学术投稿

霍乱弧菌毒力强弱及菌株同源性的快速检测

易鸿;王鸣;刘于飞;莫自耀;李孝权;范健文

关键词:霍乱弧菌, 检测, 多重 PCR, 随机扩增多态性 DNA
摘要:目的建立一套快速检测霍乱弧菌毒力强弱及不同菌株同源性的实验方法.方法设计 4对引物进行多重 PCR检测菌株毒力基因特征;采用随机扩增多态性 DNA(RAPD)结合 SPSS软件分析不同菌株的同源性.结果通过多重 PCR同时检测菌株 CtxA、 TcpA、 Ace、 Zot 4种主要的毒力基因,并快速判定其毒力强弱; RAPD产生的指纹图谱条带清晰、数目较多、片段大小分布均匀,结合 SPSS软件分析可判断菌株间的同源性关系.结论多重 PCR和 RAPD结合 SPSS软件分析可在 4h内完成对霍乱弧菌毒力强弱及不同菌株间同源性的检测,有助于在疫情处理中判断病菌来源和及时采取适当的处理措施.
热带医学杂志相关文献
  • 鸭乙型肝炎病毒感染模型及其方法学研究进展

    回顾和展望鸭乙型肝炎病毒感染模型的研究进展.阐述鸭乙型肝炎病毒自然感染地区差异与鸭种属间差异,鸭乙型肝炎病毒的垂直传播,鸭乙型肝炎病毒实验感染中存在的问题,以及 DHBV传染性质粒等方面.

    作者:谈博;张奉学;操红缨;郭兴伯 刊期: 2005年第01期

  • 云南省人体旋毛虫感染血清流行病学调查

    目的通过调查了解旋毛虫病在云南省流行程度和分布情况,为制定防治措施和策略提供科学依据.方法根据以往人体感染和动物感染程度确定轻、中、重流行区,采用 ELISA检测法进行检测.结果共调查 10个县, 20个点的 10 109人份血清,血清阳性人数 852,阳性率 8.43%,以陇川县血清阳性率高 25.87%,文山县血清阳性率低 1.00%; 30~ 40岁中青年组阳性率较高 10.64%,血清学阳性率年龄大 79岁,小 2岁;血清学阳性与地区、年龄、居住地、生吃或半生吃猪肉和用不洗砧板切熟食等生活、行为习惯的关系具有统计学差异 (χ 2=767.64、χ 2=65.66、χ 2=9.435、χ 2=22.19, P< 0.005),男女性别与血清学阳性无统计学差异 (χ 2=0.851, P >0.005). 结论旋毛虫病为我省重要公共卫生问题,各级卫生部门加强卫生宣教,健全农村食品卫生监督制度.

    作者:汪丽波;杜尊伟;王学忠;董莹;姜进勇;李菊升;刘慧;李春富 刊期: 2005年第01期

  • 小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染

    目的研究分离自弓形虫RH株速殖子经口感染小鼠后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞 (intraepithelial lymphocyte, IEL)过继转移抗弓形虫感染作用,探讨其作用机制.方法 BALB/c鼠经口感染弓形虫速殖子 5× 104个 /只或未感染,作为供体提供 IEL.同品系受体鼠分为实验组 (IEL7组、 IEL9组、 IEL11组、 IEL13组和 IEL15组 )和对照组 (IEL0组 ),每组 6只小鼠.受体鼠经尾静脉分别接受分离自供体鼠经速殖子感染后第 7、 9、 11、 13、 15天的致敏 IEL或未致敏的 IEL 3× 105 /0.2 ml只.各组小鼠过继转移后第 4天,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第 13天分离纯化脑、肺、脾组织弓形虫速殖子并计数,测定肠液 IgA含量.结果致敏 IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内弓形虫速殖子数显著减少,接受感染后第 13天 IEL的小鼠组织内速殖子数减少为显著 (P< 0.01)脑、肺和脾组织内速殖子数比对照组分别减少 81.13%, 58.43%和 70.97%.致敏 IEL过继转移使肠道 IgA水平升高, IEL11组和 IEL13组显著高于 IEL0组 (P< 0.01).结论致敏 IEL过继转移能上调肠道黏膜的免疫应答,导致黏膜特异性 IgA分泌增加,诱导黏膜抗体的保护性免疫应答. IEL的这种保护作用具有致敏的时间依赖性,感染后第 13天分离的致敏 IEL对弓形虫感染具有大的保护作用.

