学术投稿

用双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术分析HBV感染肝组织蛋白质组

秦雪;谢丽;陈晓燕;代智;崔杰峰;康晓楠;彭宽;舒宏;李山;刘银坤

关键词:肝炎病毒, 乙型, 肝, 肝炎, 蛋白质组学
摘要:目的 比较正常肝组织与HBV感染肝组织中蛋白质表达谱的改变,筛查在HBV致病过程中相关蛋白质分子表达的不同.方法 应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,对3例正常肝组织(A组),3例HBV感染肝组织(B组,均为组织HBsAg阳性,外周血HBsAg阳性、抗-Hbe阳性、抗-HBc阳性)的蛋白质组表达谱进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行了鉴定.结果 相同条件下对各组总蛋白样品分别进行3次双向电泳,各组检测到的蛋白点数如下:A组(1125±56)个,B组(1203±42)个.以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行2组间的匹配分析,筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点40个.应用质谱鉴定出人线粒体醛脱氢酶H链、结合珠蛋白Hp2、抗过氧化物蛋白2等22种蛋白质.结论 HBV感染所致慢性炎症能使肝组织表现出明显的差异性蛋白表达谱.
中华实验和临床病毒学杂志相关文献
  • 慢性乙型肝炎患者病毒基因型分布及与临床关系

    目的 了解邯郸市乙肝病毒基因型分布情况,并探讨其与临床的关系.方法 采用PCR-RFLP方法对邯郸108份HBV感染者的血清进行基因型分型,并结合转氨酶和HBV-DNA结果,分析乙肝病毒基因型的临床意义.结果 邯郸市慢性乙肝人群感染的HBV主要以C基因型为主,占93.5%,B基因型占6.5%.不同性别感染基因型差异无统计学意义.肝生化指标ALT、AST、TB比较提示C基因型患者的肝脏炎症似乎比B型患者重,但差异无统计学意义.C基因型的患者血清HBeAg阳性率高于B基因型.C基因型的患者血清HBV-DNA略高于B基因型,但无统计学差异.结论 邯郸市慢性乙肝人群感染的HBV主要以C基因型为主.C基因型患者血清HBeAg阳性率高于B基因型,C基因型患者与B基因型相比肝脏炎症较重,HBV-DNA略高,但差异无统计学意义.

    作者:孔洪彬;李友生 刊期: 2007年第04期

  • 三 干扰素-α(interferon alpha,IFN-α)

    1概述干扰素-α历史上曾用名为:B-细胞干扰素(Bcell interferon);血浆沉淀淡黄色表层干扰素(Buffy coat interferon);外源性细胞干扰素(Foreign cellinduced interferon);白细胞干扰素(Leukocyte interferon,LeIFN);淋巴母细胞干扰素(Lymphoblast interferon,LyIFN-alpha);类淋巴母细胞干扰素(Lymphoblastoid interferon,LyIFN-alpha);Namalwa细胞干扰素(Namalwa interferon);pH2-稳定干扰素(pH2-stable interferon);Ⅰ型干扰素(Type-1 interferon);RSV-诱导因子(RSV-induced factor).

    作者:张丽兰 刊期: 2007年第04期

  • 一起病毒性脑炎病因的分子生物学鉴定

    目的 探讨2003年山东济南地区病毒性脑炎(VE)流行病因.方法 通过随机PCR及肠道病毒特异性的RT-PCR扩增获得病毒分离株特异性核酸片段,测序并进行同源性分析和多序列比对,确定病毒种类及分型.结果 从患者标本中分离到5株病毒,以随机PCR获得其中1株病毒的核酸片段,经BLAST分析发现其与肠道病毒同源性高,然后分别测得5株病毒5'端非编码区及部分VP1区核酸序列,经序列比对分析,确定5株病毒均为小RNA病毒科肠道病毒属的柯萨奇B5,并且均与2002-2004年间浙江无菌性脑膜炎流行期间分离的柯萨奇B5分离株同源性高(95%以上).结论 柯萨奇B5是2003年济南地区VE流行的重要病因之一.

