刘美德；赵彤言；菫言德；陆宝麟
目的 从分子水平上探讨登革4型病毒Ban18-30减毒株的毒力相关位点和减毒机制.方法 Ban18原株及Ban18-30减毒株在Vero细胞中培养增殖,收集病毒液,经RNA抽提后RT-PCR扩增C、prM、E、NS1和3′、5′端核苷酸片段并测序,比较分析结果,研究两株病毒的分子特征. 结果 RT-PCR成功扩增出目的 片段,对两株病毒部分基因测定序列后进行对比分析,两株病毒间在C111位和E155位各有1个氨基酸残基发生变化,在3′UTR的219位发生核苷酸改变. 结论 从分子水平证明两株病毒确为DEN-4型病毒,某些基因位点的变化与Ban18-30株病毒毒力减弱有关,其中E155位的突变可能关系大.
作者：刘志文；俞永新；贾丽丽；董关木 刊期： 2008年第05期
目的 分析57例肝泡球蚴病患者阿苯达唑治疗1年后的超声检查结果,评价阿苯达唑治疗效果.方法 对血清学检查(ELISA)阳性和经B型超声检查确诊的57例肝泡球蚴病患者给予阿苯达唑治疗1年后同法复查,根据疗后B超声像变化评价治疗效果. 结果 57例患者使用阿苯达唑治疗1年后B超检查9例钙化痊愈,35例部分钙化好转,8例退化稳定,5例扩大恶化. 结论 阿苯达唑治疗泡球蚴病有效,B型超声检查可用于阿苯达唑等药物治疗后的效果评价.
作者：赵玉敏；才学鹏；景涛；种世桂；景志忠 刊期： 2008年第05期
目的 调查浙江省丽水市狂犬病毒在鼬獾中的感染率,为防制该病提供科学依据.方法 收集丽水市狂犬病疫区鼬獾脑组织标本,用DFA和RT-PCR方法分别检测狂犬病毒特异性抗原及核酸,确定阳性标本. 结果 20份鼬獾脑组织标本经DFA检测狂犬病毒抗原,阳性1份,阳性率为5.0%.阳性脑组织提取物经RT-PCR,得到256 bp的扩增片段,大小与理论值一致. 结论 首次用免疫学和分子生物学方法检测证实丽水市存在鼬獾狂犬病毒感染.
作者：雷永良；陈秀英；叶夏良；柳付明；叶碧峰 刊期： 2008年第05期
目的 用胶体金标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体制备金标AP33 mAb,研制开发出一种能快速、简便、有效检测阴道毛滴虫感染的免疫层析( GICA)试纸条.方法 采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体,选择佳反应模式组装试纸条.用该试纸条检测滴虫性阴道炎患者及非滴虫性阴道炎患者白带中的靶抗原,鉴定方法的敏感性和特异性. 结果 用制备的免疫层析试纸条检测重组AP33抗原的低量为20 ng/ml,其中以单克隆抗体4A2为包被抗体、单克隆抗体4F8为金标抗体的试纸条检测效果佳.以湿片法为标准,用该试纸条检测60例滴虫性阴道炎患者白带,敏感性为90.0%(54/60);检测60例非滴虫性阴道炎患者白带,特异性为95.0%(57/60).两法的总符合率为92.5%. 结论 GICA检测阴道毛滴虫特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.
作者：王雪玲；蔡敏；俞石芳；黄慧聪；潘长旺 刊期： 2008年第05期
将麻疯树素配成不同浓度,观察不同时间钉螺及淡水鱼的死亡率.试验设萃取剂和清水对照.结果麻疯树素浓度为0.75 mg/L 24 h钉螺开始死亡,6.00 mg/L 48 h钉螺死亡率100%,室内浸杀钉螺24 h的LC50为3.40 mg/L;该药对淡水鱼苗有中度毒性,浸杀鲫鱼苗96 h的LC50为1.05 mg/L,浸杀草鱼苗96 h的LC50为2.78 mg/L.麻疯树素是一种有应用潜力的植物杀螺剂.