    作者:刘红丽;殷国荣;沈嬿琼;元海军 刊期: 2005年第01期

  • 纸片法检测大肠菌群测定结果的实验研究

    目的探讨纸片法检测大肠菌群的结果判断标准.方法对餐 (饮 )具消毒效果监测的大肠菌群检测纸片状况进行详细记录,将纸片以无菌状态转入单料乳糖胆盐发酵管中,用发酵法来证实其大肠菌群的阴阳性.结果按 GB14934-94判断纸片法大肠菌群的阴阳性,其灵敏度为 73.6%,特异度为 98.8%;若按作者提出的标准进行判断,其灵敏度为 98.2%,特异度为 89.8%.结论二者比较灵敏度有显著性差异.消毒剂的残留可能是导致结果判断出偏差的主要原因.建议完善纸片法测大肠菌群的判断标准,以便更准确地反映大肠菌群的真实情况.

    作者:卢崇南 刊期: 2005年第01期

  • 癌痛对晚期癌症患者生活质量的影响

    目的了解癌痛对晚期癌症患者生存质量的不良影响,探讨三阶梯药物疗法是否可提高癌痛患者的生存质量.方法采用数字疼痛分级法 (NRS),对 200例晚期癌症患者的癌痛程度进行评估;采用癌症病人的生活质量 (QOL)评分标准对患者生活质量进行评分调查;对癌痛患者分别给予三阶梯镇痛药物,观察镇痛疗法对改善生存质量的作用.结果 200例晚期癌症患者,疼痛的发生率为 76.5%,其中轻度疼痛占 20.0%,中度疼痛占 23.0%,重度疼痛占 33.5%,疼痛程度越重,对患者的生存质量的影响越大,而经镇痛治疗后,随着疼痛程度的减轻,生活质量得以提高.结论疼痛是影响生活质量的一个重要因素,有效的镇痛治疗在改善癌痛患者的生存质量方面能发挥重要的作用.

    作者:彭金莲;王增英;韦若梨;陈亦欣;卢惠珍 刊期: 2005年第01期

  • SARS临床流行病学分析

    目的探讨 SARS的临床流行病学特点. 方法回顾性收集并登记 122例 SARS患者的流行病学和临床资料及其动态变化,建立数据库后进行分析.结果本组病例以青壮年为主, 42例( 34.4%)有明确的 SARS患者接触史,其中以医院和家庭接触为主.入院时的主要症状为发热 (116例, 95.1% )、寒颤 (37例, 30.3% )、咳嗽 (90例, 73.8% )、咳痰 (78例, 63.9% )、全身酸痛 (33例, 27% )和呼吸困难 (14例, 11.5% ).入院时外周血白细胞计数正常者有 81例 (66.4% ),低于正常上限者 35例 (28.7% ),高于正常上限者 6例,其中 61例 (50% )的淋巴细胞计数下降,在住院过程中,共有 34例 (27.9% )的白细胞总数高于正常上限 ( >10 000/mm3);入院时 91例 (74.6% )胸片病灶为云雾状, 76例 (62.3% )有致密阴影, 7 例有肺实变,所有病例无胸腔积液、气胸或纵隔气肿, 82.8%的病例于入院后平均 (9.17± 5.05)d病灶开始吸收; 47例应用过糖皮质激素; 34人接受无创通气, 8例接受有创通气; 32例次出现肝、肾、心功能损害、消化道出血和继发细菌和真菌感染等并发症, 6例死亡. 结论 SARS主要表现为发热、寒颤、咳嗽、咳痰、全身酸痛和呼吸困难,易出现低氧血症和多脏器功能损害,影像学无明显特异性.

    作者:罗一鲁 刊期: 2005年第01期

  • 白蚊伊蚊经卵传递登革2型病毒的实验研究

    目的证明白蚊伊蚊亲代能够经卵传递登革 2型病毒给子代,并且在传递过程中病毒毒力呈逐渐增强趋 势.方法采用套式 PCR分批检测感染雌蚊的子一代至子四代卵内登革病毒结合 C6/36细胞培养分离病毒及 TCID50法滴定病毒滴度.结果白蚊伊蚊能经卵传递 DEN-2, 至少可传四代以上;且在传代中病毒毒力有增强的趋势.结论实验证明白蚊伊蚊对登革 2型病毒有较大的媒介效能,且在维持登革病毒的自然循环中起重要作用.

