辛丽；舒跃龙
目的 探讨小泛素相关修饰物(SUMO)特异性蛋白酶-1(SENP1)对神经胶质瘤细胞的生长和侵袭能力的影响.方法 采用腺病毒感染方法敲除胶质瘤细胞LN229的SENP1基因,然后用双染法检测基因敲除后对细胞增殖和细胞凋亡的影响,并用Tanswell小室法检测基因敲除后胶质瘤细胞迁移能力的改变.结果 敲除SENP1后的LN229细胞增殖与对照组相比明显被抑制,双染实验发现SENP1敲除可以促进肿瘤细胞凋亡.且进一步功能实验表明SENP1敲除后的肿瘤细胞的迁移能力明显下降.结论 SENP1可以促进细胞增殖,降低细胞凋亡率,并影响肿瘤细胞侵袭基因的表达,在神经胶质瘤发病和进展过程中发挥着十分重要的作用.
作者：张秋生；张猛；黄贤键；刘晓佳；李维平 刊期： 2014年第03期
目的 探索采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用单克隆抗体的可行性.方法 以狂犬病病毒CVS-11核蛋白355-369位B细胞线性抗原表位合成肽与钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole Limpe hemocyanin,KLH)大分子耦联后免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体.采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和间接荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)筛选和鉴定杂交瘤细胞株.结果 经过对杂交瘤细胞株上清的间接ELISA和IFA筛选获得阳性杂交瘤细胞株2B1D11,该杂交瘤细胞株产生的抗体经纯化后在IFA中可以有效检出感染犬脑组织和BHK-21细胞的狂犬病病毒.结论 采用合成肽作为免疫原制备狂犬病实验室诊断用抗体在技术上是可行的.
作者：吕新军；梁国栋；唐青 刊期： 2014年第03期
目的 系统评估我国职业暴露人群感染H6N6禽流感病毒的状况.方法 本研究利用我国2009-2011年开展的高致病性H5N1禽流感病毒职业暴露人群血清学监测所采集的近15 000份血清标本,开展H6N6禽流感病毒血清学调查.结果 本研究中检测到H6N6禽流感病毒阳性血清共10份,分别来自不同的职业暴露人群,包括活禽市场、家禽规模养殖场、家禽散养户、屠宰加工场和野生候鸟栖息地.从地域上看该10份阳性血清来自8个不同的省份,分布在我国的南北方.结论 这是我国大陆地区首次报道人感染H6亚型禽流感病毒.
作者：辛丽；舒跃龙 刊期： 2014年第03期
目的 建立基于双抗夹心微孔板化学发光酶免疫分析的人血清Ⅳ型胶原定量检测方法.方法 应用Ⅳ型胶原多抗进行包被,辣根过氧化物酶标记Ⅳ型胶原单抗,以鲁米诺化学发光体系检测,调整优化各种反应液的工作浓度和各类反应条件后建立双抗体夹心的检测方法;评价所建立方法的线性范围、特异性、灵敏度、稳定性等性能指标;应用肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验.结果 所建立方法的灵敏度为15.5 ng/ml,线性范围25 ～ 850 ng/ml,批内、批间变异均小于8％.检测Ⅳ型胶原的临床高、中、低值血清回收率分别为98.5％、94.3％和102.6％;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察,线性相关系数均＞0.99,标准偏差＜7％;比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义.结论 成功建立了定量Ⅳ型胶原化学发光酶免疫分析方法,该方法有较好的准确性、灵敏度、重复性,与进口试剂检测结果等效.
作者：徐军；侯俊；赵静；刘佳；王卫东；卞成蓉；戴亮；陈霖；刘爱霞 刊期： 2014年第03期
目的 克隆并分析HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列,根据其氨基酸序列进行表型预测,为疫苗的抗原设计奠定基础.方法 采集北京地区HIV-1 B/C重组型的抗凝全血标本,分离血浆和提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增rev-env基因,对扩增产物进行序列测定.根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并对重要的Env功能结构域进行深入的分析和比较.结果 从12例B/C重组型HIV-1感染者中成功克隆到7个rev-env基因,序列分析发现其中6个有完整的开放读码框(ORF),全部为CRF_07B/C重组型.6个Env蛋白氨基酸N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及静电荷数目预测全部使用CCR5辅助受体;GP120/GP41剪切位点高度保守,预测所有GP160前体都能有效剪切;对几个已知中和抗体的中和位点分析推测全部的6个序列都对2G12、2F5中和不敏感;对4E10、PG9及PG16中和敏感.结论 有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗和药物研究提供依据.
