李娟；石英；李海英；梁连春；计云霞；陈德喜；陈新月；吴昊
目的 构建表达HPV18E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒,并对E7E6蛋白的免疫原性进行研究.方法 将去除了转化活性的HPV18E6、E7基因融合,插入痘苗病毒重组质粒,通过同源重组构建表达HPV18E7E6的重组痘苗病毒,观察其免疫效果.结果 构建了表达E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒,PCR鉴定及测序表明融合基因序列与设计相符,正确插入到痘苗病毒TK区域;Western-Blot检测表明该重组病毒能表达HPV18E7E6融合蛋白.免疫后的小鼠可产生E6、E7特异性抗体,但ELISPOT没检测到E7肽库刺激小鼠脾细胞产生分泌IFN-丫的阳性反应.结论 构建了一株表达HPV18E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒,可以有效诱发小鼠产生针对E6、E7的体液免疫,但不能诱发产生相应的细胞免疫,为进一步研究不同动物模型中HPV18E6E7的细胞免疫特点提供了实验基础.
作者：赵莉；任皎；冯靖；高见；张卉；田厚文；阮力 刊期： 2008年第03期
目的 探讨在慢性乙肝儿童中HBV基因型分布特性及与临床特征的关系.方法 采用HBV引物特异性基因分型原理,建立巢式PCR方法 对404例儿童慢性乙型肝炎患儿的血清HBVDNA基因进行分型.结果 在儿童慢性乙肝中HBVDNA基因型主要为8型(24.5%)和c型(70.5%),其中南方儿童的8型感染率(38.7%)明显高于北方(21.3%,P=0.002)儿童,北方儿童以C型(73.3%)感染为主.B/C型的感染无性别、年龄和母婴传播途径差异.儿童慢性HBV感染者B、c不同的基因型,肝功受损程度(P=0.4796)、血清HBeA9阳性率、HBV DNA病毒载量及肝脏炎症(P=0.209)、纤维化程度(P=0.177)差异均无统计学意义.结论 HBVDNA基因型分布在儿童虽然存在南北方地域的差异,但无母婴传播、病毒复制和肝脏损伤等方面的差异.
作者：朱世殊；张鸿飞；王海滨；董漪；陈大为；贾文峥；甘雨；陈菊梅 刊期： 2008年第03期
干扰素-α2b的副反应干扰素常见的副反应为流感样症状,如发热、寒战、头疼、乏力等,大部分患者都可耐受.长期、高剂量使用时可出现骨髓抑制现象,消化道反应,神经系统和心血管系统症状等,同时出现干扰素抗体,干扰素-α2a产生抗体的概率大于干扰素-α2b.
作者：卫学军；侯云德 刊期： 2008年第03期
目的 筛选人细胞中与高致病性禽流感病毒致病相关的基因,探讨高致病性禽流感病毒的致病机理.方法 分别用高致病性禽流感病毒安徽株和普通人流感病毒H1N1株分别感染人肺癌上皮细胞,通过人类全基因表达谱芯片技术对不同时段感染细胞进行差异表达分析,筛选出与高致病性禽流感病毒感染相关的候选基因,以实时定量荧光PCR法验证差异表达基因.结果 获得了不同致病性流感病毒感染细胞后的差异表达谱,验证了细胞凋亡通路、mTOR通路中以及与免疫相关的16个基因的差异表达.结论 H5N1感染后与普通人流感病毒H1N1相比具有促进细胞凋亡的趋势.
作者：胡晓芬；刘琴芝；李川；董婕；周剑芳；王敏；舒跃龙；刘宏图；梁米芳；李德新 刊期： 2008年第03期
目的 了解苏州市婴幼儿肠套叠的发病状况及肠套叠与轮状病毒性腹泻是否存在关联.方法 采用回顾调查的方法 ,以<2岁的婴幼儿为对象,统计1999-2003年在门诊和住院的肠套叠病例.采用ELISA法对2001年9月至2003年8月2岁以下的腹泻住院患者的粪便标本进行病毒抗原测定.结果 苏州市2岁以下的肠套叠患儿1101例,1999-2003年1岁以下肠套叠的发病率分别为:275.3/10万、338.2/10万、547.0/10万、515.3/10万、425.4/10万,平均年发病率为418.1/10万.肠套叠以4-10个月常见.共692例(62.85%).平均年龄(9.62±5.65)月.轮状病毒性腹泻是以5~16个月常见,共252例(76.13%).平均年龄(11.42±5.14)月.两组间发病年龄经比较,z=-15.52,P<0.01.肠套叠的发病高峰季节在4~8月份,共595例(54.04%).而轮状病毒性腹泻的发病的高峰季节在10月至次年1月,共232例(70.09%).两组问发病的季节的分布进行统计学检验,X2=226.06,P<0.001.结论 流行病学的资料显示肠套叠与轮状病毒性腹泻的相关性有待进一步研究.
