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EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

李咏梅;陈金龙;杨海文;罗仁

关键词:表皮生长因子, 天花粉蛋白, 嵌合毒素, 细胞凋亡
摘要:目的 表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用.方法 诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果 EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/ml EGF-Linker-TCS和1μg/ml EGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P<0.05).EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98 μg/ml.结论 EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值.
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  • 弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导NALT和GALT黏膜部位的免疫应答

    目的 观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答,探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μg STAg+1μgCT)滴鼻免疫2次(间隔2周),对照组PBS滴鼻.于末次滴鼻后14 d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗体水平:计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 免疫组小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组(P<0.05).NALT内淋巴细胞明显增生(P<0.05),其中CD4+、CD8+T细胞均有增生(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05).NC中淋巴细胞数明显升高(P<0.01),以CD4+T细胞水平为主(P<0.01).GALT部位PP淋巴细胞增生显著(P<0.01),主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05).结论 弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答.

    作者:李珀;孟晓丽;殷国荣;张杰 刊期: 2007年第01期

  • 工作台面微生物污染状况对产品的影响

    目的 了解化妆品分装间工作台面微生物污染情况及分布,探讨生产车间分装间工作台面微生物污染水平和分布对产品卫生质量的影响.方法 按不同季节、生产前后分别检测粉类车间、净化车间和非净化车间的分装间工作台面和化妆品产品的微生物指标.结果 工作台面未检出大肠菌群,细菌总数均值为(447.1±217.2)cfu/25 cm2,其中净化车间细菌总数均值远低于其余两类车间,生产前低于生产中.化妆品全部合格.工作台面和产品之间r=0.203,P=0.126,两者无线性相关关系.结论 工作台面细菌污染较严重,主要是生产中非净化车间工作台面细菌总数浓度偏高.

    作者:郭重山;钟嶷;李小晖 刊期: 2007年第01期

  • 射频消融对人体单相动作电位的影响

    目的 探讨射频消融对人体心内膜记录的单相动作电位(MAP)的影响.方法 132例行射频消融的病人,在消融过程中同步记录MAP和心腔内心电图,分析消融时间和温度对MAP各项指标的影响.结果 单相动作电位振幅(MAPA)和大除极速度(Vmax)随消融时间的延长而逐渐降低,40 s后不再变化;随消融温度升高使MAPA和Vmax降低;消融时间和温度对MAPD90和MAPD50无明显影响.结论 MAPA和Vmax随消融时间和温度的变化而变化,提示利用MAP可以监测局部心肌损伤的程度.

    作者:李宜富;谭倩;张杏;高飞 刊期: 2007年第01期

  • 大豆卵磷脂辅助降血脂功能实验研究

    目的 研究大豆卵磷脂调节血脂的作用.方法 将动物随机分为空白对照组、高脂模型对照组和大豆卵磷脂低、中、高三个剂量组,剂量组每天灌胃给予样品,并同时喂饲高脂饲料.于给样30 d后,取血分别测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)等指标.结果 大豆卵磷脂三个剂量组的TG、TG水平均较高脂模型对照组降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 大豆卵磷脂具有调节血脂作用.

    作者:池莉平;谭剑斌;陈瑞仪 刊期: 2007年第01期

  • 东莞地区265例住院麻疹临床特征分析

    目的 探讨3年来麻疹的流行、临床及实验室检查的特点,以期更好的预防和治疗麻疹.方法 对东莞市人民医院自2003年6月至2006年1月收治的265例麻疹的流行病学及临床资料进行回顾性分析.结果 从4个月的婴幼儿至48岁的成年人均有麻疹发病,以6个月至3岁年龄组发病率高,占56.2%.城镇儿童麻疹疫苗接种率明显高于农村和外来工的儿童.所有病例均有发热,多在38~39 ℃之间.成人麻疹多为不典型,并发症多,以腹泻较常见.麻疹抗体IgM检测阳性率为86.4%.结论 婴幼儿仍为目前麻疹的高发人群,在春夏季节,密切接触者发病率高.加强农村和外来工的儿童麻疹疫苗接种工作尤为重要和迫切.