    作者:万言珍;岳盈盈;李鹏;李志会;李军;孟红 刊期: 2007年第04期

  • 二 干扰素的诱生和作用机制

    1概述50年前Issacs和Lindenmann在研究病毒干扰时发现了干扰素.半个世纪以来,干扰素研究始终是现代分子生物学的一个前沿领域.对此,我们可以从几个方面来认识.

    作者:金冬雁;黎孟枫 刊期: 2007年第04期

  • 自身免疫性肝炎CD4+CD25+high调节性T细胞的研究

    目的 探讨CD4+CD25+high调节性T细胞(Tr)在自身免疫性肝炎(AIH)发病中的作用.方法 用流式细胞仪技术比较分析AIH患者16例、慢性乙型肝炎(CHB)22例及键康正常人20例外周血中的CD4+CD25+high Tr细胞,同时用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况.结果 AIH组外周血中CD4+CD25+high/CD4+百分比显著低于正常组(P<0.05)和CHB组(P<0.01),并且CHB组显著高于正常组(P<0.05);同时AIH组外周血中CD4+T细胞也显著高于CHB组(P<0.01));肝组织Foxp3+细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区,AIH组肝组织Foxp3+表达显著低于CHB组(P<0.04).结论 CD4+CD25+high Tr细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一.

    作者:李明;诸葛洪祥;朱传武;胥萍;罗湘蓉;叶建中;朱伟;钱峰;王海燕 刊期: 2007年第04期

  • 正确使用医学名词

    随着医学科学的迅猛发展,浩如烟海的新医学名词不断出现,使人们应接不暇;一些老医学名词也有待人们去重新审视.有的命名不正确、欠科学;有的一名多译、欠统一.所有这些均不利于医学科学的交流和发展.

    作者:张伟 刊期: 2007年第04期

  • 重型肝炎/肝衰竭临床分类的进一步探讨

    目的 提高对重型肝炎/肝衰竭临床分类的进一步认识.方法 回顾分析251例急性、亚急性肝衰竭患者的临床资料,按照病因分为无肝病基础组(第1组)、肝炎组(第2组)、肝硬化组(第3组)共3组,并对每组中急性、亚急性肝衰竭的实验室检查、肝性脑病的发病率及预后进行统计学分析.结果 (1)转氨酶、胆碱脂酶及白蛋白的差异:无论是急性还是亚急性肝衰竭中,无肝病基础组转氨酶、胆碱脂酶及白蛋白均明显高于有肝病基础患者,特别是高于肝硬化组患者(P<0.05);(2)肝性脑病的发病率及各等级分布:在1、2、3组中,急性肝衰竭肝性脑病的发病率分别为100.00%,66.23%和51.02%;亚急性肝衰竭分别为71.42%,54.81%和49.99%;(3)在预后方面:在1、2、3组中急性肝衰竭的好转治愈率分别为15.38%、42.85%和26.09%;亚急性肝衰竭患者33.33%、51.39%和36.85%,3组具有统计学差异(P<0.05).结论 无论是急性还是亚急性发病,3组重型肝炎/肝衰竭患者的临床特点及其预后均有差异,依此进行分类,有其临床实用性及科学性,将能更好的指导临床诊断、治疗和预后判断.

    作者:曾珍;楼敏;韩玉坤;耿华;常秀娟;陈菊梅 刊期: 2007年第04期

  • 甲胎蛋白异质体的检测及临床应用

    甲胎蛋白(alpha fatoprotein,AFP)是早期肝细胞癌(HCC)诊断的良好指标,但是部分良性肝病也有AFP升高,30%~40%的肝细胞癌AFP正常,这样导致部分肝病无法判断良恶性.

    作者:陈松劲;邵平扬 刊期: 2007年第04期

  • 恶性肿瘤与人细小病毒B19DNA的关系探讨

    人细小病毒B19(human parvovirus B19,B19)是传染性红斑和急性再障危象的病因.为了解恶性肿瘤与B19病毒感染的关系,我们进行了如下研究.

