学术投稿

完整人抗-D抗体分子表达载体的构建

付涌水;江朝富;曹开源;李树浓

关键词:抗-D抗体, 表达载体, 构建
摘要:目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础.方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和K轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定.结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功.结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体.
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    目的从美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选黑胸大蠊抗原相关基因,以期获得黑胸大蠊有潜在药用价值的蛋白质、多肽成分.方法用黑胸大蠊若虫免疫兔血清筛选美洲大蠊若虫cDNA文库,对阳性克隆进行PCR鉴定和序列测定,通过国际互联网进行核苷酸序列的同源性分析及编码蛋白质的结构分析和功能预测.结果经三轮复筛,从多个持续阳性克隆中挑选出3个进行测序、分析,其中N1克隆为新基因,Score<50,命名为Parcxpwnx01,GenBank登录号为AY838802.该基因编码231个氨基酸,初步预测该蛋白可能为一具信号转导功能的跨膜蛋白.N2克隆与美洲大蠊核蛋白体16S RNA基因高度同源,N3与黑胸大蠊线粒体DNA高度同源.结论免疫筛选获得与黑胸大蠊若虫抗原相关的基因克隆,其编码的蛋白结构和功能有待进一步研究.

    作者:吴仕筠;汪世平;徐绍锐;钟飞;余俊龙;李文凯;曾少华;肖小芹;罗臣 刊期: 2006年第02期

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    作者:符永恒;单志新;余细勇;林秋雄;邓春玉;郑猛 刊期: 2006年第02期

  • 血清BNP测定在充血性心力衰竭诊断中的应用

    目的了解B型钠尿肽(BNP)在慢性充血性心力衰竭(CHF)诊断和治疗中的初步应用.方法用ADVIA-Centaur化学发光法测定25例健康体检者和183例慢性充血性心力衰竭患者的血清BNP浓度.结果CHF组血清BNP值(405.6±126.9)明显高于对照组(28.6±9.7,P<0.001).若以100pg/ml作为阈值,则BNP测定的临床符合率为90.4%(188/208),诊断灵敏度为89.6%(164/183),诊断特异性为96.0%(24/25).NYHA Ⅰ患者(146.4±27.9)与对照组相比以及NYHA各级之间也存在显著性差异(P<0.001).结论BNP的测定对CHF诊断具有较高的灵敏度和特异性,BNP与CHF分级之间具有良好的相关性.

    作者:江洁华;廖伟娇;高启键;欧阳立杰;区碧茹 刊期: 2006年第02期

  • 泛影葡胺肾盂灌注研究乳糜尿的发病机理及治疗

    目的探讨乳糜尿的发病及泛影葡胺低压肾盂灌注治疗乳糜尿的机理.方法通过对乳糜尿患者和无乳糜尿患者行膀胱镜逆行插管灌注,观察两者肾脏淋巴管返流情况,研究乳糜尿与淋巴管的关系.结果60例(95.2%)有不同程度造影剂返流,显出肾内淋巴管的破裂口.灌注1次乳糜试验转阴48例(76.2%);2次转阴12例(19.0%);余3例经2次灌注后无效改用其它方法治疗.对照组36例未见复方泛影葡胺返流.结论乳糜尿的发病与肾内淋巴管的破裂有关,可通过逆行插管泛影葡胺低压肾盂灌注治疗.

    作者:王忠;赖玉连 刊期: 2006年第02期

  • 日本血吸虫p50亲免素基因的扩增及其免疫学特性

    目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性.方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找内含子.将其cDNA序列克隆入pET30a(+)体中,原核表达并纯化表达产物,Western-blot比较重组蛋白与Sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性,间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位.结果Sjp50IP基因DNA序列与cDNA相比,有6个内含子;重组p50IP与Sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性,该蛋白位于Sj成虫的被膜上.结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的cDNA序列和DNA序列,其DNA序列中有6个内含子;重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究.

