学术投稿

人脐血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

熊石龙;王前;郑磊;包杰;曾方银;裘宇容

关键词:脐血, 内皮祖细胞, 单个核细胞
摘要:目的 探索人脐静脉血内皮祖细胞的分离培养,为内皮祖细胞的临床应用提供实验方法.方法 选择脐静脉血,应用密度梯度离心法,获取单个核细胞,接种于预先包埋了人纤维连接蛋白的培养板.用加入生长因子VEGF165和bFGF的内皮细胞专用培养基EGM-2MV培养细胞,3 d后,洗掉非贴壁细胞,换培养液继续培养至7 d,收集贴壁细胞进行细胞分析.激光共聚焦显微镜进行细胞功能学鉴定,流式细胞术测定祖细胞和内皮细胞系标志,MTT比色法检测细胞的生长状态.结果 经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞能特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞Dil-acLDL,祖细胞标志CD133及内皮细胞特异性抗原CD34、KDR检测.其阳性率分别为(27.05±2.94)%、(16.37±2.69)%和(56.67±7.29)%;体外培养的内皮祖细胞具有良好的细胞增殖活性.结论 人脐静脉血中可以分离培养内皮祖细胞,为内皮祖细胞的进一步研究及临床应用奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 一起亚硝酸盐污染自来水管网的急性中毒暴发事件调查

    目的 寻找及分析因井水亚硝酸盐污染自来水管网导致中毒暴发事件的原因.方法 根据流行病学调查、环境卫生现场调查资料和水质检验结果分析事故.结果 事故工厂生产工艺需用大量亚硝酸钠和水,生产区有一工业用井水,生产区内井水亚硝酸钠严重超标,井水管道与镇自来水管网相通,事故原因是井水亚硝酸钠污染自来水引起的19例人员亚硝酸盐中毒.结论 工厂违反饮用水卫生规范要求,擅自将井水管道与镇自来水管网相连接,有关部门缺乏对工厂饮用水安全的检查.

    作者:钟嶷;孙兰;景钦隆;石同幸;黄汝明;王德东 刊期: 2009年第01期

  • 广州动物园鸬鹚鲁道夫对盲囊线虫的分子鉴定

    目的 以核糖体DNA(rDNA)的第一与第二内转录间隔区序列(ITS-1及ITS-2)鉴定从广州动物园鸬鹚体内分离出来的鲁道夫对盲囊线虫种类.方法 将鲁道夫对盲囊线虫样品GZ1、GZ2、GZ3和GZ4的ITS-1、5.8 S、ITS-2进行PCR扩增及序列分析,并与GenBankTM公布的Contracaecum rudolphii A、B种相应序列进行比较.结果 来自鸬鹚体内的4条鲁道夫对盲囊线虫具有相同长度的ITS序列,其ITS-1、5.8 S、ITS-2分别为451、157和268 bp,与GenBankTM公布的鲁道夫对肓囊线虫B种(C.rudolphii B)序列几乎完全一致,但在第108位缺失T.结论 来自广州动物园鸬鹚体内的对盲囊线虫是C.rudolphii B.

    作者:张媛;陈武;林瑞庆;黄勉;宋慧群;朱兴全 刊期: 2009年第01期

  • TRAIL诱导乙型肝炎病毒转染细胞株凋亡的实验研究

    目的 探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15的凋亡诱导效果.方法 应用MTT法了解TRAIL对HepG2.2.15细胞的诱导效果.琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术和Caspase-3酶活性分析TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡过程.结果 TRAIL(0.1μg/mL)作用于HepG2.2.15细胞株12、24、36 h后,细胞抑制率分别为17.91%、41.26%、59.85%;PI单染亚二倍体含量12 h后为21.8%,高于对照组的8.7%;24 h后DNA电泳200 bp处出现特异性条带;6 h后Caspase-3酶活性为对照组的4.76倍.结论 TRAIL诱导后,HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15发生凋仁.

