学术投稿

泛素偶联酶UBE2C/UbcH10荧光蛋白表达载体的构建及肝癌细胞中的表达

杜红延;马慧娟;杨学习;姚小艳;吴英松;李明

关键词:泛索偶联酶UBE2C/UbcH10, 真核表达载体, 构建, 转染, 肝癌细胞
摘要:目的 构建人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10荧光蛋白真核表达载体,并转染肝癌细胞,筛选建立稳定转染细胞株.方法 从构建好的pMD19-T/ubcH10载体中PCR扩增UbcH10基因,PCR产物双酶切后克隆入pEGFP-N1真核表达载体中,构建真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10,进行双酶切和测序鉴定.将构建好的真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10和空载体pEGFP-N1利用脂质体Lip2000TM分别转染进入肝癌细胞SMMC7721中,建立肝癌细胞SMMC7721的G418细胞死亡曲线,选择G418的筛选浓度,经G418结合荧光显微镜观察筛选稳定转染细胞.将筛选获得的肝癌细胞进行有限稀释法单克隆化,收集单个细胞克隆扩大培养备用.结果 经双酶切和测序鉴定,带有荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10构建成功,经脂质体介导真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10和空载体pEGFP-N1成功转入肝癌细胞SMMC7721中,经800μg/mL G418筛选并进行单克隆化获得稳定转染的细胞株SMMC7721-pEGFP-N1和SMMC7721-pEGFP-N1/UbcH10,阳性转化率达到94%以上.结论 人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10稳定高表达肝癌细胞株的建立,为该蛋白在肝癌发生发展过程中的具体作用机制的研究奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 一起诺如病毒感染性腹泻爆发的流行病学调查

    目的 分析深圳市某区一起诺如病毒感染性腹泻爆发的流行病学特征,为防治诺如病毒感染性腹泻提供科学依据.方法 采用病例对照研究相关方法开展此次疫情调查,比较病例与对照之间不同危险因素的暴露比例,采用RT-PCR检测诺如病毒抗原.结果 共报告46例诺如临床诊断病例.病例分布在该片区的3个单位,平均罹患率为12.64%.在危险因素的单因素分析中,只有A单位中饭前用自来水洗碗(OR=7.14,95%CI:1.83~27.88)、接触病人(OR=7.64,95%CI:1.33~43.76)结果具有统计学意义.在20份患者肛拭子样本中,有15份分离到诺如病毒.结论 此宗诺如病毒感染性腹泻爆发可能是由于水污染和接触病人导致传播的.采取加强饮食卫生管理、隔离治疗病人及带菌者、整改清洁饮用水管道等措施后疫情中止.

    作者:秦彦珉;廖玉学;刘刚;曹彬;逯建华;潘柳波;吴辉 刊期: 2009年第08期

  • 力克肺疾与莫西沙星联合治疗耐多药肺结核近期疗效

    目的 评价力克肺疾与莫西沙星联合方案对耐多药肺结核(MDR-TB)的疗效.方法 100例MDR-TB患者随机分为两组,每组50例.治疗组用莫两沙星0.4 g/d,力克肺疾1.0 g/d.对照组用左氧氟沙星0.4 g/d,丁胺卡那霉素0.6 g/d,疗程12个月,同时辅以其他抗结核药.结果 第3个月末,治疗组痰菌转阴率为74%,明显优于对照组的43%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).疗程结束时,治疗组痰菌转阴率为96%,明显优于对照组的70%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 以力克肺疾与莫西沙星联合其他抗结核药物组成的化疗方案对MDR-TB疗效肯定,痰菌转阴速度快,值得继续临床探索.

    作者:洪梅;郑泽锋;吴捷;翁加豪 刊期: 2009年第08期

  • 乙型重型肝炎患者主要肝功能指标对预后影响的Meta分析

    目的 探索主要肝功能指标对乙型重型肝炎患者预后的影响.方法 应用Meta分析的方法对有关研究TBil、PTA、ALB、CHO、CHE、AFP、ALT及AST/ALT对乙型重型肝炎患者预后影响的文献进行系统评价.以加权平均数(WMD)作为评价指标.共纳入Meta分析的回顾性队列研究文献32篇,累计病例21949例.以受试者工作特征曲线(ROC)分析各指标对预后影响的敏感程度.结果 死亡组TBil水平高于生存组,差异具有统计学意义(P<0.01);死亡组FFA、ALB、CHO、CHE、AFP水平低于生存组,差异具有统计学意义(P<0.01);两组ALT及AST/ALT比较差异无统计学意义(P=0.54,0.09).AFP的ROC值高为0.943(P<0.01).结论 TBil可能是重型肝炎患者预后的危险因素,PTA、ALB、CHO、CHE和AFP可能是重型肝炎患者预后的保护因素,ALT和AST/ALT对重型肝炎患者预后无明显影响.AFP对预后的判断为敏感,其次为PTA和CHO.

