学术投稿

抗人双特异性蛋白磷酸化酶Dusp23单克隆抗体的制备及鉴定

杜红延;杨学习;姚小艳;李明

关键词:人双特异性磷酸化酶23(Dusp23), 单克隆抗体, 制备
摘要:目的 制备高亲和力、高特异性的抗人双特异性磷酸化酶23(Dnsp23)单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定,为Dusp23功能的研究奠定基础.方法 以纯化的原核表达Dusp23为免疫原,免疫BALB/c小鼠,待免疫小鼠血清效价满足融合需要,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化建立可稳定分泌抗Dusp23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将细胞株打人BALB/c小鼠腹腔制备腹水,用ProteinG亲合层析柱纯化所得腹水获得纯化抗体,ELISA及Western-blot检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定单克隆抗体的亚型.利用纯化后的两株单克隆抗体对临床收集的肝癌组织标本进行免疫组化分析.结果 筛选到2株(N012和N013)可以稳定分泌人双特异性磷酸化酶23(Dusp23)单克隆抗体的细胞株,并对其进行纯化和鉴定,两株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1:5 120和1:2 560,腹水效价分别为1:25 600和1:12 800,以肝癌细胞Hepc2和重组Dusp23蛋白为抗原,利用纯化后的两株抗体Western-blot鉴定结果均在预期位置出现阳性条带.两株杂交瘤细胞分泌抗体的亚型鉴定N012和N013均为IgG1型,轻链均为κ型.两株抗体分别与临床肝癌组织标本免疫组化结果均为阳性.结论 成功制备两株能特异性识别Dusp23的单克隆抗体.为进一步研究Dusp23的生物学功能,揭示其与肿瘤发生发展之间的关系奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 恶性疟疾所致脓毒症的临床特征分析

    目的 分析恶性疟疾并发脓毒症的临床特征.方法 对我院近8年来收治的32例确诊为恶性疟疾的患者进行病例资料分析.结果 出现脓毒症者26例(81.25%),其中严重脓毒症19例(59.38%),脓毒症休克2例(6.25%).26例脓毒症常见表现为发热26例(100%)、心率大于90次/min 25例(96.15%)以及白细胞数改变23例(88.46%),其他依次为气促、高血糖、C反应蛋白增高.严重脓毒症合并器官功能障碍依次为血液系统损害、肾功能损害、高胆红素血症、意识状态改变、低氧血症、腹胀以及低血压.31例(96.88%)患者治愈或好转出院,1例死亡(3.13%),死亡病例为脓毒症休克患者.结论 恶性疟疾原虫感染较易发生脓毒症,并极易发展为严重脓毒症,疟疾所致的严重脓毒症以血液系统损害、肾脏损害、高胆红素血症以及意识状态改变多见,如果发展为脓毒症休克则预后差.该病对青蒿琥酯的治疗效果好,及时使用青蒿琥酯清除疟原虫是预防脓毒症发生的关键.

    作者:刘远煌;李剑萍;洪文昕 刊期: 2009年第07期

  • 河源市农村生活饮用水卫生现状分析

    目的 了解河源市农村饮水水质状况,提高饮水管理水平,促进农村改水防病工作.方法 采用分层随机抽样原则对饮用水源、水质进行环境卫生学调查和检测分析.结果 从饮用水源类型看,河源农村居民主要以饮用地下水为主,占农村人口79.47%;从供水方式看,主要以分散式供水为主,占农村人口77.71%;饮用完全处理、部分处理、未经任何处理的自来水分别占26.92%、15.39%和57.69%;150份水样检测中,水质符合农村饮水Ⅱ级以上82份,占54.67%.地下水质优于地面水,合格率比较差异有统计学意义(χ2=3.96,P<0.05),集中式供水细菌总数、总大肠菌群检测优于分散式供水,合格率比较差异均有统计学意义(χ2=4.32、58,P<0.05).结论 河源农村地区饮水不安全因素主要是微生物污染,加强农村饮水卫生知识宣传,做好水源选址、保护与水质净化消毒工作,防止各种介水传染病,保护人民健康.