    作者:宋秀玲;黄炯烈;郑小英;吴瑜;王玲;潘实清 刊期: 2005年第01期

  • 四会市1996~2003年血吸虫病监测情况分析

    目的了解四会市消灭血吸虫病后的疫情动态.方法建立血吸虫病监测系统,在原疫区对钉螺和传染源进行同步监测.结果 1996~ 2003年共查螺 182.7万 m2,均未发现活的钉螺.复查历史病人 948人次;检查外来人口 112人,阳性者 4人 (3.57 % );调查低年龄组的中小学生 1 617人,皮试阳性者 106人 (6.55% ).阳性者经粪检复查均没有发现血吸虫病人.解剖野鼠 339只,检查耕牛 1 339头次, 没有发现血吸虫虫卵阳性的野鼠和牛只.结论四会市血吸虫病防治成果巩固,但仍必须加强监测,特别是输入性传染源及钉螺的监测.

    作者:赖军伟;李俊强 刊期: 2005年第01期

  • 日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

    目的分离纯化日本血吸虫成虫 (AWA)和未成熟虫卵 (SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病 免疫诊断、预防提供新的抗原分子.方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原, SDS- PAGE及银染色进行分析鉴定.结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原 AWA18 000u, SIEA42 000u, SIEA130 000u.结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法.

    作者:彭先楚;汪世平;周松华;姜孝新;吕志跃;徐绍锐;肖小芹;曾少华;余俊龙;戴橄;李文凯;吴仕筠 刊期: 2005年第01期

  • 日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定

    目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫 (Schistosoma japonicum, Sj)Sj16基因重组杆状 病毒.方法从日本血吸虫尾蚴提取总 RNA,通过 RT- PCR扩增出 Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体 pET30a(+ )中,通过 PCR将 Sj16基因连同 pET30a(+ )多克隆位点下游的 6× His· Tag一起扩增出来,插入 donor载体 pFastBacHTa中,构建重组杆状病毒 donor载体 pFastBacHTa- Sj16- His,转化大肠杆菌 DH10Bac- GFP进行转座,提取重组 Bacmid,用 Lipofectin法转染昆虫细胞 Sf9使其包装成有感染性的重组杆状病毒.结果构建了含日本血吸虫 Sj16基因的重组 Bacmid- GFP- Sj16- His,转染 Sf9细胞后,获得了有感染力的重组杆状病毒. 结论成功构建了日本血吸虫 Sj16基因重组杆状病毒,为下一步重组 Sj16蛋白表达和 Sj16基因功能研究打下了基础.

    作者:胡少敏;王海;阮志燕;余新炳;吴忠道 刊期: 2005年第01期

  • 广州化妆品生产车间空气尘埃粒子的特征

    目的探索化妆品生产车间空气尘埃粒子在不同时间、不同季节和不同生产车间的分布情况,对化妆品生产企业的 GMP建立提供科学依据.方法选择广州市采用空气过滤净化系统的化妆品厂 11家 (以下简称净化厂 )和非采用空气过滤净化系统的化妆品厂 13家 (以下简称非净化厂 ),分别在不同生产时间、不同季节和不同生产车间的情况下,分析车间空气中 0.3、 0.5、 1、 2、 3、 5μ m尘埃粒子数的分布情况,评价其污染水平.结果净化厂和非净化厂在生产中均产生不同程度的尘埃粒子污染 ;净化厂空气中尘埃粒子在季节上基本无统计学意义,非净化厂季节上主要以中、大颗粒粒径尘埃粒子 (1、 2、 3、 5μ m)有统计学意义,夏秋季高于冬春季;生产车间中净化厂以配制间、配料间和分装间产生的尘埃粒子浓度相对较高,非净化厂以配制、卫生通道、更衣室产生的尘埃粒子浓度相对较高.结论加强配制间、分装间和卫生通道的卫生管理,注意产品制作过程的密封工作,并改善制作和灌装设备;加强非净化厂生产过程的通风排气;制订洁净度标准,应不需考虑季节之分.