作者：武庆斌；顾红英；唐伟国；金辉；王蓓 刊期： 2008年第03期
目的 建立慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA荧光定量检测方法 ,并检测慢性乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA含量.方法 根据HBV DNA结构特点,于HBV cicada缺口两侧高度保守区域设计巢式PCR引物和探针,并优化PCR反应条件;选取175例慢性乙型肝炎患者,提取抗病毒治疗前后血清DNA,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,进行rcDNA定量检测;分析影响血清HBV cccDNA检出率的相关因素,探讨血清HBV cccDNA载量与慢性乙型肝炎患者临床特征的关系.结果 慢性乙型肝炎患者血清中可检测到HBV cccDNA.血清HBV cccDNA检出率与血清HBV DNA载量相关.HBeAg阳性慢性乙肝患者血清HBV cccDNA载量高于HBeAg阴性慢性乙肝患者.结论 本方法 具有较好的敏感性,可用于HBV cccDNA的检测.
作者：钟彦伟；梁兆玲；任小强；李晓东；许智慧；李乐；徐东平 刊期： 2008年第03期
目的 研究影响乙肝免疫效果的因素,探讨提高乙肝免疫预防效果的方法 .方法 使用巢式病例对照研究方法 ,以2006年全国乙肝等疾病血清流行病调查河北现场的1734名1-15岁儿童作为研究对象,按其HBsAg是否阳性分为病例组和对照组,分析造成儿童HBsA9阳性的危险因素.结果 母亲HBsAg阳性和儿童年龄、出生医院是影响乙肝疫苗预防效果的主要因素(P<0.0001).结论 当前乙肝免疫预防的工作重点在于发现HBsAg阳性孕妇,同时改进农村地区的新生儿乙肝免疫预防条件.
作者：马景臣；韩彩芝；齐顺祥；田茶；李军；赵守军；张勇 刊期： 2008年第03期
目的 通过乙型肝炎流行病学调查和病毒基因检测,了解乙肝疫苗长期免疫地区低年龄人群的基因序列与突变特征.方法 从乙肝监测点收集乙型肝炎病毒表面抗原阳性血清,取其中年龄小于16岁者,扩增包括preS和S基因在内的基因序列片段,共1100碱基,序列测定后与标准基因型别比较,确定病毒基因及血清型别,确定a抗原决定簇的氨基酸替代突变发生率,选取一株病毒进行全基因扩增、克隆和序列测定.结果 共检测样本35例,33例血清扩增出乙肝病毒基因序列,其中30例乙型肝炎病毒基因型为B型,占90.9%,3例乙型肝炎病毒基因型为C型,占9.0%,1例血清型为ayw,3例为adr,其余29例为adw,共有5例在a抗原决定簇发生氨基酸替代突变,发生率约为15.2%.其中5856号血清扩增乙型肝炎病毒全基因为B型,血清型为adw,共3215个碱基.结论 该地区乙型肝炎基因型主要为B型,血清型为adw,人群中a抗原决定簇某些位点已发生与疫苗免疫逃逸相关的突变.
作者：边涛；张勇；曹彦强；王继杰；沈立萍；王峰；王岳；毕胜利 刊期： 2008年第03期
狂犬病毒糖蛋白(GP)是一种跨膜糖蛋白,存在于病毒包膜表面,以同源三聚体的形式存在,构成病毒表面突起.它是狂犬病毒5个结构蛋白中.唯一能刺激机体产生中和抗体的抗原,与狂犬病毒的多种生物学特性有关.
作者：焦洋；张强；唐青 刊期： 2008年第03期
目的 构建可表达乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg-EGFP融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系.方法 利用PCR技术从HBV基因组中扩增出HBsAg基因片段,BamH I/EcoR l双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N1真核表达载体,转化TG1菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPNl.HBsAg.将阳性克隆用脂质体法转染Chang Liver细胞,经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系.结果 成功构建了真核表达载体pEGFPN1-HBsAg;建立了其重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系.结论 重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系可表达HBsAg-EGFP融合蛋白;该细胞系可以用于筛选HBsAg转染细胞后,差异表达的蛋白质研究,为深入研究HBsAg可能的致病机制提供依据.
