学术投稿

携带GFP和FLAG标签的真核表达载体介导细胞珠蛋白在细胞内表达的定位研究

邹珊珊;王萍;魏威;李珍;董文其

关键词:细胞珠蛋白, 真核表达载体, 细胞内定位
摘要:目的 分别构建带有绿色荧光GFP标签和带有FLAG标签的细胞珠蛋白(CYGB)真核表达载体,观察其在人肝星状细胞(LX-2)的表达定位情况,探讨细胞珠蛋白经不同载体介导表达的定位差异.方法 提取人肝癌细胞(HepG2)总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得CYGB的cDNA,以cDNA为模板采用PCR法扩增得到CYGB编码序列.将其酶切后分别连接至带有GFP标签和FLAG标签的载体上,酶切与测序鉴定阳性克隆.随后将重组质粒分别瞬时转染LX-2细胞,Western blot鉴定表达情况.利用细胞免疫荧光定位,在荧光显微镜下观察两组定位差异.结果 双酶切和测序鉴定表明pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG真核表达载体构建成功;经Western blot鉴定,转染的两个载体都能够在LX-2细胞中表达融合蛋白;通过荧光显微镜发现,pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG介导的表达产物分别定位在整个细胞和细胞质中.结论 可能由于GFP分子量大等多种原因,导致带GFP标签的融合蛋白定位与带FLAG标签的定位不同,带FLAG标签的融合蛋白定位结果更加可信.
热带医学杂志相关文献
  • 热休克对P815细胞Qa-1表达的影响

    目的 研究热休克处理小鼠肥大细胞瘤细胞P815对细胞Qa-1表达变化的影响.方法 将体外培养的小鼠肥大细胞瘤细胞P815分为四组,热休克组(共三组)及对照组,至于43℃水浴箱中0.5、1、1.5 h,然后恢复37℃、5%CO2恒温培养,4h后收集细胞,经RT-PCR技术及流式细胞技术,对Qa-1在RNA水平的变化和细胞表面表达进行分析.结果 热休克处理的三组细胞其Qa-1的表达均显著高于对照组,其中1h组升高明显;经热休克处理的靶细胞表面Qa-1表达0.5、1、1.5 h分别为(11.22±2.49)%、(14.22±3.32)%、(12.71±2.28)%,均高于对照组相应时间的(7.99±1.28)%、(7.84±2.28)%、(8.01±3.32)%,差异均有统计学意义(P<0.05).其中1h引起Qa-1表达升高明显.结论 热休克可引起小鼠肥大细胞瘤细胞P815 Qa-1表达水平升高,热休克1 h Qa-1表达水平升高明显.

    作者:程子禾;熊伟;李敏;刘甜甜 刊期: 2014年第04期

  • 云浮市2006-2012年恙虫病流行病学分析

    目的 分析云浮市2006-2012年恙虫病疫情资料,为开展预防控制工作提供参考.方法 对云浮市2006-2012年恙虫病疫情资料采用描述性流行病学方法进行分析.结果 2006-2012年云浮市全市共报告恙虫病例567例,死亡3例,年均报告发病率为3.42/10万,2006-2012年各年报告发病率依次为0.13/10万、0.26/10万、2.70/10万、2.67/10万、3.30/10万、5.21/10万和9.54/10万,发病率逐年升高.5-11月为发病高峰期,病例主要集中在云安县(346例)和云城区(176例),所报告病例数占总数的92.06%;男性247例,女性320例,男女性别比为1∶1.30;40岁以上年龄组为主报告病例数472(占83.25%);职业以农民为主报告病例数498(占87.83%).结论 云浮市恙虫病发病率呈逐年增长趋势,建议加强恙虫病的监测,对高危人群开展健康教育以降低发生恙虫病流行的风险.

    作者:刘传鸽;冯梓来;雷洁贞;崔楚平 刊期: 2014年第04期

  • 恶性疟原虫PfRh5 F2片段pTGub21b表达载体的构建及融合蛋白表达鉴定

    目的 克隆表达恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5(PfRh5)F2片段,并评价其抗原性.方法 PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pTGub21b中,构建PfRh5F2/pTGub21b原核表达载体.IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,并用Western blot检测其抗原性.结果 成功构建了PfRh5F2/pTGub21b原核表达系统,并在大肠杆菌中可溶性高效表达,表达产物能被恶性疟患者血清识别,而重组抗原免疫鼠血清也能识别恶性疟患者血样中的相应抗原.结论 恶性疟原虫PfRh5 F2片段在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性.

