张光玉；王云甫；黄朝芬；钟萍；王绍基；杨树国
目的分别采用分离外周血单个核细胞(PBMC)法和全血直接染色法的组织相容性抗原-肽五聚体(MHC pentamers)流式细胞技术定量分析慢性乙型肝炎(下称慢性乙肝)患者体内乙型肝炎病毒(HBV)特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),并对两种方法进行比较.方法从慢性乙肝患者外周血中分离PBMC,用HLA-A2*HBcAg抗原表位肽-MHC Pentamers及CD8单克隆抗体染色后,用流式细胞仪检测HBV特异性的CTL细胞,部分患者同时采用全血直接染色方法进行HBV特异性的CTL细胞的检测.结果32例HLA-A2阳性的慢性乙肝患者外周血均可检测到HBV特异性的CTL细胞,五聚体阳性细胞占CD8阳性细胞的比例平均为(1.34±1.06)%,两种染色方法检测的特异性的CTL细胞无统计学差异.结论全血直接染色结合五聚体流式细胞技术检测抗原特异性CTL是一种简便、敏感和可行的抗原表位特异性CTL检测方法.
作者：邓洪；韩晓燕；陈幼明；张富程；高志良；姚集鲁 刊期： 2006年第05期
目的检测ABCA1基因第7号外显子中R219K SNP的发生率,并探讨不同基因型与炎性因子IL-1 β、ICAM-1水平的关系.方法冠心病患者112例及正常人108例,分别进行PCR反应及限制性酶切,确定不同的基因型,并检测每例血浆中炎性因子IL-1β、ICAM-1的水平.结果RR、RK、KK基因型之间进行多重比较.冠心病组IL-1β水平差异显著(P＜0.01),对照组中IL-1β水平无明显差异(P＞0.05);冠心病组及对照组ICAM-1水平差异显著(P＜0.01).以RR型高,KK型低.结论ABCA1基因第7号外显子中R219K位点K等位基因能显著降低ICAM-1的水平,能显著降低冠心病人的IL-1β水平,但对正常人IL-1β无明显影响.
作者：查政；吴芬芳；王琦光；郭志刚 刊期： 2006年第05期
目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原(STAg)增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果.方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组(各15只):20μgSTAg,20μgSTAg+40μg蜂胶,20μg STAg+1 000U IFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1 000U IFN-γ,均溶于总体积为20μl的PBS中,滴鼻免疫(10 μl/鼻孔),免疫2次,间隔14 d.末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击.攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量.结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显著高于STAg组,黏膜sIgA含量显著高于STAg组;蜂胶+IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显著高于蜂胶组(P＜0.05).结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ+蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用.
作者：刘成芳；殷国荣；刘娟娟；管志玉；石蓉；张宇斌 刊期： 2006年第05期
目的寻找新的支持HCV亚基因复制子复制的支持细胞,为研究HCV复制机制、HCV与宿主间的关系,及建立HCV缺陷病毒培养体系提供材料储备.方法质粒pNNeo3-5B含HCV-N亚基因复制子cDNA,该复制子RNA能在Huh7细胞中有效复制.缺失其中的BsaB Ⅰ-Hpa Ⅰ片段(含NS5B的GDD基序),生成缺陷型复制子质粒pNNeo3-5B(△).将以上两个质粒线性化后体外转录出复制子RNA:rNNeo3-5B和rNNeo3-5B(△).将rNNeo3-5B电转染Huh7、SMMC7721、HepG2、BEL7402、Lo2、CBRH7919、BHIK21、Vero E6、293和293T等细胞,以G418筛选3周,观察克隆形成情况,并检测克隆中HCV特异性RNA和蛋白.结果在CBRH7919和BHK21获得G418抗性克隆,转染rNNeo3-5B(△)的细胞和未转染复制子的细胞则全部死亡.RT-PCR检测证实各克隆都含有HCV 5'NTR和新霉素磷酸转移酶基因,间接免疫荧光和Western blot检测证实有大量表达的HCV NS3和NS5A蛋白,未转染复制子的细胞全为阴性.结论本研究证实CBRH7919和BHK21能支持HCV复制子的自主复制,可作为建立HCV病毒培养体系的备选材料.
