陈俊秋;黄梁浒
目的:探索能够早期预测地西他滨(DAC)在骨髓增生异常综合征(MDS)中治疗反应的临床指标.方法:对55例MDS患者DAC治疗效果进行回顾性分析,根据患者DAC首次治疗后28天的淋巴细胞水平将患者分为高淋巴细胞组(H-Lym≥1.2×109/L)和低淋巴细胞组(L-Lym< 1.2×109/L),比较两组的总反应率(ORR)、无进展生存期(PFS)之间的差异.结果:55例患者中,H-Lym组ORR为76.0%,L-Lym组ORR为50.0%,二者之间统计学差异显著(P<0.05);H-Lym组中血小板≥100×109/L比例非常显著高于L-Lym组(72.0% vs 20.0%)(P<0.01).H-Lym组患者的中位PFS时间15.7个月,L-Lym组的中位PFS 8.5个月,二者之间统计学差异显著(P<0.05),L-Lym组患者疾病进展的风险非常显著高于H-Lym组,为H-Lym组的4.45 (95% CI:1.58-12.59)(P<0.01).结论:DAC首次治疗后28 d淋巴细胞≥1.2×109/L的患者具有较高的总反应率和较长的无进展生存期,可作为预测地西他滨治疗反应的早期临床指标.
作者:田明杰;赵松颖;薛华;郭慧敏;化罗明;范丽霞;王云;边月;庞艳彬 刊期: 2018年第06期
目的:检测慢性特发性血小板减少性紫癜(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura,CITP)患者外周血T细胞中JAK2/STAT3 mRNA信号转导通路的基因表达,探讨JAK2/STAT3 mRNA变化与CITP之间的相关性.方法:设立CITP患者组与健康对照组,用RT-PCR、琼脂糖电泳等方法检测CITP组及对照组外周血T细胞中JAK2/STAT3 mRNA基因的表达水平.结果:经PCR及RT-PCR实验证实,JAK2/STAT3 mRNA表达有清晰条带,熔解曲线峰值单一,CITP组JAK2 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.0004);STAT3 mRNA表达水平也明显高于对照组(P<0.0001);这表明CITP患者的JAK2/STAT3 mRNA表达水平明显升高.结论:CITP组中JAK2/STAT3 mRNA均有表达,且与对照组相比明显升高,其升高与患儿CITP发生有关.
作者:宋丽;杜宁超;李富荣;刘仿 刊期: 2018年第06期
目的:研究急性白血病(AL)患儿血清转铁蛋白受体(serum transferrin receptor,sTFR)的表达变化及其相关作用机制.方法:选取2016年6月至2017年6月在我院接受治疗的46急性白血病患儿纳入AL组,并募集同期体检健康儿童40例纳入对照组.记录患者的相关临床资料,分析血清转铁蛋白受体与患者临床特征的相关性.KG-1a和TCHu147细胞的TFR基因经RNA干扰技术沉默后,采用MTT法、流式细胞术检测TFR基因对KG-1a细胞和TCHu147细胞增殖、细胞周期的作用.采用Western blot法检测白血病细胞经siRNA干扰后相关细胞周期蛋白水平.结果:AL组sTFR水平显著高于对照组(P<0.05),外周血白血病细胞中TFR的mRNA水平及TFR蛋白表达量均高于对照组(P<0.05).sTFR水平与AL患儿的白细胞数、白血病细胞比例、白血病细胞绝对数、铁调素(Hepc)和危险等级等指标密切相关(P<0.05).经TFR siRNA干扰后的KG-1a和TCHu147细胞增殖能力则受到明显抑制(P<0.05).流式细胞术检测显示,转染TFR siRNA后,KG-1a和TCHu147细胞的G0/G1期比例分别为(62.51±5.39)%、(63.37±4.27)%,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著增高(P<0.05);KG-1a和TCHu147细胞的G2/M期的比例为(5.74±1.34)%、(7.37±1.56)%,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著下降(P<0.05).TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中CyclinE和CDK2表达水平显著下降(P<0.05);TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中P27表达水平显著上升(P<0.05).结论:AL患儿外周血白血病细胞可合成较多的TFR蛋白,转运至细胞外后导致sTFR水平上升,通过下调TFR基因的表达能有效干扰白血病细胞分裂.