    作者:唐永玮;吴晓蔓 刊期: 2009年第01期

  • 脂质体介导E1A—TK基因转染人肺腺癌细胞A549体外研究

    目的 用脂质体转染真核表达质粒PcDNA3E1A-TK入人肺腺癌细胞A549,观察丙氧鸟苷(GCV)、X射线及二者联合对转染细胞的体外杀伤作用.方法 用阳离子脂质体介导真核表达质粒PcDNA3E1A-TK转染人肺腺癌细胞A549,PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A-TK基因DNA整合、mRNA表达.MTT法测不同浓度GCV、不同剂量X射线及一定剂量X线照射后再给一定量GCV对转染细胞的生长抑制率.结果 PCR、RT-PCR结果表明转染细胞有EIA-TK基因整合、mRNA表达.根据IC50,转染细胞对GCV、X射线的敏感性分别比亲代细胞提高111.3倍和2.9倍,在作用相同时间后,GCV+X线照射治疗对转染细胞的生长抑制作用比单纯GCV或X线治疗明显增强(P<0.01).结论 脂质体介导外源基因E1A-TK成功转入人肺腺癌A549细胞并获得表达;转染细胞获得了对GCV和X线的敏感性,GCV和X线对转染细胞有协同杀伤作用.

    作者:何祥梁;黄龙生;刘贵真;夏增献;郑广昆;杨小南;马中富;何东华 刊期: 2009年第01期

  • 慢性阻塞性肺疾病大鼠中磷酸化蛋白激酶B与γ—谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达研究

    目的 通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)与磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)的表达,研究p-PKB和γ-GCS在COPD中可能的参与机制.方法 28只健康雄性Wistar大鼠随机分为COPD组和对照组.采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖(LPS)法制作COPD大鼠模型.检测肺组织中γ-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组化和Western印迹分析肺组织中γ-GCS与p-PKB蛋白水平.结果 γ-GCS活性在COPD组大鼠中明显高于对照组.组间差异有统计学意义(P<0.05).原位杂交显示COPD组大鼠支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCS mRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).COPD组大鼠γ-GCS与p-PKB免疫组化可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆有较强蛋白阳性信号;图像定量分析显示COPD组γ-GCS与p-PKB蛋白表达高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).Western blot显示γ-GCS与p-PKB在COPD组蛋白表达高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05).SPSS10.0直线相关分析得出p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关.结论 COPD大鼠肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,p-PKB蛋白也有相应高表达,提示p-PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中起作用,且PKB可能参与了γ-GCS的信号转导.

    作者:申严;戴爱国 刊期: 2009年第01期

  • 广西融水苗族自治县2000—2007年疟疾流行状况分析

    目的 分析该县疟疾基本控制在1/万以后8年血检阳性的疟疾病人的来源、疟原虫种类和发病情况.方法 对2000-2007年全县疟疾血检阳性病人资料进行收集统计比较分析.结果 发现该县8年所检查出的疟疾病人中,本地感染病人仅占12.50%(11/88),无恶性疟病例;流动人口疟疾病人占87.50%(77/88),值得注意的是这些疟疾病人多数在海南省感染后带回本地,占流动人口疟疾病人比例的90.91%(70/77),并有恶性疟和混合感染的病人占9.09%(7/77).结论 该县当地居民疟疾病人的发病率从原来的1/万控制到现在的1/10万以下,但是目前该县疟区的性质发生了根本的改变,从90年代前以本地感染性疟疾病人为主到本世纪转变为以输入性疟疾病人为主.