    作者:李孜;余新炳;吴忠道;徐劲;胡旭初 刊期: 2006年第02期

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    猪蛔虫病对养猪业的危害严重.蛔虫体外培养技术即是人工模拟宿主体内环境条件,从而使蛔虫在离开宿主状态下完成生活史中的部分或全部的发育阶段.通过该技术可对其生活史、不同发育阶段的形态变化、感染机制及基因功能等方面进行深入研究,对寄生虫学发展意义重大.本文主要阐述不同学者对蛔虫生活史的看法及培养过程中培养条件变化,如pH、气相、培养基化学成分的变化,对虫体生长发育的影响.但目前对蛔虫体外培养的研究,还处于探索阶段,适培养基、气相及pH值的筛选还有待进一步的研究.

    作者:陈宁;黄翠琴;朱兴全 刊期: 2006年第02期

  • 深圳东部地区地中海贫血发病率的调查研究

    目的对深圳东部地区本地居民、外来人群进行地中海贫血的调查研究.方法采用日本Sysmex SE-9000全自动血细胞分析仪,运用红细胞脆性一管定量法和血红蛋白电泳初筛法,对可疑阳性标本进行α-地中海贫血基因分析和β-地中海贫血基因分析.结果本地居民350人,异常基因携带者36例,其中β-地中海贫血异常基因12例,α-地中海贫血异常基因23例,双重杂合者1例,发病率10.28%.外来人群349人,异常基因携带者4例,β-地中海贫血异常基因1例,α-地中海贫血异常基因3例,发病率1.14%.结论本地居民发病率比外来人群发病率高9倍.

    作者:张松;邹汉良;谭萍;李芳芳;甘志彪 刊期: 2006年第02期

  • 清远市HIV/AIDS哨点监测及吸毒人员高危行为调查分析

    目的了解清远市哨点监测人群HIV/AIDS流行现状及吸毒人员的高危行为特征,为今后预防和控制艾滋病流行提供可靠科学依据.方法从2000年开始对艾滋病高危的性病人群和吸毒人群进行监测,对吸毒人员进行流行病学调查,将哨点监测和流行病学调查资料进行统计分析.结果我市目前哨点监测人群HIV/AIDS尚处于低度流行期,但感染HIV人数逐年呈倍数增加;吸毒人员的高危行为普遍,存在引起HIV流行的高危行为.结论应及早对性病人群和吸毒人群开展健康宣传教育和减少危害的行为干预等综合性防制措施,以有效阻止高危人群向一般人群传播HIV.

    作者:李昌海;朱旭豪 刊期: 2006年第02期

  • 瑞芬太尼复合异丙酚用于经阴道穿刺取卵术

    目的评价瑞芬太尼复合异丙酚静脉麻醉用于B超引导下经阴道穿刺取卵术的安全性和有效性.方法ASA Ⅰ~Ⅱ级不孕症患者80例,随机分为瑞芬太尼复合异丙酚组(A组)和单用异丙酚组(B组),每组各40例.A组瑞芬太尼1.0μg·kg-1持续静注60 s,随后静注异丙酚2 mg·kg-1,B组静注异丙酚2 mg·kg-1诱导,术中维持每次追加异丙酚0.5~1.0 mg·kg-1.观察术中血流动力学的变化,注射痛发生情况,记录异丙酚总用量、术毕睁眼时间和不良反应.结果两组患者诱导后SBP、DBP有不同程度下降(P<0.01),组间无显著性差异.A组患者心率诱导后5min与诱导前相比明显下降(P<0.01).A组注射痛发生率、异丙酚总用药量明显少于B组(P<0.01),术毕呼之睁眼时间明显短于B组(P<0.05).结论瑞芬太尼复合异丙酚静脉麻醉用于B超引导下经阴道穿刺取卵术是安全可行的,具有镇痛强、苏醒较快、显著减少异丙酚用量等优点,值得临床推广应用.