作者：徐明星；程忠跃；杨燕；黄四喜；曾庆海；姚群；胡来林；高竹琴 刊期： 2008年第05期
目的 构建、原核表达恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A 融合基因并对其表达产物的生物学活性进行评价.方法 根据按蚊对编码同种氨基酸不同密码子的偏嗜性,对鼠源性恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体4B7编码基因进行改造,并与按蚊抗菌肽Cecropin A基因融合;将融合基因Cep&m4B7克隆入原核表达载体pET32a(+)并在大肠埃希菌中进行表达;对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,体外抑菌试验鉴定表达蛋白的抑菌活性. 结果 构建了融合基因Cep&m4B7和重组表达质粒pET32a(+)-Cep&m4B7,融合基因在大肠埃希菌中以包涵体形式高效表达融合蛋白,Western blot显示重组蛋白能被抗6-His抗体识别;琼脂糖扩散法显示纯化后的目的 蛋白无抑菌活性. 结论 成功构建了融合基因Cep&m4B7,该基因在大肠埃希菌中高效表达,表达产物纯化后无体外抑菌活性.
作者：陈辉华；陈晓光 刊期： 2008年第05期
阴道毛滴虫病毒是专性寄生于阴道毛滴虫体内的一种寄生性原虫病毒,阴道毛滴虫病毒的发现为研究其细胞分子生物学特性提供了新的思路和工具.本文综述了近年来对阴道毛滴虫病毒的研究进展.
作者：赵月平；张西臣；刘晓峰；宫鹏涛 刊期： 2008年第05期
目的 用蛋白质组学的方法研究全长丙肝病毒RNA转染细胞的差异表达蛋白,观察差异表达蛋白GRP78的表达变化.方法 提取全长丙肝病毒RNA转染Huh-7细胞和未转染Huh-7细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF质谱分析,鉴定差异表达蛋白.应用RTQ-PCR检测GRP78的相对表达量. 结果 经双向凝胶电泳和质谱鉴定,共发现54个差异表达蛋白,其中包括GRP78蛋白.RTQ-PCR检测结果显示,在转染初期GRP78基因转录显著上调,转染24 h的相对表达率是未转染细胞的2.104倍,后随时间推移逐步下调. 结论 建立了重复性较好、分辨率较高的全长丙肝病毒RNA转染细胞2D图谱.GRP78蛋白的显著差异表达提示GRP78蛋白在丙肝的发生和发展中起一定的作用.
作者：寻萌；赵四海；楚雍烈；曹春霞；安润；宋娟；徐琨；邵明明 刊期： 2008年第05期
目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗.方法 以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的 片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析.以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应. 结果 成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白.Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别. 结论 在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因.整体重组酵母活菌具有免疫原性.
作者：王芳；吴少庭；黄汉菊；李俊华；付小强；甘燕；雷蕾 刊期： 2008年第05期
目的 调查齐氏姬鼠体表寄生蚤类构成情况,初步探讨齐氏姬鼠与其体表寄生蚤间的物种-样方(即物种-面积,以下均称物种-样方)关系.方法 在云南省的19个县(市)进行现场抽样调查,统计捕获的齐氏姬鼠及其体表寄生蚤数.将齐氏姬鼠随机编号,并按每50只一组等分,统计每组所获蚤类种数.以捕获到的齐氏姬鼠数为X轴,蚤种数为Y轴绘制散点图. 结果 在齐氏姬鼠体表收集到10种蚤类昆虫.特新蚤和棕形额蚤为优势种.从物种-样方关系图可以看出,蚤种数随着齐氏姬鼠的个体数增加而增加.在齐氏姬鼠为200只时,蚤种数迅速增加到7种;齐氏姬鼠1 081只时,蚤类物种数缓慢增加至10种. 结论 蚤种数随着齐氏姬鼠个体数增加而增加,当齐氏姬鼠个体数量增加到一定量时,蚤种数仍然保持增长趋势,但增长速度渐缓.
作者：张胜勇；吴滇；郭宪国；门兴元；龚正达；张丽云；王政昆 刊期： 2008年第05期
目的 研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗.应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性. 结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒.测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白.应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P＜0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应. 结论 该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值.