作者：汪孟冉；陈丹瑛；何小周；叶景荣；余双庆；徐柯；曾毅；冯霞 刊期： 2014年第03期
目的 观察聚乙二醇干扰素α-2a初治48周疗效欠佳的HBeAg阳性慢乙肝患者序贯应用替比夫定治疗48周的疗效与安全性.方法 聚乙二醇干扰素α-2a初治的27例在48周时未发生HBV DNA转阴(＜100 IU/ml)及HBeAg血清学转换的患者,序贯替比夫定继续治疗,设为A组.替比夫定初治的HBeAg阳性慢性乙肝患者54例,设为B组.比较治疗48周后两组的疗效及安全性.结果 治疗至12周,A、B两组患者的ALT复常率、HBeAg血清学转换率、HBV DNA转阴率分别为59.3％、14.8％、66.7％ vs 75.9％、5.6％、46.3％;治疗至24周,两组患者的ALT复常率、HBeAg血清学转换率、HBV DNA转阴率分别为92.6％、25.9％、70.3％ vs 92.6％、7.4％、85.2％;治疗至48周,两组患者的ALT复常率、HBeAg血清学转换率、HBV DNA转阴率分别为88.9％、29.6％、81.5％vs 98.1％、28.0％、83.3％.在各观察点两组间各观察指标的差异均无统计学意义,但A组的HBeAg血清学转换率均高于B组.治疗48周时,A组未观察到病毒学突破的发生,B组的病毒学突破的发生率为14.8％.治疗过程中有38.3％的患者出现肌酸激酶(CK)升高,A组患者在各观察点CK值均明显高于B组,但两组间的差异均无统计学意义.治疗期间未出现1例因药物严重不良反应而停药.结论 聚乙二醇干扰素α-2a初治48周疗效欠佳的患者序贯应用替比夫定治疗,短期内仍可取得较好疗效,安全性好.
作者：孙海霞；杨小安；张烨琼；张卡；曹红；李刚；徐启桓 刊期： 2014年第03期
目的 比较恩替卡韦(ETV)与拉米夫定(LAM)治疗HBeAg阴性乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF) 12周的疗效及安全性.方法 98例HBV DNA阳性且无核苷类似物抗病毒治疗史的HBeAg阴性HBV-ACLF随机分为ETV组、LAM组各49例,在内科综合治疗基础上分别予ETV(0.5 mgqd)或LAM (0.1,qd)抗病毒.比较12周时组间死亡率、临床好转率、完全病毒学应答率和不良事件的差异.结果 ①ETV组、LAM组的基线特征相似.②12周时ETV组死亡率低于LAM组(28.6％ vs 48.9％,P＜0.05);临床好转率呈高于LAM组趋势(65.3％ vs 48.3％,P=0.067),且主要来自基线终末期肝病模型(MELD)评分≤30患者(75.6％vs52.5％,P＜0.05);完全病毒学应答率高于LAM组(94.3％vs 72％,P＜0.05).③ETV组、LAM组间均无患者因药物不良事件而终止治疗.结论 ETV治疗HBeAg阴性HBV-ACLF能较LAM更强地抑制HBV复制,降低短期病死率,且安全性相当.
作者：叶非；过建春；裘云庆；李晓鸥；荀运浩 刊期： 2014年第03期
肠道腺病毒(enteric adenovirus,EAdv)是导致儿童腹泻的重要病原体,发病率仅次于轮状病毒、诺如病毒.研究表明在免疫缺陷患者中EAdv易引起并发症的发生,甚至导致死亡.国内外有EAdv暴发或流行的报道[1].虽然近年来的研究发现A、C、D、G等其他亚型的腺病毒均可引起婴幼儿急性腹泻[2],但EAdv仍以F亚群的40型和41型为常见,其代表株分别为原型株Dugan-Hovix病毒和Tak病毒.自1995年程绪杰等在我国从儿童粪便中分离到EAdv以来,我国对EAdv的研究越来越重视.本文就肠道腺病毒及其相关研究进展进行综述.