    作者:李步龙;石磊;苏志源;詹鸿;陈浩文 刊期: 2006年第02期

  • 小儿呼吸道感染常见病毒性病因及其与患儿体液免疫功能关系调查

    目的了解小儿呼吸道感染常见病毒性病因及其与患儿体液免疫功能的关系.方法用酶联免疫吸附试验对144例呼吸道感染患儿进行6种呼吸道病毒IgM抗体检测,对各组进行统计分析.其中72例病毒IgM抗体阳性血清并作非特异性免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检测.结果6种病毒IgM抗体总的阳性率为62.5%.流感病毒A型IgM抗体阳性率为52.78%,居病毒感染种类的首位.两种或以上病毒混合感染占41.11%.各年龄组病毒感染总阳性率无显著性差别.上呼吸道感染、支气管炎和肺炎3种疾病的病毒IgM总阳性率未见有显著差别.非特异性免疫球蛋白:1~3岁的患儿的IgG低于参考范围,1~12岁的患儿IgM均高于参考范围.结论小儿呼吸道感染以呼吸道病毒为主,其中以流感病毒A型为常见,病毒混合感染亦占有相当比例:病毒检出与呼吸道疾病种类、患儿年龄无关.病毒感染所致机体免疫功能改变未明.

    作者:黄海樱;徐建英;陈波 刊期: 2006年第02期

  • HPLC法和FPIA法检测卡马西平血药体积百分比的比较研究

    目的高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免疫法(FPIA)测定血清中卡马西平体积百分比的比较研究.方法收集广州市精神病医院服用CBZ的21例癫痫患者血样.用本实验室已经建立的HPLC法和FPIA法分别检测卡马西平对照品的甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清、患者血清中卡马西平体积百分比,采用配对t检验考察两种方法分别测定卡马西平对照品的甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清、患者血清中卡马西平体积百分比有无显著性差异.结果HPLC法与FPIA法检测卡马西平对照品甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清中卡马西平体积百分比无显著性差异(t值分别为-1.009、0.767,P值分别为0.325、0.452);检测患者血清中卡马西平血药体积百分比有显著性差异(t=4.919,P<0.05),FPIA法检测患者血清中卡马西平血药体积百分比较HPLC法偏高.结论FPIA法检测患者血清中卡马西平血药体积百分比过程中,CBZ的活性代谢产物环氧化卡马西平(carbamazepine-10,11-epoxide,CBZ-E)可能对FPIA法测定CBZ有干扰,导致结果偏高.

    作者:王广发;熊莺;刘伟忠 刊期: 2006年第02期

  • 机会致病原虫动物模型在实验教学中的应用

    目的探讨机会性致病原虫在实验教学中的应用效果.方法选择卡氏肺孢子虫为机会致病原虫的代表虫种,Wistar大鼠为实验动物.实验课中给实验动物口服免疫抑制剂,学生按时观察实验动物的生理状态变化,并称体重后记录.至第3周取卡氏肺孢子虫肺组织匀浆,经右胸注入部分对照组和实验组大鼠体内.第6周解剖大鼠观察肺部病理变化,并取肺组织制片检查病原体.结果实验组大鼠口服免疫抑制剂醋酸地塞米松,5周后一般状态较差,有明显的脱毛,咳喘等现象;体重由原来的160~180 g下降至120~140 g;肺组织印片查到卡氏肺孢子虫.对照组大鼠在实验过程中体重逐渐增加,由原来的160~180 g增至190~210 g;一般情况良好,肺印片镜检未发现卡氏肺孢子虫.学生在实验报告中记录了观察和检查结果,对机会性致病原虫的致病特点有深刻认识.结论有效的实验操作是保证教学质量和培养创造性思维的关键.

