学术投稿

细菌直接PCR和双引物策略鉴定16S rRNA基因技术的建立

王佃鹏;董瑞玲;张艳芳;易娟;汤海燕;邓丽丹;罗斌;李培茂;张志敏;童向东

关键词:细菌, 直接PCR, 16S rRNA
摘要:目的 探索一种基于16S rRNA基因的快速鉴定细菌方法,为临床诊断治疗及耐药菌的分子遗传分析提供科学依据.方法 对卫生部室间质评菌株和临床病人标本分离培养纯菌落,用双蒸水稀释菌落,然后直接以菌液为模板优化反应体系PCR扩增16S rRNA基因片段,再测序扩增片段.将测序结果在细菌Ribosomal数据库中进行同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌.结果 本实验鉴定的卫生部质评菌株结果与卫生部报告结果一致.本实验能够一次性鉴定出临床病人标本分离的菌株.结论 本研究优化了一种免纯化细菌核酸直接PCR鉴定细菌16S rRNA基因的方法.本研究建立的基于病原细菌16S rRNA基因鉴定方法可用于细菌的快速诊断.
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    目的 了解广州市新生儿破伤风(NT)发病情况,确定高危人群,为消除NT策略与措施的调整提供依据.方法 对广州市2004-2010年NT监测系统数据进行描述流行病学分析.结果 广州市2004-2010年共报告NT病例365例,发病率为0.96‰,发病率呈逐年下降趋势,男女性别比为1.57∶1;死亡40例,病死率为10.96%,发病时间越短,病死率越高;病例主要为流动人口,特别是外省流动人口所占比例较大;全年均有病例发生,6-8月发病较多;发病时间集中在2~10d之间,4~8 d为发病高峰;病例以在家由未经培训人员或家人接生为主,大部分为计划外生育,母亲均未接种过破伤风类毒素,只有少数做过产前检查.结论 广州市消除NT的重点在于流动人口,要采取加强宣传教育、倡导住院分娩、提倡育龄期妇女接种破伤风类毒素、完善NT监测系统等综合防控措施,并将计划生育和消除NT的行动计划有机结合起来.

    作者:李建杰;许建雄;倪莉红;谭慧峰 刊期: 2012年第02期

  • 广州地区农村登革热旧疫点白纹伊蚊密度消长特点分析

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    作者:江毅民;严子锵;胡志刚;李成玲 刊期: 2012年第02期

  • 实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

    目的 建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定.方法 根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法.结果 检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的低检出限分别可达10fg和20 CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%.20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符.70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出.结论 建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌.

    作者:林一曼;石晓路;朱玉梅;邱亚群;李迎慧;吕东月;扈庆华 刊期: 2012年第02期

  • 根管治疗期间急症的发生程度与相关因素分析

    目的 分析根管治疗期间急症(EIAE)发生率、急性发作指数(FUI)及相关因素.方法 按纳入标准选取204例在湖南旺旺医院口腔科就诊需行根管治疗的患牙,随机分成两组,A组101例患牙采用双敞法制备根管;B组103例患牙采用根向深入法制备根管.记录相关数据,如患者年龄、性别、牙位、患牙治疗前状况(包括牙髓及根尖周状况、治疗前疼痛、窦道)及根管器械制备后1周内出现的症状.结果 204例患牙EIAE的发生率为13.24%(27/204),FUI值为3.51±1.36.双敞法组EIAE的发生率(21.78%)明显高于根向深入法组(4.85%),二者差异有统计学意义(P<0.01).双敞法组FUI值(5.53±1.09)明显高于根向深入法组(1.79±0.76)(P<0.01).根尖X线透射阴影阳性患者EIAE的发生率和FUI值明显高于根尖X线正常者(P<0.05);治疗前有疼痛和无窦道患者EIAE的发生率和FUI值明显高于无症状者(P<0.05);EIAE的发生率与患者的年龄、性别和牙位无显著相关性(P>0.05).结论 根向深入法制备根管能显著降低EIAE的发生率及急性发作程度,根尖X线透射阴影阳性、治疗前疼痛和根尖无窦道的患牙能增加EIAE的发生率及急性发作程度.