    作者:刘宏声 刊期: 2009年第07期

  • 疑难病例报告并文献析评

    目的 探讨不明原因发热伴淋巴结肿大患者的诊断思路与方法及治疗方案.方法 对不明原因发热的患者进行相关检查,明确诊断,制定治疗方案,并查阅国内外有关文献进行分析.结果 该患者经淋巴结活检确诊为组织细胞性坏死性淋巴结炎,用激素治疗后好转.结论 临床上对不明原因发热伴淋巴结肿大患者应及时行淋巴结活检并排除其他疾病,以明确诊断.

    作者:唐皓;梁艳冰;徐嘉;陈志斌;李振宇;马中富 刊期: 2009年第07期

  • 某企业退休职工生活方式对自评健康状况影响的相关分析

    目的 调查某钢铁企业退休职工不同生活方式与自评健康状态,探讨其相关性.方法 结合厂企退休职工的预防性健康体检进行横断面调查.结果 本次共调查421名退休职工,平均年龄(61.2±6.5)岁,自评健康为差者105人,占24.9%;随着每天体力活动时间的增加,自评健康为好或较好的比率随之增加(P<0.05);不常吃水果/蔬菜者自评健康为差的可能性是常吃水果/蔬菜者的2.58倍:是否常饮茶、饮牛奶/豆奶和是否吸烟或饮酒等对自评健康状况的影响差异无统计学意义(均P>0.05).结论 常吃水果/蔬菜和经常进行体力活动对提高老年人健康水平有帮助.

    作者:李鹏宾;林锡谦 刊期: 2009年第07期

  • 粤桂琼三省区疟疾联防16年广东区效果评价

    目的 分析和评价粤桂琼三省区疟疾联防机制对控制广东流动人口疟疾疫情的作用.方法 主动侦查与被动侦查相结合,通过发热病人血检和疟疾病人个案调查,使用回归流行病学方法对资料进行分类和分析.结果 广东参加疟疾联防的6个地级市16年共发现流动人121疟疾病例32 233例,其中归属广东籍流动人口疟疾病人有2 401例;归属海南省籍流动人13疟疾病人有11 224例:归属广西籍流动人口疟疾病人有4 253例;归属其它省籍流动人口疟疾病人有14 355例.32 233例流动人口疟疾病人中,输入性恶性疟有47例,其余32 186例为间日疟.流动人口中的回归人员共有病例7 183例,血检阳性率为2.75%;流动人口中的外来人员共有病例25 050例,血检阳性率为2.19%;两者血检阳性率差异无统计学意义.各种职业的流动人口血检阳性率野外作业与室内作业人员相比,差异有统计学意义.1992-2007年广东省疟疾疫情呈逐年下降趋势.结论 通过连续16年的疟疾联防,广东流动人口疟疾疫情得到控制,输入病例和输入继发病例明显减少,广东省疟疾疫情稳定,年发病率逐年下降.

    作者:林荣幸;张贤昌;王金龙;阮彩文 刊期: 2009年第07期

  • 佛山地区淋球菌流行株对抗生素敏感性测定

    目的 了解佛山地区2007年分离的淋球菌流行株对青霉素、四环素、大观霉素、头孢曲松和环丙沙星的耐药性及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高度耐药淋球菌(TRNG)的流行状况.方法 采用琼脂稀释法测定小抑菌浓度(MIC),纸片酸度法检测β-内酰胺酶.结果 98株淋球菌检出PPNG 34株(34.7%),TRNG 63株(64.3%).青霉素、环丙沙星和四环素的耐药率分别为96.9%、96.9%和94.9%,未发现大观霉素及头孢曲松耐药株.青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准,尤以青霉素为甚,其MIC50及MIC90均超过耐药标准的8倍和32倍.结论 大观霉素及头孢曲松是治疗淋病的首选药物.