    作者:程莎莎;郝文波;罗树红;廖小青 刊期: 2014年第04期

  • 外源性IL-15、IL-21对HIV-1感染者T淋巴细胞增殖的影响

    目的 探讨外源性细胞因子IL-15、IL-21对HIV-1感染者T淋巴细胞增殖的影响.方法 研究对象为24例已接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)及25例未经HAART的HIV-1感染者(HAART组及HAART-na(i)ve组).以HIV-1P24编码区的氨基酸序列人工合成的12个肽段组成的肽段库作为特异性抗原表位,另添加外源性细胞因子IL-15或者IL-21,对两组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC)进行体外刺激培养,采用羧乙基锗倍半氧化物(CFSE)对PBMC进行示踪染色;流式细胞仪检测刺激后的淋巴细胞的增殖情况.结果 HAART-na(i)ve组和HAART组中CD4+CD8+T细胞的增殖百分率,两组的组内比较可见,IL-21刺激的实验组(IL-21组)和IL-15刺激的实验组(IL-15组)均显著高于相应对照组(P均为0.000);HAART组CD8+T细胞增殖水平,IL-15组及IL-21组均明显高于HAART-na(i)ve组(Z=-2.394,P=0.017;Z=-2.130,P=0.033);HAART组与HAART-na(i)ve组中实验分组IL-15组及IL-21组CD4+细胞增殖情况比较差异均无统计学意义.结论 外源性IL-15、IL-21均能促进HIV-1感染者HARRT治疗前及治疗后CD4+及CD8+T淋巴细胞的增殖;且两种因子对CD8+T淋巴细胞增殖的作用HAART治疗后大于HAART治疗前.

    作者:平岖;姚细安;李玉枝;赵令斋;唐漾波 刊期: 2014年第04期

  • 劳力型与居民型热射病大鼠模型的比较

    目的 构建劳力型热射病大鼠模型,与居民型热射病大鼠模型比较.方法 雄性SPF级SD大鼠随机分为劳力型热射病组(E-HS)、居民型热射病组(C-HS)和相应的正常对照组(E-NC和C-NC组),每组16只.热射病组大鼠予39℃热暴露,E-HS组除了给予39℃热暴露外,同时让其在跑台持续运动.监测各组大鼠核心体温和动脉收缩压变化,对比核心体温调节反应和生存时间.结果 E-HS和C-HS组大鼠表现出不同的核心体温调节特征.尽管大核心体温差异无统计学意义,但是对比C-HS组大鼠,E-HS组大鼠核心体温上升速率显著加快(P<0.05),成模时间显著缩短(P<0.05),总热负荷和严重热负荷均显著减少(P<0.05),预后更差(P<0.05).结论 劳力型热射病大鼠模型相较与居民型热射病大鼠预后差,劳力型热射病大鼠模型的建立可为研究劳力型热射病的病理生理机制提供基础.

    作者:帅军;郭进强;覃旻;罗炳德 刊期: 2014年第04期

  • 肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

    目的 阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布.方法 用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE).结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC.产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTX-M-14).PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低.结论 广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主.

    作者:黄盈敏;方芝莉;卿芸;尹琳;冯炼强;田国宝;黄曦 刊期: 2014年第04期

  • 经皮内镜下胃造口术和鼻胃管给予肠内营养的效果比较

    目的 观察胃造口管(经皮内镜下胃造口术留置)及鼻胃管给予肠内营养的疗效区别.方法 因吞咽功能障碍或意识障碍需要较长时间(>4周)实行管饲营养的门诊或住院患者50例,根据患者及其家属是否接受分为经皮内镜下胃造口术(PEG)组和鼻胃管(NGT)组.PEG组实行经皮内镜下胃造口术,术后通过胃造口管给予肠内营养;NGT组实行鼻胃管给予肠内营养,观察两组患者管饲过程的并发症包括返流、吸入性肺炎等的发生情况,以及人体测量指标和实验室检查指标包括三头肌皮褶厚度(TSF)、上臂围(AC)、上臂肌围(AMC)、血清白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)的变化,观察期为3个月.结果 治疗3个月后,NGT组的ALB、PA、TSF值均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05),而PEG组的ALB、PA、TSF、MC值均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05),且PEG组ALB、PA升高的量高于NGT组,PEG组治疗效果优于NGT组,差异有统计学意义(P<0.05);PEG组3个月内返流和吸入性肺炎等常见并发症发生率低于NGT组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 对于需要较长时间管饲喂养的病人,PEG的疗效明显优于传统的NGT.

