的方法,在VH和VL基因间引入连接短肽(Linker),构建VH-Linker-VL的单链抗体(single chain Fv,scFv)基因.经NcoⅠ和Not Ⅰ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化和筛选后,阳性细菌经IPTG诱导表达.间接免疫荧光法(IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性.结果凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约700 bp条带,SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量为27 kD左右,与scFv的理论值一致,IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性.结论本研究成功地构建并表达了抗人TfRscFv,为抗人TfR scFv的应用奠定了基础.
作者：朱慧芬；杨道锋；沈关心；周春 刊期： 2004年第04期
目的观察促酰化蛋白(ASP)对3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中克隆增殖的影响,以进一步探讨ASP诱导前脂肪细胞分化的可能机制.方法采用3H胸腺嘧啶掺入法和MTT法分别检测ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中DNA合成量及细胞增殖的情况,并采用流式细胞术检测诱导分化后细胞周期构成的变化.结果①ASP组在诱导分化24 h时,DNA合成量明显增加,与对照组相比差异有极显著性意义(P＜0.01),在48 h和72 h时DNA合成量降低,与对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).②诱导分化24 h时,ASP组细胞增殖明显,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05);诱导分化48 h、72 h时,ASP组细胞增殖不明显.③ASP组可促进处于生长停滞期的前脂肪细胞重新进入细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期的细胞明显增多,细胞处于分裂增殖状态.结论圹诱导分化过程中,ASP可促进3T3-Ll前脂肪细胞发生克隆增殖.ASP促进细胞克隆增殖的作用,可能是其诱导前脂肪细胞分化的分子机制之一.
作者：卢慧玲；王宏伟；林汉华；温宇；胡秀芬 刊期： 2004年第04期
目的将鼠dishevelled-1(DVL-1)cDNA重组质粒转染到培养的鼠成神经瘤细胞N2a,建立瞬时表达系统,为研究Wnt信号途径在阿尔茨海默病(AD)发病中的作用提供实验基础.方法用常规分子生物学方法扩增、纯化DVL-1 cDNA重组质粒,用紫外分光技术检测纯化质粒的纯度;用脂质体介导法将重组质粒转染入培养的鼠成神经瘤细胞N2a,用免疫印迹、免疫荧光法从蛋白质水平检测转染和表达效果.结果质粒酶切电泳结果显示:鼠DVL-1 cDNA重组质粒PCS2+MT-MDVL1扩增和纯化成功,纯度达到要求;免疫印迹、免疫荧光结果显示外源鼠DVL-1 cDNA重组质粒在鼠成神经瘤细胞N2a中获得表达,基因转染和表达率为57.6%.结论成功将鼠DVL-1 cDNA重组质粒转染到培养的鼠成神经瘤细胞N2a中,并获得瞬时表达.
作者：王海红；曲忠森；张迎春；王建枝 刊期： 2004年第04期
目的应用外源基因缝线行周围神经吻合,探讨神经吻合口直接转基因并使外源基因在吻合口得以表达的可行性.方法构建含有大肠杆菌(Escherichia coli,E coli)β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-Gal)的结构基因(lacZ基因)及人类巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子的PCMV β质粒.应用通过浸泡处理的8-0医用尼龙无创缝线行兔坐骨神经外膜缝合.对照组应用浸泡过蔗糖PBS溶液的缝线,实验组应用浸泡过PCMV β质粒溶液的缝线进行神经缝合.分期取出神经吻合部,进行β-半乳糖苷酶组织化学染色及β-半乳糖苷酶活性检测.结果组织化学染色显示对照组术后各期的所有吻合部神经组织均无蓝染阳性细胞,而实验组术后各期的所有吻合部神经组织均有蓝染的阳性细胞;对照组术后各期吻合部神经组织中均未检测到β-半乳糖苷酶活性,实验组吻合部神经组织从术后2d到30 d都可检测到β-半乳糖苷酶活性.结论应用外源基因缝线可使外源基因转移至周围神经吻合口中并表达出具有生物活性的外源基因表达产物,为应用基因治疗促进神经功能的恢复提供了可行途径.
