学术投稿

日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定

胡少敏;王海;阮志燕;余新炳;吴忠道

关键词:日本血吸虫, Sj16, 杆状病毒, Bac- to- Bac杆状病毒表达载体系统
摘要:目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫 (Schistosoma japonicum, Sj)Sj16基因重组杆状 病毒.方法从日本血吸虫尾蚴提取总 RNA,通过 RT- PCR扩增出 Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体 pET30a(+ )中,通过 PCR将 Sj16基因连同 pET30a(+ )多克隆位点下游的 6× His· Tag一起扩增出来,插入 donor载体 pFastBacHTa中,构建重组杆状病毒 donor载体 pFastBacHTa- Sj16- His,转化大肠杆菌 DH10Bac- GFP进行转座,提取重组 Bacmid,用 Lipofectin法转染昆虫细胞 Sf9使其包装成有感染性的重组杆状病毒.结果构建了含日本血吸虫 Sj16基因的重组 Bacmid- GFP- Sj16- His,转染 Sf9细胞后,获得了有感染力的重组杆状病毒. 结论成功构建了日本血吸虫 Sj16基因重组杆状病毒,为下一步重组 Sj16蛋白表达和 Sj16基因功能研究打下了基础.
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    目的查清梅县农村生活饮用水水源水质卫生状况,为农村改水防病工作提供科学依据.方法采用普查和随机抽样相结合方法,水源水质按<生活饮用水标准检验规范> (2001)检验,依<农村实施〈生活饮用水卫生标准〉准则>评价.结果大多数农村居民 (94.03% )饮用浅层地下水,以井水、山泉水和手摇井为主.少部份居民 (5.97% )仍饮用不卫生的库、塘、河、沟等地表水源. 75.95%水源符合农村饮用水卫生标准Ⅰ、Ⅱ级水质.结论梅县水源水质自然本底良好,但农村生活饮用水水源水质受到不同程度的自然和人为污染,水源选择、卫生防护等方面还有缺陷.建议不宜饮用库、塘、河、沟等地表水源,加强水源防护及净化消毒水质.

    作者:黄念先;肖奎光;刘思强;周志汀;巫卓英;熊杏茹 刊期: 2005年第01期

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    作者:刘凌;陈晓红;梁莉红;李结敏 刊期: 2005年第01期

  • 168例术中冷冻切片与印片病理诊断分析

    目的探讨术中冷冻切片结合印片病理诊断.方法对 168例送检组织在冷冻切片同时,在同一部位印片, HE染色,光镜下观察,并与石蜡切片对照.结果 168例良性冷冻切片 93例,印片 95例;恶性冷冻切片 67例,印片 62例.冷冻切片诊断准确率 95.24%,印片诊断准确率 93.45%.可疑冷冻切片、印片均为 5例,占 2.98%;良恶难定冷冻切片 3例,占 1.78%,印片 6例,占 3.57%.误诊 2例都为印片良性肿瘤,占 1.19%.结论在冷冻切片同时采用印片方法进行病理诊断,有提高对病理诊断的准确性.

    作者:雷伟华;刘自光;刘丽萍 刊期: 2005年第01期

  • 广州开发区企业职工肝病调查分析

    目的了解广州开发区企业职工肝病发病情况,协助企业做好肝病防治工作,防止肝脏疾病的发生和发展. 方法对 1 638例被检者采用 ELISA法检测血清中 HBV的抗原抗体.对其中 242例办公室人员用超声诊断仪检查肝脏和胆囊.结果 HBsAg阳性率为 9.83%,男性为 10.97%,女性为 5.93%. ALT异常的发病率为 4.88%,其中不明原因的占 71.25%.超声诊断仪发现肝病的发病率为 16.94% (其中脂肪肝 12.4%、肝囊肿 0.83%、肝胆结石 1.65%、胆息肉 0.83%和胆囊炎 1.24% ),与 HBsAg阳性率相比,差异非常显著 (P< 0.001).结论企业职工各种肝病的检出率高,应做好肝病防治工作.