    作者:张颖;潘倩茹;黄绮凌;郑耀斌;黄世光 刊期: 2012年第02期

  • 两种枸橼酸钠置换液配方的抗凝效果比较

    目的 通过动物实验探讨两种不同剂量的枸橼酸钠置换液在血液滤过治疗过程中的抗凝效果.方法 将建立急性肾功能衰竭模型的18只实验犬随机分为枸橼酸钠1组、枸橼酸钠2组与肝素组,每组6只.12h行血液滤过治疗,血流量为50 ml/min、置换液速度为500 ml/h.枸橼酸钠1组使用含1.5 mmol/L枸橼酸钠的置换液,枸橼酸钠2组使用含0.5 mmol/L枸橼酸钠的置换液,两组均在血滤管路静脉端持续补钙;肝素组使用低分子肝素20 U/(kg·h)持续泵入;记录血液滤过前、血液滤过后每2h的血肌酐、尿素、血气分析、电解质、凝血指标的变化、管路及血滤器的凝血情况和使用时间.结果 三组血滤治疗过程中均未有管路和血滤器堵塞现象,实验犬的电解质、血气分析、血肌酐、尿素结果三组无明显差异(P>0.05).两组枸橼酸钠组的实验犬体内的PT、PT%、PT INR、APTT、AT3%均不延长,纤维蛋白原浓度(Fbg)无明显下降.与两组枸橼酸钠组比较,肝素组在血流量为50 ml/min、置换液速度为500 ml/h时,体内的PT、PTINR、APTT均有延长(P<0.01).结论 枸橼酸盐置换液应用血液滤过治疗时,浓度在0.5~1.5 mmol/L范围内枸橼酸钠置换液有良好的抗凝效果,对体内内环境影响较少.

    作者:罗冰;熊明媚;周嘉敏;李仕成;黄东健 刊期: 2012年第02期

  • miR-1、miR-16和miR-208前体在乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达

    目的 检测心肌特异的miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中的表达.方法 利用出生1~3 d的Sprague-Dawley (SD)大鼠和C57BL/6小鼠,采用2.5%胰酶消牝和差速贴壁法分离心肌细胞和心肌成纤维细胞.提取原代的乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及P1代的心肌成纤维细胞总RNA,以β-actin为内参照,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测miR-1、miR-16和miR-208的前体表达水平.用FluorChem8900软件分析琼脂糖凝胶电泳后PCR产物条带的灰度值,计算出表达的目的miRNA前体与β-actin的比值.结果 有效分离并培养了乳C57BL/6小鼠、乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞.RT-PCR结果显示,在乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中miR-1和miR-16均有相近水平的表达;心肌细胞中miR-208的表达显著低于miR-208b(P<0.01),miR-208b在心肌细胞中的表达显著高于其在心肌成纤维细胞中的表达(P<0.05).乳C57BL/6小鼠心肌细胞中miR-1a-1的表达显著低于miR-1a-2(P<0.01),而miR-1a-2在心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达水平一致;miR-16-1在心肌细胞和心肌成纤维细胞中表达水平相近,而miR-16-2在两种细胞中均不表达;心肌细胞中miR-208a和miR-208b表达水平差别不明显,心肌成纤维细胞中只有miR-208a表达,并且在水平上低于其在心肌细胞中的表达(P<0.05).结论 miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中呈细胞特异性的表达.

