叶晓涛；李迎惠；陈日炳；张旭；马焕丽；何国坚
目的 对广州市及周边地区手足口病(HFMD)的流行病学和病原学特征进行分析.方法 收集2011年广州市及其周边地区手足口病病例968份,采用荧光定量RT-PCR方法对采集的标本进行肠道病毒(EV)核酸检测,将其分为肠道病71型(EV71)、萨克奇病毒A组16型(CA16)、非EV71、CA16阳性肠道病毒(N)三类,分离部分EV71毒株并进行全基因测序和分析.并用生物信息学软件进行病毒基因特征分析,经在线比对后进行EV型别鉴定.结果 分析显示2011年广州市及周边地区HFMD的高发年龄段为年龄小于4岁的儿童,1～2岁婴幼儿发病率高；5-7月为发病高峰期；EV71和CA16为HFMD的主要病原；但有24.79％的病例由其他肠道病毒(EV)型别引起.基于全基因序列构建种系发生进化树显示,所分离的6株EV71毒株与C4亚型毒株具有近的亲缘性和高的同源性.结论 2011年EV71和CA16为广州市及周边地区流行的主要病原,EV71病毒株分离株属于C4型,且遗传性较稳定,但存在部分其他型别EV引起HFMD.
作者：关琳琳；张定梅；徐霖；汪杨；罗燕芬；郑芸；曹开源 刊期： 2013年第04期
目的 探讨吉非替尼(Gefitinib)与染料木黄酮(Genistein)联合应用对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株H1975增殖与凋亡的影响.方法 采用MTT比色法观察两种药物单用及联用对人非小细胞肺癌细胞株H1975细胞增殖的影响；流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关基因PARP和caspase-3的蛋白水平.结果 Gefitinib与Genistein联合用药对H1975细胞的抗增殖效应优于Gefitinib单药组,协同增效作用明显,抑制率升高,并呈现剂量依赖的抗增殖效应,差异有统计学意义(P＜0.05)；两药联用细胞凋亡率为(68.70±7.13)％,与正常对照组的(3.12±0.75)％、Genistein组的(35.95±2.32)％、Gefitinib组的(42.03±4.38)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；与单药组比较,两药联用组PARP和caspase-3的断裂片段水平增加.结论 Genistein可以增强Gefitinib对H1975细胞的增殖抑制作用并促进肿瘤细胞的凋亡.
作者：张哲；郭进强；朱航；崔俊英；熊日波；万为人；罗炳德 刊期： 2013年第04期
目的 了解乙肝疫苗免疫失败者的HBV S基因的变异情况.方法 采用流行病学、ELISA与分子生物学方法,筛选乙肝疫苗免疫失败者.采用聚合酶链反应(PCR)、基因克隆和测序的方法,对乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因进行分析,并与HBV参考序列S基因进行比较,分析其变异情况.结果 从2 564份受检者中,筛选出2例(0.78‰)HBsAg(-)/HBeAg (+)/HBcAb(+)乙肝疫苗免疫失败者(HBs1、HBs2),经HBV DNA荧光定量PCR检测和HBV S基因PCR扩增,结果均为阳性,为B基因型.其S基因序列与参考序列(JX429908.1)相比,同源性为98.57％,且乙肝疫苗免疫失败者S基因在第363位和第467位分别南野生型的C变为A、G变为A,HBsAg 121位和156位氨基酸C和W缺失.结论 乙肝疫苗免疫失败者HBV S基因上第363位和第467位碱基存在错义突变(C→A和G→A),改变了HBsAg的结构和抗原性.
作者：蒋海青；朱平安；谢锦尧；金娴；肖娜；樊春卉；赵毅 刊期： 2013年第04期
目的 克隆家兔泛素样小分子修饰因子-2 (SUMO-2)基因,并预测其蛋白质结构和功能.方法 应用分子克隆技术从家兔肝组织中克隆SUMO-2基因,用DNAMAN、CBS等生物软件及网络分析平台分析克隆所得到的SUMO-2基因序列及其编码的蛋白结构.结果 测序结果显示成功克隆家兔SUMO-2基因片段,序列分析显示氢基酸序列与其他物种源性SUMO-2同源性较高,家兔SUMO-2蛋白氨基酸序列相对分子质量为10 826.9,等电点为4.70,蛋白主要以无规则卷曲形式存在(56.84％),可能含有1个N-糖基化位点,2个N-豆蔻酰化位点,1个丝氨酸磷酸化位点,2个苏氨酸磷酸化位点及2个蛋白激酶C磷酸化位点.元信号肽区域,元跨膜区,该蛋白可能为可溶性蛋白.结论 成功克隆家兔SUMO-2基因,为进一步研究SUMO-2与肝纤维化的关系及其功能奠定基础.
