王芳；吴少庭；黄汉菊；李俊华；付小强；甘燕；雷蕾
目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗.方法 以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的 片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析.以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应. 结果 成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白.Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别. 结论 在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因.整体重组酵母活菌具有免疫原性.
作者：王芳；吴少庭；黄汉菊；李俊华；付小强；甘燕；雷蕾 刊期： 2008年第05期
阿奇霉素是近几年开发生产的第2代大环内酯类抗生素,体外试验和动物试验及在现场疟疾病人治疗观察结果表明,单服该药对抗性株和敏感株疟疾感染均具有治疗和预防作用,与其他抗疟药物配伍使用效果更佳.
作者：贺颖；黄亚铭 刊期： 2008年第05期
采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测1 033例孕后自然流产者、233例原发不孕妇女(实验组)及10 284例正常孕产妇(对照组)血清弓形虫抗体,阳性率分别为6.97%、13.30%和1.89%,差异有统计学意义(P＜0.01).表明弓形虫感染是造成自然流产、不孕类不良孕产结局的原因之一.
作者：郭彩琴；朱云霞；王俊；项静英；陈道桢 刊期： 2008年第05期
目的 研究登革病毒4个血清型在C6/36细胞上的受体差异.方法 用病毒与细胞受体结合的VOPBA方法进行鉴定. 结果 C6/36细胞的4个血清型登革病毒受体分子质量相同,约为35 ku. 结论 C6/36细胞上4个血清型登革病毒受体相同.
作者：刘美德；赵彤言；菫言德；陆宝麟 刊期： 2008年第05期
目的 应用PCR扩增大肠埃希菌O2、O78及融合双价弱毒菌株O2,78的外膜蛋白A(ompA)基因,并进行克隆.方法 根据GenBank中人源大肠埃希菌K-12的ompA核苷酸序列设计特异引物,应用PCR对大肠埃希菌O2、O78及融合双价弱毒菌株O2,78的ompA 基因进行体外扩增、克隆和序列分析. 结果 O2、O78和O2,78经PCR获得的ompA基因片段大小为1 041 bp,与理论值相符;经过克隆和测序分析,该基因的核苷酸序列均由2 271 nt组成,编码1个由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A,三菌株ompA基因核苷酸序列与GenBank提供的已知基因序列比较,同源性均为100%. 结论 本研究成功克隆了大肠埃希菌ompA基因全长.
作者：向会耀；谭玉梅；向雅倩；钟守林；郝葆青 刊期： 2008年第05期
目的 用胶体金标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体制备金标AP33 mAb,研制开发出一种能快速、简便、有效检测阴道毛滴虫感染的免疫层析( GICA)试纸条.方法 采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体,选择佳反应模式组装试纸条.用该试纸条检测滴虫性阴道炎患者及非滴虫性阴道炎患者白带中的靶抗原,鉴定方法的敏感性和特异性. 结果 用制备的免疫层析试纸条检测重组AP33抗原的低量为20 ng/ml,其中以单克隆抗体4A2为包被抗体、单克隆抗体4F8为金标抗体的试纸条检测效果佳.以湿片法为标准,用该试纸条检测60例滴虫性阴道炎患者白带,敏感性为90.0%(54/60);检测60例非滴虫性阴道炎患者白带,特异性为95.0%(57/60).两法的总符合率为92.5%. 结论 GICA检测阴道毛滴虫特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.
作者：王雪玲；蔡敏；俞石芳；黄慧聪；潘长旺 刊期： 2008年第05期
目的 设计含赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS)的蜱抗凝血肽(TAP)突变体基因序列,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中与硫氧还蛋白(Trx)融合表达,以获得Trx-TAP-KGDS融合蛋白.方法 人工合成目的 基因,定向克隆于含Trx基因的高效原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-TAP-KGDS,并转化BL21感受态菌,以PCR及双酶切鉴定阳性克隆;含正确重组质粒的工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物. 结果 重组质粒经PCR及双酶切鉴定,均获得约209 bp的基因片段,与预期大小一致;SDS-PAGE分析显示,含重组质粒的工程菌在IPTG的诱导下高效表达分子质量单位约为24 ku的蛋白质,该蛋白以水溶性形式为主. 结论 构建了含KGDS基序的TAP突变基因的原核表达载体pET32a(+)-TAP-KGDS,并成功进行了融合表达,为进一步研究其抗凝血活性打下了基础.