    作者:冉嘉;张耀;熊鸿燕 刊期: 2009年第08期

  • 番禺区水产品副溶血性弧菌污染调查

    目的 了解番禺区水产品副溶血性弧菌(Vibrio parohaemolyticus,VP)的污染状况.方法 随机从番禺区的水产批发市场、零售市场和餐饮单位采集各类水产品样品,按照<食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验>(GB/T 4789.7-2008)标准对VP进行定性和定量的检测.结果 103份样品中有15份检出VP,检出率为14.6%.各类场所VP检出率差异无统计学意义(P>0.05).淡水水产品和海水水产品VP检出率差异无统计学意义(P>0.05).采集的4类水产品中虾蟹类的VP检出率高(34.8%),生吃水产品未检出VP,4类水产品VP检出率差异有统计学意义(X2=14.49,P<0.05).阳性样品中VP的平均浓度为7.6 MPN/1 g,虾蟹类样品的VP浓度明显高于鱼类,但与贝壳样品相比差异无统计学意义.结论 番禺区水产品VP的污染情况较为突出,应加强对水产品VP的主动监测.

    作者:林东明;吴利楠;杨福荣;何卓雅 刊期: 2009年第08期

  • 广州市部分医疗单位手术室空气消毒效果监测结果分析

    目的 预防和减少医院手术感染的发生.方法 2008年对本市60家省级、市级及厂企医院手术室空气,用直径9厘米普通琼脂平板和血琼脂平板,采用静态自然沉降暴露法进行菌落总数、致病菌监测.结果 采集的103份样品中有28份菌落总数项目超标,全部样品未检出致病菌,总合格率为72.8%.洁净手术室合格率为71.4%,普通手术室合格率为75.0%,两者合格率无统计学差异.上半年检测合格率为83.7%,下半年检测合格率为62.9%.两者相比差异有统计学意义.结论 我市部分医院洁净手术室需要加强管理及制定相关的洁净手术室和非洁净手术室日常维护和检测规范,提高手术室空气卫生质量以减少医院感染的发生.

    作者:区继军;贺征;龚玉娇;陈建东;林耀坤 刊期: 2009年第08期

  • 综合治疗法治疗青少年弱视的疗效

    目的 回顾综合治疗法治疗12~15岁青少年弱视的疗效.方法 回顾性分析2004-2006年我院门诊确诊为弱视且年龄为12~15岁的患儿117例(172眼)应用个性化综合疗法进行治疗的疗效,并对不同类型及不同程度的弱视的疗效进行比较.结果 屈光不正性弱视组治愈率为60.82%,屈光参差性弱视组治愈率为36%,轻度、中度、重度弱视治愈率分别是56.52%、68%、0.结论 严格的、个性化的综合治疗法能有效治疗青少年弱视.

    作者:陈晓凯;邹飞娥;宁静静 刊期: 2009年第08期

  • 脂肪酸谱分析在餐饮用油掺兑潲水油检测中的应用

    目的 了解广州市不同食品量化分级餐饮业及其生产加工场所正在使用的油品是否掺兑潲水油.方法 随机抽取不同食品量化分级餐饮店共108间,对其餐饮用油油样用气相色谱法测定油脂种类和组成,将结果与市售植物油进行比较并加以分析.结果 92.6%以上单位绝大部分油品都含有棕榈油、动物油或混合油种类.结论 C级餐饮企业餐饮用油卫生状况不容乐观,有可能来源于掺兑的潲水油.