    作者:黄帅;朱杰宁;林秋雄;符永恒;郭林林;余细勇;单志新 刊期: 2012年第02期

  • 改良痰结核分枝杆菌L型涂片检测方法的建立和应用

    目的 建立一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分枝杆菌L型的涂片染色检测方法.方法 对常规的抗酸染色法进行方法学改良,以特异性基因扩增诊断法为标准,分析评价改良方法的灵敏度、特异性和总有效检出率等统计学指标;分别采用本改良抗酸染色法(以下简称本改良法)、常规抗酸染色法和改良IK抗酸染色法检测468例临床标本,对三种方法的阳性检出率进行统计学比较.结果 本改良法阳性检出率与特异性基因扩增诊断法、改良IK抗酸染色法比较均无明显差异(x2=0.25,P=0.6171;U=0.155,P=0.4404),但明显高于常规抗酸染色法(U=3.713,P<0.0010);本改良法灵敏度、特异性和总有效检出率与改良IK抗酸染色法相似,但高于常规抗酸染色法.同时,本改良法所需时间少于改良IK抗酸染色法(5 min vs 24 h).结论 成功建立了一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分支杆菌L型的涂片染色检测方法,适合临床推广应用.

    作者:赵丹;陈倩瑜;江雄飞;张兴树;殷玲丽;郭春江;杨小猛 刊期: 2012年第02期

  • 高危型HPV感染与食管鳞癌组织中HLA-G表达的相关性研究

    目的 研究人乳头瘤状病毒(HPV)在新乡地区食管鳞癌、癌旁组织中的感染情况和人类白细胞抗原系统G(HLA-G)表达的关系.方法 采用基因芯片技术检测114例食管鳞癌组织及癌旁食管正常组织中HPV亚型感染情况,免疫组化SP法检测HLA-G的表达.结果 114例食管鳞癌组织及癌旁食管正常组织中HPV感染阳性率分别为63.2%和6.0%,HLA-G的检出率分别为51.8%、0%,差异均有统计学意义(P<0.05);食管鳞癌存在HPV16、18和52三种亚型感染,其中HPV16感染率高,HPV52感染率低.结论 新乡地区食管鳞癌组织以HPV16、18和52亚型感染为主;HPV感染和HLA-G蛋白表达与食管鳞癌分化程度正相关;HPV感染食管鳞癌组织与HLA-G蛋白表达存在一定的相关性,可能提示与食管鳞癌发生有较密切关系.

    作者:许建功;蔡瑞君;熊刚;王武军 刊期: 2012年第02期

  • 3640例育龄产妇TORCH筛查回顾性分析

    目的 对育龄妇女产前TORCH筛查,并对结果进行回顾性分析.方法 采用ELISA法,对2009年1月至2011年5月在暨南大学附属第一医院做产前筛查的3 640名育龄妇女进行孕妇致畸八项(TORCH-IgM及IgG抗体)或优生四项(TORCH-IgM抗体)的检测.结果 孕妇致畸八项中TORCH-IgM阳性率为2.29%,优生四项中TORCH-IgM阳性率为1.59%,TORCH-IgM总阳性率为2.03%.孕妇致畸八项中Tox-IgG、RV-IgG、CMV-IgG及HSV-Ⅱ-IgG分别为3.49%、69.60%、83.30%和71.00%.结论 广州地区育龄妇女TORCH-IgG阳性率较低,而相应的IgM水平也较文献报道低,表明产妇TORCH既往感染和当前感染率均较低,可能与当前卫生条件的改善有关.

    作者:李珉珉;曾正坤;朱勤爱;朱穗兰 刊期: 2012年第02期

  • 妊娠及分娩对盆底肌力的影响

    目的 比较妊娠及分娩后妇女和正常妇女的盆底肌力,了解妊娠及分娩对盆底肌力的短期影响.方法 将183例在本院就诊的孕产妇分为顺产组和剖宫产组,使用盆底肌电生理仪分别检测其产前及产后盆底肌肌力,并与166例正常妇女进行评估及比较.结果 妊娠组盆底肌力与正常组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠组和正常组中的Ⅰ类与Ⅱ类肌纤维肌力均降低,但差异无统计学意义(P>0.05);产后6~8周顺产组盆底肌力较剖宫产组肌力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);产后12~14周顺产组盆底肌力与剖宫产组盆底肌力均降低,差异无统计学意义(P>0.05).结论 顺产及选择性剖宫产对盆底肌肌力的影响在产后3个月无明显差异.