    作者:钟嶷;马林;郭重山;李小晖 刊期: 2005年第01期

  • 168例术中冷冻切片与印片病理诊断分析

    目的探讨术中冷冻切片结合印片病理诊断.方法对 168例送检组织在冷冻切片同时,在同一部位印片, HE染色,光镜下观察,并与石蜡切片对照.结果 168例良性冷冻切片 93例,印片 95例;恶性冷冻切片 67例,印片 62例.冷冻切片诊断准确率 95.24%,印片诊断准确率 93.45%.可疑冷冻切片、印片均为 5例,占 2.98%;良恶难定冷冻切片 3例,占 1.78%,印片 6例,占 3.57%.误诊 2例都为印片良性肿瘤,占 1.19%.结论在冷冻切片同时采用印片方法进行病理诊断,有提高对病理诊断的准确性.

    作者:雷伟华;刘自光;刘丽萍 刊期: 2005年第01期

  • 探索现代本科教学模式在寄生虫学教学中的应用

    目的探索现代本科教学模式,培养医学本科生创新精神和科研能力.方法在广州医学院 2001级临床、检验、影像医学专业本科寄生虫学教学中进行教学改革:合理优化教师队伍、重新设置教学内容、实行启发式教学方法.结果现代本科教学模式受到学生普遍欢迎,此种模式具有获得知识量大,激发学生学习的主动性和积极性,促进专业技能的掌握,有意识的培养学生的科研意识和科研能力等特点.结论寄生虫学教学中采用现代本科教学模式为高校培养造就出具备创新精神和科研能力的医学人才开辟了一条新的教育途径.

    作者:陈新宇 刊期: 2005年第01期

  • 心肌肌钙蛋白I酶联荧光免疫定量检测方法的方法学评价

    目的初步评价心肌肌钙蛋白 I(cTnI)的酶联荧光免疫定量测定方法的临床应用性能.方法依据美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)颁布的<定量临床检验方法的初步评价;批准指南 (EP10-A)>提供的方法,按特定的顺序连续 5d测定高、中、低浓度标准品中的 cTnI,对 MINI VIDAS测定 cTnI的方法进行初步评价.结果当标准品中的 cTnI浓度为 0.602μ g/L、 7.911μ g/L、 15.22μ g/L时, cTnI测定的回归方程为 Y=1.02X-0.12,相关系数 r2=0.9999;绝对偏差分别是-0.06μ g/L、-0.09μ g/L、 0.18μ g/L;总不精密度分别是 7.22%、 2.17%、 1.62%.结论 MINI VIDAS酶联荧光免疫定量测定 cTnI方法的检测性能符合临床应用要求.

    作者:刘忠民;高国贞;高月亭;黄慧萍 刊期: 2005年第01期

  • 幽门螺杆菌cag致病岛的研究现状

    细菌致病岛是指病原菌染色体上编码许多毒力相关基因的分子量较大 (通常为 20~ 100kb)的外源性 DNA片段,其两侧往往含有重复序列或插入序列.幽门螺杆菌的致病岛 cag,可能是由水平转移的方式来自于质粒或噬菌体. cagA基因是 cag致病岛的标志,具有多态性.表达细胞相关抗原 CagA的 HP菌株感染与消化性溃疡和胃炎、胃癌等疾病发生有密切关系.

    作者:陈文超;陈红庆;郭英;陈瑛 刊期: 2005年第01期

  • 妊娠高血压综合征35例剖宫产手术的麻醉处理

    目的总结妊娠高血压综合征 (妊高征 )行剖宫产术的麻醉处理过程.方法对 35例妊高征患者在围术期采取一系列救治措施:①有效防治子痫发作;②麻醉诱导要求占时短,循环干扰少,能有效抑制有害应激反应和消除病人的精神紧张和不安,消除因疼痛而引起血压继续升高;③合理降低高血压,改善血流动力学,避免术中发生高血压危象;④改善肾脏及子宫血流灌注;⑤避免或慎用对新生儿呼吸有抑制作用的麻醉药.结果全组病例经麻醉处理后,循环稳定,均无发生任何并发症,经术后进一步积极支持治疗后全部康复.结论术前全面了解病情,充分完善术前准备,选择合理的麻醉方法,围术期对患者的合并症进行积极治疗,采取止惊、降压、强心、扩容等综合措施,是提高妊高征患者麻醉成功的重要因素.