    作者:陈彩芳;陈艳鸿;黄鹤 刊期: 2014年第04期

  • 唐氏筛查高风险对胎儿其他染色体异常的预测意义

    目的 研究唐氏筛查高风险与其他染色体异常的关系,为降低其他染色体异常胎儿的出生提供参考.方法 回顾广州医科大学附属第三医院2010年1月至2013年6月共10 291例有产前诊断指征前来咨询的病例,研究唐氏筛查高风险并进行胎儿染色体核型分析的病例中所有异常染色体核型的分布.结果 4 163例唐氏筛查高风险的孕妇中3 336例同意进行染色体核型分析,其中97例检出染色体异常(2.91%),21、18、13三体综合征有46例(47.42%),而其他染色体异常包括性染色体异常、平衡易位、臂间倒位及嵌合体等共51例(51.55%).结论 唐氏筛查可以提示除21、18、13三体综合征以外的其他染色体异常,孕期唐氏筛查高风险有必要对胎儿进行进一步的产前诊断,并进行胎儿染色体核型分析,从而可以有力的降低出生缺陷儿的出生.

    作者:李海军;李志华;陈敏;陈兢思;陈菲;黄丽娟;潘悦健;赖峥菲;孙筱放 刊期: 2014年第04期

  • 广州北部山区螺种、蟹类及其感染并殖吸虫的调查

    目的 调查广州北部(从化区、增城区、龙门县、新丰县)山区淡水螺、淡水蟹感染并殖吸虫尾蚴、囊蚴的情况,了解并殖吸虫流行分布状况.方法 采集山溪螺蛳、溪蟹,检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴,鉴定并殖吸虫虫种.结果 从化区良口镇螺蛳尾蚴感染率0.32%,螺种为放逸短沟蜷;溪蟹囊蚴感染率100%,蟹种为平和华溪蟹.吕田镇螺蛳尾蚴感染率0.32%,螺种为拟钉螺;溪蟹感染率为36.73%,蟹种为平远南海溪蟹.龙门县南昆山尾蚴感染率0.15%,螺种为放逸短沟蜷;溪蟹囊蚴感染率为100%,溪种为平和华溪蟹.增城区、新丰县各调查点收集的螺蛳、溪蟹均未检测到尾蚴及囊蚴.结论 广州北部山区从化区良口镇、南昆山为卫氏并殖吸虫超高度疫源地(Ⅰ级).吕田镇为斯氏狸殖吸虫中度疫源地(Ⅲ级).

    作者:赵太平;陆予云;沈浩贤;龙小山;魏桂芬;罗健留 刊期: 2014年第04期

  • 广西玉林市非结核病防治机构网络报告肺结核患者转诊与追踪情况分析

    目的 分析玉林市2005-2012年非结防机构网络直报肺结核患者转诊、追踪及到位后活动性与涂阳肺结核检出情况及对发现活动性/涂阳患者的贡献率,为进一步做好该项工作提供科学依据.方法 对玉林市网络报告患者转诊追踪工作相关数据进行分析.结果 玉林市非结核防治机构网络直报肺结核及疑似患者转诊到位率、追踪到位率及总体到位率呈逐年上升趋势(P<0.001);到位后活动性肺结核及涂阳肺结核检出率分别为59.01%(16 725/28 345)和25.87%(7 333/28 345),未到位患者未到位原因主要是外出,非结核防治机构对发现活动性和涂阳肺结核患者的贡献率为53.13%和50.47%.结论 玉林市肺结核及疑似患者报告、转诊和追踪工作取得显著成效.

