学术投稿

携带EGFP与rtTA双基因的逆转录病毒载体的构建及其在PA317细胞中的表达

赵宁;邓新燕;单于;郭中敏

关键词:pLXSN逆转录病毒载体, rtTA基因, EGFP基因, PA317细胞
摘要:目的 构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP-rtTA,并在PA317细胞中表达.方法 以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应获得EGFP基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN,筛选出正确的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP.PCR方法从pTet-on质粒中扩增出rtTA基因,酶切纯化后克隆于逆转 录病毒载体pLXSN-EGFP中,限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定筛选出正确的重组载体pLXSN-EGFP-rtTA,脂质体介导转染PA317细胞,PCR方法检测PA317细胞内EGFP、rtTA基因,RT-PCR方法检测PA317细胞内rtTA基因的mRNA表达,荧光显微镜观察EGFP基因的表达情况.以NIH3T3细胞为靶细胞测定重组逆转录病毒滴度.结果 成功构建了表达EGFP、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体,转染PA317细胞后,RT-PCR方法可检测到rtTA基因的mRNA表达,荧光显微镜下可观察到EGFP基因表达所产生的绿色荧光,说明连接有EGFP和rtTA双基因的逆转录病毒载体在PA317细胞中可正常表达,转染pLXSN-EGFP-rtTA载体的PA317细胞可产生4.8x 104 CFU/ml病毒滴度的重组病毒.结论 成功构建表达EGFP、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体,该载体可在PA317细胞内正常表达,获得较高滴度的病毒上清.
热带医学杂志相关文献
  • 腹水型晚期血吸虫病治疗方法研究进展

    腹水型晚期血吸虫病患者基本丧失劳动力,一般不能彻底治愈,可达到临床治愈,但不少病人仍反复发作,需长期治疗.腹水型晚期血吸虫病患者是我国晚期血吸虫病医疗救治工作的重点对象,为了更好地提高医疗救治效果,本文就近几年来腹水型晚期血吸虫病治疗方法作一综述.

    作者:来如意;何永康;邓维成;刘爱忠;荆群山 刊期: 2012年第12期

  • 梅州市2010-2011年手足口病病原学流行特征分析

    目的 了解梅州市手足口病病原学流行情况,为手足口病控制和治疗提供科学依据.方法 对2010-2011年梅州市手足口病哨点病原学监测医院的手足口病病例采集粪便标本,提取标本中的核酸,采用实时荧光定量PCR方法扩增病毒的特异性片段,检测总肠道病毒、EV71和CoxA16核酸.结果 255份手足口病临床诊断病例的粪便标本中,总肠道病毒、EV71和CoxA 16病毒核酸检出率分别为72.55%、40.39%和11.37%,其中EV71和CoxA16核酸检出率差异有统计学意义(x2=55.97,P<0.01).发病以5-7月高发,占48.65%,有较明显的季节性分布.男性总肠道病毒核酸检出率高于女性(x2=10.24,P<0.01),但不同性别间的EV71和CoxA16病毒核酸检出率差异均无统计学意义(x2=0.01、0.69,均P>0.05).结论 EV71是梅州市2010-2011年手足口病的主要病原体.今后应加强手足口病流行特征和病原谱的动态研究,以进一步掌握手足口病流行规律.

    作者:陈志青;林立新;王东勉;黄玉玲;杨翼龙;何秋瑜 刊期: 2012年第12期

  • 86例复治涂阳肺结核患者的耐药分析

    目的 探讨复治涂阳肺结核患者对抗结核药物的耐药特点.方法 回顾性分析86例复治涂阳肺结核患者的单耐药、多耐药及耐多药的情况及治疗转阴率和不良反应.结果 所有患者中,任何形式耐药占100%,多耐药占91.9%,耐多药占65.1%,一线药物耐药顺位为H>R>S>E,二线药物以对左氧氟沙星耐药的比例高,占37.21%;3个月后痰菌转阴率仅为60.46%,复治病例中耐药比例高的人群为40~60岁的中老年人,占68.96%;不良反应主要为过敏反应(54.65%)和肝功能异常(8.14%).结论 复治涂阳的肺结核耐药率高,且以中老年人为主,应当重视结核患者耐药性的检测及用药的规律性、足量性.