作者:陈社安;张文斌 刊期: 2018年第06期
目的:探索地西他滨治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效及预后预测因素.方法:回顾性分析87例接受地西他滨治疗的MDS患者的临床资料.分别采用Q-PCR及测序检测MDS患者hENT1的mRNA表达及TP53基因的突变情况,分析患者临床特征及分子学指标与地西他滨临床反应的关系.结果:地西他滨中位治疗4(2-17)个疗程,51例(58.6%)治疗有效,其中CR 17例(19.5%),PR 12例;mCR 9例,HI 13例,36例(41.4%)无反应.单因素分析显示,复杂核型、单体核型、7号染色体异常以及1个疗程后Plt数倍增的患者可获得更高的CR率;IPSS相对高危组(中危2+高危)、复杂核型及1个疗程后Plt倍增的患者总体有效率更高.治疗有反应组MDS患者的hENT1 mRNA表达水平明显高于无反应组[1.78±1.45(2-△△Ct)vs 0.96±0.97(2-△△Ct)](P=0.002).在51例有反应组中,CR组的hENT1 mRNA表达水平高于未获得CR者[2.58±1.44(2-△△Ct) vs 1.39±1.3(2-△△Ct)](P=0.005).在52例相对高危组(中危2+高危)中高hENT1 mRNA表达的患者中位OS时间显著长于低hENT1表达的患者(31 vs 12个月)(P <0.001).在87例接受地西他滨治疗的患者中,TP53突变者11人(12.6%).TP53突变患者总体反应率高(P=0.04),且更容易获得CR(P <0.001).多因素Logistic回归模型显示,复杂核型、1个疗程后Plt数倍增、TP53突变及hENT1 mRNA高表达是预测地西他滨治疗获得CR的独立预后因素.结论:IPSS分期、复杂核型、1个疗程后Plt数倍增及hENT1表达、TP53基因突变可预测地西他滨治疗的疗效.
作者:鲍振华;赵洪国;于虹娥 刊期: 2018年第06期
肿瘤相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境的主要成分之一,对肿瘤的发生、发展、浸润及转移具有极其重要的作用,在多种实体肿瘤中其甚至可决定肿瘤细胞的命运.鉴于CAF在推动肿瘤进展方面的关键作用,因而CAF近已经成为多种肿瘤的治疗靶点,但在血液系统肿瘤中CAF相关研究尚少.新近研究发现,急性髓系白血病(AML)、多发性骨髓瘤(MM)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)等多种血液恶性肿瘤的耐药、复发及骨髓增殖性肿瘤(MPN)骨髓纤维化的发生、发展与CAF密切相关,靶向CAF可有效提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效应,进而提高疗效,因而有望成为血液系统肿瘤治疗的新靶点.本文总结了近年来肿瘤相关成纤维细胞在血液系统恶性肿瘤中的研究进展.
作者:潘成云;许娜;刘晓力;周璇;李艳菊;王季石 刊期: 2018年第06期
近年来随着基因编辑技术的兴起,可以实现对基因组中特定的基因进行编辑,使基因突变性疾病的治愈成为可能.在众多基因编辑技术中,CRISPR/Cas9系统因其操作简便性、靶向特异性、经济性等特点备受关注,已广泛应用于分子生物学以及生命科学的领域研究中.本文就此系统结构、作用机制以及在血友病、β-地中海贫血、慢性髓系白血病等血液病中基因治疗的新研究进展作一综述.
作者:李婉影;高清平;刘会 刊期: 2018年第06期
免疫介导血细胞减少症是常见的非骨髓造血异常所致的血细胞减少性痰病,在一线治疗无效情况下,患者生存质量大幅降低.雷帕霉素具有明确的抑制mTOR靶蛋白机制,可以上调调节性T细胞及其诱导特定细胞凋亡,通过调节淋巴细胞亚群从而对各类免疫介导血细胞减少治疗方面取得一定疗效.因此,本文就雷帕霉素治疗免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)、自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)、获得性再生障碍性贫血及自身免疫性淋巴细胞增生综合症(autoimmune lymphoproliferative syndrome,ALPS)等免疫相关血细胞减少症的作用机制及临床应用进行综述.