    作者:刘芬;陈敦金 刊期: 2012年第02期

  • 清远市部分地区鼠类路氏锥虫感染调查

    目的 了解广东清远部分地区鼠类路氏锥虫自然感染情况.方法 2009-2010年在连州、佛冈和清新的居民区(自然村)内外环境捕捉鼠形动物,取鼠血液涂片染色镜检.结果 共检查鼠形动物238只,路氏锥虫总感染率为13.87%.连州、佛冈和清新的路氏锥虫感染率分别为18.18%、7.04%、14.71%.共捕获褐家鼠(85.71%)、黄胸鼠(3.78%)、黄毛鼠(7.98%)、板齿鼠(0.84%)、臭鼩鼱(1.68%)5种鼠形动物,褐家鼠的自然感染率为12.75%.不同地区、不同鼠种、不同生态环境的鼠数路氏锥虫感染率差异均无统计学意义(X2=4.352、0.916、3.356,P均>0.05).结论 清远地区鼠类路氏锥虫自然感染较普遍,褐家鼠是带虫优势鼠种,人群中是否存在可疑病例或隐性感染情况有待进一步探讨.

    作者:邝西金;李初升;孙小康;卢文涛;黄伟芳;谭绍安 刊期: 2012年第02期

  • 婴儿肝炎综合征血清前白蛋白、腺苷脱氨酶和总胆汁酸联合检测的临床应用

    目的 探讨婴儿肝炎综合征(IHS)血清前白蛋白(PA)、腺苷脱氨酶(ADA)、总胆汁酸(TBA)的变化规律及其诊疗价值.方法 应用全自动生化分析仪检测198例IHS患儿的血清PA、ADA、TBA,并与健康对照组比较.结果 IHS组PA浓度低于对照组,差异有统计学意义(t=2.512,P<0.05);IHS组ADA、TBA浓度均高于对照组,差异有统计学意义(t分别为3.517,8.753,P均<0.05).单项检测时IHS患儿PA的阳性率为90.4%,ADA的阳性率为92.4%,TBA的阳性率为96.0%,联合检测三项指标阳性率可高达100%.结论 联合检测血清PA、ADA、TBA水平能较早地反映肝脏合成及代谢功能,对IHS的病情判断和预后有重要的临床价值.

    作者:陈小娟;曾兰兰;李娟;高飞;郑浩 刊期: 2012年第02期

  • 石炭酸浓度对脑脊液蛋白定性试验的影响

    目的 探讨脑脊液蛋白定性适用的石炭酸浓度.方法 配制5%、8%和过饱和浓度的石炭酸溶液,与71例病人脑脊液标本进行潘氏试验,配制不同浓度的总蛋白和球蛋白标准液,与不同浓度的石炭酸进行蛋白定性试验.比较不同浓度的石炭酸对脑脊液蛋白定性的影响.结果 同一级别的潘氏试验结果,5%浓度的石炭酸对应脑脊液总蛋白含量高于8%和过饱和浓度的石炭酸;5%和6%浓度的石炭酸与各种浓度的总蛋白标准液定性均为阴性(-),8%、饱和和过饱和浓度的石炭酸与各种浓度的总蛋白标准液均出现极弱阳性(±)以上结果,过饱和浓度石炭酸结果阳性值较前两者强;5%浓度石炭酸与低浓度(≤1 200 mg/L)球蛋白标准液定性结果均为阴性(-),7%、8%和10%浓度的石炭酸与球蛋白标准液蛋白定性较一致,均在1 200 mg/L时出现阳性(+)结果,过饱和浓度的石炭酸在150 mg/L时出现极弱阳性(±)结果.结论 不同浓度的石炭酸潘氏试验有显著差异,8%以上浓度的石炭酸潘氏试验较灵敏,以过饱和浓度的石炭酸灵敏度高,适合脑脊液潘氏试验.