    作者:焦丽;李林瑞 刊期: 2007年第04期

  • 双环醇片联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效和安全性分析

    目的 研究双环醇片联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎的疗效和安全性.方法 随机选择135例慢性乙型肝炎患者分2组接受治疗,试验组,68例,每日口服双环醇片75 mg,同时使用胸腺肽20 mg,肌内注射,隔日一次,对照组,67例,仅给予每日口服双环醇片75 mg,2组均连续用药24周.观察治疗前后血清氨基转移酶水平及血清病毒学标志方面的改变.结果 2组血清氨基转移酶均得到明显下降,但差异无统计学意义.试验组HBeAg阴转率(35.3%)显著高于对照组(19.4%)P<0.05,HBeAg血清转换率(22.0%)虽高于对照组(14.9%),但差异无统计学意义,HBV DNA阴转率(36.7%)显著高于对照组(20.9%)P<0.05.2组均未出现明显不良反应.结论 双环醇片和胸腺肽联合应用治疗慢性乙型肝炎可提高抗病毒疗效且安全.

    作者:侯世荣;谢碧红;顾小军;严晓敏;邱杰 刊期: 2007年第04期

  • 检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义

    目的 检测乙肝患者血清中乙肝两对半(HBVM)、乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)以及HBV DNA,比较在不同乙肝两对半模式的患者中HBV-LP与HBV DNA的检出率,探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)用于乙肝患者临床诊断的意义.方法 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBV-LP和乙肝两对半,采用荧光定量PCR方法对患者HBV DNA进行检测.结果 (1)相同乙肝模式患者血清中HBV-LP与HBV DNA检出率差异无统计学意义;(2)143例小三阳乙肝患者血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率差异无统计学意义,二者的检出一致率为82.52%[(65+53)/143];(3)HBV-LP吸光度(A值)与HBV DNA呈正相关关系(r=0.983).结论 乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白与HBV DNA有良好的正相关关系,在HBeAg阴性的乙肝患者中乙肝病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)与HBV DNA有较高检出一致率,HBV-LP用于临床反映乙肝病毒复制水平,特别是HBeAg阴性乙肝患者体内病毒复制情况有重要的意义.

    作者:龚玉华;胡云;张利莉;苏琴;刁仁联;缪家文 刊期: 2007年第04期

  • 用螨原代培养细胞检测螨体内汉坦病毒和恙虫病东方体复合感染的研究

    目的 研究汉坦病毒(Hantavirus,HV)和恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)能否同时共生于同一媒介小盾纤恙螨(Leptotrombidium scutellare)体内.方法 采集HFRS和恙虫病混合感染疫区鼠体恙螨和游离恙螨饲养的幼虫、若虫、成虫,蛋白酶消化后作螨细胞原代培养细胞片,用原位RT-PCR分子杂交和PCR法分别检测HV和Ot在培养螨细胞内的分布和定位.结果 HV和Ot在感染的螨细胞中多分布于消化系统的上皮细胞、卵巢组织细胞内,且随传代次数的增加而阳性率增高.结论 小盾纤恙螨可同时自然感染HV和Ot.

    作者:邓小昭;许可;蒋春梅;王忠灿;孔晶;刁振宇;钱俊英;张云;曹广文 刊期: 2007年第04期

  • 慢性重型肝炎合并真菌感染61例临床分析

    近年来随着高效、广谱抗生素及激素在临床上的广泛应用,真菌感染的发病率呈上升趋势[1].慢性重型肝炎由于肝功严重障碍,免疫力低下,易并发真菌感染,感染又再次加重肝功衰竭,促使病情恶化和死亡.本研究对我院近年来收治的慢性重型肝炎患者合并真菌感染的情况进行分析.