    作者:周家杰;曾伟凤 刊期: 2012年第12期

  • 肇庆市2010-2011年手足口病疫情和病原学分析

    目的 了解肇庆市2010-2011年手足口病的流行特征.方法 应用描述流行病学的方法对肇庆市2010-2011年手足口病疫情资料进行分析.结果 肇庆市2010年报告手足口病10 112例,报告发病率为263.70/10万,死亡病例8例,病死率为0.21/10万;2011年报告手足口病15 030例,报告发病率为383.61/10万,无死亡病例报告.手足口病以4-7月发病较多,城区或城乡结合地区和经济发达地区为手足口病的高发区域.手足口病发病以散居和幼托儿童为主,1~3岁年龄段发病率高.2010年以EV71为主要流行毒株,2011年EV71、其他肠道病毒和CoxA16相继成为优势毒株.2010年重症病例比例与EV71构成比成正相关关系(r=0.573,P<0.01).结论 肇庆市手足口发病存在明显的季节、地区、性别及年龄的差异,重症病例发生与EV71构成有关.

    作者:朱碧柳;冼国佳;钟伟强;麦炜;程丽涓 刊期: 2012年第12期

  • 应用灰色模型预测深圳市肺结核发病率

    目的 预测深圳市肺结核的发病率,掌握疫情动态变化,为相关卫生行政部门对肺结核的防治提供科学依据.方法 收集深圳市2006-2011年肺结核发病率,建立灰色模型,预测未来2年的肺结核发病率.结果 将6年数据建立灰色预测模型,通过SPSS计算结果D=51 020.77,a=-0.055 63,u=24.88,模型合计误差=-0.024 54,预测深圳市2012年肺结核发病率为36.19/10万,2013年肺结核发病率为40.45/10万.动态修正灰色预测模型,计算结果D=6 403.98,a=-0.001 82,u=32.17,预测模型(x)(o)(t+1)=32.23e-000182+17 675(后验差比值C为0.42,小误差概率P为0.89,模型合计误差=-0.00051),预测深圳市2012年肺结核发病率为32.44/10万,2013年肺结核发病率为32.56/10万.结论 动态修正灰色预测模型结果与实际值比较接近,模型拟合误差较小,可以用于短期预测.

    作者:贺锋;郑磊;刘德坚;许贤 刊期: 2012年第12期

  • 早期血乳酸清除率对心脏骤停后综合征患者预后的评估价值

    目的 探讨早期血乳酸清除率在判断心脏骤停后综合征(PCAS)患者预后的评估价值.方法 回顾性分析96例心脏骤停自主循环恢复后收入ICU的患者临床资料,计算6h血乳酸清除率,同时进行APACHEⅢ评分及记录患者预后情况.根据患者人院72 h转归情况,分成存活≤72 h组和存活>72 h组,按血乳酸清除率10%为界分成高乳酸清除率组(>10%)和低乳酸清除率组(≤10%或负值),比较各组间性别、年龄、血乳酸基础值、6h血乳酸值、6h血乳酸清除率、6h中心静脉血氧饱和度(ScvO2)、APACHEⅢ评分、休克指数等的差异性.对有统计学意义的变量进行多因素二元Logistic回归分析筛选出影响PCAS预后的独立危险因素,并绘制ROC曲线,比较危险因素曲线下面积大小.结果 存活≤72 h和存活>72 h组在性别、年龄、血乳酸基础值、复苏6h内的APACHEⅢ评分等方面差异均无统计学意义(P>0.05);而存活>72 h组的6h血乳酸清除率明显高于存活≤72 h组[(32.72±15.56)% vs (21.47±18.08)%,P<0.01];高乳酸清除率组中存活>72 h的比率明显高于低乳酸清除率组[73.24%vs 28.00%,P<0.01].多因素二元Logistic回归分析表明,6h血乳酸清除率、6 h ScvO2是影响PCAS患者预后的独立危险因素;应用6h血乳酸清除率判断PCAS预后的ROC曲线下面积(AUC=0.830)较6 h ScvO2曲线下面积(AUC=0.729)大,差异有统计学意义(P<0.001),具有更好的特异度和灵敏度.结论 早期血乳酸清除率可作为心脏骤停后综合征患者预后的评估重要且简便的指标之一.