作者:谷昊;吴润晖 刊期: 2018年第06期
弥漫大B细胞淋巴瘤是成人常见的非霍奇金淋巴瘤,占成人非霍奇金淋巴瘤的30%-40%,治疗手段主要包括化疗、局部放疗和自体造血干细胞移植.大量研究表明,自体造血干细胞移植作为该病的主要治疗手段,可用于初治的年轻高危弥漫大B细胞淋巴瘤患者的一线巩固治疗和复发或难治性的弥漫大B细胞淋巴瘤患者的挽救治疗,不少学者对自体造血干细胞移植应用于初治年轻高危和复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤患者的有效性进行了评估,并对改善移植效果的方法进行了不断的探索和尝试,从而使移植患者获益.
作者:王希;夏冰;张翼鷟 刊期: 2018年第06期
目的:发展一种通过三维形态学参数评价阿司匹林抑制血小板聚集行为的新方法.方法:将采集的12名健康志愿者枸橼酸钠抗凝外周血均分为二份,一份加入200μmol/L乙酰水杨酸(ASA)处理作为实验组,另一份为对照组,分别对两组血小板进行洗涤纯化.将纯化血小板加入Ⅰ型胶原蛋白修饰的反应池中在静态条件下诱导血小板活化聚集,通过形状测量激光显微系统观察分析形成的血小板聚集体三维形态.同时,通过光透射浊度法(LTA)分析血小板功能.结果:本技术可在无标记情况下获取血小板聚集体的形貌、高度及三维形态图像数据,并可量化血小板聚集体的体积参数;ASA处理能明显改变血小板聚集体的三维形态学特征;与对照组相比,实验组血小板聚集体体积显著降低(t=8.97,P<0.01),而横截面积改变不显著(t=1.94,P>0.05).受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示,血小板聚集体体积截断值为1 395 μm3时鉴别ASA抑制功效的灵敏度和特异度分别为91.7%和75%,其准确度和灵敏度均优于LTA方法测试的聚集度参数.结论:本研究建立的ASA抑制血小板聚集行为的三维形态学分析方法将为后续研究和临床评价ASA抗血小板聚集效应提供新的分析策略.
作者:刘娟;丁玲;何翠;陈丹;邓素容;李远 刊期: 2018年第06期
目的:探讨机体在不同凝血状态下(低凝、高凝和正常凝血)血栓弹力图实验(thromboelastography,TEG)与凝血4项、血小板数值之间的相关性和一致性,评价2种方法在低凝、高凝和正常凝血状态下对于临床应用的参考价值.方法:回顾性分析中南大学湘雅三医院2015年1月至2017年12月409例进行TEG、凝血4项和血常规检测的病人临床资料,将TEG的主要参数凝血因子激活时间(R)、血块形成速率参数(K)、弹力图大切角(An-gle)和弹力图大振幅(MA)与凝血常规检测中的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)以及血小板计数进行不同凝血情况下的Pearson相关性分析,并进行Kappa一致性分析和配对卡方检验,同时对2种方法指导的临床用血情况进行比较.结果:R值与PT呈正相关,在低凝、高凝和正常凝血状态下相关系数分别为r=0.376、r=0.316和r=0.276(P <0.05);Kruskal-Wallis检验两两比较,相关系数两两比较无差别(P>0.05);一致性分别为0.208、0.227和0.131.R值和APTT呈正相关,在低凝、高凝和正常凝血状态下相关系数分别为r=0.418、r=0.258和r=0.458(P <0.05);Kruskal-Wallis检验两两比较,低凝和正常凝血相关系数无差别(P>0.05),其他两两比较有差别(P<0.05);一致性分别为0.338、0.291和0.161,一致性总体有差异(P<0.05).K值与Fib呈负相关,在低凝、高凝和正常凝血状态下分别为r=-0.611、r=-0.411和r=-0.311(P<0.05);Kruskal-Wallis检验两两比较均有差别(P<0.05);一致性分别为0.432、0.481和0.323,一致性总体有差异(P<0.05).K值与Plt呈负相关,在3种凝血状态下相关系数分析为r=-0.278、r=-0.238和r=-0.278;Kruskal-Wallis检验两两比较均无差别(P>0.05);一致性分别为0.401、0.312和0.279,一致性总体有差异(P<0.05).Angle角与Fib显正相关,相关系数在低凝、高凝和正常凝血状态下分别为r=0.638、r=0.538和r=0.438(P <0.05),Kruskal-Wallis检验两两比较均有差别(P<0.05);一致性分别为0.323、0.357和0.288,一致性总体有差异(P<0.05).MA与Fib呈正相关,在低凝、高凝和正常凝血状态下分别为r=0.351、r=0.381和r=0.211 (P<0.05),Kruskal-Wallis检验两两比较,低凝和高凝血相关系数无差别(P>0.05),其他两两比较有差别(P<0.05);一致性分别为0.510、0.467和0.427,一致性总体有差异(P<0.05).MA与Plt数呈正相关,在低凝、高凝和正常凝血状态下相关系数分别为r=0.478、r=0.515和r=0.378;Kruskal-Wallis检验两两比较均有差别(P<0.05);一致性分别为0.581、0.461和0.350,一致性总体有差异(P<0.05).结论:TEG与凝血试验及Plt检测结果相关;在不同情况下,常规凝血4项、Plt数与TEG的相关性和一致性有差别.因此建议在临床实际工作中对可能存在病理状态的高凝和低凝的患者进行TEG检测,这样能动态观测体内凝血情况,指导临床合理用药和输血,降低病人栓塞和输血风险.