作者：郑科；沈天伦；张培；李思思；宋秋怡；张茹；朱丹丹；段义农 刊期： 2013年第04期
目的 研制一种无血清培养基,并与其他三种常用无血清培养基进行比较,探讨自主研发无血清培养基在肝细胞培养上的可行性.方法 以肝C3A细胞株为目标细胞,四组无血清培养基组均采取逐渐降低血清浓度方法(10％、5％、2.5％、0％),以达到完全无血清培养,与完全培养基组(阳性对照)及基础培养基组(阴性对照)在细胞活力、生长曲线、功能及相关功能基因上进行比较.结果 细胞培养24 h后开始生长,并保持与阳性组相似的生长率.从第2天起,自主研发无血清培养基组尿素合成率就明显高于阳性及阴性对照组(P＜0.001),在白蛋白合成上,实验组与阳性组比较差异无统计学意义.Real-time qPCR结果提示,在UGT、GST、AFP和ALB表达上,实验组与阳性组比较差异无统计学意义(P=0.640、0.075、0.504、1.000),但在CK18、CK19和HNF4α表达上,却明显低于阳性组(P＜0.001).结论 新研发的无血清培养基在肝细胞培养中与完全培养基基本相同,能维持细胞形态、活力及主要功能,使肝细胞能更好地应用于生物人工肝治疗中.
作者：蔡理全；赵逸超；汪艳；高毅 刊期： 2013年第04期
目的 建立快速的检测方法对腹泻患者中的小肠结肠炎耶尔森菌进行快速检测.方法 利用析因设计试验方法建立并优化检测小肠结肠炎耶尔森菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并与普通PCR法对临床腹泻标本进行检测比较.结果 析因设计试验确定LAMP佳反应体系:Mg2++为2.0 mmol,内引物FIP/BIP为1.6 μmol,dNTPs为1.6 mmol,时间为60 min,反应温度为63℃.对12种细菌进行LAMP扩增,仅小肠结肠炎耶尔森菌获得阳性扩增结果,小肠结肠炎耶尔森菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别为38.05 fg和15 CFU/ml.对腹泻样本进行直接检测,检测限为150 CFU/g.539例腹泻患者粪便标本中,LAMP成功检出13例样本中含有小肠结肠炎耶尔森菌,普通PCR检出11例,灵敏度为100％,特异度为99.62％.结论 本方法检测小肠结肠炎耶尔森菌特异性强、灵敏度高,且操作简单、快速、检测成本低,适合基层单位及现场应用.
作者：罗敏红；胡婷婷；冀新凤；李美青；黄燕惠；陈慧芳；姚月娴；陈清；俞守义 刊期： 2013年第04期
目的 探讨华支睾吸虫病的临床流行病学特征变化,为制定进一步的防治策略提供理论基础.方法 于2010年收集哈尔滨医科大学人体寄生虫病研究所就诊的疑似患者875人,采用Kato-Katz方法和酶联免疫方法分别对受检者的1 950份粪便样本和875份血清样本进行检测,同时收集患者的基本信息.结果 受检者中华支睾吸虫感染患者317例,感染率为36.23％,该病的流行多为散发病例.男性感染率为39.94％,明显高于女性的26.36％,差异有统计学意义(P＜0.001).感染率随年龄增长而上升,20～69岁人群感染率较高,其中40～49岁人群感染率高(42.71％).农村患者感染率(42.27％)高于城市(20.33％),反复感染患者常见,吃生鱼(虾)习惯具有高的感染风险(OR=28.507).结论 华支睾吸虫感染率较高,揭示该病流行病学特征和风险因素,将为加速控制和消灭华支睾吸虫病提供依据.
作者：韩甦；张晓丽；文景山；李懿宏；舒晶；董云霞；凌虹；张凤民 刊期： 2013年第04期
目的 建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE).方法 应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗；应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应.结果 重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15％左右；其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000.PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,大中和程度分别为49.84％和50.22％；FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到高峰.结论 重组DENV-2prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体.