    作者:陈晓 刊期: 2014年第04期

  • 2007-2013年东莞市不明原因夜间睡眠猝死综合征的流行病学特征分析

    目的 研究近年来东莞市不明原因夜间睡眠猝死综合征(SUNDS)的流行病学特征,探寻有关的病因学线索.方法 收集东莞市2007-2013年SUNDS死亡病例,并在资料库中按年龄、性别和死亡时间相接近、1∶1匹配死因明确者作为对照组,同时对两组病例按年龄、性别、籍贯、死亡月份、死亡时刻及职业划分亚组,对病例资料数据进行统计分析,研究该病的流行病学特征.结果 2007-2013年东莞市SUNDS死亡病例共计565例;男女性别比为14.7∶1;2007-2013年各年发病率分别为0.68/10万、0.79/10万、0.60/10万、1.24/10万、1.20/10万、1.65/10万、0.93/10万;年龄分布在17~55岁,中位年龄为35岁,与全死因组年龄分布差异有统计学意义;发病例数高峰出现在3-6月份,低在10-12月份,与当地全年月平均气温变化趋势存在相关性;死亡高峰时段为凌晨0-1点,例数较低时段(凌晨3-4点)高出20多倍;病例籍贯来源多为湖南省(93例),有发病“聚集性”的是云南省(病例组/对照组4.25倍)、香港(3.67倍)及海南(2倍);SUNDS病例主要发生于劳动强度大、文化程度低的工厂一线工人、保安、清洁员等人群中.结论 近年来东莞市SUNDS的年均发病率未见下降,提示发病的高危因素依然存在,须作进一步流行病学调查查明高危因素.

    作者:余彬彬;翟李俊;徐伦武;郑金祥;黄二文;唐双柏;刘超;成建定 刊期: 2014年第04期

  • 2012-2013年广州地区鼻病毒感染的流行病学调查

    目的 了解2012-2013年广州地区呼吸道感染人群中人鼻病毒(HRV)感染的流行特征.方法 收集2012-2013年广州市5家哨点医院符合条件的有发热并伴有呼吸道感染症状患者的咽拭子标本2 124份,采用实时荧光定量PCR检测标本中HRV的核酸,同时结合患者的临床基本信息,分析HRV的感染情况、人群分布和时间分布等.对HRV阳性的标本进一步进行流感病毒(IFv)、呼吸道合胞病毒(RSV)等7种常见呼吸道病毒的检测,以了解其共感染情况.结果 共收集咽拭子2 124份,1 254份来自门诊急诊病例,870份来自住院病例;男性1 253份,女性871份,男女检出率无明显差异;年龄范围0个月到103岁.HRV检测阳性的标本有101份,阳性检出率为4.76%:阳性标本中20例混合感染了至少一种其他呼吸道病毒,占HRV阳性标本的19.80%;IFV是常见的混合感染病毒.HRV全年散发,秋季检出率高(6.13%),冬季低(1.51%),不同季节检出率差异有统计学意义(X2=10.592,P<0.05).尤以感染0~4岁的婴幼儿和65岁的老年人为主,中青年检出率低.结论 广州地区HRV以感染儿童和老年人为主,尤其是4岁以下的婴幼儿;全年均可发生;男女感染率无明显差异;与IFV混合感染率较高.

    作者:罗燕芬;钟慧玲;徐霖;庹玖玲;汪杨;朱勋;曾谷城;曹开源 刊期: 2014年第04期

  • 34例组织细胞坏死性淋巴结炎器官受累分析

    目的 探讨组织细胞坏死性淋巴结炎(HNL)的器官受累情况及治疗、预后,以提高对本病的认识.方法 收集1997年7月至2013年6月中山大学附属第三医院收治的34例HNL病例的临床资料,总结其器官受累特点、治疗与预后.结果 HNL可累及多个器官.34例患者均有淋巴结受累,血液受累者占67.6%(23/34),累及皮肤者占23.5%(8/34),累及肺脏者占14.7%(5/34),累及浆膜腔者占11.8%(4/34),累及脑膜者占5.9%(2/34),累及关节占2.9%(1/34).同时累及3个及以上器官者32.3%(11/34),定义为多器官受累,激素治疗起始剂量比非多器官受累组大(t=3.126,P<0.05),激素治疗时间亦较长(t=2.446,P<0.05).两组住院时间分别为(16.2±8.7)和(14.0±5.3)d,差异无统计学意义(t=0.751,P=0.465).结论 HNL激素治疗有效,多器官受累患者激素治疗起始剂量较大、时间较长.