作者:文贤慧;张军华;桂嵘 刊期: 2018年第06期
目的:探讨非血缘脐血移植治疗Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)的临床疗效和安全性.方法:回顾性分析5例接受了非血缘脐血移植(unrelated umbilical cord blood transplantation,UCBT)治疗WAS患儿的临床资料.5例患儿均为男性,中位年龄268 d(3 d-695 d),其中接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)6/6位点相合脐带血移植患儿2例,接受HLA5/6位点相合脐带血移植患儿3例.5例患儿采用强化清髓性预处理方案,环孢素联合短程霉酚酸酯预防移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD).将移植后中性粒细胞、血小板的恢复时间及移植后嵌合状态作为造血重建的依据.结果:5例患儿均获得植入,移植后中性粒细胞>0.5×109/L中位时间为移植后15.8 d(11-25 d),血小板计数>20×109/L中位时间为移植后20.4天(12-30 d).移植后30 d检测供受者嵌合体状态显示4例为完全嵌合型,1例为混合嵌合型.2例患儿发生植入前综合征,3例患儿发生Ⅰ-Ⅲ度急性移植物抗宿主病,4例患儿合并肺部感染及巨细胞病毒感染,无患儿发生慢性移植物抗宿主病.1例患儿于移植后22 d死亡,其余4例患儿持续无病存活,中位随访时间为12.3个月(5个月-27个月).结论:非血缘脐血移植是根治Wiskott-Aldrich综合征的一种较为安全有效方法.
作者:宋慧慧;余正平;何文多;丁家华;陈宝安 刊期: 2018年第06期
异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)已成为治愈多种良、恶性血液系统疾病的唯一方法,许多病人获得了长期缓解.然而移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)大大阻碍了其发展和临床应用.目前认为,供者T细胞攻击宿主抗原引发的免疫反应是GVHD发病的重要机制,但供者T细胞在抗肿瘤、降低疾病复发率等方面又有不可替代的作用.因此,如何在抑制GVHD的同时保留移植物抗肿瘤(graft versus tumor,GVT)效应成为HSCT后的一大难题.近年来,丙戊酸、棘霉素等药物,联合使用CD4+与CD8+诱导调节性T细胞以及毫超微包囊T细胞等新型技术,在分离GVHD和GVT效应方面均取得了良好的实验效果,在临床治疗上具有巨大的潜力.
作者:王栋;朱锋;徐开林 刊期: 2018年第06期
目的:探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6 PD)活性在急性白血病患儿中的变化及其与临床特征的相关性.方法:应用1967年WHO推荐的Zinkham法检测74例AL(ALL 50例,AML 24例)患儿外周血中G6PD活性,分析其活性与临床特征的相关性.以70例正常健康体检儿童外周血中G6PD活性作为对照.结果:ALL和AML组的G6PD活性均明显低于正常对照组(P=0.000,P=0.000),ALL组与AML之间G6PD活性无统计学差异;AL患儿细菌感染组、真菌感染组、无感染组(无细菌和真菌感染),分别与对照组比较差异均有统计学意义(P =0.02,P=0.001,P=0.001),真菌感染组再分别与细菌感染组和无感染组比较差异有统计学意义(P=0.004,P=0.019);AL患儿的G6PD活性与白细胞数及中性粒细胞百分比呈线性相关(P=0.000,P=0.001,r=0.465,r=0.434);G6PD活性缺乏组中位生存时间高于G6PD活性正常组,但差异无统计学意义(P =0.4149).结论:急性白血病患儿G6PD活性明显低于正常健康儿童,与患儿白细胞数和中性粒细胞百分比呈线性相关,G6PD活性降低易罹患真菌感染,且感染更严重.