    作者:许斌;黄亮宇;李虹;董欣;张珍真;吕史维;朱惠莲 刊期: 2009年第08期

  • 液态芯片技术在致早产病原体诊断中的应用

    目的 建立快速高通量的病原体检测方法多靶点液相芯片(multi analyte suspension array,MASA)法,分析早产孕妇病原微生物的分布情况.方法 利用多靶点液相芯片技术平台,结合细胞培养技术对350例早产孕妇的羊水及胎盘组织标本进行感染病原学分析,主要针对人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCVM)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)Ⅰ+Ⅱ型、风疹病毒(rubella virus)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)和解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)、淋球菌(Neisseria gonorrhoea,NG)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)、弓形虫(Toxoplasma gondii)等常见微生物进行病原学研究.结果 在350例标本中至少被前述的一种病原体感染的标本有161例,阳性率为46%.其中HSV Ⅰ+Ⅱ感染率为4.3%、HCMV感染率为3.71%、TOX感染率为4.86%、RV感染率为4.57%、TP感染率为5.43%、Uu感染率为8%、Ct感染率为7.71%、NG感染率为7.43%,被两种以上病原体混合感染的早产孕妇有17例.MASA技术在致早产病原体分析中与培养法比较其特异性达到94%以上,敏感度达到95%以上.结论 致早产的病原微生物感染机率均等,都值得重视.基于MASA技术平台建立的多重液相基因芯片法具有快速、高通量、敏感、特异性高等诸多优点值得推广.

    作者:吴润香;杨来智;何英;王琼;柳红;陆学东;刘键 刊期: 2009年第08期

  • 热休克蛋白90对抗氯化钴引起的心肌细胞损伤

    目的 探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在对抗氯化钻(cobalt chloride,CoCl2)诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用.方法 应用不同浓度的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测HSP90的表达:双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒分析SOD活性抑制率.结果 在400~1000 μmol/L浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率.在0.5~36 h时间范围内,600μmol/L CoCl2呈时间依赖性地促进H9C2心肌细胞HSP90的表达.2~16 μmol/L HSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17demethoxygeldanamycin,17AAG)呈剂量依赖性地加重600 μmol/L CoCl2对H9C2细胞存活率的抑制.2 μmol/L 17AAG本身不损伤H9C2心肌细胞,但明显地加强CoCl2增加H9C2心肌细胞内ROS生成的作用,并增加CoCl2对SOD活性的抑制.结论 HSP90表达上调可能是H9C2心肌细胞对抗化学性缺氧的内在防御机制之一.

    作者:李建平;杨春涛;杨战利;廖新学;谭钰嫔;黄雪;王礼春;陈培熹;冯鉴强 刊期: 2009年第08期

  • 肺癌血清肿瘤标记物的联合检测及其临床意义

    目的 评价CEA、NSE、CYFRA21-1联合检测对肺癌与良性肺部疾病鉴别诊断的价值.方法 应用电化学发光法(ECLIA)检测经病理确诊的56例肺癌、41例良性肺部疾病和30例正常体检者血清中癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞角蛋白21-1(CYFRA21-1)的含量.结果 肺癌组CEA、NSE、CYFRA21-1测定水平明显高于肺良性病变组和正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);CEA、NSE、CYFRA21-1对肺癌的敏感性分别为51.79%、44.64%、55.36%,特异性分别为92.96%、90.14%、88.73%;CEA、NSE、CYFRA21-1三项联合检测对肺癌的敏感性与特异性分别为92.86%和94.37%.结论 CEA、NSE、CYFRA21-1三项肿瘤标记物联合检测明显提高肺癌诊断的阳性率,有助于肺癌的预测和鉴别诊断.

    作者:熊石龙;王前;郑磊;包杰 刊期: 2009年第08期

  • 黑木耳多糖对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的研究

    目的 通过黑木耳多糖对血管平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化的影响,探讨黑木耳多糖降血脂和抗氧化以外的抗动脉粥样硬化形成作用.方法 将30只新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组和实验组3组,分别给予普通饲料(正常组)、高胆固醇饲料(模型组)以及高胆固醇加黑木耳多糖饲料(实验组)喂养.第12周末处死动物,取主动脉行组织形态学观察及用透射电镜和免疫组织化学方法分析平滑肌细胞表型转化及bFGF和PDGF表达变化.结果 实验组主动脉斑块面积明显小于模型组,模型组和实验组分别为(0.44±0.10)和(0.30±0.83),两组比较差异有统计学意义(P<0.01);透射电镜和免疫组化结果显示:模型组动脉粥样硬化斑块的平滑肌细胞内内质网、线粒体增多,主要为合成表型;而实验组平滑肌细胞内内质网、线粒体少,主要为收缩表型,并且斑块内bFGF和PDGF的表达减少.结论 黑木耳多糖可抑制动脉粥样硬化过程中血管平滑细胞从收缩表型向合成表型的转化,从而抑制平滑肌细胞合成和分泌bFGF、PDGF和其他细胞外基质的能力,从而减少动脉粥样硬化形成中血管平滑肌细胞参与的过程.