作者：邬刚；吴英松；董文其；陈白虹；李明 刊期： 2006年第05期
目的探讨HBsAg(-)/HBeAg(+)/HBcAb(+)/preS1Ag(+)少见血清学模式形成的原因,了解该少见模式乙肝病毒携带者体内血清学标志物及其HBV DNA变化情况.方法采用ELISA、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、巢式PCR和实时荧光定量PCR,对该少见模式乙肝病毒携带者HBV血清学标志物和HBV DNA进行检测,每隔3个月复查一次,持续15个月.结果在研究的时间内,国产ELISA试剂盒检测结果均为HBsAg(-)/HBeAg(+)/HBcAb(+)/preS1Ag(+);电化学发光免疫分析法检测HBsAg均为阳性,并随时间延续HBsAg水平逐渐下降;巢式PCR与实时荧光定量PCR检测HBV DNA为阳性,病毒载量上下波动.结论该乙肝病毒携带者血清学少见模式HBsAg为假阴性,动态观察HBsAg与HBV DNA水平,了解HBV复制情况,可为临床诊治提供可靠的依据.
作者：朱平安；祝玲玲；申群喜；谭德明；朱红秋；谭萍；陈素文 刊期： 2006年第05期
目的研究猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法.方法采用7.5%次氯酸钠氧化感染期蛔虫卵,37℃过夜后,用灭菌生理盐水离心数次,充分洗去次氯酸钠,将沉淀用玻璃珠在振荡器上振荡至全部卵壳破裂,幼虫孵出.用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分离,后收集底层的脱鞘第三期(L3)幼虫.在贝尔曼原理的基础上,在漏斗中加入低浓度(0.4%)琼脂凝胶,分别将绞碎的含幼虫的猪肝、肺和小肠内容物及其肠粘膜平均分装在数个漏斗中,放入40℃温箱中孵育3 h,待大部分幼虫游离到管底,后用400目分样筛过滤分离肝中的L3,用300目分样筛过滤分离肺中的L3,用200目分样筛过滤分离肠内容物及其粘膜上的第四期幼虫(L4).结果次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法能够使感染期蛔虫卵几乎完全脱壳,配合淋巴细胞分离液的密度梯度离心法能收集到纯度较高且活力较强的体外脱鞘幼虫.与传统贝尔曼氏分离法相比,采用低浓度琼脂糖凝胶液能获得杂质少、高纯度的猪内脏中的不同发育期幼虫.结论次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法是体外脱鞘分离感染期幼虫的一种较为理想的方法,通过在漏斗内加低浓度的琼脂凝胶的方法是从猪内脏中获得高纯度的不同发育期幼虫的一种有效的方法.本方法不仅适用于猪蛔虫,而且对其它动物和人的寄生线虫幼虫的收集也有参考价值.
作者：黄翠琴；陈宁；邹丰才；林瑞庆；朱兴全 刊期： 2006年第05期
目的了解麻疹的血清流行病学特征,探讨麻疹与风疹之间的血清学鉴别诊断.方法采用酶联免疫吸附法对539例麻疹疑似病例的血清标本进行麻疹IgM和风疹IgM抗体检测.结果539例麻疹疑似病例中7岁前发病占61.0%,而20岁以后发病仍占25.0%.麻疹IgM阳性率为82.6%(445/539),风疹IgM抗体阳性率为1.1%(6/539),以麻疹为主.各年龄组麻疹IgM抗体检测阳性率经x2检验(x2=2.895,P=0.576),无统计学意义.在出疹后第2天前(0～1 d)采集的血清标本其麻疹IgM抗体阳性检出率为72.9%,从出疹后第3天至14天(2～14 d)采集的血清标本其麻疹IgM抗体检测阳性率为88.4%,两者之间经x2检验有统计学意义(x2=21.08,P＜0.001).结论本地发热出疹性疾病以麻疹为主;发病年龄分布主要在7岁前,而20岁以后仍然占相当大比例,值得注意;采血时间与检出率密切相关;仍然有16.3%的疑似病例未经过实验室确诊,应提高麻疹实验室诊断的及时性、准确性和敏感性,建议采集双份血(即采集急性发病期及恢复期血清),对麻疹IgM和风疹IgM抗体检测阴性结果的病例,再进行双份血IgG测定,以提高麻疹疑似病例确诊性.
