学术投稿

弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

龙彩虹;吴少庭;翁亚彪;高世同;张仁利;林绮萍;谢德华;卜春玲;雷明军;黄达娜

关键词:弓形虫, SAG2, 基因克隆, 表达
摘要:目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体,并在Vero细胞中表达. 方法设计1对引物,从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因,构建pVAX1-SAG2真核表达重组质粒.以限制性内切酶KpnⅠ和 EcoRⅠ进行双酶切、PCR鉴定,纯化后进行测序鉴定.脂质体介导法瞬时转染Vero细胞,同时以pVAX1为对照,48 h后收集细胞, Western-blot鉴定. 结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577 bp的SAG2基因,构建了真核表达载体pVAX1-SAG2,在质脂体介导下转染Vero细胞,质粒DNA成功的转染到细胞中.通过Westen-blot分析,细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17 ku大小的条带,与预计大小一致. 结论真核表达载体pVAX1-SAG2在Vero细胞中有一定表达,且有一定的活性.
中国病原生物学杂志相关文献
  • 隐孢子虫SSU rRNA基因的巢式PCR-RFLP分析

    目的建立用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)- 限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)检测、鉴别微小隐孢子虫(Cryptospordium parvum)和安氏隐孢子虫(C. andersoni)的方法. 方法用巢式PCR技术扩增长春市人和牛粪便中C. parvum与C. andersoni的Small-Subunit rRNA (SSU rRNA)部分基因,并克隆和测序.扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,进行RFLP分析,并与GenBank上的17株隐孢子虫相应序列进行对比分析和系统发育分析. 结果 C. parvum HCC1、C. parvum BOCC1和C. andersoni BOCC1扩增产物片段大小分别为830 bp、830 bp和828 bp,经SspⅠ和VspⅠ分别单酶切后形成2种不同的RFLP图谱,根据RFLP图谱可鉴别C. parvum与C. andersoni.序列分析结果显示,C. parvum HCC1与国外牛源C. parvum BOH6、C. parvum GCH1、鹿源C. parvum DR1相应序列同源性均为99.3%;C. parvum BOCC1与国外牛源C. parvum BOH6、C. parvum GCH1、鹿源C. parvum DR1相应序列同源性均为99.5%;C. andersoni BOCC1与国外C. andersoni相应序列同源性为99.9%.系统发育分析结果显示,隐孢子虫虫种形成了2个群,1个群包括C. parvum、C. baileyi、C. meleagridis、C. felis和C. wrairi,另1个群包括C. andersoni、C. muris和C. serpentis. 结论用巢式PCR技术可扩增隐孢子虫基因组DNA中特异片段,根据RFLP图谱可鉴别C. parvum和C. andersoni,表明本实验建立的检测、鉴别C. parvum和C. andersoni的巢式PCR- RFLP方法有效,为我国隐孢子虫分类、隐孢子虫病的分子流行病学研究和诊断打下了良好基础.

    作者:姚龙泉;张西臣;Lihua Xiao;吴涛;李建华;尹继刚 刊期: 2004年第06期

  • 3种培养基体外培养人芽囊原虫的效果观察

    目的观察人芽囊原虫在3种培养基中的生长繁殖情况,以探讨佳的培养方法. 方法从大学生粪便中分离人芽囊原虫,转种至3种不同培养基,定时观察人芽囊原虫的生长繁殖情况,根据原虫密度评价培养效果. 结果培养96 h后,Locke's鸡蛋血清(LES)双相培养基中的人芽囊原虫密度高,改良Jones单相液体培养基次之, Locke's琼脂血清(LAS)双相培养基原虫密度低,差异有显著性(P<0.05);观察3种培养基中的原虫密度高峰持续时间分别为360 h、96 h和72 h,长存活时间分别为552 h、336 h和168 h. 结论 Locke's鸡蛋血清双相培养基较适用于人芽囊原虫体外增殖培养.