    作者:郭素芬;成永霞;孙平 刊期: 2009年第08期

  • 342例骨科感染病人病原菌培养及药敏结果分析

    目的 了解骨科病人感染菌及耐药性,为药物的合理使用提供参考依据.方法 对骨科病房病人细菌感染的412份送检分泌物标本进行细菌培养,并对检出的病原菌按K-B法做体外药敏试验.结果 374份阳性标本共分离出病原菌392株,其中革兰氏阳性菌155株(39.54%),革兰氏阴性菌227株(57.91%);革兰阳性菌对常用抗生素药物敏感性高的抗生素是万古霉素,低的是青霉素类.革兰阴性菌对常用抗生素药物敏感性高的抗生素是亚胺培南,低的是青霉素类.结论 细菌谱发生改变且对大部分常用抗菌药物已产生耐药性,合理应用抗生素,才能降低骨科感染率.

    作者:莫茅 刊期: 2009年第08期

  • 广州管圆线虫感染致大鼠肺组织病理改变及免疫组化研究

    目的 观察动物感染广州管圆线虫后肺组织病理改变,以及应用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体进行感染鼠肺免疫组织化学研究.方法 20只大鼠实验室人工感染广州管圆线虫,组织学方法观察肺组织的形态学变化,免疫组织化学方法应用实验事制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体IgG和IgM进行肺组织切片的免疫反应性研究.结果 受感染的大鼠肺组织肿胀实变,表面及切面质硬粗糙,有灰白色虫卵结节,病变范围广泛.HE染色镜下观察可见肺组织中有多个圆形、椭圆形的虫卵结节,结节周围组织细胞反应及纤维化,肺泡隔增厚,肺泡轮廓消失.结节内虫卵发育形成桑葚期、仔虫期及一期幼虫.用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM分别行免疫组化,结果显示桑葚期虫卵表达IgG,而IgM则在桑葚期、仔虫期及一期幼虫等部位均有显著阳性表达.结论 广州管圆线虫感染所致大鼠肺脏病理改变,主要表现在肺内形成多个虫卵结节,并可致肺呈纤维化改变;抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM在肺组织虫卵结节内的阳性表达有显著差别.

    作者:李晓恒;张仁利;陈木新;耿艺介;高世同;黄达娜 刊期: 2009年第08期

  • OSAS合并原发性高血压患者血浆内皮素-1与颈动脉内膜中层厚度的变化

    目的 观察阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)及OSAS合并原发性高血压(essential hypertension,EH)患者血浆内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、颈动脉内膜中层厚度(carotid artery intima-media thickness,IMT)的变化及相互关系.方法 选择OSAS合并EH患者组50例,OSAS患者组40例及健康对照组30例,采用ELISA法测定其血浆ET-1浓度,及利用颈动脉超声检测IMT.结果 OSAS合并EH组的血浆ET-1浓度均高于单纯OSAS组及对照组即(124.66±18.90)pg/mL、(54.53±10.82)pg/mL,(45.07±6.45)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.01);而单纯OSAS组的血浆ET-1浓度亦高于对照组,即(54.53±10.82)pg/mL对(45.07±6.45)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05);OSAS合并心血管病组的IMT明显高于单纯OSAS组及对照组,即(1.03±0.11)mm对(0.93±0.06)mm,(0.88±0.07)mm,差异有统计学意义(P<0.01).结论 OSAS患者存在内皮功能损害,OSAS合并EH者内皮功能紊乱更严重,同时伴IMT增厚.