作者：向静瑶；李丹地；李宇宁；段招军 刊期： 2014年第03期
目的 分析2010年宁夏回族自治区流行的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)VP1基因特征.方法 用特异引物通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),对2010年分离自宁夏手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)病例的CA16毒株,进行VP1编码基因的扩增.扩增阳性产物进行序列测定,采用生物信息学软件进行分析.结果 本研究共获得62株CA16的VP1编码序列,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为90.1％ ～100％(平均94.5％)和98.7％ ～100％(平均99.6％).在亲缘性关系树上与B1基因亚型毒株位于相同分支,且各个地市流行株又同时存在B1a和B1b分支.结论 与全国流行情况相一致,宁夏2010年存在B1a和B1b分支CA16的共循环,毒株间具有较大的核苷酸序列差异,提示流行中存在多个传播链.
作者：檀晓娟；马江涛；陈慧；祝双利；詹军；许文波 刊期： 2014年第03期
目的 研究吉林省2013年麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP)氨基酸位点的变异.方法 对吉林省2013年麻疹病例咽拭子标本用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NP基因片段,将麻疹病毒RT-PCR阳性产物进行测序,分析其NP基因推导的氨基酸序列变异情况.结果 吉林省2013年麻疹病毒均为H1a基因亚型.以吉林省2001年麻疹病毒NP基因推导的氨基酸序列为基准,2013年50份麻疹病毒RT-PCR阳性标本中有部分标本在4个氨基酸位点出现变异;在其中3个出现变异的氨基酸位点422位点(G→S)、457位点(S→G)、497位点(R→K)上,2001-2008年33株麻疹病毒中仅有个别毒株出现该3个位点的变异,而2009年、2010年、2013年在该3个位点发生如上变异的麻疹毒株所占比例分别为100％、76.9％以及32.0％ ～32.6％;在第430位点,仅2013年有44.0％的麻疹病毒阳性标本出现P→S的变异.结论 吉林省2013年麻疹病毒呈现NP的氨基酸位点变异多样化,提示要关注NP的氨基酸变异趋势.
作者：田鑫；周剑惠；单元春；王爽；曹凤瑞；程涛；魏雷雷；吕淑梅；李大强 刊期： 2014年第03期
目的 探讨原发性肝癌患者血清中的甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)水平与肝癌分期和癌灶大小的相关性.方法 随机选取162例原发性肝癌(PHC)患者的血清,分别进行总甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3的纯化和检测,并计算AFP-L3的百分含量后与患者的癌灶大小和肝癌分期进行相关性分析.结果 PHC患者血清AFP-L3百分含量与癌灶大小呈正相关(r=0.332,P=0.009),与肝癌分期不相关(r=0.121,P=0.189).结论 AFP-L3的测定对于判断癌灶的大小具有一定的临床意义.
作者：张健；阿克木江；刘爱霞；刘佳；赵静；徐军；戴亮；王卫东；卞成蓉 刊期： 2014年第03期
1 临床资料患者李某某,男性30岁,体重60 kg,既往有不洁注射史.于2012年5月当地医院体检时发现“抗HCV阳性,ALT70 U/L,6月17日起给予聚乙二醇干扰素α2a(派罗欣)180μg/周联合利巴韦林抗病毒治疗.治疗第3周来我院查ALT93U/L,HGB 142.00 g/L、WBC 6.74×109/L、中性粒细胞绝对值NE 4.93×109/L、RBC 4.82×1012/L、PLT 165.00×109/L.抗HCV 37.6s/co,HCVRNA＜15IU/ml,IL-28B基因rs12979860为CC型,rs8099917为TT型.淋巴细胞亚群、免疫球蛋白、甲状腺功能正常,自身抗体均阴性.