    作者:苏水莲;严宜明;陈桂凤;廖华;张瑞其;胡雅琼 刊期: 2004年第06期

  • 中国云南吸虱昆虫种类初步调查

    目的初步了解云南省吸虱昆虫的基本种类及分布状况. 方法在对云南省9个县(市)进行抽样调查的基础上,归纳、总结了从小型哺乳动物(小兽)体表所采集到的吸虱昆虫种类.小兽用鼠笼加食饵诱捕,从小兽宿主体表所采集的吸虱经过常规逐级脱水、透明、干燥处理、制成玻片标本后于显微镜下鉴定. 结果在9个县(市)共捕获到2 745只小兽,经分类鉴定隶属5目(啮齿目、食虫目、攀鼩目、兔形目和食肉目)、10科、25属、41种.从各种小兽宿主体表共采集到吸虱昆虫18 165只,经分类鉴定隶属4科、6属、22种,其种类明显少于宿主种类.大多数小兽宿主体表都有固定的吸虱种类寄生(但种类数很少,1~4种). 结论小兽体表吸虱昆虫种类较少,多数小兽体表都有固定的吸虱种类寄生.

    作者:郭宪国;钱体军;郭利军;王晶;董文鸽;张励;马志敏;李伟 刊期: 2004年第06期

  • 昌宁县湾甸乡内源性疟疾点状暴发特征分析

    湾甸乡地处云南昌宁县西部,东经99°23′12″~99°24′51″,北纬24°26′00″~24°33′45″.辖5个行政村、48个村民小组,总人口12 316人,以傣族为主.总面积314 km2,属亚热带气候,年平均气温22.3℃,年均降雨量1 100 mm,低海拔608 m,适宜当地媒介按蚊孳生及疟疾传播,是昌宁县主要疟区之一.1970年7月,湾甸乡疟疾暴发流行,疟史率高达60.00%.1971年再度全面暴发流行,疟史率达58.91%.通过多年的积极防治,疟疾发病率降至1以下,1993年达到卫生部基本消灭疟疾标准,连续11年未出现内源性病例.

    作者:李贵华 刊期: 2004年第06期

  • 时间序列分析预测洞庭湖区退田还湖试点血吸虫病疫情变化趋势

    目的预测洞庭湖区退田还湖试点退田还湖前后血吸虫病疫情的变化趋势,为血吸虫病防治策略的制定提供依据. 方法应用时间序列中指数平滑法、移动平均法、自相关分析及自回归综合移动平均法(ARIMA)对洞庭湖区退田还湖试点血吸虫病疫情建模、分析,并比较4种方法的预测效果. 结果集成垸试点和濠口试点ARIMA模型粪检阳性率误差平方和小,分别为100.16和22.54.其ARIMA预测模型分别为t=1.2877Yt-1+0.4246Yt-2-0.7123 Yt-3-0.4305et-1+0.9981et-2-0.0544和t=0.6487Yt-1+0.3513Yt-2+0.8671et-1+0.0223;退田还湖后的患病率预测值高于退田还湖前. 结论退田还湖后血吸虫病粪检阳性率预测值有升高的趋势,应加强当地的血吸虫病防治工作.

    作者:赛晓勇;闫永平;张治英;蔡凯平;李岳生;周晓农;徐德忠 刊期: 2004年第06期

  • 广西玉林市2001~2003年疟疾病例调查分析

    玉林市辖玉州区、福棉管理区,人口1 026 000人.地处原玉林县东南部,南流江流经,多条溪流,气候温和,雨量充沛,属亚热带气候.北部为山区,南部为丘陵,东部为平原.农业种植以水稻为主,兼种蔗、果、瓜、菜、桑等经济作物.玉林市为间日疟和恶性疟混合流行区,传疟媒介山区为微小按蚊,丘陵平原中华按蚊为优势蚊种.上世纪80年代后期,疟疾年发病率在1以下.为了解灭疟后期疟疾病例分布情况,现将2001~2003年的疟疾病例资料总结分析如下.