    作者:叶华清;陈茂招;黄莉;李莉 刊期: 2005年第01期

  • 新生儿高胆红素血症巨细胞病毒及胆汁酸检测的意义

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    作者:谢宝丽;张丽娜;夏琦;陈瑛 刊期: 2005年第01期

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    目的探讨纸片法检测大肠菌群的结果判断标准.方法对餐 (饮 )具消毒效果监测的大肠菌群检测纸片状况进行详细记录,将纸片以无菌状态转入单料乳糖胆盐发酵管中,用发酵法来证实其大肠菌群的阴阳性.结果按 GB14934-94判断纸片法大肠菌群的阴阳性,其灵敏度为 73.6%,特异度为 98.8%;若按作者提出的标准进行判断,其灵敏度为 98.2%,特异度为 89.8%.结论二者比较灵敏度有显著性差异.消毒剂的残留可能是导致结果判断出偏差的主要原因.建议完善纸片法测大肠菌群的判断标准,以便更准确地反映大肠菌群的真实情况.

    作者:卢崇南 刊期: 2005年第01期

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    作者:李志刚;杨林;江元森;顾琳;姚集鲁 刊期: 2005年第01期

  • 小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染

    目的研究分离自弓形虫RH株速殖子经口感染小鼠后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞 (intraepithelial lymphocyte, IEL)过继转移抗弓形虫感染作用,探讨其作用机制.方法 BALB/c鼠经口感染弓形虫速殖子 5× 104个 /只或未感染,作为供体提供 IEL.同品系受体鼠分为实验组 (IEL7组、 IEL9组、 IEL11组、 IEL13组和 IEL15组 )和对照组 (IEL0组 ),每组 6只小鼠.受体鼠经尾静脉分别接受分离自供体鼠经速殖子感染后第 7、 9、 11、 13、 15天的致敏 IEL或未致敏的 IEL 3× 105 /0.2 ml只.各组小鼠过继转移后第 4天,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第 13天分离纯化脑、肺、脾组织弓形虫速殖子并计数,测定肠液 IgA含量.结果致敏 IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内弓形虫速殖子数显著减少,接受感染后第 13天 IEL的小鼠组织内速殖子数减少为显著 (P< 0.01)脑、肺和脾组织内速殖子数比对照组分别减少 81.13%, 58.43%和 70.97%.致敏 IEL过继转移使肠道 IgA水平升高, IEL11组和 IEL13组显著高于 IEL0组 (P< 0.01).结论致敏 IEL过继转移能上调肠道黏膜的免疫应答,导致黏膜特异性 IgA分泌增加,诱导黏膜抗体的保护性免疫应答. IEL的这种保护作用具有致敏的时间依赖性,感染后第 13天分离的致敏 IEL对弓形虫感染具有大的保护作用.

    作者:刘红丽;殷国荣;沈嬿琼;元海军 刊期: 2005年第01期

  • 江门市人体肠道寄生虫感染状况分析

    目的通过对江门市人体肠道寄生虫的感染情况进行调查分析,为该市制定今后的人体寄生虫防治对策提供科学依据.方法对调查对象采取改良加藤氏厚涂片法检查肠道寄生虫卵,用透明胶纸肛拭法检查蛲虫卵,并对检查结果进行分析讨论.结果共调查 1 530人,查出肠道寄生虫 5种,共有 521人感染,总感染率为 34.05%,其中华支睾吸虫、钩虫、鞭虫、蛔虫和蛲虫的感染率分别为 27.18%、 6.67%、 0.85%、 0.33%和 39.15%.结论经过多年的努力,江门市的寄生虫防治工作取得了显著的成效,但华支睾吸虫和蛲虫的感染率还很高,今后要加强这两虫种的防治工作.

    作者:周悦亮;李凤玲;区博文 刊期: 2005年第01期

  • 农村居民肠道寄生虫感染调查及流行病学分析

    目的调查深圳市宝安区部分村民中肠道寄生虫的感染现状和流行趋势.方法以加藤氏法检查本地部分村民 506人份.结果检查总人数为 506人,寄生虫阳性数 16人,总感染率为 3.16%.共检出寄生虫 5种,其感染率分别为华支睾吸虫 1.19%、蛔虫 0.99%、钩虫 0.59%、鞭虫 0.20%和蛲虫 0.20%. 结论深圳市宝安区部分村民的肠道寄生虫感染呈下降趋势,并将维持于一个低水平状态,食源性寄生虫的感染有增加的趋势.