作者：李瑾；魏庆宽；徐秀来；傅婷霞；崔勇；肖婷；王洪法；张佃波；王用斌；黄炳成；闫歌；韩广东 刊期： 2008年第05期
目的 应用PCR扩增大肠埃希菌O2、O78及融合双价弱毒菌株O2,78的外膜蛋白A(ompA)基因,并进行克隆.方法 根据GenBank中人源大肠埃希菌K-12的ompA核苷酸序列设计特异引物,应用PCR对大肠埃希菌O2、O78及融合双价弱毒菌株O2,78的ompA 基因进行体外扩增、克隆和序列分析. 结果 O2、O78和O2,78经PCR获得的ompA基因片段大小为1 041 bp,与理论值相符;经过克隆和测序分析,该基因的核苷酸序列均由2 271 nt组成,编码1个由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A,三菌株ompA基因核苷酸序列与GenBank提供的已知基因序列比较,同源性均为100%. 结论 本研究成功克隆了大肠埃希菌ompA基因全长.
作者：向会耀；谭玉梅；向雅倩；钟守林；郝葆青 刊期： 2008年第05期
采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测1 033例孕后自然流产者、233例原发不孕妇女(实验组)及10 284例正常孕产妇(对照组)血清弓形虫抗体,阳性率分别为6.97%、13.30%和1.89%,差异有统计学意义(P＜0.01).表明弓形虫感染是造成自然流产、不孕类不良孕产结局的原因之一.
作者：郭彩琴；朱云霞；王俊；项静英；陈道桢 刊期： 2008年第05期
目的 设计含赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS)的蜱抗凝血肽(TAP)突变体基因序列,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中与硫氧还蛋白(Trx)融合表达,以获得Trx-TAP-KGDS融合蛋白.方法 人工合成目的 基因,定向克隆于含Trx基因的高效原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-TAP-KGDS,并转化BL21感受态菌,以PCR及双酶切鉴定阳性克隆;含正确重组质粒的工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物. 结果 重组质粒经PCR及双酶切鉴定,均获得约209 bp的基因片段,与预期大小一致;SDS-PAGE分析显示,含重组质粒的工程菌在IPTG的诱导下高效表达分子质量单位约为24 ku的蛋白质,该蛋白以水溶性形式为主. 结论 构建了含KGDS基序的TAP突变基因的原核表达载体pET32a(+)-TAP-KGDS,并成功进行了融合表达,为进一步研究其抗凝血活性打下了基础.
作者：陈炳龙；叶彬；武卫华 刊期： 2008年第05期
阿奇霉素是近几年开发生产的第2代大环内酯类抗生素,体外试验和动物试验及在现场疟疾病人治疗观察结果表明,单服该药对抗性株和敏感株疟疾感染均具有治疗和预防作用,与其他抗疟药物配伍使用效果更佳.
作者：贺颖；黄亚铭 刊期： 2008年第05期
对新疆农三师农牧工家庭成员血清学调查,包虫总感染率为2.18%,流行严重地区感染率达30.97%.健康教育前后牛、羊的患病率分别为17.34%和3.67%,牧工及屠宰人员包虫病知晓率分别为8.56%和64.56%,高危行为率分别为97.86%和55.27%,犬驱虫率分别为5.30%和32.47%.
作者：魏宏；唐开哲；白润本 刊期： 2008年第05期
目的 比较具有不同致病性以及毒力的5株内阿米巴的14-3-3蛋白序列,并选取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株进行相关生物信息学预测,用以指导进一步实验研究.方法 收集各虫株滋养体的基因组DNA,根据GenBank收录的溶组织内阿米巴编码基因序列设计特异引物,以基因组DNA为模板扩增目的 基因片段,测序后利用生物信息学网站的各种在线分析工具和Genetyx软件ver 13.0,对所得序列进行比较,构建分子进化树,并对溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株的14-3-3蛋白进行相关的生物信息学分析. 结果 5株内阿米巴属虫株均含有3个14-3-3基因,编码的氨基酸序列同源性较高,个别位点存在差异.取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1序列与其他物种的同源蛋白比较并构建分子进化树,与种系进化过程非常吻合.根据生物信息学分析结果预测,溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1含720个碱基,编码239个氨基酸;14-3-3-2含717个碱基,编码238个氨基酸;14-3-3-3含723个碱基,编码240个氨基酸.3种异构体都带有2个14-3-3蛋白家族标记,含有多个潜在的磷酸化位点,但不含线粒体、过氧化物酶体等细胞器定位序列以及信号肽.该蛋白在大肠埃希菌中表达的半衰期＞10 h. 结论 内阿米巴属14-3-3基因高度保守.生物信息学分析结果提示14-3-3蛋白是研究物种进化的理想分子.