作者:苏琼;黄成双;吴柳松;罗茜;田润梅;陈艳 刊期: 2018年第06期
目的:研究组蛋白去乙酰化转移酶6(Histone deacetylase 6,HDAC6)对人白血病细胞促凋亡作用及其机制.方法:采用siRNA干扰技术抑制HDAC6基因的表达;应用RT-PCR和Western blot分别检测白血病细胞中HDAC6和相关信号通路蛋白的表达;流式细胞术和Hoechest染色检测K562细胞的凋亡及形态改变.结果:与健康志愿者的外周单核细胞和骨髓基质细胞株比较,白血病细胞系的HDAC6表达量均明显增高(P<0.05);流式细胞术和Hoechest染色显示,干扰HDAC6基因后K562细胞凋亡率增加,且呈凋亡形态发生改变;Western blot显示,干扰HDAC6能增加Bax/Bcl-2的比例和cleaved Caspase-3的表达,并激活MAPK、ATK、ERK信号通路.结论:干扰HDAC6促进人白血病细胞K562细胞的凋亡,其凋亡的机制可能与激活MAPK信号通路有关.
作者:刘泽洪;郭兵;秦观海;袁英;王渝东;周一刃;宋世卿;侯彦华 刊期: 2018年第06期
目的:探讨高分辨熔解(HRM)曲线分析法检测遗传性球形红细胞增多症(HS)患者SLC4A1基因D38A和K56E突变位点的可行性及其意义.方法:抽取23例HS患者外周血样本进行常规检测,提取基因组DNA,针对SLC4A1基因突变位点D38A和K56E设计引物,应用HRM法对所有样本进行突变分析,并通过DNA测序技术对HRM结果进行验证.结果:23例HS患者中,HRM法共检测出杂合突变型基因6例,其中包括D38A突变3例,K56E突变3例.DNA测序结果与HRM法检测结果一致.结论:应用HRM法能准确检测SLC4A1基因D38A和K56E突变位点,具有高效、快速、可靠等优点,不仅可用于临床辅助诊断,还有望成为确定HS患者基因突变谱的新方法.
作者:马诗玥;廖林;何本进;林发全 刊期: 2018年第06期
移植相关性血栓性微血管病(transplantation associated thrombotic microangiopathy,TA-TMA)是造血干细胞移植的致死性并发症之一,其发病机制尚未完全阐明.新的研究发现,补体系统的异常激活可引起广泛内皮损伤,并在TA-TMA的发病机制中起到重要作用.难以控制的高血压、蛋白尿、可溶性C5b-9的升高、移植早期发生心包积液等是TA-TMA发生的危险因素.本文就近年来TA-TMA的发病机制、早期诊断、治疗等方面的研究进展进行综述,为TA-TMA的早期诊断及治疗提供新思路.
作者:贺艺璇;李斯丹;吴润晖;秦茂权 刊期: 2018年第06期
目的:分析中国汉族人群中发现的一例弱D血型表型及基因型.方法:分别采用盐水法及微柱凝集(玻璃珠/凝胶)卡对该弱D血型进行血清学分析,鉴定该标本12种D抗原表位以确定其表型,对RhD基因10个外显子及其侧翼序列进行测序并分析其杂合性.结果:该个体盐水法与微柱凝胶卡法检测均为dCcee,但微柱玻璃珠卡法抗-D检测结果为1+,D抗原表位分析显示缺失部分D表位.测序检测发现,该标本存在等位基因c.1022T>A,结合其血清学反应格局更符合部分D表型,RHD合予型鉴定为D/d.结论:中国汉族人群中发现的一例弱D血型归为弱部分D型更为恰当.