    作者:李燕娃;潘洪亮;吴兴中 刊期: 2009年第07期

  • 经阴道注水腹腔镜在输卵管妊娠诊治中的应用

    目的 探讨经阴道注水腹腔镜(transvaginal hydrolaparoscopy,THL)在输卵管妊娠诊治中的临床效果和安全性.方法 选择输卵管妊娠患者22例(研究组)进行THL检查和治疗,选择同期输卵管妊娠30例(对照组)行单纯药物保守治疗.记录研究组手术时间、后穹隆穿刺成功率、手术成功率、诊断符合情况、手术并发症、对侧输卵管的通畅程度等:记录两组治愈率、治愈时间、化疗药物毒副作用发生率、住院时间、住院费用等.结果 THL平均手术时间(25.4±3.5)min;后穹隆穿刺成功率95.6%,20例与术前诊断符合,18例手术成功,无手术并发症发生;术中发现对侧输卵管阻塞3例;两组治愈率比较差异无统计学意义(P>0.05),但研究组治愈率有增加趋势.治愈时间、药物毒副作用发生率、住院时间对照组均大于研究组,差异有统计学意义(P<0.05),住院费用两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 THL在应用于输卵管妊娠的早期诊断和治疗中既具备了单纯药物保守治疗的优势,又达到了经腹腹腔镜保守手术的效果,术中可以同时检查对侧输卵管的通畅度,为输卵管妊娠早期诊断和输卵管保守治疗开辟了新途径,有较好的应用前景.

    作者:邹敏;吕晓亮;胡小良;叶萍;张秀果;潘红平 刊期: 2009年第07期

  • 大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养

    目的 分离、培养原代脑微血管内皮细胞,建立体外血脑屏障模型.同时探索高纯度、活性好的脑微血管内皮细胞的分离培养方法.方法 取3周大鼠大脑,分离皮质,经过匀浆、葡聚糖离心以及消化后,取纯度较高的脑微血管段种植于胶原蛋白包被过的塑料培养瓶中进行培养.显微镜观察及检测Ⅷ因子相关抗原.结果 镜下细胞呈长梭形,7 d左右细胞可融合,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测为阳性,且阳性细胞占绝大部分.结论 本实验成功分离大鼠脑微血管内皮细胞,并进行原代培养.为脑微血管内皮细胞的进一步研究提供了模型,也为构建更高级的大鼠体外血脑屏障奠定基础.

    作者:李珺;彭亮;黄胜和;吴春华;曹虹 刊期: 2009年第07期

  • 新生儿病房呼吸机相关性肺炎病原菌变迁及药物敏感性分析

    目的 探讨近年新生儿层流病房应用后新生儿呼吸机相关性肺炎(VAP)的病原菌变迁及药物敏感性情况.方法 系统回顾我院新生儿重症监护病房(NICU)近4年接受机械通气>48 h的287例患儿的临床资料,以发生时间先后分成两组,分析其VAP发病情况、痰培养病原学、药敏结果及治疗转归等.结果 近4年NICU的VAP发生率为15.68%,培养出致病菌株共32株,依次为缓症链球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、溶血葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等.前两年病原菌以革兰阳性菌为主,主要是缓症链球菌和葡萄球菌属,近两年以革兰阴性杆菌为主,尤以嗜麦芽窄食单胞菌居多.以万古霉素、环丙沙星、氧氟沙星为主要敏感药物,对青霉素类抗生素及第二、三代头孢菌素普遍耐药.结论 近年VAP致病菌谱发生显著改变.以耐药性条件致病菌为主,强调综合治疗,预防为主.尽早使用敏感药物.