    作者:钟坚;李少洪;卜会驹;温海洋;郭少卿;马诚 刊期: 2012年第12期

  • 黄连上清丸联用AT1拮抗剂治疗H型高血压的临床研究

    目的 研究黄连上清丸联合常规降压治疗对H型高血压病患者的临床疗效,及对同型半胱氨酸(HCY)等心脑血管风险因素的影响.方法 将H型高血压患者82例随机分为常规降压治疗组(42例)和联合治疗组(40例).常规降压治疗组单用AT1拮抗剂缬沙坦治疗,联合治疗组用黄连上清丸联合缬沙坦治疗,两组在实验前后分别检测血清中高密度脂蛋白(HDL)、HCY水平、颈动脉内中膜厚度等指标.结果 与常规降压治疗不同,黄连上清丸联合治疗组能更有效地降低收缩压(P<0.05)、血浆HCY水平(P<0.01),更有效地升高血浆HDL水平(P<0.05).两种治疗方法均不能改善颈动脉内中膜厚度.结论 黄连上清丸联合AT1拮抗剂降压治疗能显著改善动脉硬化相关的心脑血管疾病风险因素,有利于H型高血压患者的抗动脉硬化治疗.

    作者:李莹莹;李翠芝;童裕维;吕明芳;胡骏 刊期: 2012年第12期

  • IRS-4和GCKR基因多态性与2型糖尿病的关联性研究

    目的 研究IRS-4和GCKR基因多态性与黑龙江汉族2型糖尿病的关联性.方法 采用PCR-RFLP技术检测黑龙江汉族2型糖尿病组、正常对照组人群的IRS-4基因密码子879C/G和GCKR基因P446L多态性,并分析其基因型频率及等位基因频率.结果 2型糖尿病组IRS-4基因879C/G的GG、GC、CC基因型频率分别为0.538、0.404、0.058,G及C等位基因频率分别为0.740、0.260;正常对照组IRS-4基因879C/G的GG、GC、CC基因型频率分别为0.556、0.352、0.092,G及C等位基因频率分别为0.732、0.268;糖尿病组和正常对照组之间IRS-4基因879C/G基因型频率及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05).2型糖尿病组GCKR基因P446L的PP、PL、LL基因型频率分别为0.212、0.596、0.192,P和L等位基因频率分别为0.510、0.490;正常对照组GCKR基因P446L的PP、PL、LL基因型频率分别为0.148、0.463、0.389,P和L等位基因频率分别为0.380、0.620;糖尿病组和正常对照组之间GCKR基因P446L基因型频率及等位基因频率差异有统计学意义(P<0.01).结论 IRS-4基因879C/G多态性与黑龙江省汉族2型糖尿病的发生无相关性,GCKR基因P446L多态性与黑龙江省汉族2型糖尿病的发生有相关性.

    作者:卜晓波;张雪;宋洁;张书捷;高晓红;韩彦龙 刊期: 2012年第12期

  • 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株的细胞毒性比较

    目的 比较肠出血性大肠埃希菌流行菌株的细胞毒性,筛选强毒株,为进一步研究细菌的致病机理提供理论依据.方法 采用PCR技术鉴定菌株的毒力基因E-hlyA、stx2、stxl,Giemsa染色观察细菌的黏附情况,通过测定感染后Vero细胞的乳酸脱氢酶释放情况了解细菌的Vero细胞毒性强弱.结果 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株含有的毒力基因不同,均具有较强的黏附能力和Vero细胞毒性,其中国际菌株933W/O,中国流行菌株882364、01H112和日本菌株Cua9的Vero细胞毒性较强.结论 筛选出的流行菌株强毒株,可用于进一步的细菌感染模型构建和毒力基因致病机制研究.