    作者:陈忆宁;杨祥敏;贾绍明;路改元;韦海艳;林康明;贺颖;黄亚铭 刊期: 2009年第01期

  • 胰岛移植研究进展

    胰腺组织的移植,包括胰腺器官(胰腺)和胰岛细胞(胰岛)移植,已经被公认为是治疗1型糖尿病的一个临床选择.成功的胰腺或胰岛移植相对于传统的外源性胰岛素注射疗法来说,可以达到一个正常或接近正常的血糖控制水平和糖化血红蛋白水平,而且还不会出现胰岛素疗法经常出现的严重的低血糖反应.两种类型胰腺组织的移植,都可以有效的降低严重低血糖的事件发生.而且胰腺移植已经被证实可以长时间使血糖保持一种持续正常稳定的状态.对于接受胰腺移植的糖尿病患者,其优点是血糖可以很好的得到控制;但同时也面临着出现手术以及移植后并发症的风险.与胰腺移植相比,成人胰岛细胞移植更加安全,手术简捷,并发症极少.并可多次重复进行;其更加吸引人的地方是它创伤性更小.而且,通过移植前的特殊培养,未来有望实现脱离免疫抑制剂的胰岛移植.不足之一是胰岛移植往往不能使血糖控制在一个稳定的水平,这一点对降低糖尿病并发症的发生往往又是必须的.另外,胰岛移植又使接受移植的患者不得不承受免疫抑制治疗带来的一系列不良反应.尽管新近的发展已使胰岛移植后脱离胰岛素治疗的比率有了很大提高,但是如何使移植物保持更长时间的活力和功能以更好的控制血糖,今后还有很多的事情要我们去做.本文将就近些年胰岛移植的一些相关内容做一简要综述,以期能给临床及科研工作者带来一定的启示.

    作者:马广念;贺德 刊期: 2009年第01期

  • 数字图像处理技术对人源隐孢子虫卵囊形态学参数的测定

    目的 建立并分析人源隐孢子虫卵囊的形态学参数,明确其形态学变化特点.方法 收集一名严重腹泻儿童的粪便,涂片经改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊.应用奥林巴斯(Olympus)BX50万能生物显微镜(日本)摄像系统采集1 439个隐孢子虫卵囊的图像,利用计算机数字图像分析系统测定其长径(L)、短径(W)、周长、面积,用SPSS数据处理软件(12.0版本)分析,计算其卵形指数(L/W)等一系列形态学参数.结果 计算机数字图像分析技术测定人源1 439个隐孢子虫卵囊长径均值为4.78 μm,95%可信区间为4.73~4.82;卵囊短径均值为4.35 μm,95%可信区间为4.33~4.37;卵囊周长、面积和卵形指数均值分别为15.63 μm、15.22 μm2和1.10.计算机数字图像分析技术测定的人、狗和小鼠源隐孢子虫卵囊的形态学参数,经方差分析F值在10.7374~68.8776,P<0.01.结论 利用计算机数字图像分析系统和SPSS数据处理软件,获得人源隐孢子虫卵囊长径、短径、周长、面积、卵形指数的累加和、均值、中值、大值、小值、标准差及95%可信区间等一系列形态学参数.获得的资料是精确的,为鉴别人源隐孢子虫提供了科学信息.

    作者:宫玉香;韩秀霞 刊期: 2009年第01期

  • 手足口病患儿T淋巴细胞亚群与CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞的检测及其临床意义

    目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群及CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞在手足口病病人发病中的临床意义.方法 采用流式细胞术检测了46例手足口病患者以及17例健康体检者外周血T细胞亚群CD3+、CD3+CD4-CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD3+CD4+CD8-与CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞水平.结果 与正常对照组相比,手足口病患者组CD3+、CD3+CD4-CD8+、CD3+CD4-CD8+双阴性调节性T细胞的百分率降低(P值分别为0.008、0.050、0.025),CD3+CD4+CD8+、CD3+CD4+CD8-百分率以及CD4/CD8比值差异无统计学意义(P值分别为0.847、0.775、0.149),以上各细胞亚群的百分率以及CD4/CD8比值在年龄与性别方面差异无统计学意义.结论 手足口病患者CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞、CD3+、CD3+CD4-CD8+异常变化提示其免疫功能异常.

    作者:裘宇容;何宗忠;孙德华;王强;杨春莉 刊期: 2009年第01期

  • 清远市2006—2007年法定传染病报告信息质量分析

    目的 分析清远市法定传染病报告信息质量情况,为进一步完善传染病管理措施提供科学信息.方法 参照<全国疾病预防控制机构工作规范(2001版)>和<全国法定传染病漏报调查方案>,每年通过自查和抽查相结合的方法对清远市法定传染病漏报及及时报告情况进行调查和分析.结果 2006-2007年共查出医疗机构报告法定传染病种5 622例,漏报1 114例,平均漏报率为19.82%.其中,不同年份、不同地区之间漏报率差异均有统计学意义(P<0.001);乙、丙类传染病的漏报率分别为15.51%、31.93%,丙类传染病漏报率明显高于乙类(P<0.001);医疗机构级别越高漏报率越低;2007年报告和审核及时率均高于2006年.结论 清远市传染病漏报率仍然较高,建立健全传染病疫情报告相关管理制度并贯彻落实,加强传染病防治知识培训,提高医务人员传染病报告意识,加大监督力度,是提高清远市传染病疫情报告质量的重要措施.