作者：罗小铭；高赛珍；阮坛凤；叶宝青；吕海英 刊期： 2006年第05期
目的在CHO细胞中表达小鼠TLR2(mTLR2).方法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,并将其转染到CHO细胞,用G418筛选阳性克隆.采用PCR方法,检测外源基因的整合.采用Western blot、免疫组织化学对转染细胞的mTLR2表达进行鉴定.结果成功构建了pcDNA-mTLR2重组质粒.将其转染到CHO细胞,经G418筛选获得阳性细胞克隆.阳性细胞克隆经PCR检测表明TLR2基因得到稳定整合.Western blot分析显示在分子量约95 000处可见清晰的阳性反应条带.免疫组织化学检测显示转染细胞表达mTLR2.结论获得了表达mTLR2的细胞株,为进一步进行相关研究奠定了基础.
作者：赵文忠；罗招凡；刘艳君；杨翠兰；朱平；江丽芳 刊期： 2006年第05期
目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因.方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primer express 2.0引物设计软件设计引物和Taq Man-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法.结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml～3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98.结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法.
作者：邹亚伟；胡斌；何蕴韶；陈福雄；封志纯 刊期： 2006年第05期
目的调查湛江地区家栖鼠形动物和蚤类的生态及种群的构成比.方法捕鼠采用笼夹法,晚放晨收,将捕获鼠类,分类鉴定,称重,解剖观察胎仔数及妊娠斑.室内地面游离蚤采用16开粘蚤纸,室内四个角和中央各放1张,每月布150张,晚放晨收,用生物显微镜低倍鉴别蚤种.结果在捕获鼠中,黄胸鼠占28.41%,褐家鼠占9.17%,小家鼠6.23%,臭鼩鼱占55.64%,地面游离蚤指数0.24.结论在城镇鼠类以褐家鼠为主,农村以黄胸鼠及臭鼩鼱为主,地面游离蚤以1～4月份高,以致痒蚤为主.
作者：张曼碧；张曼青；刘小华；黄济英；张涛 刊期： 2006年第05期
目的检测胡椒碱对草地贪夜蛾SF-21细胞的毒性作用和生长抑制作用,以便进一步研究其对昆虫细胞离子通道的影响.方法胡椒碱处理SF-21细胞后,用MTT微量酶反应比色法、改良微波Giemsa染色法检测细胞死亡率及形态学改变,用冲击式测试法检测细胞生长率及受损细胞的恢复.结果胡椒碱处理24 h后,对SF-21细胞的半数毒性浓度(IC50)为95.37μg/ml,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强.胡椒碱浓度在10 μg/ml以上时可诱发SF-21细胞形态学改变,表现为细胞呈多形性、细胞间有间隙、胞质内充满颗粒,以后随药物浓度的升高,胞质出现空泡、染色质凝成粗大颗粒或无结构大块、大片细胞脱落、崩解、死亡.低浓度胡椒碱(5μg/ml)对SF-21细胞增殖没有影响,较高浓度胡椒碱(10、20、40 μg/ml)则对SF-21细胞增殖有明显的抑制作用,抑制作用强度随药物浓度的增加而增加,去除药物作用后,受抑制的细胞又重新恢复生长、分裂.结论胡椒碱对昆虫细胞有较强的毒性作用和生长抑制作用,可作为新型杀虫剂的功能物质.