作者：陈炳龙；叶彬；武卫华 刊期： 2008年第05期
调查十堰市小学生肠道寄生虫感染率为26.9%,巿区(15.5%)和各县巿(29.4%)小学生的感染率差异有显著性(P<0.01);小学一、二、三年级学生和男、女生的感染率差异无显著性(P>0.05).
作者：朱名胜；耿家荣；宋明华；王绍基 刊期： 2008年第05期
目的 构建、原核表达恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A 融合基因并对其表达产物的生物学活性进行评价.方法 根据按蚊对编码同种氨基酸不同密码子的偏嗜性,对鼠源性恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体4B7编码基因进行改造,并与按蚊抗菌肽Cecropin A基因融合;将融合基因Cep&m4B7克隆入原核表达载体pET32a(+)并在大肠埃希菌中进行表达;对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,体外抑菌试验鉴定表达蛋白的抑菌活性. 结果 构建了融合基因Cep&m4B7和重组表达质粒pET32a(+)-Cep&m4B7,融合基因在大肠埃希菌中以包涵体形式高效表达融合蛋白,Western blot显示重组蛋白能被抗6-His抗体识别;琼脂糖扩散法显示纯化后的目的 蛋白无抑菌活性. 结论 成功构建了融合基因Cep&m4B7,该基因在大肠埃希菌中高效表达,表达产物纯化后无体外抑菌活性.
作者：陈辉华；陈晓光 刊期： 2008年第05期
目的 从分子水平上探讨登革4型病毒Ban18-30减毒株的毒力相关位点和减毒机制.方法 Ban18原株及Ban18-30减毒株在Vero细胞中培养增殖,收集病毒液,经RNA抽提后RT-PCR扩增C、prM、E、NS1和3′、5′端核苷酸片段并测序,比较分析结果,研究两株病毒的分子特征. 结果 RT-PCR成功扩增出目的 片段,对两株病毒部分基因测定序列后进行对比分析,两株病毒间在C111位和E155位各有1个氨基酸残基发生变化,在3′UTR的219位发生核苷酸改变. 结论 从分子水平证明两株病毒确为DEN-4型病毒,某些基因位点的变化与Ban18-30株病毒毒力减弱有关,其中E155位的突变可能关系大.
作者：刘志文；俞永新；贾丽丽；董关木 刊期： 2008年第05期
目的 探讨乙型肝炎病毒感染孕妇胎盘中细胞因子的笔表达以及与胎盘细胞凋亡的关系,阐明乙型肝炎病毒感染孕妇致异常妊娠的机理.方法 选择30例HBV感染孕妇死胎胎盘作为研究组,正常分娩后的胎盘20例作为对照组,应用免疫组织化学法测定各组胎盘组织中TNF和IL-18的表达,应用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡指数. 结果 在正常胎盘组织中有一定量的TNF和IL-18的表达,但在HBV感染孕妇死胎胎盘组织中TNF和IL-18的阳性细胞数显著高于对照组(P<0.01);研究组胎盘细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),合体滋养细胞的凋亡指数高于滋养细胞,在正常对照组两种细胞的凋亡指数差异有显著性(P<0.05),而在研究组两种细胞的凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05).经相关分析发现,胎盘细胞的凋亡指数与TNF、IL-18呈正相关,(A=6.38,B=0.82,r=0.54;A=9.66,B=0.52,r=0.61). 结论 HBV感染孕妇死胎胎盘中TNF和IL-18的表达增加,使胎盘细胞凋亡加速,影响胎盘的正常功能,是导致胎儿异常的原因之一.
作者：于爱莲；张延玲；乔云波；邓文；刘丹茹；张忠；王玉；景菲 刊期： 2008年第05期
目的 研究单剪接及双剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒基因编码剪接特异性蛋白(分别为TPss及TPds)对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制.方法 PCR扩增TPss及TPds编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC.采用FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA.以Western blot检测目的蛋白的表达,通过Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化并以半定量RT-PCR进一步验证. 结果 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TPss及pcDNA3.1/HisC-TPds,在Huh7细胞中能分别表达TPss(单剪接)及TPds(双剪接)蛋白.TPss蛋白导致Huh7细胞DGKβ(diacylglycerol kinase beta )等4个基因转录上调,ZNF652( zinc finger protein 652)等5个基因转录下降;TPds蛋白导致细胞MTSS1( Metastasis suppressor 1)等3个基因转录上调,WARS2基因(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)转录下降. 结论 2.2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接体编码剪接特异性蛋白可能影响肝细胞骨架的重塑、细胞内物质代谢等方面,与肝细胞的增生、迁移及代谢异常密切相关.