    作者:方润婷;陈志凤;李锐钦;卢燕玲 刊期: 2009年第07期

  • 曼氏血吸虫Sm28GST疫苗研究进展

    曼氏血吸虫病(Schistosomiasis mansoni)是由曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni,sm)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于非洲、拉丁美洲和亚洲的53个国家和地区.本文综述了Sm28GST蛋白分子、DNA疫苗、rSt疫苗以及rBCG疫苗等方面的研究进展.

    作者:李文桂;陈雅棠 刊期: 2009年第07期

  • 乙型肝炎病毒核壳蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

    目的 初步探讨乙型肝炎病毒野生型核壳蛋白和L60V、I97L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡的分子机制.方法 将构建的野生型核壳蛋白融合表达载体(pEGFP-WT),L60V变异核壳蛋白(pEGFP-V60)和I97L变异核壳蛋白(pEGFP-L97)表达载体HepG2阳性细胞株复苏培养;Western blot检测各核壳蛋白表达;TNF-α、Act-D诱导各种HepG2细胞株凋亡,48 h采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测NF-κB信号传导通路中IKK-α、IκB-α、NF-κB P65蛋白表达与caspase-8、caspage-3蛋白表达情况.结果 Western blot检测pEGFP-WT组、pEGFP-V60组和pEGFP-L97组核壳蛋白表达基本相同;流式细胞术检测显示,与pEGFP-C1细胞株相比,48 h时pEGFP-WT、pEGFP-V60和pEGFP-L97表达细胞株的细胞凋亡率均明显偏低(P<0.01);4组细胞株IKK-α、IκB-α、NF-κB P65蛋白表达水平无明显差异,而pEGFP-WT组caspase-8、cagpage-3蛋白表达水平明显低于pEGFP-V60和pEGFP-L97组,且三组表达均明显低于pEGFP-C1组.结论 乙型肝炎病毒野生型和L60V、I97L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡可能与核壳蛋白影响细胞内caspase-3,8表达有关.

    作者:李发武;卢放根;王文琦;吴福全 刊期: 2009年第07期

  • 卡培他滨联合紫杉醇治疗晚期转移性宫颈癌的临床研究

    目的 探讨观察紫杉醇联合希罗达对比紫杉醇联合顺铂治疗晚期转移性宫颈癌的疗效及不良反应.方法 对2003年7月至2006年12月本院确诊晚期转移性宫颈鳞癌患者52人双盲随机分为两组,试验组(n=26)口服希罗达每日1 650 mg/m2,连服1~14 d,紫杉醇80 mg/m2静脉滴注,第1天应用,每3周为1周期,连用2~4周期;对照组(n=26)顺铂20 mg/m2静脉注射,第1~5天,紫杉醇80 mg/m2静脉滴注,第1天应用,每3周为1周期,连用2~4周期,治疗结束2周后评价疗效.结果 试验组可评价26例,有效率46.15%(12/26),中位生存时间11.6月,1年生存率43.33%(13/26);安全性方面Ⅲ反应占38.4%(9/26),Ⅳ反应占15.4%(4/26),主要为手足综合征、骨髓抑制和消化道毒性.对照组疗效可评价26例,有效率42.31%(11/26),中位生存时间11.9月,1年生存率43.33%(13/26);安全性方面Ⅲ反应占34.4%(10/26),Ⅳ反应占17.2%(5/26),主要为脱发、消化道毒性、骨髓抑制.结论 希罗达联合紫杉醇对晚期转移性宫颈癌的疗效与紫杉醇联合顺铂疗效相当,但是不良反应较轻.