    作者:石云锋;吴本权;周宇麒;刘慧;张天托 刊期: 2014年第04期

  • 携带GFP和FLAG标签的真核表达载体介导细胞珠蛋白在细胞内表达的定位研究

    目的 分别构建带有绿色荧光GFP标签和带有FLAG标签的细胞珠蛋白(CYGB)真核表达载体,观察其在人肝星状细胞(LX-2)的表达定位情况,探讨细胞珠蛋白经不同载体介导表达的定位差异.方法 提取人肝癌细胞(HepG2)总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得CYGB的cDNA,以cDNA为模板采用PCR法扩增得到CYGB编码序列.将其酶切后分别连接至带有GFP标签和FLAG标签的载体上,酶切与测序鉴定阳性克隆.随后将重组质粒分别瞬时转染LX-2细胞,Western blot鉴定表达情况.利用细胞免疫荧光定位,在荧光显微镜下观察两组定位差异.结果 双酶切和测序鉴定表明pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG真核表达载体构建成功;经Western blot鉴定,转染的两个载体都能够在LX-2细胞中表达融合蛋白;通过荧光显微镜发现,pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG介导的表达产物分别定位在整个细胞和细胞质中.结论 可能由于GFP分子量大等多种原因,导致带GFP标签的融合蛋白定位与带FLAG标签的定位不同,带FLAG标签的融合蛋白定位结果更加可信.

    作者:邹珊珊;王萍;魏威;李珍;董文其 刊期: 2014年第04期

  • 血浆置换联合持续性血液透析滤过治疗肝衰竭的疗效分析

    目的 回顾性分析人工肝血浆置换联合持续性血液透析滤过治疗肝衰竭的疗效及其影响因素.方法 收集2008年1月至2012年12月于佛山市第一人民医院在内科综合治疗基础上接受血浆置换联合持续性血液透析滤过治疗的肝衰竭患者77例,观察人工肝治疗前后的临床症状、生化指标(转氨酶、胆红素、凝血功能、肾功能、电解质)和不良反应.结果 人工肝治疗的肝衰竭患者,治疗后临床症状改善有效率为64.9%,转氨酶、总胆红素、凝血功能、肾功能、电解质均较治疗前有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05),其疗效与肝衰竭分期相关,以早期有效率高(P<0.05).治疗过程中出现35例次不良反应,经对症处理后,所有不良反应均可缓解.结论 在内科综合治疗基础之上,血浆置换联合持续性血液透析滤过治疗能有效治疗肝衰竭患者,不良反应少,可作为治疗肝衰竭的重要手段.

    作者:吴李贤;叶一农;何宏亮;龙辉;白红莲;李宗良;邓洪 刊期: 2014年第04期

  • EV71/CA16联合P1基因重组杆状病毒的构建

    目的 利用昆虫杆状病毒表达系统构建肠道病毒71型及柯萨奇病毒A16型(EV71/CA16)联合P1基因(HP1)重组杆状病毒.方法 利用重叠PCR的原理,设计合成HP1基因;HP1基因与载体pFastBac1连接后转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组穿梭杆粒HP1-bacmid;提取纯化重组杆粒转染Sf9细胞,收获重组杆状病毒;以SDS-PAGE、Western blot进行重组蛋白鉴定.结果 成功合成HP1基因;完成HP1与pFastBac1载体连接;获得了重组穿梭杆粒HP1-bacmid;并通过转染Sf9细胞,获得具有感染活性的重组杆状病毒;SDS-PAGE电泳结果显示重组病毒感染的Sf9细胞表达了大小约为100×103 Mr的目的蛋白条带,经Western blot鉴定,该条带能与EV71单克隆抗体特异结合.结论 成功构建了EV71/CA16联合P1基因重组杆状病毒,为下一步EV71/CA16联合P1蛋白的免疫鉴定奠定基础,并为兼抗EV71、CA16疫苗的研究提供参考.