作者：张世强；刘玲；张经歧；张英泽；李衡；潘进社；赵昌平 刊期： 2004年第04期
目的建立头孢他啶血药浓度的高效液相色谱(HPLC)测定方法.方法采用HPLC-UV方法,内标为丙酮,色谱柱为μbondaparC18(7.8 mm×300 mm),流动相:甲醇:0.01 mol/L磷酸二氢钾(20:80,V/V),检测波长:254 nm,柱温:室温,流速:1.0 ml/min.结果头孢他啶的血药浓度在10～120μg/ml范围内与峰面积比有良好的线性关系,低检测浓度为0.1 μg/ml,方法的平均回收率为(98.0±6.2)%,日内变异系数≤6.8%.结论该方法简单,快速,准确,为头孢他啶的血药浓度监测提供了分析方法.
作者：艾又生；徐楚鸿；陈华庭；王霞 刊期： 2004年第04期
目的从临床流行病学的角度,对新的人微小病毒B19非结构蛋白DNA巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法的效度及信度进行评价,探索其运用于临床筛查B19病毒感染的可行性.方法以国内目前常用的结构蛋白DNA巢式PCR检测结果,并结合孕妇的典型临床表现作为诊断标准,将30例孕妇分为B19病毒感染组及非感染组,对非结构蛋白DNA巢式PCR的检测结果进行效度及信度评价.结果新的检测方法血清标本的灵敏度可达100%,组织标本的特异度及阳性预测值高于血清标本,联合试验有助于提高检测的灵敏度或特异度.结论非结构蛋白DNA巢式PCR检测方法是一种特异、敏感、简便、快速诊断B19病毒感染的新方法.在临床筛查中,血清标本的检测优于组织标本.
作者：李增庆；黄咏梅；乔福元；李武 刊期： 2004年第04期
目的观察6%羟乙基淀粉(HAES)等容血液稀释和川芎嗪注射液在兔心肌缺血再灌注损伤时对心肌过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及心肌细胞超微结构的影响.方法32只家兔随机分为4组,每组8只:Ⅰ组为对照组;Ⅱ组为血液稀释组;Ⅲ组为川芎嗪组;Ⅳ组为稀释+川芎嗪组.观察在急性心肌缺血45 min及再灌注180 min后,心肌组织中SOD活性、MDA含量的变化及心肌超微结构改变.结果与非缺血区比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组缺血区心肌SOD活性明显降低(均为P＜0.05),但Ⅱ、Ⅲ组降低程度轻于Ⅰ组(均为P＜0.05);4组缺血区心肌MDA含量均较非缺血区明显升高(均为P＜0.05),但Ⅲ、Ⅳ组升高程度较Ⅰ、Ⅱ组轻(P＜0.05).缺血区心肌细胞超微结构可见Ⅰ组结构破坏严重,Ⅱ、Ⅲ组结构破坏均较Ⅰ组轻,Ⅳ组结构基本接近正常.结论 6%HAES等容血液稀释和川芎嗪能减轻心肌缺血再灌注损伤的程度,二者合用效果更佳.
作者：王鹏；张燕；田玉科；吴震 刊期： 2004年第04期
目的评价Root ZX根尖定位仪对侧向加压法根管充填质量的影响.方法选取拟行根管治疗术的86例患者,单根管牙104个,随机分成实验组和对照组.实验组的工作长度用Root ZX根尖定位仪测定,对照组工作长度用器械探测法测定.两组均用手动逐步后退法根管预备,侧方加压法根管充填.结果适充、超充和欠充在实验组中的比例分别为79%、15%和6%;在对照组中,分别为56%、31%和13%,经统计学处理两组差异有显著性意义(P＜0.05).结论 Root ZX根尖定位仪可以准确测定根管长度,从而明显提高侧向加压法根管充填质量.
作者：于晓霞；欧汝强；宋斌 刊期： 2004年第04期
目的制备稳定高效表达血管生成素-1(Ang-1)的转基因工程骨髓基质干细胞.方法应用基因重组的方法构建Ang-1真核表达质粒pEGFP/Ang-1,利用脂质体将pEGFP/Ang-1转入骨髓基质干细胞,用流式细胞仪检测转染率,用荧光显微镜和免疫细胞化学方法检测蛋白质的表达.结果质粒酶切电泳显示重组质粒构建成功,转染pEGFP/Ang-1质粒的骨髓基质干细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光;流式细胞仪检测转染率约50%;免疫细胞化学检测可见转基因骨髓基质干细胞表达Ang-1蛋白.结论成功制备表达外源性基因Ang-1的骨髓基质干细胞,制备方法是可行的.