    作者:张立建;钟惠娟;谢富兰;陈端;潘锦汉 刊期: 2009年第08期

  • 枸橼酸钠置换液在血液滤过中的抗凝效果评估

    目的 评估枸橼酸钠置换液在血液滤过中的抗凝效果.方法 随机对照的实验研究,每组健康犬6只.枸橼酸钠组:配制含1.5 mmol/L枸橼酸钠抗凝剂的置换液,在血滤管路静脉端持续补钙对抗枸椽酸根;肝素组:使用低分子肝素(20 U/kg·h)持续泵入的抗凝方法.分别对急性肾功能衰竭的动物行血液滤过治疗,血流量为50 ml/min,置换液速度为500 ml/h.观察使用枸橼酸钠置换液后及补钙后血滤管道的凝血功能(PT、PT%、PT/R、FT INR、APTT、AT3%及Fbg等)的变化,记录血滤管路使用时间,以及血液滤过结束时的血清肌酐、尿素、电解质、酸碱平衡,血滤器前、以及体内凝血功能指标的变化.结果 血液滤过治疗过程中,使用枸橼酸钠置换液后血滤管道中血液的凝血指标(PT、PT%、PT INR、APTT)延长,补钙后恢复正常水平,体内静脉血的凝血指标均恢复正常范围内;两组均未有血滤管路和血滤器堵塞现象,实验犬的血浆电解质、酸碱平衡、肌酐、尿素等结果两组无明显差异(P<0.01),肝素组动物体内的部分凝血指标(PT、PT INR、AFIT)延长(P<0.01).结论 经研究配制后的枸橼酸钠置换液应用血液滤过治疗时,通过血滤器时有良好的抗凝效果,而且对体内凝血功能及内环境无不良影响.

    作者:罗冰;熊明媚;周嘉敏;李仕成;唐新兴;黄东健 刊期: 2009年第08期

  • 卵巢早衰影响因素病例对照研究的相关性分析

    目的 探讨卵巢早衰(premature ovary failure,POF)发病的可能危险因素,旨在找出卵巢早衰发病的高危因素,为卵巢早衰的预防提供科学依据,为进一步病因研究提供线索.方法 采用1∶1配比的病例对照研究方法.抽取POF组150例,健康对照组150例,资料收集后,对每一变量进行定义、赋值,使用Excel建立数据库,采用单因素和多因素的条件Logistic回归分析性研究.结果 单因素Logistic回归分析显示,婚姻状况,人工流产次数,心情,饮酒,吸烟等12个变量与POF的发生有关,经多因素Logistic回归分析后显示,婚姻状况(OR=5.753),人工流产次数(OR=2.076),吸烟(OR=3.002),心情(OR=0.164),蔬菜摄入频率(OR=0.341),腮腺炎(OR=11.460)7个变量与POF仍有关联.结论 POF的发病与生活方式,行为习惯,环境,医源性和感染有关.其中婚姻状况,人工流产次数,心情,饮酒,腮腺炎病史,蔬菜摄入频率是POF发生的主要影响因素.

    作者:李玉华;何小红;王颖娴;朱国平 刊期: 2009年第08期

  • 1980-2008年广西钦州市钦南区疟疾防治效果

    目的 评价沿海开发城市钦州市钦南区在历经多次行政区域划分后近28年的疟疾防治效果.方法 收集、整理、统计、分析该地区近28年疟疾防治的各种资料.采用Excel统计软件进行统计分析.结果 该地区属多种疟原虫混合流行的高疟区,80年代初开始与周边的县市进行疟疾联防,1988年发病率已控制在1/10万以下,至今仍未发现内源性疟疾病例.结论 在行政区域划分反复变更的地区实施疟疾联防,同样能有效控制疟疾的流行,使其达到卫生部基本消除标准.

    作者:沈平;黄亚铭;裴俊;廖开周;毛玮;黎学铭;李锦辉;郭传坤;覃业新;蒋智华;杜进发;林康明;韦海艳;贺颖 刊期: 2009年第08期

  • 尖锐湿疣患者皮损及外周血CD4+和CD8+细胞免疫功能的检测

    目的 通过对尖锐湿疣(CA)患者皮损及外周血CD4+和CD8+细胞免疫功能检测的分析,探讨尖锐湿疣患者细胞免疫功能的变化及其对CA的影响.方法 通过流式细胞仪(FCM)对40例CA患者及20名正常人外周血进行反映细胞免疫功能的T淋巴细胞亚群的检测,实验采用免疫组化的方法对40例CA皮损样本中CD4+和CD8+细胞的数目进行检测.结果 CA患者外周血及皮损较正常对照组中的CD8+细胞百分率增加,CD4+细胞百分率及CD4+/CD8+比值降低.结论 CA患者存在全身和局部的细胞免疫功能低下,而且局部皮损细胞免疫功能低下可能在CA的发病中具有重要作用.