作者：陈大为；董漪；张鸿飞；徐志强；朱世殊 刊期： 2014年第03期
目的 从线粒体损伤的角度探讨ACLF存在的能量代谢障碍.方法 雄性SD大鼠随机分三组,ACLF组、NAC组各15只,正常组10只,制作ACLF模型,NAC灌胃作抗氧化模型.留肝组织及血液标本,梯度离心分离线粒体,ELLSA法测线粒体Cyt C、荧光酶标法测MPTP RFU;酶标法测肝组织、血浆GSH、MDA、SOD.结果 ACLF组肝组织、血浆MDA明显高于正常及NAC组(P＜0.05);NAC组MDA高于正常组(P ＜0.05);ACLF组血浆GSH、SOD低于正常及NAC组(P＜0.05);三组Cyt C为正常组高、ACLF组低(P＜0.05);三组MPTP为ACLF组高、正常组低;MPTP与Cyt C、ATP呈负相关(r=-0.858,-0.799);Cyt C与ATP呈正相关(r=0.78).结论 ACLF大鼠处于氧化应激损伤,Cyt C外流入胞质可能是ACLF发生能量代谢障碍的原因之一;NAC可在一定程度上提高肝细胞的抗氧化能力.
作者：王克菲；朱跃科；张剑；谢放；贾琳；刘晖；孟庆华 刊期： 2014年第03期
目的 研究1983-2013年间B型流感病毒的重配变异情况.方法 对GenBank数据库中1983-2013年间具有8个片段全基因组序列的B型流感病毒进行分析,利用Simplot软件筛选重配病毒,利用MEGA软件进行系统进化分析验证重配病毒.结果 获得432株B型流感病毒的全基因组序列,在66株代表病毒中,共计发现了22株重配株,其中9个为系内重配,13个为系间重配.在9个系内重配病毒中,2个B/Vic-87系内重配,7个B/Yam-88系内重配.Simplot软件结果和MEGA软件验证结果相似.结论 B型流感病毒间的重配事件频繁发生,既存在系内重配,也存在两系间的重配.Simplot软件可以用于快速筛选B型流感重配病毒.
作者：曾晓旭；隗合江；杨磊；李希妍；郭俊峰；蓝雨；邢永才；王大燕；舒跃龙 刊期： 2014年第03期
目的 研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的免疫原性.方法 利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统共表达3CD及P1蛋白,制备CA16病毒样颗粒,通过SDS-PAGE及透射电镜等方法对VLPs进行鉴定,以氢氧化铝佐剂免疫ICR小鼠,并对乳鼠经颅腔攻毒.对病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果进行评价.结果 将重组CA163CD及P1蛋白的杆状病毒转染SF9细胞,可以产生类似CA16病毒颗粒的大小为27 ～ 30 nm的VLPs.小鼠免疫试验结果显示CA16 VLPs可以刺激产生较高水平的抗CA16病毒的特异性IgG抗体及中和抗体,乳鼠攻毒试验结果显示,母传抗体保护率高达90％.结论 CA16 VLPs可以刺激小鼠产生较高水平的体液免疫反应,并且母传抗体可以保护乳鼠抵御经颅腔的病毒攻击.
作者：张福顺；郝春生；宋敬东；张硕；李阿茜；刘林；李川；张全福；梁米芳 刊期： 2014年第03期
目的 检测血清中高尔基体蛋白73(GP73水平),分析GP73指标对于原发性肝癌诊断的作用,探讨血清GP73水平和AFP联合检测对原发性肝癌诊断的临床价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(E LISA)定量检测60例体检正常者,128例慢性肝炎和肝硬化(CH/LC)患者和96例原发性肝癌(PHC)患者血清中的GP73,同时采用电化学发光法检测血清中AFP的水平.结果 经统计分析,正常对照组、CH/LC组和PHC组GP73表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05).GP73的敏感度和特异性分别为91.67％和95.21％,AFP的敏感度与特异度分别为73.96％和87.23％.GP73和AFP联合检测时敏感度与特异性分别为96.52％和87.46％.结论 GP73对PHC的诊断有较好的敏感度和特异性,血清GP73联合AFP检测能够有效地提高PHC的诊断效率,可用于PHC高危人群的普查.