    作者:詹雪梅;李明毅;梁颖 刊期: 2009年第07期

  • 儿童真菌感染的病原学研究

    目的 探讨广州地区儿童真菌感染的病原分布特点及其耐药状况,为防治儿童真菌感染提供实验室依据.方法 对患儿感染部位的真菌进行分离培养和鉴定:以ATBTM FUNGUS 3酵母样真菌药敏试验条进行常用抗真菌药物的敏感性分析.结果 从患儿标本中分离出558株真菌,主要来自呼吸道有299株,占53.58%;其次是消化道、伤口(创口)、泌尿系统和血液等,分别占28.14%、6.27%、4.66%、3.76%.其中白色假丝酵母菌367株,占65.77%;其次为热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、季也蒙假丝酵母菌等,分别占15.28%、5.02%、4.48%、3.41%、2.69%.从骨髓中检出5株马尔尼菲青霉,从脑脊液中检出3株新型隐球菌.真菌对两性霉素B、5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑等总耐药率分别为8.78%、4.84%、10.54%、1.36%、0.85%.结论 引起儿童真菌感染的主要病原菌是白色假丝酵母菌,对真菌感染应该有针对性地使用高效的抗真菌药物进行早期治疗.

    作者:谢永强;周珍文;虢艳;邓秋连;黄勇 刊期: 2009年第07期

  • 溶血标本对生化检验结果的影响分析

    目的 研究溶血标本对生化检验结果的影响,为检验人员和临床医生对溶血标本的生化检验结果进行正确的分析提供依据.方法 取未溶血标本的血清进行相关的生化项目检验,然后通过搅拌使标本发生轻度溶血、重度溶血,并分离出溶血标本的血清进行相同的生化项目检验,对未溶血、轻度溶血及重度溶血标本的检验结果进行统计分析.结果 轻度溶血标本对ALT、AST、TP、AMY、ALP、LDH、CK、CK-MB、HBDH、UREA、GLU、CRE、UA、LDHC、IP、Fe、Mg、Zn、K、Na、Cl的检验结果产生显著性的影响;标本重度溶血时,除对轻度溶血产生显著性影响的项目外,还对ALB、HDLC、APOA1、Ca、IgG的检验结果也产生显著性影响.结论 标本溶血对大部分生化检验项目的 检验结果可产生显著性的影响,但在分析溶血标本的生化检验结果时,无论是检验人员还是临床医生均应将该项目的 统计学结果、实验允许误差、医学决定水平结合起来分析.同时以本单位实验室公布的受影响的实验项目为参考背景,才能大限度地利用溶血标本的检测结果,为临床医生的诊疗提供正确的分析.

    作者:贾璋林;谢煜楠;杨发达 刊期: 2009年第07期

  • 362例乙肝患者HBV-DNA含量与免疫学标志物、肝功能关系分析

    目的 探讨乙型肝炎患者HBV-DNA含量与血清免疫学标志物、肝功能的关系.方法 将362例乙肝患者按血清免疫学标志物不同模式分成两组:HBeAg阳性组,82例;HBeAg阴性组,280例.HBV-DNA、免疫学标志物和肝功能检测分别采用荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法和生化分析法,数据分析采用SPSS11.0统计学软件.结果 HBeAg阳性组HBV-DNA含量≥103 IU/mL者为97.56%,高于HBeAg阴性组的43.57%,二者间差异有统计学意义(χ2=74.96,P<0.01).HBV-DNA含量103~104 IU/mL者,HBeAg阳性组为2.44%,低于HBeAg阴性组的35.00%.二者间差异有统计学意义(χ2=33.63,P<0.01).HBV-DNA含量为105~106 IU/mL者,肝功能异常者的比例为64.70%.结论 HBeAg阳性者乙肝病毒复制水平较高,HBeAg阴性者病毒复制水平相对较低,但病毒并非停止复制.HBeAg阴性者也存在高水平病毒复制.判断乙型肝炎患者是否存在病毒复制,是否具有传染性,直接、可靠的指标是HBV-DNA定量检测.