    作者:王亚美;卞苏环;郑锦芬;余光银;聂李平 刊期: 2009年第08期

  • Legumain对肿瘤细胞侵润力和血管内皮细胞管腔形成的作用

    目的 探讨肿瘤组织巾过度表达的一种天冬酰胺肽链内切酶Legumain在肿瘤细胞侵润性生长和血管内皮导管形成中的作用及相关机制.方法 采用体外细胞培养的方法,观察在缺氧条件下人乳腺癌细胞MDA MB231和人静脉血管内皮细胞HUVEC中Legumain的蛋白表达量;观察Legumain对MDA MB231细胞的侵润能力的影响以及人工合成的Legumain抑制物(asparaginly endopepidase inhibitor,AEPI)对人静脉血管内皮细胞HUVEC小管腔形成能力的影响;用免疫组织化学的方法观察Legumain与整合素(Integrin)β1的结合情况.结果 Western-blot的结果表明,在缺氧条件下,体外培养的人乳腺癌细胞MDA MB231和人静脉血管内皮细胞HUVEC的Legumain蛋白表达量增加.应用免疫荧光双染色法对缺氧条件下培养的MDA MB231细胞进行染色,与正常条件下培养的细胞相比,缺氧条件下培养的MDA MB231细胞体积增大,胞浆内含有大量绿色的Legumain,成点状分布,并有部分Legumain分布在迁移中的细胞表面前缘,与红色的整合素β1重叠,呈现为黄色.在血管内皮细胞小管腔形成试验中,加入AEPI的实验组,HUVEC细胞的小管形成数量明显减少,分别为(13.2±0.85),(5.33±0.35),(0.57±0.23),与对照组(21.3±1.73)相比差异均具有统计学意义(P<0.001).细胞的侵润能力试验结果表明.加入激活的Legumain后,实验组中的MDA MB231细胞的侵袭能力增高,分别为(170.90±59.27和(321.22±22.39),与对照组(67.56±7.58)相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧条件下,MDA MB231细胞株和HUVEC细胞株的Legumain表达增加,能促进肿瘤细胞的迁移和血管内皮细胞的小管形成.其分子机理之一可能是通过与整合素β1结合.

    作者:吴文苑;余涟;刘春;罗金刚;段朝晖 刊期: 2009年第08期

  • 泛素偶联酶UBE2C/UbcH10荧光蛋白表达载体的构建及肝癌细胞中的表达

    目的 构建人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10荧光蛋白真核表达载体,并转染肝癌细胞,筛选建立稳定转染细胞株.方法 从构建好的pMD19-T/ubcH10载体中PCR扩增UbcH10基因,PCR产物双酶切后克隆入pEGFP-N1真核表达载体中,构建真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10,进行双酶切和测序鉴定.将构建好的真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10和空载体pEGFP-N1利用脂质体Lip2000TM分别转染进入肝癌细胞SMMC7721中,建立肝癌细胞SMMC7721的G418细胞死亡曲线,选择G418的筛选浓度,经G418结合荧光显微镜观察筛选稳定转染细胞.将筛选获得的肝癌细胞进行有限稀释法单克隆化,收集单个细胞克隆扩大培养备用.结果 经双酶切和测序鉴定,带有荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10构建成功,经脂质体介导真核表达载体pEGFP-N1/UbcH10和空载体pEGFP-N1成功转入肝癌细胞SMMC7721中,经800μg/mL G418筛选并进行单克隆化获得稳定转染的细胞株SMMC7721-pEGFP-N1和SMMC7721-pEGFP-N1/UbcH10,阳性转化率达到94%以上.结论 人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10稳定高表达肝癌细胞株的建立,为该蛋白在肝癌发生发展过程中的具体作用机制的研究奠定了基础.

    作者:杜红延;马慧娟;杨学习;姚小艳;吴英松;李明 刊期: 2009年第08期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会