    作者:张瑞琳;曹爱莲;郑小英;何蔼;潘实清;梁炽;吴忠道 刊期: 2006年第02期

  • 妇科门诊泌尿生殖系统支原体培养及药敏试验3750例结果分析

    目的了解支原体引起的泌尿生殖道感染的状况以及对药物的敏感性.方法采用支原体培养鉴定和药敏试剂盒,对3 750例泌尿生殖系感染患者进行支原体培养鉴定以及体外药物敏感性试验.结果支原体阳性的有2 868例(76.48%),其中解脲支原体阳性1 866例(49.8%).1 935例支原体对交沙霉素敏感,敏感率为99.1%;克林霉素敏感性差,其敏感率为10.8%.结论支原体为非淋菌性尿道炎的主要病原体,对多种抗生素产生耐药性,临床治疗应尽可能地进行支原体培养及药敏试验.

    作者:邹明荣;陈育贤;林常瑜 刊期: 2006年第02期

  • 广州市1992~2004年人间布鲁氏菌病监测分析

    目的掌握广州市人间布鲁氏菌病流行规律及分布状况,为今后制定防治策略提供科学依据.方法1992~1994年采用试管凝集试验(SAT),每年监测一次,以后每2~3年覆盖一次.1997年开始采用虎红凝集试验作为筛选,阳性者血清送广东省疾病预防控制中心做进一步诊断.结果1992~2004年血清学共检测19 619,阳性14人,阳性率为0.07%;感染病例主要分布于番禺区;男女均可感染;以兽医、饲养员等职业较多;感染年龄在20~50岁.结论经过多年努力,广州市布鲁氏菌病达到稳定控制标准,其综合防治策略取得显著效果,但仍要坚持长期的人畜布病监测.

    作者:冯月菊;刘小宁;潘志明;任文锋;高雨藩;郭荣同 刊期: 2006年第02期

  • 培哚普利及伊贝沙坦联合治疗对原发性高血压左室肥厚的逆转作用

    目的探讨培哚普利、伊贝沙坦、两者联合用药对原发性高血压(EH)患者左室肥厚(LVH)的干预作用.方法EH伴有LVH患者112例随机分成A组(培哚普利4 mg/d 37例)、B组(伊贝沙坦150 mg/d,38例)和C组(培哚普利4 mg/d 37例,加伊贝沙坦150 mg/d).治疗3周时若血压≥160/95 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),则培哚普利和伊贝沙坦剂量分别增加至8 mg/d和300 mg/d.总疗程共6个月,治疗前后彩色超声多普勒检测左室相关数据,计算左室重量指数(LVMI)和行24 h动态血压监测.结果①3组治疗前后比较均能显著降低LVMI(P<0.01).其中A组和B组LVMI的降低差异无显著意义(P>0.05),但C组LVMI降低较A组、B组两组更为显著,差异具有显著性意义(P<0.01).②分别比较3组治疗前24 h平均收缩压、平均舒张压差异无显著性意义(P>0.05),治疗后24 h平均收缩压、平均舒张压均分别较治疗前显著降低(P<0.01),但治疗后3组间比较均无明显差别(P>0.05).结论培哚普利、伊贝沙坦均能逆转EH患者LVH,培哚普利和伊贝沙坦联合用药疗效更为显著,这种协同作用与降压效应无关.