作者：林育涛；付永峰；程训佳；Hiroshi Tachibana 刊期： 2008年第05期
目的 制备临床分离的耐药大肠埃希菌脂多糖(LPS)脂质体并考察其免疫保护作用.方法 采用逆向蒸发法制备大肠埃希菌LPS脂质体,透射电镜观察其形态,激光散射法分析其粒径分布,鲎试验法(LAL)测定其活性;用LPS脂质体免疫小鼠,以LPS 2倍完全致死剂量攻击小鼠,观察并记录结果. 结果 大肠埃希菌LPS脂质体常温下呈乳白色混悬液,透射电镜下呈多层圆形或椭圆形小囊,粒径为(300.195±108.932)nm;LAL法测定E. coli LPS脂质体和E. coli ob55∶b5 LPS脂质体活性,均比未经脂质体包被的LPS降低99.9%;E. coli LPS脂质体和E.coli ob55∶b5 LPS脂质体免疫鼠接受E. coli LPS攻击后72 h的存活率分别为91.67%和75.00%,与对照组存活率16.67%比较,差异均有统计学意义(P=0.000 322和P=0.000 614). 结论 大肠埃希菌LPS脂质体制备方法可行,制备的LPS脂质体对该菌属的LPS攻击均具有一定的免疫保护作用.
作者：陆书华；尚玮；徐建设；李晓霞；钟启平 刊期： 2008年第05期
目的 调查青海省东部农村人体猪带绦/囊虫病的流行情况.方法 使用问卷进行流行因素调查;粪抗原ELISA法用于绦虫病检测;生理盐水直接涂片法和醛醚法镜检绦虫卵用于绦虫病人的确诊;囊虫病ELISA法用于囊虫病检测. 结果 调查4个自然村,共766人.镜检598人,确诊绦虫病病人2例,患病率为0.33%;绦虫病粪抗原ELISA检查512人份,阳性率为9.18%;囊虫病ELISA检查652人,阳性率为4.14%. 结论 该地区绦/囊虫病流行仍然很严重.
作者：马俊英；王虎；Ito.A；Craig PS；吴献洪；张静宵；刘培运；曾诚；刘海青；蔡辉霞；刘玉芳；马霄；刘巴睿；赵艳梅 刊期： 2008年第05期
目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp )可塑区-JHP940、JHP947、JHP949基因与胃、十二指肠疾病的关系;鉴定JHP947基因是否表达蛋白.方法 从胃粘膜活检组织中分离培养Hp,PCR 扩增分离菌株的JHP940、JHP947、JHP949基因,分析基因检出与临床疾病的关系;以Biodesign软件确定并合成3个JHP947肽段,KLH交联免疫家兔获得多克隆抗体,免疫印迹方法鉴定JHP947基因是否表达相应蛋白. 结果 分离获得108株Hp,目的 基因在胃炎、溃疡、胃癌标本中的检出率分别为:JHP940 30.6%、22.6%、40.0%,JHP947 3.2%、32.2%、33.3%,JHP949 0、3.2%、13.3%,经χ2检验,JHP940在胃炎、溃疡、胃癌各组中的检出率差异均无统计学意义(P>0.05 );JHP947在胃癌、溃疡组中的检出率显著高于胃炎组(χ2=12.04,P<0.002 27;χ2=8.64,P<0.004 17),而在胃癌、溃疡组中的检出率差异无统计学意义(P>0.012 5);JHP949在胃癌组中的检出率显著高于胃炎组(χ2=8.48,P<0.004 17),而在其他组间差异无统计学意义(χ2=1.69～2.02,P>0.012 5).JHP947和JHP949的检出率呈正相关(χ2=6.034,P<0.05),JHP947和JHP940的检出率无显著相关性(χ2=2.939,P>0. 05).HpJ99和临床分离株的JHP947基因均表达相应蛋白. 结论 JHP947与胃癌和消化性溃疡的发生密切相关,JHP947和JHP949的检出率呈正相关.JHP947基因表达相应蛋白.
作者：孙各琴；佘菲菲；李能；陈豪 刊期： 2008年第05期
中国病原生物学杂志
主管:中国寄生虫病防治杂志
主办：中华人民共和国卫生部