    作者:池沛冬;罗耀凌;邝妙欢;钟义富 刊期: 2012年第02期

  • LPS诱导CD11b+Gr-1+髓源抑制性细胞在小鼠脾脏募集的研究

    目的 观察脂多糖(LPS)诱导的髓源抑制性细胞(MDSCs)在小鼠脾脏中的募集情况,以探讨诱导MDSCs募集的新方法.方法 采用LPS反复腹腔注射的方法使小鼠产生内毒素耐受.流式细胞术检测正常小鼠和LPS注射小鼠第5、10天脾脏中CD11b+Gr-1+双阳性细胞,即MDSCs的比例.结果 经LPS处理后第5、10天脾脏MDSCs的比例分别为( 17.99±1.66)%和(27.37±6.62)%,较正常小鼠(4.53±3.00)%显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 LPS可在短期内诱导大量MDSCs在小鼠脾脏中聚集.

    作者:郑燕妮;于化鹏;陈新;龚雨新 刊期: 2012年第02期

  • 珠海市农村地区2010年华支睾吸虫感染情况调查及其危险因素分析

    目的 了解珠海市农村地区华支睾吸虫感染和流行现状,为制定防治规划提供科学依据.方法 采用改良加藤厚涂片法(kato-katz法)检查华支睾吸虫虫卵,并进行华支睾吸虫知晓和防治状况调查.结果 本次抽样调查斗门区5个乡镇共1 000人,检出华支睾吸虫感染者63人,以中年男性为主,总感染率为6.3%(63/1 000).被调查者对于肝吸虫防治知识的知晓率为87.8%,生熟食品砧板分开成为感染华支睾吸虫病的保护性因素(OR=0.11,OR95% C.I.(0.02-0.62).结论 珠海市农村地区华支睾吸虫感染率低于全省平均水平,肝吸虫防治知识知晓率较高,生熟食品砧板分开是感染华支睾吸虫病的保护因素.

    作者:焦亮;陈斌;周伴群;罗志华;赵超敏;张恒秋 刊期: 2012年第02期

  • 多重PCR检测婴幼儿腹泻样本中常见病毒

    目的 初步了解深圳地区引起临床婴幼儿急性腹泻中常见病毒的病原分布情况,为临床防治提供依据.方法 采用多重RT-PCR方法检测婴幼儿急性腹泻常见病毒:轮状病毒(RV)、星状病毒(AstV)、诺如病毒(NV),采用单重PCR法筛查临床腹泻标本肠道腺病毒(EAdV).结果 在440份标本中,共检出197例至少感染一种腹泻病毒,总阳性率为44.77% (197/440),其中183例为一种病毒感染,14例(3.18%)为混合感染.4种腹泻病毒以RV感染为主,阳性率为28.64%(126/440);其次是EAdV,阳性率为8.86% (39/440);NV阳性率为5.45%(24/440);AstV阳性率为1.82%(8/440).混合感染以RV合并其他病毒感染为主,占92.86%.结论 RV、EAdV和NV是引起深圳地区婴幼儿急性腹泻的主要病毒致病原,混合感染以RV联合其他病毒感染为主,临床上应根据所感染病原体制定有针对性的诊治措施.

    作者:徐丹;罗历;谭文;班博;沈化清;陆学东 刊期: 2012年第02期

  • 2008-2010年重庆市血吸虫病潜在流行区监测报告

    目的 了解重庆市血吸虫病潜在流行区血吸虫病潜在流行因素,为血吸虫病潜在流行区提供预警信息,防止钉螺的扩散与血吸虫病疫情的传播.方法 在三峡库区中段万州和支流上游开县设立固定监测点和流动监测点,调查当地居民、流动人口及家畜的血吸虫感染情况;在固定危险地带和流动可疑环境开展输入性钉螺调查.采用ELISA方法检测人群血清血吸虫抗体情况.结果 2个监测点共调查当地居民2 006人,血清阳性率为1.50%(30/2006),开县血清阳性率高于万州(2.29% vs 0.70%),差异有统计学意义(x2=8.66,P<0.01).调查流动人员1 970人,血清阳性率为2.39%,返乡人员血清阳性率高于疫区来渝人员(2.92% vs 0.26%)(x2=9.54,P<0.01),万州区的流动人员阳性率高于开县(3.61% vs 1.32%)(x2=11.03,P<0.01).监测点未发现从血吸虫病流行区引进的家畜,检测当地的牛和羊血清均为阴性.固定监测和流动监测分别调查133 875、545 530 m2,未发现钉螺.结论 重庆市血吸虫病潜在流行区存在血吸虫病传播的危险因素,应加强潜在流行区的传染源监测和管理,防止钉螺输入潜在流行区.