    作者:陈仕菊;向蕾;王昕;吕星;陆家海;房师松 刊期: 2014年第04期

  • RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究

    目的 构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制.方法 构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况.结果 重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P<0.05).DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,pro-caspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡.进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点.

    作者:彭迎霞;张贤;张雪峰;高彦君;王穗海;李纪良 刊期: 2014年第04期

  • 胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病患者胰腺β细胞及血管内皮细胞功能的影响

    目的 探讨胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病(T2DM)患者胰腺β细胞及血管内皮细胞功能的影响.方法 选取初诊T2DM患者196例,随机分为观察组(n=98)与对照组(n=98).对照组给予口服降糖药治疗,观察组给予胰岛素强化治疗,即于早、中、晚餐15 min前皮下注射门冬胰岛素,睡前皮下注射甘精胰岛素,总疗程均为8周.于治疗前后观察两组患者的血糖、HbA1c和胰岛素水平,计算胰腺β细胞功能指数(Homa-β)和胰岛素抵抗指数(Homa-IR),检测血清一氧化氮(NO)和内皮素(ET),超声测定内皮依赖性血管舒张功能(FMEDD)和非内皮依赖性舒张功能(NIEID).结果 治疗后,两组FBG、2hPPG、HbA1c、Homa-IR、ET水平均降低,Homa-β、NO均增高(P<0.05或P<0.01);且观见察组FBG、2hPPG、HbA1c、Homa-IR、ET水平均低于对照组,Homa-β、NO、FMEDD高于对照组(P<0.05),血糖达标时间少于对照组(P<0.05).结论 短期速效胰岛素联合长效胰岛素强化治疗初诊T2DM有效控制了血糖水平,保护了胰腺β细胞及血管内皮细胞功能,对控制T2DM进展和并发症的发生具有积极的作用.

    作者:周卫东;任伟;韩金荣;刘慕华 刊期: 2014年第04期

  • 铜绿假单胞菌的耐药现状及外膜通道蛋白OprD2的研究

    目的 了解铜绿假单胞菌临床分布情况、耐药现状以及外膜通道蛋白OprD2的缺失与亚胺培南耐药的相关性.方法 收集2011-2013年深圳市第二人民医院临床分离到的949株铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行12种抗生素药敏试验,通过设计引物,运用聚合酶链反应(PCR)方法扩增oprD2基因.结果 共949株铜绿假单胞菌,分离率前两位的科室是神经外科和ICU病房,分别占25.40%和22.76%;铜绿假单胞菌对12种抗生素的药敏试验中,敏感的是阿米卡星(85.88%),其次是氨曲南(85.25%),耐药率高的是头孢他啶(37.09%),对亚胺培南耐药的有312株,即亚胺培南耐药铜绿假单胞菌(IRPA)的分离率为32.88%(312/949);2012年6-12月筛选的81株IRPA中,有42株oprD2基因缺失,缺失率为51.85%.结论 临床分离铜绿假单胞菌耐药性严重,外膜通道蛋白OprD2缺失可能是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因之一.

    作者:吴伟清;盖俊惠;李卓成 刊期: 2014年第04期

  • 三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇刺激其受体2在内皮细胞的表达

    目的 应用激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)刺激下S1P受体2(S1PR2)的表达变化,并探讨共聚焦三维重建技术与普通单层扫描技术在生物组织功能和形态学研究中的应用价值.方法 S1P(10μmol/L)刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs)6 h,Western blot检测S1PR2的表达变化;对细胞进行免疫荧光染色后,采用激光扫描共聚焦显微镜分别进行多层层切扫描和单层扫描,层切扫描之后对图像进行三维重建,比较两种技术的优劣.结果 Western blot结果显示S1P刺激6h后S1PR2表达显著性增高(P<0.05).荧光图像显示,单层扫描时S1P 6 h组荧光强度与对照组比较差异无统计学意义;而层切之后三维重建图像中,S1P刺激后S1PR2荧光强度显著高于正常对照组和单层扫描所得图像,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术,可以获得三维重构图像,并且具有三维立体及图像信息量更全的特点,更能客观的表现出整个细胞特定分子荧光强度的变化.

    作者:萧艳;王立群;黄巧冰 刊期: 2014年第04期

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