    作者:姚云洁;吴贻琛;朱琼香;邢汉前;游绍莉;辛绍杰 刊期: 2007年第04期

  • 血清谷氨酰转肽酶含量测定在慢性乙型肝炎中的临床意义

    目的 探讨血清谷氨酰转肽酶(GGT)含量变化在慢性乙型肝炎(CHB)不同程度肝脏病理损害中的变化规律及临床意义.方法 测定70例CHB患者血清ALT、AST、GGT水平,同时行肝活体组织检查,对肝脏进行炎症分级和纤维分期.分析ALT、AST、GGT与CHB之间的关系.结果 (1)ALT、AST、GGT随炎症程度和纤维化程度的上升而上升,但到G4和S4后则下降.GGT随ALT、AST的升高而升高,ALT、AST和GGT的相关系数分别为:0.322、0.328(P<0.05).在保肝治疗后,ALT较快降至正常且GGT保持在一个较低水平的为轻度CHB,而随着ALT下降,GGT仍持续在一个较高水平的为中度及重度CHB,其中重度CHB的GGT水平有所波动.结论 血清GGT比ALT、AST更准确的反映肝脏的炎症程度,GGT的活动度给临床判断慢乙肝的炎症提供了重要的判断依据.

    作者:冼永超;杨景毅;徐茹;黄成军;吴洛琳 刊期: 2007年第04期

  • 单纯疱疹病毒糖蛋白D与IL-2基因共表达质粒的构建及其免疫学鉴定

    目的 构建含单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D(gD)全长基因和人白细胞介素2(IL-2)共表达的重组真核表达质粒IRES-gD-IL-2,并诱导其在抗原提呈细胞--树突状细胞(DCs)的表达.方法 应用PCR方法分别扩增出HSV-1 gD和IL-2基因,经PCR、双酶切及测序证实正确后分别插入真核表达载体IRES的上、下游.通过脂质体介导转染DCs,并进行免疫学鉴定.结果 重组表达质粒IRES-gD-IL-2经PCR和酶切均出现相应长度的片段.经Western Blot证实,HSV-1 gD抗体可特异识别DCs内表达的gD蛋白.结论 构建了gD与IL-2共表达的重组真核表达质粒IRES-gD-IL-2,免疫印迹鉴定证实该表达产物具有免疫学活性.

    作者:李伟荣;王得新;王健伟;牛勃;胥显民 刊期: 2007年第04期

  • Nr-CWS对TC-1细胞致瘤作用的影响及抗女性下生殖道人乳头状瘤病毒感染的研究

    目的 探讨Nr-CWS对含HPV16型病毒基因的TC-1细胞荷瘤鼠肿瘤生长的影响及对女性下生殖道HPV感染的清除效果.方法 SCID小鼠分别注射TC-1细胞形成肿瘤模型后随机分成3组,分别注射生理盐水、60 μg/ml和120 μg/ml Nr-CWS,观察肿瘤生长的情况.临床选取45例单纯HPV感染者使用Nr-CWS 1个月、3个月后再次检测HPV,分析Nr-CWS对生殖道HPV感染的清除效果.结果 动物实验表明两组用药组的肿瘤体重明显低于对照组,抑瘤率分别为59.1%和84.2%;三组瘤重用秩和检验分析P<0.05,差异有统计学意义;临床实验结果显示用药后3个月HPV检测转阴23例(51.1%),型别减少9例(20%),无效13例(28.9%);治愈率与自然转阴率31%相比较,X2检验P=0.005,差异有统计学意义.结论 Nr-CWS对HPV16型病毒基因的TC-1细胞荷瘤鼠肿瘤有明显的抑制作用;且对临床女性下生殖道HPV感染有一定的清除作用.