    作者:何慧萍;黄金英;孙小康;黄晋飞;曾茜茜 刊期: 2009年第01期

  • Toll样受体3相关信号转导途径与病毒感染

    哺乳动物的Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一种重要的模式识别受体,TLR3是Toll样受体家族中的一员,与病毒感染密切相关.本文就TLR3相关信号转导途径与病毒感染及凋亡作一综述.

    作者:徐娟;黄俊琪 刊期: 2009年第01期

  • 结核分枝杆菌稳定L型感染检测方法的研究

    目的 探讨结核分枝杆菌稳定L型感染标本的病原学的检测方法.方法 以非高渗分离培养法诱导并获得结核分枝杆菌稳定L型纯培养物,将其感染豚鼠后进行病原体分离培养,采用PCR方法检测稳定L型培养物的IS986序列并鉴定其性质.结果 结核分枝杆菌稳定L型在常规细菌学方法检查中不能发现或鉴定,但采用非高渗分离培养法能够检出,5例动物病变组织有4例检测出稳定L型,PCR直接扩增动物病变组织有3例呈阳性反应.结论 采用以非高渗分离培养和基因检测为主要内容的非高渗分离培养法,能够快速的检测出样品中潜伏存在的结核分枝杆菌稳定L型,可提高病原学诊断的阳性率和特异性.

    作者:罗振华;王和 刊期: 2009年第01期

  • 清新县2006—2007年麻疹发病情况分析

    目的 通过对清新县2006-2007年麻疹的发病情况分析,了解其流行趋势,为制定防控措施提供科学依据.方法 采用描述性流行病学方法,运用Epi Info软件进行分析、评价.结果 2006-2007年清新县共报告253例麻疹病例,确诊190例,临床诊断63例,麻疹平均发病率22.14/10万.病例发病时间主要集中在4~7月,占全年病例的67.19%.发病年龄分布呈现<8月龄的婴儿和>20岁年龄组的成人发病增高的现象.56.13%的病例无麻疹疫苗免疫史,32.80%的病例接种史不详.病例呈现全县散发流行及局部地区聚集的现象,乡镇发病率高的达138.72/10万.结论 麻疹的发病水平与其疫苗的初免和复种工作落实情况有密切的关系,免疫接种是目前麻疹防控的重要手段.

    作者:周志珊;李初升 刊期: 2009年第01期

  • 犬隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

    隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种重要的人畜共患病.近年来,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界常见的6种腹泻病之一.犬隐孢子虫病世界各地均有报道.严重威胁着人类和动物的健康.本文对犬隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和寄生部位、流行病学特点、诊断、防治等方面研究状况进行了综述,为犬隐孢子虫病的有效防制提供参考.

    作者:董和平;菅复春;张龙现;宁长申 刊期: 2009年第01期

  • 细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价

    目的 为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究.方法 在表达载体PET32a中构建AgB1+AgB2(AgBs)联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性.结果 构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确.AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38 kDa,为不溶性蛋白.联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病(CE)血清的敏感性为84.4%,特异性为80.5%;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75.6%和57.8%,特异性分别为72.6%和91.2%.结论 成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基冈表达的AgB1或AgB2抗原.

    作者:江莉;冯正;许学年 刊期: 2009年第01期

  • 育龄青年静止型α—地中海贫血的表型分析

    目的 了解育龄青年静止型α-地中海贫血的表型特征,探讨表型特征的诊断价值.方法 利用血细胞仪和高效液相色谱仪,对117例经基因诊断为静止型α-地中海贫血的佛山地区育龄青年进行MCV、MCH和HbA2等指标的检测,并对其均值及处于正常范围的例数进行统计学分析.结果 在117例静止型仅α-地中海贫血中,MCV、MCH和HbA2分别为(83.55±5.60)fl、(26.10±1.03)pg和(2.84±0.29)%;其中MCV、MCH和HbA2处于正常范围的例数分别占52.99%(62/117)、59.83%(70/117)和92.30%(108/117).右缺失组的MCV及MCH均值分别比左缺失组的高,两者之间差异均有统计学意义(84.17 vs 82.02,t=-2.180,P=0.032;27.06 vs 26.10,t=-3.642,P=0.000).结论 静止型α-地中海贫血表型特征不明显,应用表型特征进行静止型α-地中海贫血初筛存在较高的漏检风险.右缺失的表型特征比左缺失更轻微,其筛查漏检的风险更高.