作者：冯俊杰；罗雅艳；周俊梅；方丹云；曾谷城；晏辉钧；江丽芳 刊期： 2013年第04期
目的 了解宝安区感染性腹泻的病原菌构成情况,为控制感染性腹泻提供病原学依据.方法 采集辖区内2011年5月至2012年4月感染性腹泻患者的粪便标本,进行病原菌分离、鉴定,并对检测结果统计分析.结果 检测标本2 310份,病原菌的检出率为12.29％(284/2 310).分离菌株以副溶血性弧菌为主,其次是沙门菌和肠致泻性大肠埃希菌；夏秋季为高发季节,副溶血性弧菌检出高峰在6-9月;沙门菌感染中婴幼儿占52.56％,副溶血性弧菌在20～40岁多见.结论 副溶血性弧菌是辖区内感染性腹泻的主要病原菌,加强夏秋季海产品的监测和针对特定人群的饮食安全教育是腹泻防控的重要措施.
作者：余光清；雷蕾；茌静；郑晓晨；肖锦晖 刊期： 2013年第04期
目的 探讨高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞增殖、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及NF-κB活化的影响.方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)分为4组:正常对照组(含5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖1组(含15 mmol/L葡萄糖)、高糖2组(含20 mmol/L葡萄糖)和高糖3组(含25 mmol/L葡萄糖).MTT法检测细胞的增殖情况,ELISA法检测MCP-1的表达,Western blotting法检测IκBα以反映NF-κB的活性.结果 与正常对照组比较,高糖环境下24 h后细胞增殖明显,MCP-1表达明显增强(P＜0.01).高糖刺激30 min后,NF-κB结合蛋白IκBα明显降解,提示高糖可诱导MC NF-κB活化.结论 高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞的增殖及炎症因子MCP-1的高表达可能是通过NF-κB的活化来实现的.
作者：贾倩倩；王建成；赵艳；陈斯佳；龙海波 刊期： 2013年第04期
目的 研究2006年深圳市急性肠胃炎发病的主要病因.方法 收集深圳急性肠胃炎粪便样本200份(包含122份散发样本和78份暴发样本),采用RT-PCR的方法进行急性肠胃炎相关病毒检测.结果 44％ (88/200)的样本为诺如病毒阳性,9％(18/200)为轮状病毒A阳性,2％(4/200)为星状病毒阳性,2％ (4/200)为肠道腺病毒阳性,还有8％ (16/200)的样本为混合感染.其中散发样本中检出腺病毒、轮状病毒、星状病毒和诺如病毒GⅠ、诺如病毒GⅡ 5种病毒,而诺如病毒GⅡ是3次暴发样本中的唯一病原.对22例NoⅤ GⅡ阳性样本测序后的系统发育分析表明NoⅤ GⅡ.4 variants 2006b cluster是造成2006年深圳市肠胃炎暴发的主要诱因,其次为NoⅤ GⅡ.12和GⅡ.4 Hunter簇.结论 NoⅤ GⅡ.4是2006年流行于深圳的主要病毒株.
作者：谢飞飞；何雅青；程锦泉；姜君；杨洪；赵金银；张海龙；姚相杰；周俊宜 刊期： 2013年第04期
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在干扰素治疗过程中出现E抗原(HBeAg)/E抗体(抗-HBe)双阳性现象的临床意义.方法 回顾性分析317例CHB患者,观察聚乙二醇化干扰素(PEG-IFN-α)或普通干扰素(IFN-α)治疗过程中HBeAg/抗-HBe双阳性的发生率、持续时间和临床转归.结果 HBeAg阳性CHB患者在干扰素治疗过程中,HBeAg/抗-HBe双阳性发生率为25.2％.HBeAg/抗-HBe双阳性时HBeAg滴度中位数(范围)为3.45(1.03～187.54)S/CO,抗-HBe滴度为0.52(0.03～0.99)S/CO,均接近于各自截断值.出现过HBeAg/抗-HBe双阳性患者的HBV DNA阴转率、HBeAg阴转率及HBeAg血清转换率分别为76.2％、62.5％、61.2％,高于未出现者的49.8％、35.9％、29.1％,差异均有统计学意义(P均＜0.05).二分类Logistic回归显示,HBeAg阳性患者中,男性更易出现HBeAg/抗-HBe双阳性(OR=1.887；95％ CI:1.013～3.518).结论 干扰素治疗过程中,CHB患者出现HBeAg/抗-HBe双阳性的现象并不罕见；其终临床转归显示更易获得HBeAg血清学转换.