    作者:张坤全;欧阳文博;冯肇洪 刊期: 2005年第01期

  • 生物可降解吻合环在结肠吻合中的应用

    目的探讨应用生物可降解环 (BAR)进行结肠吻合的手术技巧. 方法应用 BAR 27例行结肠切除术的患者行结肠吻合, 46例手工吻合, 观察手术时间, 手术并发症,术后恢复情况. 结果吻合环吻合组患者全部成功吻合, 手工吻合组出现 1例吻合口漏, 2例吻合口狭窄.两组间并发症的发生无统计学意义 (P >0.05).两组间手术时间、术后肛门排气时间、腹涨改善时间均有统计学意义 (P< 0.05). 结论用 BAR行结肠吻合, 操作简单方便、吻合可靠, 明显缩短手术时间, 术后恢复快.

    作者:李旺林;曹杰;唐伟镖 刊期: 2005年第01期

  • 呼吸系统疾病中SE-选择素的临床意义

    目的探讨 SE-选择素在呼吸系统疾病中的临床意义.方法采用酶联免疫吸附实验检测 141例临床常见几种呼吸系统疾病与恶性肿瘤血清的 SE-selectin水平.结果对照组 E-选择素含量为 (23.85± 3.18)ng/ml; 各病理组血清 SE-selectin水平均显著高于对照组 (P< 0.01);慢性阻塞性肺炎合并呼吸衰竭组的血清 SE-selectin水平显著高于其它各组 (P< 0.01). 结论 SE-选择素检测可为呼吸系统疾病临床观察和判断炎症的轻重、病程的严重程度提供新的诊断指标,尤其对动态观察呼吸系统疾病是否合并呼吸衰竭时更有价值.

    作者:刘凌;陈晓红;梁莉红;李结敏 刊期: 2005年第01期

  • 上海市南汇区人体寄生虫感染状况调查分析

    目的了解和分析南汇地区人体寄生虫感染的现状.方法选择 5个点,以整群抽样的常住人群为调查对象,粪便检查肠道寄生虫、以血清学检测绦囊虫、特殊人群弓形虫的感染情况.结果对 424人进行绦囊虫调查,阳性率 0.24%;弓形虫血清学检测 117人,阳性率 1.71%;肠道寄生虫调查人数为 1 719人,感染人数 62人,感染率为 3.61%,其中蛔虫的感染率为 0.58%,鞭虫为 2.50%, 钩虫为 0.12%, 蓝氏贾第鞭毛虫为 0.64%,蛲虫为 0; 男女性别的感染率没有显著差别 (χ 2=1.68, P >0.05);年龄组感染率以 70岁以上年龄组的感染率为高,达 6.67%;不同职业人群感染率以农民为高;不同文化程度感染率以文盲的感染率为高,文化程度越高,感染率越低.结论经过反复防治,人体寄生虫感染率有了明显的下降,防治的重点人群已由学生转为农业人群,年龄组由低龄转向 50岁以上人群.寄生虫感染与生产方式、生活习惯、卫生条件等有关,所以要加大宣传力度,提高人们卫生意识、改变生活习惯等以控制寄生虫的感染.

    作者:宋海红 刊期: 2005年第01期

  • 海南省恶性疟原虫氯喹抗性相关基因 Pfmdr1多态性分析

    目的了解海南省恶性疟原虫 Pfmdr1基因中的关键性点突变是否与海南株恶性疟原虫产生氯喹抗性有关.方法采用套式 PCR法分别扩增 Pfmdr1基因中含有第 86位和 1246位氨基酸的多态性片段,并对扩增产物进行限制性内切酶酶切分析,观察是否存在突变位点. 结果 45个样本中, Pfmdr1基因第 86位氨基酸均未发生点突变,即 86位密码子是 Asn而非突变型的 Tyr; Pfmdr1基因发生 D1246Y突变的样本有 3个,其中 1个是抗性株, 2个为敏感株.结论我国海南株恶性疟原虫产生氯喹抗性与 Pfmdr1基因的多态性无显著关系.

    作者:宋杰;江钢锋;陈沛泉 刊期: 2005年第01期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会