    作者:谢庆敢;陆运龙;杜传 刊期: 2004年第06期

  • 全国囊虫病、包虫病血清流行病学调查质量评价

    目的对全国囊虫病、包虫病血清流行病学调查质量进行评价. 方法用相同试剂盒,按统一的操作规范,对各地检测出全部阳性血清和随机抽取的部分阴性血清进行复测,并采用符合率和Kappa统计量评价两次检测结果的一致性. 结果囊虫病、包虫病两次检测结果阳性符合率分别为58.54%和91.12%,阴性符合率分别为98.83%和96.58%,总符合率分别为98.85%和97.47%.Kappa值分别为0.7139和0.9362. 囊虫病二次检测重现性好,包虫病二次检测重现性极好.Kappa统计量分析回代结果一致性都具有极显著性意义(P<0.01). 结论本次囊虫病和包虫病血清流行病学调查质量控制较为理想.

    作者:陈颖丹;周长海;王聚君;袁忠英;陈景英;徐祥珍;许隆祺 刊期: 2004年第06期

  • 抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

    目的本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础. 方法用六钩蚴粗制抗原免疫家兔,制备兔抗六钩蚴抗体(Ab1),再用Ab1免疫昆明小白鼠,制备抗独特型抗体(Ab2),免疫猪体,以3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染,90 d后剖杀,观察感染情况. 结果 5头试验猪只有1头在膈肌发现1个囊虫,而2头阳性对照猪均被感染,各检查部位囊虫数平均为4.5个/100 g和3.2个/100 g. 结论抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用.

    作者:王洪法;张红花;李怀菊;赵长磊;陈锡欣;岳继娥;杨淑芳 刊期: 2004年第06期

  • 贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究

    目的观察贵州省牛带绦虫亚洲亚种囊尾蚴在猪体内的发育情况. 方法用牛带绦虫亚洲亚种孕节直接灌喂当地圈养的14 d龄健康乳猪8头,并以健康乳猪4头作对照.于感染后40、50、60和75 d分别剖检,观察猪体内囊尾蚴的分布、大小、形态及成熟情况. 结果从感染后40 d起,在6头猪的肝脏表面和实质内共检获421个囊尾蚴,多分布在肝实质内,其大小为1.34~2.78 mm×1.22~2.31 mm.其余部位未找到囊尾蚴.感染后40 d和50 d,囊尾蚴经胆汁孵育,头节翻出率分别为78.3%和93.4%.感染后50 d开始发现钙化的囊尾蚴.囊尾蚴活体观察可见头节上4个吸盘和活动的顶突.压片染色镜检,头节有4个吸盘和顶突,顶突周围发现不完整的两圈点状结构. 结论根据囊尾蚴的分布、大小、发育时间及形态特征,进一步认定贵州省都匀市的带绦虫为牛带绦虫亚洲亚种.家猪是其可能的中间宿主.

    作者:莫兴泽;包怀恩;戎聚全;吴桂萍;牟荣 刊期: 2004年第06期

  • 粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA原核表达质粒的构建与表达

    目的构建粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA基因的重组表达质粒,并在大肠埃希菌中表达. 方法采用亚克隆技术,用SacⅠ和NotⅠ从重组质粒pMD-18T- Der f 2上切下Der f 2 cDNA片段,插入表达载体pET-32a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pET-32a(+)-Der f 2转化大肠埃希菌,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析. 结果对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,获得455 bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,证明已成功构建携带Der f 2基因的重组原核表达质粒pET-32a(+)-Der f 2.核酸序列测定及同源性分析证实,所构建的原核表达质粒pET-32a(+)-Der f 2中所含的Der f 2 cDNA片段与GenBank中的Der f 2序列同源性达到100%.Der f 2 cDNA在大肠埃希菌诱导表达后获得分子质量单位为34 ku的蛋白,蛋白含量占菌体蛋白含量的16%. 结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET-32a(+)-Der f 2,并在大肠埃希菌中获得高效表达,为获得重组纯化Der f 2变应原并用于尘螨变应性疾病的诊治奠定基础.