作者：王佳；诸葛洪祥；朱江；周洪福；陈明中 刊期： 2006年第05期
目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体(TSP-2)对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响.方法用RT-PCR、免疫组化检测了小鼠肥大细胞瘤P815细胞在mRNA水平的表达及膜表面TLR2与抗体TSP-2的结合;利用激光共聚焦显微镜观察小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响.结果P815细胞在mRNA水平以及膜表面均有TLR2表达,抗体TSP-2能有效抑制C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒反应所致的形态学改变与钙流出.结论抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2可与P815细胞膜表面TLR2结合,并能抑制C48/80诱导的P815肥大瘤细胞脱颗粒.
作者：杨翠兰；郑健；罗冰；刘艳君；富宁 刊期： 2006年第05期
目的为了解佛山市水痘疫苗免疫效力(即疫苗保护效果),进而探讨水痘爆发的原因.方法选择2004年以来4起有代表性的水痘爆发,进行1:2配比的病例对照研究,共调查370例,并计算配比和不配比的水痘疫苗效力.结果病例组的水痘疫苗接种率显著低于对照组.配比后得出的水痘疫苗效力为84.4%.结论水痘疫苗效力＜90%,仍偏低.水痘疫苗效力不够高和免疫接种率偏低是水痘爆发的主要原因.
作者：梁飞琼；何炳欣；杨国；郭志强 刊期： 2006年第05期
目的建立新型、高产量的慢病毒衍生载体的生产体系.方法构建主框架质粒pVECRNA、包装质粒pGAGPOL及包膜质粒pVSVG.通过脂质体将这三个质粒共转染至BHK21细胞,再用含有T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF-3感染细胞,培养4 d后,收集培养上清,0.22 μm滤膜过滤.结果将培养上清进行RT-PCR反应,结果能扩增出96 bp长度的目的条带,将培养上清感染BHK21细胞,检测到BHK21细胞中GFP的表达,测定病毒载体滴度为(1.45±0.30)×107tu/ml.结论已初步生产出慢病毒载体,为下一步生产系统建立,系统产量优化奠定良好基础.
作者：马强；李明；吴英松 刊期： 2006年第05期
目的探讨急性危重症患儿死亡的危险因素及临床对策.方法对2002年1月～2005年6月儿童监护病房(PICU)收治的282例患儿在入院第1、3、7天作小儿危重病例评分(PCIS)和全身炎症综合征(SIRS)、多器官功能障碍(MODS)指标的检查,并记录患儿的临床资料.结果SIRS组病死率明显高于非SIRS组(P＜0.05);死亡组SIRS病例明显多于存活组,且其PCIS明显降低;PCIS 70分以下者病死率高于71～90分者(P＜0.01),PCIS越低,病情越重,SIRS病例越多.PCIS与SIRS呈负相关.发生3个或3个以上器官功能障碍时病死率明显高于2个(x2=20.2,P＜0.01),随着功能障碍器官数目的增加,死亡率亦增加.结论降低急危重症患儿的病死率关键是积极控制炎症反应,加强护理及临床监护,阻止SIRS向MODS的发展,保护重要器官的功能.
作者：张坤尧；卢远达；余蓉 刊期： 2006年第05期
目的探讨神经内镜技术和手术显微镜结合单鼻孔经蝶微侵袭垂体瘤切除的效果.方法从2003年7月～2005年8月在神经内镜和手术显微镜下单鼻孔经鼻蝶入路切除23例垂体瘤.结果在神经内镜和手术显微镜下全切肿瘤19例,近全切4例,术后21例内分泌化验恢复正常,10例视力好转,4例病人出现暂时性尿崩,2例病人出现脑脊液漏,均于1～2周后恢复.23例病人随访3～16个月,未见复发,无传统唇下入路常见的唇部麻木、鼻中隔穿孔等并发症.结论神经内镜辅助下经鼻蝶入路切除垂体瘤能达到微创的目的,能更好显示鞍上和鞍旁的肿瘤,神经内镜能清晰显示手术显微镜不能看清的部位,而手术显微镜能提供三维视野,在经鼻入路过程及切除鞍区肿瘤的主体等方面具有其优势,二者结合能更安全更完全切除肿瘤.