作者：潘新娣；施前锋；邵伟芳；张卫国 刊期： 2014年第03期
目的 分析GⅡ-4型诺如病毒广州株GZ20133135全基因组序列,了解其分子结构特点及基因组类型.方法 根据Sydney2012参考株全序列设计引物,用RT-PCR分段扩增诺如病毒全基因组,经分子克隆、测序后进行系统进化分析.结果 GⅡ-4型NoVs广州株GZ20133135病毒基因组全长7566 bp,病毒基因组分三个开放阅读框(ORFs),ORF1、ORF2及ORF3长度分别为5100 bp、1623 bp和807 bp,ORF1与ORF2之间有19个核苷酸重叠.广州株GZ20133135基因组核苷酸序列与参考株GⅡ-4型Sydney2012变异株同源性高,全长同源性为99.07％.根据系统进化分析,广州株GZ20133135株属于GⅡ-4 Sydney2012变异株.通过对衣壳区氨基酸比对,Sydney2012变异株位点变化情况为:aa294V或A或P→T,aa296S或T→S,aa297H或Q→R,aa298D或N或T→N,aa368T或N或S或A→E,aa372 N或S→D,aa393 N或D或S,aa394 T或G或S→T,aa395T或A→T,aa407 N或D→S,aa412T或D→N,aa413G或I→T.结论 诺如病毒广州株GZ20133135与参考株Sydney2012NSW0514同源性高,属于GⅡ-4Sydney2012变异株.全长序列可应用于流行病学诊断、疫苗开发、预测新变异株的出现及诺如病毒流行株进化研究.
作者：田毅；裴银辉；靳淼；谢华萍；陈克娜；李慧莹；段招军 刊期： 2014年第03期
目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因(wt.AE env)相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的.
作者：陈丹瑛；汪孟冉；何小周；叶景荣；余双庆；李秦剑；徐柯；曾毅；冯霞 刊期： 2014年第03期
目的 探讨聚乙二醇干扰素α-2a联合基因重组酵母乙肝疫苗治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者疗效.方法 总75例HBeAg阳性慢性乙型肝炎纳入本研究,其中单用聚乙二醇干扰素α-2a治疗的45例(A组);聚乙二醇干扰素α-2a联合基因重组酵母乙肝疫苗的HBeAg阳性慢性乙肝患者30例(B组).对比分析两组在治疗0、24、48和72周时ALT、HBsAg水平、HBeAg血清转换率和HBV DNA阴转率的差异.结果 治疗前(0周)时两组患者的年龄、ALT、HBsAg和HBV DNA水平差异均无统计学意义(P＞0.05),其中联合治疗组(B组)HBeAg水平明显高于对照组(A组),差异具有统计学意义(P＜0.05).第24周和48周时,两组患者的ALT、HBsAg水平、HBeAg血清学转换率和HBV DNA阴转率差异并无统计学意义(P＞0.05).在治疗结束随访至72周时,A、B两组ALT、HBeAg血清转换率和HBsAg水平差异没有统计学意义(P＞0.05),但B组HBV DNA阴转率高于A组,差异具有统计学意义(P=0.032).结论 聚乙二醇干扰素α-2a联合基因重组乙肝疫苗治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者可以提高48周治疗结束后72周时的HBV DNA阴转率,但是与HBeAg血清学转换和HBsAg水平降低无关.
作者：王君萍；张卡；杨小安；孙海霞；徐启桓 刊期： 2014年第03期
目的 探讨氟伐他汀对巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染所致的apoE-/-小鼠主动脉血管重塑的影响.方法 以apoE-/-小鼠为研究对象,感染小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)后,观察主动脉动脉粥样硬化病变程度及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达情况,以及氟伐他汀对上述指标的影响.结果 MCMV感染可以加重apoE-/-小鼠主动脉的动脉粥样硬化病变面积和血管横截面积,以及MMP-9的表达;而氟伐他汀能够改善上述指标.结论 氟伐他汀能够改善MCMV感染所致的apoE-/-小鼠主动脉血管重塑.
作者：易立；赵日光；脱厚珍；王佳伟 刊期： 2014年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