    作者:马智超;黎建民;詹志强;刘益民;蔡日东;诸毕科;张小岚 刊期: 2005年第01期

  • 日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

    目的分离纯化日本血吸虫成虫 (AWA)和未成熟虫卵 (SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病 免疫诊断、预防提供新的抗原分子.方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原, SDS- PAGE及银染色进行分析鉴定.结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原 AWA18 000u, SIEA42 000u, SIEA130 000u.结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法.

    作者:彭先楚;汪世平;周松华;姜孝新;吕志跃;徐绍锐;肖小芹;曾少华;余俊龙;戴橄;李文凯;吴仕筠 刊期: 2005年第01期

  • 日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定

    目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫 (Schistosoma japonicum, Sj)Sj16基因重组杆状 病毒.方法从日本血吸虫尾蚴提取总 RNA,通过 RT- PCR扩增出 Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体 pET30a(+ )中,通过 PCR将 Sj16基因连同 pET30a(+ )多克隆位点下游的 6× His· Tag一起扩增出来,插入 donor载体 pFastBacHTa中,构建重组杆状病毒 donor载体 pFastBacHTa- Sj16- His,转化大肠杆菌 DH10Bac- GFP进行转座,提取重组 Bacmid,用 Lipofectin法转染昆虫细胞 Sf9使其包装成有感染性的重组杆状病毒.结果构建了含日本血吸虫 Sj16基因的重组 Bacmid- GFP- Sj16- His,转染 Sf9细胞后,获得了有感染力的重组杆状病毒. 结论成功构建了日本血吸虫 Sj16基因重组杆状病毒,为下一步重组 Sj16蛋白表达和 Sj16基因功能研究打下了基础.

    作者:胡少敏;王海;阮志燕;余新炳;吴忠道 刊期: 2005年第01期

  • 日本血吸虫精氨酸酶基因启动子序列的扩增及序列分析

    目的获取日本血吸虫(Sj)精氨酸酶(ARG)新基因的DNA编码序列及其启动子序列,实验验证ARG基因编码序列的完整性.方法 以日本血吸虫成虫 DNA做模板,PCR扩增 ARG基因编码区的DNA序列并测序;根据Sj ARG基因已扩增的 DNA序列设计2条巢式引物,用TaKaRa LA Taq PCR Cloning in vitro Kit,扩增 Sj ARG基因的启动子序列;对已扩增得到的序列进行 TATA盒的寻找以分析启动子序列的位置,实验验证我们曾获取的 Sj ARG新基因编码序列的完整性. 结果 扩增得到长约 1 000bp ARG基因 DNA序列 , Sj ARG基因 DNA序列内没有内含子,与 cDNA序列完全一致.对启动子序列扩增后,得到一略大于 250bp的序列,测序后分析发现其中有 36bp与 ARG基因 DNA序列的 5′端重叠.因此 ,将精氨酸酶基因的 DNA序列又向前延伸了 221bp,与前面得到的序列拼接后得到一条 1 486bp的总序列,将该序列在 NCBI上进行 ORF的寻找发现其长的 ORF达 1 164bp,起始密码子在第 156位,终止密码子在第 1 319位 ,该起始密码子前 32位为 TATA盒的位置.因此,确定该 Sj ARG基因全长 cDNA编码序列长应为 1 164bp.结论 成功扩增获得了日本血吸虫精氨酸酶基因编码区的 DNA序列,其不含有内含子;并扩增得到了该基因的启动子序列,从而获得了 Sj ARG基因真正的全长 cDNA序列,为进一步的功能鉴定奠定了基础.

    作者:李孜;余新炳;吴忠道 刊期: 2005年第01期

  • 南水北调中线引江济汉水利工程对血吸虫病流行的影响

    目的了解引江济汉水利工程对血吸虫病流行的影响及流行趋势,制定防治对策. 方法制定统一的现场调查方案,对工程区涉及的 8个市县试点疫区人口地理位置、自然环境、国土面积及近 4年内血吸虫病疫情及螺情资料进行收集立档建库. 结果工程区涉及 3个市、县、区,现有钉螺面积 15.81万 m2,血吸虫病人 105人.补水区涉及 5个市、县、区,现有钉螺面积 130.5万 m2,血吸虫病人 2 510人.整个工程区渠道流域路线大部分地域为血吸虫病非流行区,且疫情较轻.结论工程区仍然存在着血吸虫病流行的潜在威胁因素和地域条件,如果没有按血防措施的要求去实施,局部爆发血吸虫病流行是可以发生的.