作者：杨炳湖；罗洪海；荆国杰；黄月红 刊期： 2006年第05期
目的通过调查广州市水源水中存在的污染物质的种类,分析各类污染物质的可能危害,并提出解决饮用水源水的方向.方法所需资料来自于1999～2004年广州市排入Z江的主要河涌水污染指标实验室监测数据以及各水厂水源水的实验室监测数据,按照<生活饮用水标准检验法>GB5750-1985、GB/T5009-2003、卫生部<生活饮用水检验规范>2001监测各项理化指标.结果广州地区水源水中有机污染物占所有污染物的70%以上,无机污染物中金属锰和亚硝酸盐氮是常见的超标项目;有机污染物主要来源于城市生活污水和工业废水,无机污染物主要是工业废水以及河底沉积重金属的溶解,致病性微生物主要来源于粪便和医院污水.结论有机污染物是广州市水源水污染的主要因素,污染主要来源是城市污水和生活垃圾,水源水的处理不能完全去除有害因素,需要寻找新的水源或采用新技术改善水质.
作者：孙兰；杨轶戬；廖育煌；钟嶷；黎淑端；黄汝明 刊期： 2006年第05期
目的建立猕猴局灶性血管缺血性脑损伤模型,评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤的疗效及临床治疗可行性.方法用导管介入法从股动脉将栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发局灶性缺血性脑损伤,经CT扫描确认脑损伤及部位和行为学观察符合脑损伤要求.分离扩增自体骨髓间充质干细胞至第4代,于脑血管栓塞后30 d,在CT引导下将4×108细胞/kg骨髓间充质干细胞移植到脑损伤部位,每月1次连续观察脑损伤面积及行为学变化.结果脑血管栓塞前造影明显可见左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,随后连续CT扫描见额颞叶区明显梗死灶,行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍.间充质干细胞移植后3个月可见脑损伤面积明显缩小,脑神经功能明显改善,半年后脑损伤面积进一步缩小,脑神经功能基本恢复正常.结论自体骨髓间充质干细胞移植有助于缺血性脑损伤结构修复和功能恢复.
作者：潘兴华；贺斌；庞荣清；刘力；和占龙；唐隆旺；李进领；张步振；陈系古 刊期： 2006年第05期
目的了解肺结核患者MTB-L型的感染情况,并探讨其培养的临床意义.方法选取2004年1月～2004年12月确诊为肺结核患者的痰标本372例进行MTB-L型培养.结果MTB-L型总培养阳性率为16.7%.菌阳肺结核组MTB-L型培养阳性率为21.8%,菌阴组为9.6%;活动性肺结核组MTB-L型培养阳性率为18.6%,非活动性组为2.5%,两者差异极显著(P＜0.01);服药时间＞6个月组MTB-L型培养阳性率为33.8%,服药时间＜1个月组MTB-L型培养阳性率为10.9%,两者有极显著差异(P＜0.01).初治肺结核组MTB-L型培养阳性率为13.9%,复治组MTB-L型培养阳性率为35.4%,两者差异极显著(P＜0.01).结论肺结核患者MTB-L型感染占一定比例,服药时间＞6个月和复治的患者MTB-L型感染率较高,若在痰结核分枝杆菌培养的同时进行MTB-L型培养,不仅可使肺结核患者细菌学的诊断率提高一定比例,而且对肺结核患者的治疗以及判断预后也具有重要意义.
作者：黄燊德 刊期： 2006年第05期
目的通过分析先天性梅毒患儿肺部、四肢骨骼X线征象的改变及颅脑超声的表现,总结出早期诊断的方法.方法对84例确诊的先天性梅毒患儿进行胸部和四肢骨骼的X线检查及颅脑超声检查,并进行分析、总结.结果84例患儿中胸片异常的有54例,占64.2%,以肺炎表现为主;四肢骨骼改变的有30例,占35.7%,病变以长骨干骺端为主;颅脑超声异常27例,占32.1%,以室管膜下出血及囊性改变为主.结论简便的胸及骨骼X线摄片与颅脑超声检查有助于先天性梅毒的早期诊断,可为治疗和预后提供重要参考.
作者：郭小芳；张丽范；张霞；王坤林 刊期： 2006年第05期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