作者:徐慧英;王蕊;林春燕;俞石芳;刘春华;陶志华;廖昭平 刊期: 2018年第06期
目的:通过多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞慢性淋巴增殖性疾病(B cell chronic lymphoproliferative disorders,B-CLPD)中CD180的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),探讨CD180在B-CLPD中的表达特点及其在鉴别诊断中的价值.方法:利用FCM检测178例B-CLPD病人骨髓中异常B淋巴细胞表面CD180的MFI.以正常对照组为参照,分析各类型B-CLPD中CD180的表达情况,并比较不同亚型中的表达差异.结果:①除脾脏弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤(SDRPL)外,各类型B-CLPD中CD180的表达强度均显著低于正常对照组;②慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中CD180 MFI明显低于其余类型B-CLPD;③CD180在毛细胞白血病(HCL)中的表达强度显著高于边缘区淋巴瘤(MZL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM);④在脾脏边缘区淋巴瘤(SMZL)、毛细胞白血病(HCL)、毛细胞白血病变异型(HCLv)以及SDRPL等原发于脾脏的淋巴瘤中,有绒毛组和无绒毛组CD180表达强度有显著差异.结论:利用多参数FCM,检测CD180和其他免疫标志表达水平,有助于区分B-CLPD不同亚型.
作者:吴婧;盛燕;眭竫旎;翁香琴 刊期: 2018年第06期
目的:研究铁代谢异常对贫血患者EPO-STAT5信号通路的影响.方法:根据疾病将患者分为较低危骨髓增生异常综合症(MDS)组30例,其中铁过载16例,非铁过载14例,对其中12例铁过载患者进行祛铁治疗;慢性病贫血(ACD)组(12例),缺铁性贫血(IDA)组(12例),另设健康对照组10例;检测患者铁代谢指标铁蛋白(SF),血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC),血清红细胞生成素(EPO)、血浆中P-STAT5及外周血中STAT5 mRNA表达.分析铁代谢异常对各组贫血患者EPO及STAT5表达的影响.结果:与非铁过载组相比,铁过载组MDS患者EPO水平明显升高(P<0.05),STATS mRNA及P-STAT5表达明显降低(P<0.05).祛铁治疗后EPO水平明显下降(P<0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P<0.05).与健康对照组相比,ACD组EPO表达明显下降(P<0.05),STAT5 mRNA表达无差异,P-STAT5表达明显降低(P<0.05);IDA组EPO表达明显升高(P<0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P<0.05).结论:过量铁负荷或慢性炎症可能抑制EPO-STAT5通路激活,加重贫血.
作者:张耀;韩爽;郭垞;张青霞;常春康 刊期: 2018年第06期
目的:探讨TGF-β 1和IL-10对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)免疫调控功能的影响.方法:分离扩增人脐带来源的MSC,分别用TGF-β 1和IL-10处理72h,提取上清中MSC-EV.应用BCA法测定提取EV的总蛋白含量,在透射电子显微镜下观察EV的形态结构,流式细胞术检测EV表面标志物以鉴定MSC-EV.在ConA刺激后的人外周血单个核细胞(PBMNC)培养体系中,加入不同处理方法获得的EV,培养72 h后应用流式细胞仪检测PBMNC的凋亡,以及CD4+CD25+/CD12T调节T(Treg)细胞比例.应用CBA试剂盒和EUSA试剂盒检测培养PBMNC上清以及MSC-EV中IL2,IL4,IL6,IL10,IFN-γ,TNF-α,Th17A和TGF-β1的含量.结果:不同处理后的EV在透射电子显微镜下均呈现特征性杯口状膜样结构,均表达CD9,CD44,CD63及CD81.TGF-β1处理后MSC-EV促PBMNC凋亡的能力明显增强(P<0.01),不同处理后EV均可以提高Treg细胞比例.MSC-EV可以提高PBMNC培养上清中IL-10的含量,TGF-β 1处理MSC-EV共培养后的PBMNC上清TGF-β 1含量较未处理组明显降低(P<0.05).TGF-β 1处理后的MSC-EV样本IL-6含量显著升高,TGF-β1含量降低.结论:TGF-β1处理后MSC-EV的免疫调控功能发生改变,其意义值得进一步研究阐明.
作者:马聪;张青宜;郭子宽;王恒湘 刊期: 2018年第06期