    作者:黄仕洲;刘明 刊期: 2006年第02期

  • 深圳市鼠疫宿主动物及媒介调查

    目的通过对我市所辖四个区开展鼠疫宿主动物及媒介调查,了解我市是否存在鼠间鼠疫疫情.方法鼠疫宿主动物调查采用笼日法;采集全部活鼠鼠体表蚤鉴定后分类;采用鼠疫间接血球凝集试验(IHA)查鼠血清F1抗体,脏器压印法分离鼠疫耶尔森氏菌.结果4区25个调查点共捕获鼠形动物472只,捕获率为8.25%,隶属于2目2科3属4种,褐家鼠占87.50%,为本市优势鼠种,黄胸鼠占8.03%,臭鼩鼱占4.42%,板齿鼠占0.21%.雌雄性别比为1:0.82.繁殖指数褐家鼠为0.41,黄胸鼠为0.55,臭鼩鼱为0.14,以黄胸鼠高,预示将来该鼠种的种群数量将会增长较快.472只鼠形动物中有129只鼠形动物寄生565匹蚤,经鉴定均为印鼠客蚤,染蚤率为27.33%,总蚤指数为1.20.黄胸鼠染蚤率、蚤指数高,分别为63.16%、3.80;褐家鼠为25.70%、1.01;臭鼩鼱为15.0%、0.20.5种不同生境的捕鼠率为2.61%~15.42%,鼠体印鼠客蚤指数为0.68~2.59.25个调查点有10个点鼠带印鼠客蚤指数大于1.间接血凝法检测鼠疫F1抗体458份,未检出阳性血清,鼠脏器压印培养407份,未分离出鼠疫杆菌.结论目前我市尚未发现鼠间鼠疫疫情,但鼠疫宿主动物和媒介生物密度较高,存在鼠间鼠疫流行的隐患.

    作者:张小岚;马汉武;谢旭;王昕;梁焯南;王冰 刊期: 2006年第02期

  • 云南大理大绒鼠体表寄生恙螨群落结构的研究

    目的了解大绒鼠体表恙螨寄生状况、恙螨群落结构特点及优势恙螨的空间分布格局.方法选择云南大理洱海周边地带为调查点,用鼠笼(夹)加食饵诱捕大绒鼠.选择大绒鼠双侧耳窝作为恙螨固定采集部位,用手术刀片刮取耳窝全部恙螨,70%乙醇固定保存,Hoyer's液封片,显微镜下鉴定螨种.恙螨群落结构用丰富度(S)、Shannon-Wiener多样性指数(H')、均匀度(J')及优势度指数(C')描述.优势恙螨种类的空间分布格局用分布型指数中的扩散系数(C)、Cassie指数(CA)、丛生指数(Ⅰ)及聚快指数(m*/m)测定.结果在所捕获的917只大绒鼠体表共采获恙螨29 702只,分类鉴定为3亚科8属51种,其中有6种占优势(81.22%),其染螨率和螨指数较高.群落结构统计显示,大绒鼠体表恙螨群落物种丰富度、多样性指数及均匀度都比较高,但优势度指数比较低.6种主要恙螨在大绒鼠体表的分布格局均被判定为聚集型分布.结论云南大理洱海周边地带大绒鼠体表恙螨寄生比较普遍,且寄生程度也比较严重,其体表恙螨群落种类丰富,群落结构复杂.主要恙螨在大绒鼠体表的寄生呈聚集性(群居性).

    作者:牛爱琴;郭宪国;门兴元;董文鸽;包怀恩 刊期: 2006年第02期

  • 恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫效应检测

    目的探讨恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫活性.方法利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达AMA-1(Ⅲ),表达产物用纯化后免疫新西兰兔,检测其血清中IgG滴度的变化,观察重组AMA-1(Ⅲ)免疫效应.结果重组AMA-1(Ⅲ)免疫后,ELISA检测新西兰兔血清中IgG滴度发现在3次免疫后OD490值明显高于佐剂免疫对照组(P<0.01).结论AMA-1(Ⅲ)重组蛋白具有较好的免疫原性.

    作者:张忠广;赵恒梅;宫玉香;曾宪忠;常志尚 刊期: 2006年第02期

  • 纪念血吸虫病在中国被发现100周年--解放前中国血吸虫病研究简况

    1905年Logan[1]从1例湖南常德一痢疾患者的粪便里检出了血吸虫虫卵,确诊了我国第1例血吸虫病人.1924年,Faust等[2]在浙江省苏州、嘉兴进行日本血吸虫病人群感染率调查,并出版了专著.

    作者:吴忠道;吕志跃;张双民;王丽;胡斐;Florian Rubelt 刊期: 2006年第02期

  • 转基因疟原虫的研究进展

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    作者:郝文波;李明 刊期: 2006年第02期

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