    作者:吴成果;肖邦忠;李珊珊;罗兴建;罗飞 刊期: 2012年第02期

  • 长效与常规干扰素治疗慢性乙型肝炎引起骨髓抑制的特点及其对疗效的影响

    目的 分析聚乙二醇干扰素α(Peg-IFN-α)与干扰素α(IFN-α)治疗慢性乙型肝炎(CHB)引起骨髓抑制的特点和差别、对抗病毒疗效的影响和两类干预药物的效果.方法 252例CHB患者分别给予Peg-IFN-α或IFN-α治疗48周,比较IFN应用过程中Peg-IFN-α治疗组和IFN-α治疗组白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)和血小板(PLT)的变化及差异;以IFN治疗24周内血细胞计数低值将患者再分组,比较各亚组干扰素的疗效;比较口服升白细胞药物和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对干扰素所致Neu减少的疗效.结果 Peg-IFN-α治疗组引起骨髓抑制较IFN-α治疗组常见,两组WBC、PLT减少比率、Neu≤0.75×109/L比率差异有统计学意义(P<0.05);3.6× 109/L>WBC≥2.5×109/L亚组较WBC≥3.6×109/L亚组有更高的HBeAg和HBV DNA阴转率(P<0.05),1.5× 109/L>Neu≥0.75×109/L亚组较Neu≥1.5×109/L亚组有较高的HBeAg阴转率(P<0.05);与口服升白细胞药物相比,rhG-CSF对IFN引起的Neu减少疗效快速而短暂,二者升白细胞治疗1周和1月时的Neu计数及有效率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Peg-IFN-α引起骨髓抑制较IFN-α更为常见,白细胞下降幅度可一定程度预测IFN的疗效,rhG-CSF用于IFN治疗CHB引起的骨髓抑制的临床价值值得进一步探讨.

    作者:周斌;周锐;李威;王俊洁;张健;张浩;杨淑玲;姜荣龙;周元平 刊期: 2012年第02期

  • 锁核酸结合分子信标技术检测乙型肝炎病毒DNA G1896A点突变研究

    目的 研究和评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法.方法 收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定.结果 突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100 copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合.结论 实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBV DNA G1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值.

    作者:张红;郑欣;宋庆涛;蔡剑英;王大明;曾劲峰;叶贤林;熊文 刊期: 2012年第02期

  • 细菌直接PCR和双引物策略鉴定16S rRNA基因技术的建立

    目的 探索一种基于16S rRNA基因的快速鉴定细菌方法,为临床诊断治疗及耐药菌的分子遗传分析提供科学依据.方法 对卫生部室间质评菌株和临床病人标本分离培养纯菌落,用双蒸水稀释菌落,然后直接以菌液为模板优化反应体系PCR扩增16S rRNA基因片段,再测序扩增片段.将测序结果在细菌Ribosomal数据库中进行同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌.结果 本实验鉴定的卫生部质评菌株结果与卫生部报告结果一致.本实验能够一次性鉴定出临床病人标本分离的菌株.结论 本研究优化了一种免纯化细菌核酸直接PCR鉴定细菌16S rRNA基因的方法.本研究建立的基于病原细菌16S rRNA基因鉴定方法可用于细菌的快速诊断.

    作者:王佃鹏;董瑞玲;张艳芳;易娟;汤海燕;邓丽丹;罗斌;李培茂;张志敏;童向东 刊期: 2012年第02期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会