作者：牟劲松；王慧芬；王江华；潘孝本；张璐；魏来 刊期： 2008年第03期
目的 探讨新城疫病毒对BGC-823胃癌细胞线粒体结构和三磷酸腺苷(ATP)酶活性等功能的影响.方法 应用电子显微镜观察、线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性变化测定、罗丹明123染色法测定细胞线粒体膜电位及Western Blot测定细胞色素C等方法 进行分析.结果 新城疫病毒感染肿瘤细胞线粒体结构破坏,线粒体Na+-K+ATP酶、Ca2+-ATP酶活性较对照组显著下降(P<0.01).线粒体膜电位及细胞色素C显著下降(P<0.01).结论 对线粒体结构及功能的影响可能是新城疫病毒杀伤BGC-823胃癌细胞的机制之一.
作者：刘开扬；屈建国；刘进军；刘芳 刊期： 2008年第03期
目的 研究高致病性禽流感(HPAI)H5N1病毒NS1蛋白对干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响.方法 分别将禽流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)的NS1基因、插入80-84位缺失氨基酸的NS1突变基因及流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的NS1基因克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染人支气管上皮细胞BEAS-2B,流式细胞仪检测转染细胞内IP-10的表达情况.结果 与pEGFP-N1对照组相比,三种NS1蛋白均能下调BEAS-2B细胞IP-10的表达(P<0.01),但三者之间下调程度差异无统计学意义(P>0.01).结论 A/Anhui/1/2005(H5N1)禽流感病毒单一NS1蛋白能够抑制BEAS-2B细胞IP-10表达,但这并不能完全阐明其与病毒致病性之间的关系.
作者：贾晓俊；周剑芳；王晶钰；董婕；薄洪；李梓；李魁彪；蓝雨；舒跃龙 刊期： 2008年第03期
目的 探索用原核表达的人甲3型流感病毒核蛋白(NP)免疫小鼠所获得的抗重组蛋白抗体检测甲型流感病毒的可行性.方法 用Clustal X, Antheprot等软件,对IFV-A3 NP进行分析,确定保守区并分析其抗原性.RT-PCR获得NP基因,分3段克隆NP基因到PET-28(c),并在B121中诱导表达.经Ni-Agarose亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c鼠制备抗重组蛋白抗体.用Western Blot和免疫组化法检测抗重组蛋白抗体与病毒抗原的反应性.结果 重组质粒在BL21中高效表达,表达量为15-20 m9/L菌液.Western Blot检测显示,抗NP1、NP2、NP3多克隆抗体(1:2000)均对流感病毒NP具有反应性.免疫组化检测也显示,抗NP1、NP2、NP3多克隆抗体对IFV-A3、-Al感染的MDCK细胞有特异性染色,抗体滴度从1:640到1:1280.结论 重组表达的NP能够诱导产生高效价多克隆抗体,所产生的抗体与IFV-A3、A1具有交叉免疫反应性.通过生物信息学分析预测抗原性并制备多克隆抗体是可行的,并可望用于流感病毒感染的早期快速诊断的研究中.
作者：包怡华；辛若雷；邓洁；王芳；钱渊；吴建新；张霆 刊期： 2008年第03期
作者： 刊期： 2008年第03期
目的 探讨E2F1对XRCC1的调节作用及其意义.方法 将受四环素调节的启动子控制的E2F1表达载体(tet-E2F1)和突变的E2F1(tet-132E)表达载体分别转染至Saos2细胞,构建XRCC1启动子荧光报告载体,同时转染特异的XRCC1启动子荧光报告载体和不同数量的E2F1表达载体以及E2F2、E2F4、E2F4表达载体进入Saos2细胞,收集细胞,进行荧光素酶分析,570 nm波长读取吸光度值.结果 转染E2F1表达载体和XRCC1启动子荧光报告载体,提高E2F1载体的数量可以增加荧光素酶的活性,相反.突变的E2F1(132E)不能激活XRCC1启动子荧光报告基因.结论 E2F1能够激活XRCC1启动子,并且能够使XRCC1启动子表达增强.