作者：余开湖；冯敢生；姜晓兵 刊期： 2004年第04期
目的探讨全反式维甲酸诱导分化的HL60细胞周期变化,进一步揭示细胞分化在细胞周期中的时相特异性.方法以分化诱导剂全反式维甲酸(终浓度为10μmol/L)影响下不同时间点的HL60细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志;碘化丙啶(PI)染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态从而对已分化细胞进行确认;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化,检测G1期的Ki67表达水平;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态.结果①随着药物诱导时间的延长,细胞的体积逐渐增大,被诱导的细胞出现髓系细胞表面的分化标志物CD11b.②全反式维甲酸导致HL60细胞周期的G0/G1峰升高,S期水平下降.③随着药物诱导时间的延长,G1期的Ki67的表达水平逐渐下降.④只在G1期细胞中可见到已分化细胞.结论全反式维甲酸可以诱导HL60细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞,并诱导HL60沿着粒系方向分化,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期.
作者：许培权；龚建平 刊期： 2004年第04期
目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在大鼠分泌性中耳炎模型中耳粘膜中的表达,探讨其在分泌性中耳炎发病机制中的作用.方法取健康SD大鼠40只,于左侧中耳注射脂多糖(LPS),并同时切断同侧三叉神经第三支(下颌神经)制备大鼠分泌性中耳炎模型.右耳仅向中耳注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为实验对照.术后3、7、14、30 d采集中耳粘膜标本,SP法检测中耳粘膜中TNF-α及ICAM-1的表达并计算机图像定量分析处理,HE染色检查中耳粘膜的病理变化.结果 4个时点组左侧中耳粘膜上皮细胞和血管内皮细胞中TNF-α及ICAM-1的表达均较对照组明显增强.14 d组和30 d组TNF-α及ICAM-1的阳性表达范围扩大,在炎性细胞及成纤维细胞也有大量表达.术后3 d组血管内皮细胞和上皮细胞中TNF-α与ICAM-1的表达呈正相关(r=0.74,0.80;均为P＜0.05).3 d组及7 d组中ICAM-1在中耳粘膜血管内皮中的表达强度与中性粒细胞浸润程度正性相关.结论 TNF-α通过上调ICAM-1的表达,从而促进炎性细胞的粘附和聚集,二者可能在分泌性中耳炎中耳粘膜的炎症发生发展中起重要作用.
作者：郭志强；黄孝文；崔永华；高源；王春芳 刊期： 2004年第04期
目的探讨咪达唑仑靶控输注(TCI)系统用于臂丛神经阻滞患者清醒镇静的可行性及中国人咪达唑仑清醒镇静靶控血药浓度.方法对40例ASA Ⅰ～Ⅱ级择期在臂丛神经阻滞下行上肢手术的患者,运用警觉/镇静(OAA/S)评分和脑电双频指数(BIS)评估镇静深度.采用咪达唑仑TCI行清醒镇静,以血浆室为靶控目标,确定相应靶控血药浓度及其与BIS相关性.结果深度清醒镇静(OAA/S评分3分)时所需靶控血药浓度为(118.0±l0.8)ng/ml.BIS与TCI血药浓度(Cp)具有良好的相关性,BIS=-3.03Cp+352.27(r=-0.8854,P＜0.01).结论咪达唑仑靶控输注系统用于臂丛神经阻滞患者清醒镇静可控性良好,镇静深度适宜,对血流动力学和呼吸功能无明显影响,适宜临床推广应用.
作者：刘萍；杨钰香；姚尚龙；武宙阳 刊期： 2004年第04期
目的探讨天然和氧化极低密度脂蛋白(n-VLDL,ox-VLDL)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)的影响.方法将n-VLDL和ox-VLDL作用于培养的HUVEC,用细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)和单核细胞粘附试验检测VCAM-1蛋白在HUVEC的表达,用原位分子杂交检测VCAM-1mRNA的表达.结果正常培养的HUVEC表达VCAM-1,n-VLDL和ox-VLDL促进HUVEC表达VCAM-1,尤以ox-VLDL作用更强.单核细胞粘附试验显示,n-VLDL和ox-VLDL促进单核细胞向HUVEC粘附.结论天然和氧化极低密度脂蛋白可能通过增强血管内皮细胞表达VCAM-1而促进血液单核细胞粘附于血管壁,从而在动脉粥样硬化的早期病变中起重要作用.
作者：瞿智玲；杨全宝；阮秋蓉；朱大和 刊期： 2004年第04期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