    作者:李朝品;杨庆贵 刊期: 2004年第06期

  • 晚期血吸虫病肝纤维化合并胆道疾病42例临床分析

    肝纤维化合并胆囊炎、胆石症临床上并不少见.近年来文献报道,慢性肝病肝硬化是胆道疾病的好发因素之一.为了进一步探讨晚期血吸虫病(下称晚血)肝纤维化对胆囊炎、胆结石发病的影响及其特征性表现,对我站2000年以来收治的208例晚血患者,其中合并胆囊炎、胆结石42例的发病机制、临床表现和治疗措施等进行分析.

    作者:熊衍琨;杨国瑛 刊期: 2004年第06期

  • 湖南省消除丝虫病后的监测

    目的探讨达到消除丝虫病地区继续监测的措施及效果. 方法选择湖南省边远、贫困地区、防治监测中可能存在薄弱环节的地区和外来流动人口聚集区搜索残存传染源,对原微丝蚴血症者追踪观察并进行蚊媒监测.采用常规厚血膜双片法检查微丝蚴;个体解剖方法检查蚊媒感染幼丝虫情况. 结果复查经治疗转阴20~26年后的原微丝蚴血症者611例和防治监测工作中存在薄弱环节地区血检13 171人以及流动人口3 631人,均未检出微丝蚴血症者;解剖致倦库蚊3 050只,未检出幼丝虫感染蚊. 结论湖南省消除丝虫病后的成果巩固,但全国和全球尚未消灭丝虫病,监测措施仍不能终止,其方法需要改进.

    作者:段绩辉 刊期: 2004年第06期

  • 弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

    目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体,并在Vero细胞中表达. 方法设计1对引物,从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因,构建pVAX1-SAG2真核表达重组质粒.以限制性内切酶KpnⅠ和 EcoRⅠ进行双酶切、PCR鉴定,纯化后进行测序鉴定.脂质体介导法瞬时转染Vero细胞,同时以pVAX1为对照,48 h后收集细胞, Western-blot鉴定. 结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577 bp的SAG2基因,构建了真核表达载体pVAX1-SAG2,在质脂体介导下转染Vero细胞,质粒DNA成功的转染到细胞中.通过Westen-blot分析,细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17 ku大小的条带,与预计大小一致. 结论真核表达载体pVAX1-SAG2在Vero细胞中有一定表达,且有一定的活性.

    作者:龙彩虹;吴少庭;翁亚彪;高世同;张仁利;林绮萍;谢德华;卜春玲;雷明军;黄达娜 刊期: 2004年第06期

  • 硼镁石粉持效灭螺实验研究

    目的观察硼镁石粉的持效杀螺作用及其灭螺活性. 方法在直径12 cm并铺垫约1 cm厚江滩泥土的玻璃培养皿内,每皿放置钉螺30只,设80.0、120.0、160.0和200.0 g/㎡4个剂量组,每个剂量组再分A、B两组.采用直接撒粉法,室温下定时观察钉螺死亡情况. 结果 A、B两组钉螺在撒粉后3~15 d的死亡率分别为30.0%~86.7%和36.7%~100.0%.两组不同剂量间3 d和7 d的钉螺死亡率差异无显著性(χ 23 d=1.7143,χ 27d=2.3821,P均>0.05),而15 d的钉螺死亡率差异则非常显著(χ 215d=16.5848,P< 0.001).远期杀螺效果,A组钉螺在撒粉后30~180 d的死亡率为60.0%~86.7%,B组为86.7%~100.0%,两组间差异非常显著(χ 230d=22.0915、χ 260d=14.7512、χ 290d=20.7485、χ 2120d=24.8454、χ 2150d=24.2202和χ 2180d=23.3989,P均﹤0.001). 结论硼镁石粉杀螺作用缓慢、药效稳定、持久,在干燥环境下的杀螺效果要高于潮湿环境,因此在现场灭螺时须注意环境的选择.