    作者:赵健;詹少兵;李雪倩;周玲;杨英捷;廖秦平 刊期: 2007年第04期

  • 痘苗病毒增强子样序列的筛选及应用研究

    目的 从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响.方法 采用氯霉素乙酰转移酶基因(cat)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列VV1的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性.结果 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选出18个在大肠埃希菌中具有增强活性的序列,从中筛选到两个原核增强子样序列VV1和VV16,VV1正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,VV16正反向分别可使lacZ基因活性提高9.0倍和4.1倍;证实它们的增强活性体现在转录水平;用痘苗病毒增强子样序列VV1构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高2.6倍.结论 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到2个原核增强子样序列-携带有痘苗病毒增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平.

    作者:韩峰;秘晓林;曹茹;王艳;吴淑华 刊期: 2007年第04期

  • 复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

    目的 验证复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效和安全性.方法 将420例慢性乙型肝炎肝纤维化患者随机分为两组:治疗组300例,口服复方鳖甲软肝片,对照组120例,口服和络舒肝胶囊,6个月为1疗程.结果 治疗组的患者在改善症状和体征,恢复肝功能总疗效方面,显效率和总有效率分别为55.67%和81.67%,对照组分别为15.80%和60.00%,治疗组明显优于对照组(P<0.01).结论 复方鳖甲软肝片在改善中医症状,血清学肝纤维化及肝组织病理指标等方面疗效确切,可以有效治疗慢性乙型肝炎肝纤维化.

    作者:陈菊梅;杨永平;陈德永;韩晋;靳雪源;黄泽香;徐成彬;申砚明 刊期: 2007年第04期

  • 用双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术分析HBV感染肝组织蛋白质组

    目的 比较正常肝组织与HBV感染肝组织中蛋白质表达谱的改变,筛查在HBV致病过程中相关蛋白质分子表达的不同.方法 应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,对3例正常肝组织(A组),3例HBV感染肝组织(B组,均为组织HBsAg阳性,外周血HBsAg阳性、抗-Hbe阳性、抗-HBc阳性)的蛋白质组表达谱进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行了鉴定.结果 相同条件下对各组总蛋白样品分别进行3次双向电泳,各组检测到的蛋白点数如下:A组(1125±56)个,B组(1203±42)个.以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行2组间的匹配分析,筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点40个.应用质谱鉴定出人线粒体醛脱氢酶H链、结合珠蛋白Hp2、抗过氧化物蛋白2等22种蛋白质.结论 HBV感染所致慢性炎症能使肝组织表现出明显的差异性蛋白表达谱.

    作者:秦雪;谢丽;陈晓燕;代智;崔杰峰;康晓楠;彭宽;舒宏;李山;刘银坤 刊期: 2007年第04期

  • HBV慢性感染者免疫耐受相关临床与病理探讨

    目的 了解HBV慢性感染免疫耐受相关的临床与病理特征,探讨临床免疫耐受期患者的诊断.方法 对135例既往未出现过肝功异常的HBV慢性感染患者进行分析,了解他们年龄、性别、血清HBV DNA水平,肝功及肝脏病理情况.结果 本组患者平均年龄(22.61±8.95)岁,大部分肝脏损害轻微(99/135),病理损害轻微组(G≤1和S≤1)与病理损害明显组(G≥2或S≥2)在年龄、乙型肝炎家族史、性别等无明显差异,但在ALT≥30及ALT<30两组患者中,高水平的ALT组病理损害明显的患者更多见(20/41及16/94);血清HBVDNA≥107拷贝/ml与血清HBVDNA<107拷贝/ml两组患者比较,低水平的HBVDNA组病理损害明显的患者更多见(7/13及29/108).结论 HBV慢性感染HBVDNA、HBeAg阳性、既往肝功一直正常的患者,一般病理损害轻微,但尚有部分患者肝脏损害较明显,说明这部分人群不是都处于免疫耐受期,监测肝功及HBV DNA水平有助于免疫耐受的判断,特别是肝组织活体穿刺是指导诊治的有效办法.

    作者:游绍莉;邢汉前;刘鸿凌;荣义辉;朱冰;辛绍杰 刊期: 2007年第04期

中华实验和临床病毒学杂志

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主管:实验和临床病毒学杂志

主办:中国科学技术协会