    作者:王春晖;赵素慧;万成松 刊期: 2012年第12期

  • 深圳市宝安区海洛因依赖者患肺结核的流行病学调查

    目的 对深圳市宝安区海洛因依赖者进行肺结核的流行病学调查,调查其患病率及分布特征.方法 参照2010年第5次全国结核病流行病学调查方案和实施细则,对深圳市宝安区药物滥用监测点发现的海洛因成瘾者进行结核病筛查.结果 调查海洛因依赖者1 383人,肺结核的患病率为2.96%(41/1 383),高于全省常住人口患病率229.97/10万(x2=359.898,P=0.000).30岁以下、30~39岁、40岁以上年龄组的患病率分别为0.97%、3.00%、5.90%(x2=13.567,P<0.001).男性肺结核患者高于女性,但差异无统计学意义(x2=0.143,P>0.05).结论 深圳市宝安区海洛因依赖者肺结核患病率较高,多集中于30~49岁年龄组,而且随着年龄增长患病率有增加的趋势.

    作者:夏莉;张泉水;曾令延;钟鸿剑;蔡翠兰;高纯良;任小龙 刊期: 2012年第12期

  • 353例主动脉夹层中以腹泻为首发表现的临床病例分析

    目的 探讨以腹泻为首发表现的主动脉夹层患者的临床特点.方法 收集主动脉夹层患者353例,寻找以腹泻症状为首发表现的临床病例,分析其发病特点及临床转归.结果 仅发现3例主动脉夹层以腹泻为首发表现,该3例患者以腹泻求治急诊科,均发生不同程度、不同时间的误诊,均在住院期间死亡.3例患者的死亡原因得到确诊,其中1例因主动脉造影确诊,1例因床边超声心动图确诊,1例因尸检确诊.结论 以腹泻为首发表现的主动脉夹层主诉不典型,具有较高的误诊率及院内死亡风险,临床医师应具备较高的警惕性.

    作者:肖平喜;戴振林;胡作英;张航;陈绍良;柳剑 刊期: 2012年第12期

  • 双水平无创正压通气技术治疗急性大面积脑梗死合并呼吸衰竭的临床体会

    目的 观察双水平无创正压通气技术(BiPAP)治疗急性大面积脑梗死合并呼吸衰竭的疗效及其影响因素.方法 选取大面积脑梗死合并呼吸衰竭患者64例,按照预后分为生存组和死亡组,并检测各组的氧分压(PO2)、二氧化碳分压(PCO2)、pH值、氧合指数(OI)、前白蛋白(PA)和高敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响.结果 64例大面积脑梗死合并呼吸衰竭患者的生存率为60.94%(39/64).通气后两组的pH值、PCO2、PO2、OI和PA均较通气前明显提高(P<0.01),且生存组的PCO2、PO2、OI和PA水平较死亡组升高更为明显(P<0.01),而pH值两组无明显变化(P>0.05);两组的hs-CRP水平均较治疗前明显降低(P<0.01),且生存组的hs-CRP水平较死亡组降低更为明显(P<0.01).结论 BiPAP呼吸机在治疗急性大面积脑梗死合并呼吸衰竭的疗效显著,通气前动脉血气、OI、PA和hs-CRP水平对患者的预后有明显的影响.