作者：张健；张艳茹；李威；王俊洁；张浩；陈金军；周元平 刊期： 2013年第04期
目的 探讨持续性血液透析联合活性碳血液灌流治疗重型肝炎的疗效.方法 将梅州市大埔县人民医院88例慢性重型肝炎患者随机分为两组,对照组(n=43)给予内科综合治疗及活性碳血液灌流治疗,观察组(n=45)在对照组基础上联用持续性血液透析治疗.观察两组治疗前、治疗结束时和治疗48 h后的临床疗效及生化指标的变化.结果 观察组的临床症状改善率达97.78％,显著高于对照组的81.39％,差异有统计学意义(P＜0.05)；低钾血症和低钠血症的复常率分别为100％和84.44％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).观察组肾功能明显改善,血BUN和Scr明显减低(P＜0.05)；且治疗后血总胆红素明显低于对照组,但两组下降幅度差异无统计学意义(P＞0.05),而治疗48 h后观察组总胆红素反弹幅度低于对照组(P＜0.05).结论 活性碳血液灌流联合持续性血液透析可显著改善慢性重型肝炎患者临床症状和肝肾功能,延缓胆红素治疗后反弹,值得推广应用.
作者：何丰海；刘成；黄伟崧；邱创衡 刊期： 2013年第04期
目的 研究外膜蛋白CarO的表达、序列突变与鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感性的关系.方法 收集鲍曼不动杆菌8株,E-test鉴定亚胺培南敏感性;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定菌株同源性；PCR法检验CarO基因,并进行序列分析;Real time PCR法检验CarO mRNA的表达;SDS电泳法比较CarO蛋白的表达.结果 本实验发现4株耐药菌株CarO序列同源性高；所有菌株中均存在CarO基因,但亚胺培南敏感及耐药菌株基因序列相似性仅87％,敏感菌株与耐药菌株均有CarO mRNA基因表达,且两者表达水平差异无统计学意义；SDS电泳也发现其基因序列不同者CarO蛋白分子量不同.结论 CarO基因序列改变可能与鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感性的变化有关.
作者：范敏；梁家隐；冼盈；李志涛；孙希；吴忠道；张扣兴 刊期： 2013年第04期
目的 观察硝普钠与硝酸甘油治疗高血压危象并急性左心功能不全患者的疗效.方法 选择深圳市龙岗中心医院2008年8月至2012年8月患高血压危象并急性左心功能不全的患者52例为研究对象,随机分为硝普钠组和硝酸甘油组,每组26例；在综合治疗的基础上硝普钠组使用微量泵注射硝普钠治疗,硝酸甘油组则给予硝酸甘油治疗,两组治疗后观察3h,监测患者血压、呼吸、心率等情况.结果 治疗后两组患者在血压、呼吸及心率方面均较治疗前改善,但硝普钠组患者血压、呼吸及心率改善程度优于硝酸甘油组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).硝普钠组总有效率为92.3％,硝酸甘油组为69.2％,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后硝普钠组收缩压、舒张压、心率恢复正常的时间较硝酸甘油组快,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在抢救高血压危象并急性左心功能不全患者时使用硝普钠的疗效优于硝酸甘油,值得推广应用.
作者：唐细生；胡平 刊期： 2013年第04期
以问题为基础的教学(PBL)模式具有良好教学效果,是一种能够适应当前医学模式转变的特色教学模式.本文通过将PBL模式应用于病原生物学教学的实践,对此模式所涉及的教学准备、实施及效果等问题进行了初步探讨,并对当前PBL应用于病原生物学教学所存在的问题做了分析.
作者：吴琛耘；张湘燕；吴健桦；徐大刚；王兆军 刊期： 2013年第04期
目的 以鸡卵黄免疫球蛋白IgY代替哺乳动物来源的IgG抗体,建立ELISA双抗体夹心法,探索用于诺如病毒检测的可行性.方法 以387型菌株(GⅡ.4型)诺如病毒P颗粒为抗原免疫健康产蛋来航鸡,制备、纯化特异性抗诺如病毒鸡卵黄免疫球蛋白IgY.采用过碘酸钠法对IgY进行酶标.以特异性抗体为捕获抗体,酶标抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA检测体系.评价其灵敏度、特异度及重复性.并将其与金标准进行比较.结果 本实验建立的双抗体夹心ELISA检测体系低检测限达20 ng/ml,批内变异系数为1.021％,批间变异系数为1.150％.临床应用评价显示真阳性率为82.5％,真阴性率为81.82％.与金标准比较,检出率差异无统计学意义(P=0.629).结论 建立了基于特异性抗诺如病毒卵黄抗体Igy的双抗体夹心ELISA检测体系,用于腹泻患者粪便标本诺如病毒的检测具有较好的敏感性和特异性.