作者：陈婉南；郭丹华；陈金烟；林万松；林建银；林旭 刊期： 2008年第05期
阴道毛滴虫病毒是专性寄生于阴道毛滴虫体内的一种寄生性原虫病毒,阴道毛滴虫病毒的发现为研究其细胞分子生物学特性提供了新的思路和工具.本文综述了近年来对阴道毛滴虫病毒的研究进展.
作者：赵月平；张西臣；刘晓峰；宫鹏涛 刊期： 2008年第05期
目的 制备临床分离的耐药大肠埃希菌脂多糖(LPS)脂质体并考察其免疫保护作用.方法 采用逆向蒸发法制备大肠埃希菌LPS脂质体,透射电镜观察其形态,激光散射法分析其粒径分布,鲎试验法(LAL)测定其活性;用LPS脂质体免疫小鼠,以LPS 2倍完全致死剂量攻击小鼠,观察并记录结果. 结果 大肠埃希菌LPS脂质体常温下呈乳白色混悬液,透射电镜下呈多层圆形或椭圆形小囊,粒径为(300.195±108.932)nm;LAL法测定E. coli LPS脂质体和E. coli ob55∶b5 LPS脂质体活性,均比未经脂质体包被的LPS降低99.9%;E. coli LPS脂质体和E.coli ob55∶b5 LPS脂质体免疫鼠接受E. coli LPS攻击后72 h的存活率分别为91.67%和75.00%,与对照组存活率16.67%比较,差异均有统计学意义(P=0.000 322和P=0.000 614). 结论 大肠埃希菌LPS脂质体制备方法可行,制备的LPS脂质体对该菌属的LPS攻击均具有一定的免疫保护作用.
作者：陆书华；尚玮；徐建设；李晓霞；钟启平 刊期： 2008年第05期
目的 分析57例肝泡球蚴病患者阿苯达唑治疗1年后的超声检查结果,评价阿苯达唑治疗效果.方法 对血清学检查(ELISA)阳性和经B型超声检查确诊的57例肝泡球蚴病患者给予阿苯达唑治疗1年后同法复查,根据疗后B超声像变化评价治疗效果. 结果 57例患者使用阿苯达唑治疗1年后B超检查9例钙化痊愈,35例部分钙化好转,8例退化稳定,5例扩大恶化. 结论 阿苯达唑治疗泡球蚴病有效,B型超声检查可用于阿苯达唑等药物治疗后的效果评价.
作者：赵玉敏；才学鹏；景涛；种世桂；景志忠 刊期： 2008年第05期
目的 了解住院病人弓形虫感染情况.方法 采集吉林大学第一医院637例住院病人和400名在读大学生血清,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测弓形虫抗体,检测结果通过χ2检验进行组间感染率差异分析. 结果 住院病人弓形虫抗体阳性率为16.95 %(108/637),在校大学生阳性率为1.75%(7/400),差异具统计学意义(P＜0.001).其中肿瘤及系统性红斑狼疮病人阳性率为15.43%(29/188),心血管病人阳性率为17.57%(13/74),肝胆胃肠疾病病人阳性率为25.00%(19/76),脑血管病人阳性率为14.29%(7/49),炎症病人阳性率为17.82%(18/101),糖尿病病人和其他疾病病人阳性率分别为0(0/12)和16.06%(22/137),差异有统计学意义(P＜0.05);男性阳性率19.29%(65/337),女性阳性率14.33%(43/300),差异无统计学意义(P＞0.05);儿童阳性率21.74%(5/23),成人阳性率16.78%(103/614),差异无统计学意义(P＞0.05);城镇病人阳性率17.18%(84/489),农村病人阳性率16.22%(24/148),差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 吉林大学第一医院住院病人弓形虫抗体阳性率显著高于健康人.提示医院就诊病人中可能有弓形虫感染或患弓形虫病.