    作者:刘裕英;黄澄;吕艳;陈永烨;李胜玲 刊期: 2012年第12期

  • 西尼罗病毒前膜蛋白在果蝇细胞S2中的表达与鉴定

    目的 克隆西尼罗病毒(WNV)前膜蛋白(prM)基因,将其在果蝇细胞(S2)中表达,为制备研制诊断试剂所需的单克隆抗体奠定基础.方法 以质粒WNV-CME为模板,PCR扩增获得prM基因,与T载体连接,测序正确后酶切,酶切产物与果蝇表达载体pMT/Bip/V5-HisC重组,重组质粒与pCoBlas共转染果蝇S2细胞,25 μg/ml Blasticidin筛选获得抗性细胞,500μmol/L CuSO4溶液诱导表达,72 h后收集细胞与细胞上清进行Western blot鉴定.结果 酶切与测序结果表明成功构建重组表达载体WNV-prM-pMT,Western blot显示目的蛋白在果蝇细胞S2内稳定表达.结论 在果蝇S2细胞内成功地稳定表达WNV prM蛋白,为下一步WNV单克隆抗体的制备奠定了实验基础.

    作者:李林海;杜鹏;陈丽丹;王文敬;石玉玲;黎诚耀 刊期: 2012年第12期

  • 2009-2011年深圳龙岗吸毒人群行为特征及HIV感染状况分析

    目的 了解深圳市龙岗区吸毒人群艾滋病病毒(HIV)流行趋势及其行为变化.方法 采用SPSS17.0统计软件对2009-2011年深圳市龙岗区吸毒人群艾滋病哨点监测资料进行分析.结果 共调查吸毒者1 214名,HIV年均感染率为2.31%,吸食海洛因毒品的比例呈逐年下降趋势(由64.75%下降至36.66%)(x2=75.27,P<0.01),吸食新型毒品的比例呈逐年上升趋势(由17.50%上升至39.65%)(x2=36.42,P<0.01).艾滋病知识年均知晓率为53.13%,呈上升趋势.注射毒品者中,有共用针具史者占45.49%.商业性乱行为中从未使用安全套的比例由2009年的25.64%上升至2011年的57.14%(x2=70.42,P<0.01).结论 深圳市龙岗区HIV感染率总体处于低流行水平,但吸毒人群新型毒品流行迅速,需引起更多关注.

    作者:邹惠英;黎明;刘丽红;罗伟炎 刊期: 2012年第12期

  • 胃肠道间质瘤的CT征象与临床病理变化的对比研究

    目的 探讨胃肠道间质瘤(GIST)的影像学特征,观察其CT征象与病理结果的诊断价值.方法 选取胃肠道间质瘤患者42例,经病理形态学确诊并分为良性组、交界性组及恶性组,手术切除前经CT平扫及增强诊断其恶性程度,比较肿物大小、密度、形态、强化程度及强化方式等CT征象与肿瘤恶性程度的相关性.结果 CT显示不同恶性程度组别间质瘤肿物大小比较差异有统计学意义(P=0.024),肿物密度均匀性和边缘光滑度比较差异亦具有统计学意义(P=0.041,0.034),而肿物形态在良恶性间质瘤中差异无统计学意义(P=0.631);良性、交界性和恶性间质瘤中CT强化程度比较差异无统计学意义(P=0.628),而强化方式比较各组间差异有统计学意义(P=0.022).结论 CT显示GIST肿物大小、边缘、密度、强化方式与肿瘤恶性程度相关,CT可作为诊断GIST及其良恶性的重要手段.