作者：王云芸；戴迎春；聂军；蔡渊钧；胡婷婷；李建栋 刊期： 2013年第04期
目的 构建过表达和干扰RN181基因的肝癌MHCC97L重组细胞系,并研究RN181对该细胞体外增殖的影响.方法 基于基因克隆技术,构建plncx2-GFP-IRES/RN181重组载体,常规鉴定后,与pVSV-G共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒.该病毒与RN181干扰慢病毒分别感染MHCC97L细胞,流式分选表达绿色荧光的细胞,RT-PCR、Western blotting鉴定后,CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况.结果 重组载体构建成功,重组细胞荧光良好,RT-PCR、Western blotting分别证实重组细胞中RN181的mRNA和蛋白表达水平在重组细胞系间均出现差异有统计学意义(P＜0.05).增殖实验显示RN181上调后细胞生长减慢,克隆数也显著少于对照组(P＜0.05),而RN181干扰后上述现象可得到逆转.结论 成功构建了过表达和干扰RN181的MHCC97L重组细胞系,初步证实了RN181在体外对MHCC97L细胞增殖的抑制作用.
作者：王小波；彭迎霞；张贤；尹江丽；李明 刊期： 2013年第04期
目的 探讨霉酚酸衍生物(JU95-07B)对人外周血单个核细胞(PBMC)产生IL-17和IFN-γ的抑制作用,为临床治疗炎症及自身免疫性疾病提供依据.方法 用anti-CD3+anti-CD28刺激PBMC,酶联免疫吸附法(ELISA)检测加入不同浓度JU95-07B及作用不同时间点的IL-17和IFN-γ水平.用流式细胞术(FCM)检测JU95-07B对T细胞不同亚群表达IL-17和IFN-γ的影响.用RT-PCR法测定JU95-07B对IL-17和IFN-γ mRNA的作用.结果 JU95-07B对anti-CD3 +anti-CD28诱导PBMC产生的IL-17和IFN-γ均呈剂量依赖性的抑制,与作用时间有关,早期无明显的抑制现象,12h后开始出现有统计学意义的抑制效果(P＜0.05),培养时间越长抑制效果越明显.JU95-07B可明显降低CD4+和CD8+T细胞产生IL-17和IFN-γ的比例,对IL-17的抑制率高于IFN-γ.此外,JU95-07B抑制IL-17和IFN-γmRNA的表达.结论 JU95-07B能有效抑制T细胞产生IL-17和IFN-γ.
作者：唐泽丽；黄河；江玉霞；张燕楠；杨滨燕；吴长有 刊期： 2013年第04期
目的 分析宜昌市2010-2011年新型农村合作医疗(以下简称新农合)中肺结核病患者医疗费用情况,探讨合理应用新农合经费,促进结核病防治工作.方法 收集宜昌市新型农村合作医疗肺结核病患者医疗费用报销相关文件、宜昌市2010-2011年参合肺结核病患者门诊和住院费用结算资料,经EXCEL统计分析.结果 2010-2011年两年期间,宜昌市新农合共补偿了5 045例肺结核患者,两年医疗总花费为14 778 314元,新农合总支出6 608 937元,患者自付8 169 377元,报销比例为44.72％,人均医疗费用2 929.30元.2011年享受新农合报销政策的肺结核患者数增加了231例,住院人次增加了145例,住院比例增加了0.38％.新农合支出费用增加了1 382 317元,患者平均费用增加了653元,报销比例略有增加,增幅为4.79％.结论 新农合是肺结核病患者的一项重要保障措施,成为当前结核病防治工作的重要推动力量.但尚需加强管理,制订更为科学合理的补偿办法,以充分发挥新农合在补偿结核病方面的作用.
作者：刘晓俊；周萍；程云舫；张培；袁凤花 刊期： 2013年第04期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