作者：崔黎明；霍威；李淑红；刘妮 刊期： 2008年第05期
本文报道了血吸虫性膀胱炎1例.患者主要表现为膀胱刺激症状及排尿困难,偶伴血尿.拟诊为膀胱肿瘤,术后经病理诊断确诊.
作者：张浩；张育新；邹保国；邓全红；舒春桂 刊期： 2008年第05期
目的 比较具有不同致病性以及毒力的5株内阿米巴的14-3-3蛋白序列,并选取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株进行相关生物信息学预测,用以指导进一步实验研究.方法 收集各虫株滋养体的基因组DNA,根据GenBank收录的溶组织内阿米巴编码基因序列设计特异引物,以基因组DNA为模板扩增目的 基因片段,测序后利用生物信息学网站的各种在线分析工具和Genetyx软件ver 13.0,对所得序列进行比较,构建分子进化树,并对溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株的14-3-3蛋白进行相关的生物信息学分析. 结果 5株内阿米巴属虫株均含有3个14-3-3基因,编码的氨基酸序列同源性较高,个别位点存在差异.取溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1序列与其他物种的同源蛋白比较并构建分子进化树,与种系进化过程非常吻合.根据生物信息学分析结果预测,溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株14-3-3-1含720个碱基,编码239个氨基酸;14-3-3-2含717个碱基,编码238个氨基酸;14-3-3-3含723个碱基,编码240个氨基酸.3种异构体都带有2个14-3-3蛋白家族标记,含有多个潜在的磷酸化位点,但不含线粒体、过氧化物酶体等细胞器定位序列以及信号肽.该蛋白在大肠埃希菌中表达的半衰期＞10 h. 结论 内阿米巴属14-3-3基因高度保守.生物信息学分析结果提示14-3-3蛋白是研究物种进化的理想分子.
作者：林育涛；付永峰；程训佳；Hiroshi Tachibana 刊期： 2008年第05期
目的 探讨含人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)AD169株gB680糖蛋白基因和突变的pp65基质蛋白基因(pp65m)DNA疫苗(pVAX1/gB680+pp65m)的免疫效果.方法 重组质粒pVAX1/gB680+pp65m转染COS-7细胞,用RT-PCR法和Western blot法检测瞬时表达产物;经碱裂解法大量提取质粒pVAX1/gB680+pp65m,经Sepharose 4FF柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠(SPF),并通过ELISA法和脾淋巴细胞转化实验检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答效果. 结果 重组质粒pVAX1/gB680+pp65m能够在真核细胞中表达,表达蛋白的分子质量单位约为124 ku,且能被抗HCMV血清识别.用该重组质粒第2次免疫后第3 d受试小鼠开始产生抗HCMV抗体,第2次免疫后第8周,淋巴细胞转化试验SI值为1.951±0.112,对照组为1.095±0.060,差异有统计学意义. 结论 含HCMV AD169株gB680糖蛋白基因和突变pp65蛋白基因的DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定强度的体液免疫和细胞免疫应答.
作者：李猛；邵丽军；郭立君；王宣军 刊期： 2008年第05期
目的 调查齐氏姬鼠体表寄生蚤类构成情况,初步探讨齐氏姬鼠与其体表寄生蚤间的物种-样方(即物种-面积,以下均称物种-样方)关系.方法 在云南省的19个县(市)进行现场抽样调查,统计捕获的齐氏姬鼠及其体表寄生蚤数.将齐氏姬鼠随机编号,并按每50只一组等分,统计每组所获蚤类种数.以捕获到的齐氏姬鼠数为X轴,蚤种数为Y轴绘制散点图. 结果 在齐氏姬鼠体表收集到10种蚤类昆虫.特新蚤和棕形额蚤为优势种.从物种-样方关系图可以看出,蚤种数随着齐氏姬鼠的个体数增加而增加.在齐氏姬鼠为200只时,蚤种数迅速增加到7种;齐氏姬鼠1 081只时,蚤类物种数缓慢增加至10种. 结论 蚤种数随着齐氏姬鼠个体数增加而增加,当齐氏姬鼠个体数量增加到一定量时,蚤种数仍然保持增长趋势,但增长速度渐缓.
作者：张胜勇；吴滇；郭宪国；门兴元；龚正达；张丽云；王政昆 刊期： 2008年第05期
中国病原生物学杂志
主管:中国寄生虫病防治杂志
主办：中华人民共和国卫生部