    作者:戴裕海;黄水生;刘建兵;廖洪义;蒋勇;何汇 刊期: 2005年第01期

  • 血吸虫病健康教育干预模式及成本效果研究

    目的针对血吸虫病健康教育还缺乏有效的干预模式和尚未建立适合特定目标人群 (学生、成年女性和成年男性 )有效的血防健康促进方法,探讨适合不同目标人群的切实有效的健康教育干预模式及其在血吸虫病控制中的成本效果.方法采用基线调查,人群访谈以及快速评估等方法比较不同目标人群针对性健教干预前后的变化并对健康教育的成本效果进行分析.结果不同目标人群喜闻乐见的健教方式不同,对不同目标人群采取针对性健教干预取得了很好效果.结论以健康教育为主,结合人群化疗的防治策略能够有效地控制居民血吸虫病感染和再感染.健康教育还必须与化疗、灭螺、提供安全用水及环境改造配合,贯彻血吸虫病综合防治策略,从健 康教育到健康促进,才能更好地防治血吸虫病,增进人们健康.

    作者:刘子瑛;戴裕海;徐兴建;李成名;张德坡 刊期: 2005年第01期

  • 昆虫神经元离子通道及杀虫剂作用机理的研究进展

    昆虫神经细胞膜离子通道是多种天然毒素及合成杀虫剂的作用靶标.大部分杀虫剂作用于多种神经元受体和离子通道,主要包括钠通道、 GABA受体和 nACh受体.昆虫的击倒抗性与钠通道和 GABA受体某些氨基酸置换有关.本文综述了杀虫剂对神经元离子通道的作用机理及抗药性机理的研究.

    作者:王佳;诸葛洪祥;周洪福 刊期: 2005年第01期

  • 幽门螺杆菌cag致病岛的研究现状

    细菌致病岛是指病原菌染色体上编码许多毒力相关基因的分子量较大 (通常为 20~ 100kb)的外源性 DNA片段,其两侧往往含有重复序列或插入序列.幽门螺杆菌的致病岛 cag,可能是由水平转移的方式来自于质粒或噬菌体. cagA基因是 cag致病岛的标志,具有多态性.表达细胞相关抗原 CagA的 HP菌株感染与消化性溃疡和胃炎、胃癌等疾病发生有密切关系.

    作者:陈文超;陈红庆;郭英;陈瑛 刊期: 2005年第01期

  • 口腔原虫感染与口腔疾患关系的调查研究

    目的了解福州市不同年龄段学生的口腔原虫感染情况以及与口腔疾患之间的关系,并探讨提高检出齿龈内阿米巴 (Eg)的方法.方法采用 locke液培养法与直接涂片法检测口腔原虫并进行比较,记录学生的牙龈出血与龋齿情况.结果学生的总感染率为 57.58%,其中大学生的 Eg感染率 (71.15% )依次高于中专生 (53.49% )、初中生 (42.47% ), 小学生 (39.13% )低.用 locke液培养 Eg检出率 (71.15% )明显较直接涂片法 (44.87% )高 (P< 0.005).牙龈出血和龋齿的口腔疾患者的口腔原虫感染率 (80.62% )较口腔健康者 (39.41% )高 (P< 0.005).结论随着年龄增长口腔原虫感染增高,普查或个体检查时采用 locke液培养法可提高检出率,口腔疾患的口腔原虫感染率较健康人群高,提示 Eg感染在一定条件下可引起牙周病.

    作者:陈豪;魏雪英;刘光英;李存辉 刊期: 2005年第01期

  • 内镜下粘膜内注射联合奥曲肽序贯治疗dieulafoy病

    目的观察内镜下粘膜内注射联合奥曲肽序贯治疗 dieulafoy病的疗效.方法 15例患者均经内镜确诊 dieulafoy病,先以高渗盐水、肾上腺素 (HSE)液行病灶粘膜内注射,再以 50μ g/h的剂量持续静滴 7d.结果 14例经该方法治疗止血成功,止血成功率为 93.3%, 1例再发出血,再出血率为 6.7%.结论内镜下粘膜内注射联合奥曲肽的序贯疗法能有效永久性地控制 dieulafoy病,并明显降低再出血率.

    作者:李明;黄仕洲;甘少光;严衍伟 刊期: 2005年第01期

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