    作者:吴福全;刘军;邝明子;王文琦;殷思纯;李发武;陈桂轩;夏宪照;程元桥 刊期: 2007年第01期

  • 登革病毒基因组核苷酸变异与毒力的关系

    登革病毒是一种流行于热带、亚热带地区的蚊媒病毒,其引起的登革热、登革出血热/登革休克综合征(DSS/DHF)已成为严重威胁人类健康的公共卫生问题.登革病毒缺乏精确的复制校正系统,在传播过程中核苷酸的变化会导致病毒毒力的变化,目前其致病与免疫机制尚未明了,缺乏有效的疫苗.本文就登革病毒基因变异与其毒力关系方面的研究进行综述.

    作者:曹丹;周俊梅 刊期: 2007年第01期

  • 东莞市厚街镇流动儿童免疫状况调查分析

    目的 了解东莞市厚街镇流动儿童免疫状况,为免疫规划提供科学依据.方法 对2002-2004年厚街镇免疫规划疫苗接种情况与免疫监测相关资料进行分析.结果 2002-2004年出生的流动儿童基础免疫5种疫苗(卡介苗、口服脊髓灰质炎疫苗、百白破联合疫苗、麻疹疫苗、乙肝疫苗)全程接种(覆盖)率分别是69.42%、70.17%、69.78%,均非常显著低于同年出生本地户籍常住儿童的99.36%、98.36%、97.66%(Χ2分别为380.45、336.96、317.48,P值均<0.005).2004年免疫监测表明,1~6岁流动儿童中乙型肝炎表面抗原抗体(抗-HBs)、麻疹IgG抗体、脊灰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体的阳性率分别是45.21%、72.37%、93.33%、97.33%、94.67%,几何平均滴度(GMT)分别是7.55 mIU/ml、1∶576.10、1∶164.28、1∶288.68、1∶70.2.2004-2005年报告的麻疹病例中,流动人口占99.72%,其中0~6岁占57.45%.结论 流动儿童基础免疫全程接种率、部分抗体阳性率与GMT低,存在易感人群积累,导致麻疹等传染病的流行与暴发.加强流动儿童计划免疫管理,提高免疫规划疫苗接种率,是本地区计划免疫的工作重点.

    作者:黄兴民;刘春玉;陈金燕;李丽欢 刊期: 2007年第01期

  • 一起大学毕业生集体食物中毒事故的调查

    目的 分析该次大学毕业生集体食物中毒事故的原因.方法 采用流行病学调查、临床诊断和实验室检验结果相结合的方法.结果 认为是一起因食用被副溶血性弧菌污染的食物而引起的食物中毒.结论 对校园内的饮食单位必须加强卫生管理,对校园内的大型餐饮任务更要加强监督,控制超负荷生产经营,以保障消费者的健康.

    作者:刘士俊;丘春萍 刊期: 2007年第01期

  • 广州地区质粒和染色体介导的淋球菌对青霉素和四环素耐药株趋势分析

    目的 监测2000-2005年间广州地区质粒和染色体介导的淋球菌对青霉素和四环素的耐药性及耐药株流行趋势.方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌对青霉素和四环素抗菌药物的低抑菌浓度(MIC),用纸片酸度法测定质粒介导的产青霉素酶淋球菌(PPNG).结果 6年来共测定631株临床分离的淋球菌,检出PPNG 132株(20.9%),阳性率从2000年的17.1%上升到2005年的23.7%(Χ2=0.955,P>0.05);质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)222株(35.2%),阳性率从2000年的20%上升到2005年的46.1%(Χ2=11.94,P<0.05).染色体介导的青霉素耐药率从2000年的76%上升到2005年的98.3%(Χ2=12.94,P<0.05),染色体介导的四环素的耐药率介于70.7%~85.7%(Χ2=3.246,P>0.05).在2000-2005年期间,青霉素的MIC50和MIC90由1 mg/L和2mg/L上升到4 mg/L和>32 mg/L,四环素的MIC50和MIC90由1 mg/L和2 mg/L上升到2 mg/L和4 mg/L,且都超过了耐药标准.结论 广州地区近6年来质粒介导的淋球菌耐药株PPNG和TRNG增长速度较快,呈逐年上升趋势:染色体介导的淋球菌对青霉素和四环素耐药比率很高.