    作者:李胜凯;卞丽娟;郭友逢;朱文标 刊期: 2012年第12期

  • 与食道鳞状上皮细胞癌发生相关的细胞骨架及相关蛋白的筛选鉴定

    目的 比较永生化食道上皮细胞系和食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)细胞系的差异表达细胞骨架相关蛋白图谱,筛选并探讨与ESCC发生发展相关的细胞骨架及相关蛋白.方法 采用组分蛋白分离方法提取细胞骨架相关蛋白,利用双向凝胶电泳(2DE)联合MALDI-TOF/TOF串联质谱技术,分析并鉴定永生化食道上皮细胞系NE1及ESCC细胞系HKESC-2中差异表达的细胞骨架及相关蛋白,并用Westem blot验证其中感兴趣的差异蛋白在一组食道上皮来源细胞系和ESCC患者肿瘤组织中的表达情况.结果 三次独立实验结果表明永生化食道上皮细胞系NE1和ESCC细胞系HKESC-2有52个蛋白点表达差异超过2倍,31个蛋白点经质谱分析鉴定为28种蛋白质,其中16种蛋白质在HKESC-2细胞中表达上调,12种表达下调.Vimentin在所有ESCC细胞系和大部分ESCC肿瘤组织中均呈现高表达,而Annexin Ⅱ则呈现低表达甚至缺失.结论 多种细胞骨架及相关蛋白在ESCC发生发展过程中表达发生变化,某些细胞骨架及相关蛋白的特异性表达模式可能可以作为ESCC诊断的分子标志.

    作者:蔡贞;周园;熊石龙;温淑娟;裘宇容 刊期: 2012年第12期

  • 刚地弓形虫感染与肝脏疾病

    刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生原虫,可感染几乎所有的温血动物,寄生在除红细胞以外的所有有核细胞中,引起人兽共患的弓形虫病.据统计,全世界大约有1/3的人感染弓形虫.弓形虫感染可影响宿主的淋巴结、眼、中枢神经系统、肝和心等脏器的功能.本文对弓形虫感染所引起的肝脏病变作一综述,以期为进一步研究弓形虫所致消化系统疾病提供有价值的参考.

    作者:闫俊平 刊期: 2012年第12期

  • 深圳市一起人感染高致病性禽流感病例的流行病学调查

    目的 明确人感染高致病禽流感病例的感染来源,探索是否存在人与人之间的传播,为进一步认识与防治禽流感提供科学依据.方法采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方法进行调查、诊断.结果 发现2011年深圳首例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例,无明确病、死禽接触史,密切接触者中无不明原因肺炎病例,未发现人-人传播证据.结论 2011年深圳人感染高致病性禽流感病例属感染个案,未发现人传人现象,感染来源可能与农贸市场环境有关.今后应继续加强不明原因肺炎监测,加强人感染高致病性禽流感的应急贮备、培训和健康教育.

    作者:秦彦珉;谢旭;梅树江;孔东锋;曹彬 刊期: 2012年第12期

  • 干预前后清洁切口手术围手术期抗菌药物使用情况调查分析

    目的 比较干预前后深圳市光明新区人民医院清洁切口手术围手术期抗菌药物使用情况,评价积极干预对规范清洁切口手术围手术期抗菌药物使用的作用.方法 采用回顾性调查的方法,选取干预措施实施前后3个月的清洁切口手术病例共521份,调查干预前后清洁切口手术抗菌药物的使用率、疗程合理率、选药时机合理率、选药品种合理率及联合用药情况.结果 清洁切口手术围手术期抗菌药物使用率由干预前的83.9%降至干预后的19.0%(x2=219.9,P<0.01),抗菌药物选药合理率由干预前的71.6%上升至干预后的87.2%(x2=4.980,P=0.026),疗程合理率由干预前的26.6%上升至干预后的48.9%(x2=9.158,P=0.020),差异均有统计学意义(P<0.05).干预后杜绝了联合用药现象,但用药时机合理率有所降低,仍有待改善.结论 加强对医生规范用药的宣传与培训、加强监督检查等措施,对控制清洁切口手术围手术期抗菌药物不合理使用现象具有积极的作用.

    作者:钟晓;肖丽华;汪东篱 刊期: 2012年第12期

  • 超抗原的新研究进展

    超抗原是瑞典科学家怀特于1989年在国际上首次提出的免疫学概念.超抗原通过MHCⅡ阳性细胞介导能与特定的T细胞vβ领域架桥结合而不需要提示细胞参与呈递就能使T细胞活化与增殖.本文就其分类、性质和结构,以及相关疾病和临床进展作一综述.

    作者:李仲娟;杨朝令;李茉;胡芳 刊期: 2012年第12期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会