作者：李娟；石英；李海英；梁连春；计云霞；陈德喜；陈新月；吴昊 刊期： 2008年第03期
作者： 刊期： 2008年第03期
目的 观察结肠净化治疗肝性脑病的临床疗效.方法 将我院收治的肝硬化合并肝性脑病患者117例随机分为两组,治疗组59例,对照组58例,在积极去除诱因基础上,两组患者均给予常规的抗肝性脑病治疗,治疗组在上述治疗的基础上加用结肠净化治疗.比较两组患者治疗前后症状、体征、肝功能、血氨及治疗后恢复清醒时间的变化,总有效率及死亡率.观察治疗前后的肝性脑病分期计分情况.结果 治疗组与对照组比较,治疗组可明显改善患者的症状体征,缩短患者的清醒时间,降低患者的血清转氨酶、胆红素及血氨水平,提高总有效率,降低死亡率,改善肝性脑病的计分值.结论 结肠净化是较为有效的治疗肝硬化合并肝性脑病的疗法.
作者：赵和平；丁保华；张建设；郭世民；张自然；赵耀州 刊期： 2008年第03期
目的 观察医源性HIV感染者CD8+细胞非细胞毒性HIV抑制反应(CNAR),并比较CNAR与CD4细胞计数的关系.方法 免疫磁珠法分离HIV感染者的CD8+细胞,按2:1,1:1,0.5:1和0.25:1的比例,与体外急性感染的CD4+细胞混合培养,测定培养物上清中逆转录酶活性,与阴性对照比较计算病毒抑制率.结果 CNAR活性达到80%病毒抑制率时,CD4<300个/μl组的平均CD8与CD4比例为2.4:1,CD4>300个/μl组的平均CD8与CD4比例为1.3:1,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIV感染者的CNAR活性与其CIM细胞计数相关,CD4>300的个体较CD4<300的个体有着更显著的抑制HIV复制的能力.
作者：袁霖；马丽英；臧希卉；孟向东；彭虹；赵全壁；邢辉；邵一鸣 刊期： 2008年第03期
目的 评价诊断狂犬病的新方法 -直接快速免疫组化法(Direct Rapid Immunohistochemical Test, DRIT)在我国狂犬病实验室监测工作中的应用推广价值.方法 采用美国疾病预防控制中心(CDC)狂犬病室新近建立的检测狂犬病毒抗原的DRIT法与目前常用狂犬病诊断方法 直接荧光抗体法(Direct Fluorescent-antibody Assay, DFA)和反转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR),检测来源于贵州、广西、湖南、安徽、江苏和云南6个省(区)的72份家犬及患者脑组织标本.通过比较3种方法的检测结果,评价DRIT法的敏感性和特异性.同时分析3种方法 的实验成本、技术要求等指标,讨论DRIT法的优势所在及适用范围.结果 3种方法对所有标本的检测结果一致,DRIT法具有与DFA法和RT-PCR法同等的敏感性和特异性.与其他两种方法 相比,DRIT法具有研究成本低、技术要求也较低的特点,更适于经费有限及技术力量较弱的实验室采用.结论 DRIT法在狂犬病诊断中有良好的应用价值,适于在我国基层CDC的狂犬病实验监测工作中普及推广.
作者：陶晓燕；Michael Niezgoda；杜加亮；李浩；王晓光；黄莹；焦洋；曹蕾；唐青；梁国栋 刊期： 2008年第03期
目的 测定中国狂犬病毒人用疫苗株aG和减毒株CTN181的RdRp编码(L)基因序列并初步研究其结构和功能特点.方法 RT-PCR法获得若干交叉重叠小片段,序列拼接得到完整RdRp编码基因序列,利用生物学软件进行同源性和种系发生分析,并对RdRp保守功能序列和位点进行预测分析.结果 中国狂犬病毒aG和CTN181株的L蛋白分别由6387和6384个核苷酸编码的2128和2127个氨基酸组成,前者比后者在起始部位多编码一个Met.结构功能分析发现在L蛋白上存在若干可能对RNA合成、mRNA聚腺苷酸化和磷蛋白磷酸化以及甲基转移酶的功能起决定作用序列;种系发生树显示中国疫苗株aG相对独立于WHO推荐使用的其他疫苗株.结论 完整L基因结构揭示,对于全面了解中国狂犬病毒分子特征,发现新的功能位点,开发以RdRp为靶标的新型抗病毒药物研究以及弹状病毒科种系发生分析提供了有力的工具.
作者：杜加亮；张强；陶晓燕；李浩；梁国栋；唐青 刊期： 2008年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