    作者:徐秋英;刘亚敏;沈强 刊期: 2009年第07期

  • 彩色多普勒超声在子宫颈癌诊断中的价值

    目的 探讨彩色多普勒超声对子宫颈癌的临床诊疗价值.方法 回顾性分析60例宫颈癌的超声检查结果及血流动力学改变.结果 早期宫颈癌超声多无阳性发现,随着癌肿的进展,宫颈癌的超声表现有:宫颈体积增大、回声不均匀,宫颈肿块、宫腔积液;宫体、阴道受侵,宫旁浸润,盆腔脏器侵犯,彩色多普勒血流显示宫颈癌病灶可见丰富血流信号.结论 彩色多普勒超声诊断宫颈癌的主要价值是观察肿瘤的浸润和转移情况.协助临床分期,指导治疗和观察疗效.

    作者:陈茹;李活霞;林剑英;李涛 刊期: 2009年第07期

  • 宫颈癌前哨淋巴结活检的假阴性原因分析

    目的 探讨染料法识别宫颈癌前哨淋巴结(SLN)活检时出现假阴性的原因.方法 选择49例早期宫颈癌患者,术前宫颈瘤周注射亚甲蓝,行广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫术;进行前哨淋巴结定位及病理学检查.结果 SLN识别率为87.8%(43/49),灵敏度为81.8%,准确率为92%,假阴性率为18.2%.结论 本组假阴性与肿瘤大小、淋巴转移的途径、术前放疔、病理检测方法有关.

    作者:蒋燕明;李立 刊期: 2009年第07期

  • HBx基因缺失型突变体HBx-d382与HBx-d431原核表达载体的构建和鉴定

    目的 为探讨HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体.方法 以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的HBx基因片段.HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a(+)经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体.结果 成功构建了重组pET-28a(+)/Hax-d382和pET-28a(+)HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致.结论 pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)/HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础.

    作者:朱平安;祝玲玲;黄巧梅;侯周华;谭萍;赖秀花 刊期: 2009年第07期

  • 奉节县91例麻风病联合化疗疗效分析

    目的 观察麻风病联合化疗(MDT)的治疗效果.方法 对麻风病患者按照麻风病联合化疗方案进行治疗,并进行定期监测和长期随访.结果 91例患者完成化疗并治愈,MDT规则治疗率为100%,治愈率100%,平均临床治愈时间3年,全程细菌密度指数(B1)BT型年均下降0.6,BL、LL分别为0.58和0.63,疗程中发生麻风反应12例,新发畸残4例.治愈后监测未发现复发病例.结论 通过对91例麻风患者联合化疗疗效观察,MDT疗效确切,疗程短,复发低,是治疗麻风病的有效方法.应加强麻风病的联合化疗,提高规则治疗率.及时处理麻风反应,减少畸残,治愈患者.

    作者:雷兵;刘学刚;廖和平 刊期: 2009年第07期

  • 凝胶直接抗球蛋白试验在自身免疫性溶血性贫血实验诊断中的应用

    目的 探讨凝胶直接抗球蛋白试验的特点及其在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)实验诊断中的应用价值.提高致敏红细胞检出率.方法 检测临床诊断疑似AIHA标本135例.用Coomb's凝胶试剂卡对受检标本进行直接抗球蛋白试验.以试管法直接抗球蛋白试验作对照.凝胶法阳性者用单特异性IgG和C3d凝胶试剂卡进行分型.结果 试管法直接抗球蛋白试验阳性19例,Coomb's凝胶直接抗球蛋白试验(GDAT)阳性24例,两种检测方法间差异有统计学意义(P<0.05).对24份凝胶直接抗球蛋白试验阳性标本进行IgG和C3d分型,其中IgG+C3d型7例(29%),IgG型13例(54%),C3d型4例(17%).结论 凝胶直接抗球蛋白试验不需洗涤红细胞,操作简便,重复性好;检测致敏红细胞灵敏度优于试管法,在AIHA实验诊断中值得临床推广应用.

    作者:罗广平;骆宏;汪传喜;叶欣;夏文杰;戎霞;陈扬凯;邓晶;赵阳;丁浩强 刊期: 2009年第07期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会