    作者:曾劲伟;杨光;崔金环;区丽群 刊期: 2009年第01期

  • 脂多糖诱导家蝇胚胎细胞抗菌肽的初步研究

    目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导家蝇胚胎细胞产生抗菌肽的抗菌活性.方法 LPS诱导家蝇胚胎细胞系(MDEC-07114),收集诱导后4、8、12、16、20、24 h上清液,三氯醋酸提取抗菌肽,抑菌圈法测定抗菌活性.结果 LPS作用处于对数生长的家蝇胚胎细胞后,细胞形态、增殖无明显变化;诱导后8 h家蝇胚胎细胞开始产生抗菌肽,16 h达高峰.诱导后24 h仍有抗菌活性.结论 LPS可诱导家蝇胚胎细胞系MDEC-07114产生具抗菌活性的抗菌肽.

    作者:刘晖;贺莉芳;万启惠;张曦 刊期: 2009年第01期

  • 广州市2007年与2008年麻疹流行特征比较

    目的 分析2008年与2007年麻疹的流行特征,比较两年间流行特征的异同,为2008年后半年麻疹的控制重点提供依据.方法 利用<麻疹疫情监测系统数据>中麻疹的个案资料,抽取广州市2007年3-9月的2 809例麻疹病例,及2008年1~5月的1 003例病例,对其免疫史情况、发病年龄构成、户籍性质分布等进行比较分析.结果 两年间麻疹病例的平均年龄差异无统计学意义(P>0.05);2008年上半年,相比2007年8月龄~14岁麻疹免疫目标人群发病所占比例下降(P<0.05).未到初免年龄(8月龄)病例中6~8月龄占了绝大部分比例;两年中免疫空白病例仍然是发病的重点人群;流动人口仍然是发病的主要人群.结论 麻疹免疫目标人群的麻疹控制较2007年取得了一定的成绩,非目标人群(8月龄~14岁以外人群)、免疫空白人群及流动人口是麻疹控制的重点.

    作者:云雪霞;许建雄;梁建华;谭慧峰 刊期: 2009年第01期

  • 重组人血红蛋白δ链的制备与鉴定

    目的 克隆人血红蛋白δ(delta)链蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达,经纯化与鉴定,获得δ链蛋白,为建立β-地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原.方法 从K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得目的 片段并将其克隆到pET-32a及pET43.1a载体中,经PCR、酶切及测序验证,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.包涵体经变性、复性后以Ni2+亲和层析柱纯化,可溶性蛋白直接以Ni2+亲和层析柱纯化.采用Western Blot和ELISA分析鉴定表达产物.结果 成功构建两种融合表达载体pET32-Hbδ及pET43.1.Hbδ,分别为包涵体表达和可溶性表达,纯化产物经Western blotting和ELISA鉴定均为δ链蛋白.结论 克隆表达并获得了纯化的人血红蛋白δ链,为后续的抗体制备及地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原.

    作者:卢晓;蒋小滔;朱平;富宁 刊期: 2009年第01期

  • 淮北市仓储环境中粉螨种群组成及多样性分析

    目的 调查仓储环境中粉螨的孳生情况及多样性.方法 采用直接镜检法和水膜镜检法分离粉螨,并进行计数、鉴定及数据分析.结果 420份样本中339份检出粉螨,检出率为80.71%.粉螨密度差异较大,从1.5~286.2 NO·g-1不等.共检获粉螨26种,隶属7科17属.多样性分析表明,丰富度指数(Rmangalef)为2.65,多样性指数(H')为3.14,均匀度指数(J)为0.96.结论 淮北市仓储环境中粉螨种类较多,污染严重,群落组成多样化,应引起重视.

    作者:王慧勇;宋福春;沈静 刊期: 2009年第01期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会