    作者:吴兴中;郑和平;黄进梅;曾维英;潘惠清;李美玲;薛耀华 刊期: 2007年第01期

  • 嗜人按蚊rDNA-ITS2基因的克隆鉴定及SNP分析

    目的 克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP).方法 用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5.8S和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp+LB固体平板筛选的阳性克隆,经amp+LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析.结果 经PCR反应扩增出全长556 bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,纯化后重组克隆经PCR鉴定可重现556 bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同.嗜人按蚊6个克隆的同一性为99.6%,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入.结论 嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性.

    作者:耿艺介;黄达娜;高世同;庾蕾;黄继莲;张仁利 刊期: 2007年第01期

  • 广州成人散发急性腹泻中诺瓦克样病毒感染及毒株型别初步研究

    目的 探讨诺瓦克样病毒与广州成人散发急性腹泻的病原关系和感染毒株的基因型别.方法 采用ELISA方法筛检轮状病毒,RT-PCR方法检测诺瓦克样病毒,诺瓦克样病毒阳性样品的PCR产物经纯化、测序后进行基因分型.结果 35份成人散发急性腹泻患者粪便标本中检出轮状病毒8例,诺瓦克样病毒4例,测序分析确定1株为诺瓦克样病毒GⅡ-3型,另1株为GⅡ-4型.结论 广州成人散发急性腹泻患者中存在诺瓦克样病毒感染,且感染毒株的基因型别不一.

    作者:詹惠春;聂军;唐亚丽;李建栋;戴迎春;陈清;俞守义 刊期: 2007年第01期

  • 一起学校流感暴发的调查和分析

    目的 调查此次疫情暴发的原因和特点,防止类似疫情再次发生.方法 按2005年广东省卫生厅《广东省流感样病例暴发疫情报告及调查处理工作指引(试行)》进行.结果 全校学生902人,发病74例,罹患率为8.20%.整个疫情流行过程为17日,7~9岁年龄组发病较多,男女发病无显著差别.一、二年级学生和在校午休学生罹患率较高,具明显的班级和宿舍聚集性;病毒分离培养为B型流感病毒.结论 此次为一起由B型流感病毒引起的流感暴发疫情,暴发原因为未及时隔离治疗病人、疫情报告迟缓、室内通风换气不够和学校未开展流感疫苗接种等.

    作者:钟新光;刘艳璋;张泽武 刊期: 2007年第01期

  • 阿托伐他汀对老年冠心病患者血小板α颗粒膜蛋白GMP-140的影响

    目的 探讨阿托伐他汀对老年冠心病患者血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的影响.方法 80例老年冠心病患者服用阿托伐他汀8周,测定冠心病患者和正常对照者的GMP-140含量并比较冠心病患者服用阿托伐他汀前后总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的变化.结果 发现冠心病患者治疗后总胆固醇、低密度脂蛋白、GMP-140浓度均明显降低,高密度脂蛋白浓度增高.结论 阿托伐他汀治疗老年冠心病患者能有效地降低胆固醇,抑制血小板活性.

    作者:林玲;欧少雯;吕红;殷丽萍;罗荣娟 刊期: 2007年第01期

  • 深圳市肠道病毒71型血清流行病学初步调查

    目的 探讨深圳市不同人群肠道病毒71型血清流行病学规律.方法 收集1999-2003年深圳地区正常人血清584份,按年龄0~岁、1~岁、2~岁、5~岁、15~岁和>30岁分成6个组,用ELISA方法对其肠道病毒71型抗体进行检测.结果 1999-2003年深圳地区正常人血清中肠道病毒71型抗体阳性率高的年龄组为5~岁组,阳性率超过50%;15~岁和>30岁组血清阳性率分别为47.7%和39.8%;2~岁血清阳性率约为30%,其中0~岁和1~岁两个低年龄组的血清阳性率低,不超过20%.结论 5岁以下低年龄儿童是肠道病毒71型的易感人群.