    作者:吴锋;姜玉骥;奚伟萍;洪青标 刊期: 2004年第06期

  • 利用果蝇转座子作载体构建土垢分枝杆菌变异基因文库的研究

    目的利用果蝇mariner转座子作为载体构建土垢分枝杆菌随机变异基因文库以筛选影响脂肪酸代谢的基因. 方法将果蝇转座子mos1的末端反向重复序列置于卡那霉素抗性基因两侧,并将此种基因插入到M272B载体,用此载体转化土垢分枝杆菌,用Southern blot验证外源基因的插入.将变异的基因克隆在不同碳源的培养基上培养,筛选只在软脂酸上生长的菌落. 结果初筛了468个菌落,有5个不能在软脂酸上生长,其中2个在ICL基因上发生变异,3个在PCKA基因上发生变异.ICL为乙醛酸旁路所必须,PCKA编码糖异生的关键酶. 结论研究证明该转座子载体用于基因变异有效,变异筛选分枝杆菌中与脂肪酸代谢的基因可行.

    作者:刘克义;于进芝 刊期: 2004年第06期

  • 2002~2003年广西流动人口疟疾监测情况报告

    流动人口疟疾管理是控制疟疾的重要措施.通过监测及时发现、治疗输入性疟疾病例,防止其引起传播[1].现将2002~2003年全区流动人口疟疾监测结果报告如下.

    作者:李锦辉;黎学铭;覃业新;林珍 刊期: 2004年第06期

  • 日本血吸虫SIEA 26-28 ku抗原组分的紫外吸收光谱分析

    目的了解SIEA 26-28 ku抗原分子的结构和功能以及生物学特性. 方法采用梯度聚丙烯酰胺凝胶制备电泳和高效液相色谱方法,分离纯化SIEA26-28 ku分子,并对其进行紫外吸收光谱分析鉴定. 结果通过紫外吸收光谱分析表明,SIEA26-28 ku抗原组分的紫外吸收光谱共有6个特征性蛋白吸收峰,分别在258、260、264.5、268、269.5和272 nm,部分吸收峰符合苯丙氨酸的吸收光谱. 结论高效液相色谱技术结合紫外吸收光谱分析,可为日本血吸虫SIEA 26-28 ku抗原组分结构和功能的进一步研究以及生物学特性分析提供重要信息.

    作者:吕志跃;刘立鹏;汪世平;徐绍锐;李文凯;何卓;彭先楚;邓世林 刊期: 2004年第06期

  • 储藏菜种粉螨孳生情况初步调查

    粉螨是节肢动物中的一大类群,分类学上属蛛形纲 (Arachnida)蜱螨亚纲(Acari)真螨目(Acariformes)粉螨亚目(Acaridida).其种类繁多、生境广泛,与人类健康及医学关系密切.为深入了解粉螨的生态环境, 2003年3~4月作者等调查了淮南市唐山镇邱村储藏蔬菜种子粉螨孳生情况,并作鉴定、分类.

    作者:朱玉霞;崔玉宝;李朝品 刊期: 2004年第06期

  • 疟疾14例误诊分析

    疟疾是由疟原虫感染引起的急性传染病,临床上以周期性发热、贫血、脾肿大为主要特征.基本消灭疟疾后,疟疾感染率、发病率维持在较低水平,疟疾病人临床症状不典型、常无寒战期表现,可出现严重贫血,甚至出现血小板严重减少,容易误诊为恶性血液病,延误患者的治疗时机,甚至危及患者的生命.本文回顾了自1979年~2003年首诊误诊的14例疟疾病例资料,就其误诊原因和临床表现进行总结,以提高临床医生诊断疟疾的准确性.

    作者:赵新东;吴少玲 刊期: 2004年第06期

  • 多效灭螺肥料的灭螺效果观察

    溴乙酰胺在1 ppm浓度时有良好的灭螺效果,10 ppm灌溉秧苗未见毒害「1」,钾肥可促进氮磷养分从水稻的茎叶部位向穗输送,增加水稻产量「2」.为评价多效灭螺肥料的灭螺效果,作者进一步观察了多效灭螺肥料的杀螺作用,并与溴乙酰胺,溴乙酰胺加氯化钾以及单纯肥料的灭螺效果进行了比较.

    作者:詹素云 刊期: 2004年第06期

中国病原生物学杂志

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主管:中国寄生虫病防治杂志

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