    作者:周世力;李琳琳;何雅青 刊期: 2007年第01期

  • 日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选及EST序列的分析

    目的 为获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列.方法 采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Si尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500 bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定.结果 对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500 bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的三个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200).结论 SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行.

    作者:陈奕慧;李孜;李涛;李巧燕;麦璟莹 刊期: 2007年第01期

  • EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

    目的 表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用.方法 诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果 EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/ml EGF-Linker-TCS和1μg/ml EGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P<0.05).EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98 μg/ml.结论 EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值.

    作者:李咏梅;陈金龙;杨海文;罗仁 刊期: 2007年第01期

  • 广州及其周边地区福寿螺体内广州管圆线虫感染的现状调查

    目的 了解广州及其周边地区福寿螺感染广州管圆线虫的情况,为防治提供依据.方法 人工消化174只福寿螺,显微镜下检查消化液中有无广州管圆线虫幼虫.结果 广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地的福寿螺感染率分别为25.0%、23.1%、24.2%、18.5%、14.3%、13.3%,广东省东莞采集的福寿螺未发现感染广州管圆线虫.结论 广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地存在广州管圆线虫的自然疫源地.

    作者:郝丽;吴焜;程璐;王琼;陈晓光 刊期: 2007年第01期

  • 基因免疫制备抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体

    目的 通过基因免疫方法,制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并对单抗进行初步鉴定.方法 将含有N蛋白的编码基因的真核重组质粒pSecTagB/N免疫BALB/c小鼠,然后取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用原核表达的SARS病毒N蛋白筛选阳性克隆.然后通过免疫印迹法进一步证明抗体对N蛋白的特异性,用ELISA方法检测抗体对灭活SARS全病毒的免疫反应.结果 筛选得到10株抗N蛋白的单克隆抗体,ELISA和免疫印迹结果表明这些抗体特异性针对N蛋白上的抗原决定簇,且有7株抗体对SARS灭活病毒有阳性反应.结论 所得的单克隆抗体特异针对N蛋白.

    作者:盛慧英;曾其毅;田新贵;朱冰;邝璐;王长兵;周荣 刊期: 2007年第01期

  • SARS相关冠状病毒Spike蛋白定点诱变

    目的 分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变.方法 比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Spike蛋白与其受体结合进而导致SARS病毒对宿主细胞的膜融合侵染能力的7个位点,对各个位点用重叠延伸PCR法或直接PCR法进行人工定点诱变,获7个突变片段,之后将各片段亚克隆至克隆载体PSP72中.结果 经PCR和测序确认各片段点突变成功,并正确插入克隆载体PSP72中.结论 成功实施Spike蛋白的定点诱变,获得7个突变片段的重组子,这些突变体可为研究这些突变位点在Spike蛋白与受体结合中的意义,进而可为阐述Spike蛋白的结构与功能的关系、揭示Spike蛋白变异与SARS病毒侵入(染)细胞能力的相关性提供坚实的实验基础.

    作者:刘利东;涂洪斌;李冰 刊期: 2007年第01期

  • RNA干扰技术及其在病毒感染疾病治疗中的研究进展

    2002年被《科学》杂志评为重大科学突破之一的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一种特殊的转录后基因表达沉默(Posttranscripofional gene silence,PIGS)现象.近年来应用RNAi技术治疗病毒感染性疾病的实验研究取得了很大的进展,其高效、特异的抗病毒作用,设计灵活的多靶位效应使其成为一种应用前景广阔的基因治疗手段.

    作者:宋蓓;戴启宇 刊期: 2007年第01期

热带医学杂志

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会