荧光定量PCR技术在检测HCV-RNA中的应用

林潮双；韦嘉；卢建溪；陈文思；彭晖；高志良

关键词：荧光定量PCR, PBMC, 丙型肝炎病毒RNA

摘要：目的评价荧光定量PCR技术测定HCV-RNA水平的价值,探讨PBMC中检出HCV-RNA的意义.方法采用荧光定量PCR及RT-PCR技术同时检测87例血液透析患者的血清和淋巴细胞中HCV-RNA.结果血清、淋巴细胞中HCV-RNA的荧光定量PCR检出率(49.4%、69.0%),分别高于相应标本中HCV-RNA的RT-PCR阳性率(33.3%、35.6%)(P<0.05).血清、淋巴细胞中同时检出HCV-RNA的一致率,荧光定量PCR法(31.0%)显著高于RT-PCR定性法(6.9%)(P<0.001).荧光定量PCR法,淋巴细胞中HCV-RNA检出率高于血清(P<0.01).结论与RT-PCR相比,荧光定量PCR技术检测HCV-RNA敏感性较高,对PBMC内HCV-RNA检测有利于提高HCV检测的阳性率.

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中国热带医学的未来十年

医学发展总是与人类文明、社会进步双相同步的.随着经济全球化、知识经济时代和信息化的齐步到来,对我国未来热带医学的发展必将产生深远的影响.新中国成立以来,在热带医学的研究方面,特别对传染病的防制方面已取得了举世瞩目的成就,是属于热带病控制比较成功的一个发展中国家,但与发达国家和我国的经济发展要求还有一定的距离.随着我国综合国力的不断增强,展望今后十年我国热带医学发展的前景,将是挑战与机遇并存,前途一片光明.

作者：俞守义刊期： 2001年第01期
微生态制剂对肝硬化患者术后肠道真菌感染的预防作用

目的探讨微生态制剂对肝硬化患者术后肠道真菌感染的预防作用.方法采用前瞻性研究方法,自1997年1月至2001年1月先后收治220例肝硬化门脉高压症患者,行脾切除或脾切除加断流术后分层随机分为两组,治疗组(n=116)服用微生态制剂,对照组(n=104)服用安慰剂,分别观察其肠道真菌感染情况.结果治疗组和对照组真菌感染率分别是2.6%和8.7%(P<0.05),血内毒素86.8±26.3 pg/ml和101.5±62.4pg/ml(P<0.05)血氨62±28.3μmol/L和83±24.8μmol/L(P<0.05).结论对门脉高压症患者围手术期使用微生态制剂,能防止二重感染和内毒素血症的发生,有利于患者术后的康复.

作者：邱万寿；许瑞云；凌云彪刊期： 2001年第01期
细粒棘球蚴线粒体rRNA的序列测定

通过EST方法对细粒棘球蚴cDNA文库进行筛选,将得到的EST序列送入GenBank和EBI进行同源性分析及登陆,对有意义的EST进行通测,得到了完整的细胞线粒体rRNA序列,并进行了同源性比较及质粒转化.为细粒棘球蚴的系统分类、鉴定及进化研究提供了新的有用依据.

作者：陈守义；余新炳；陆家海；徐劲；郭中敏刊期： 2001年第01期
三种表达形式的SAG1基因对小鼠的免疫效果观察

目的构建了三种表达形式的弓形虫主要表面抗原(SAG1)基因-表膜型、分泌型和细胞内型,并分别用于免疫BALB/C小鼠.结果SAG1基因免疫小鼠后,表膜型和分泌型较细胞内型体液免疫出现早且反应强;细胞因子水平测试显示免疫后小鼠免疫反应趋向Th1型.攻击感染结果证实:表膜型和分泌型免疫小鼠较细胞内型免疫小鼠所获保护力强.结论三种表达形式的SAG1基因在小鼠模型中免疫效果不同.

作者：陈晓光；周晓红；龚娅；杨培梁；沈树满；冯明钊；伦照荣刊期： 2001年第01期
疣萎平局部用药治疗尖锐湿疣32例临床分析

尖锐湿疣称为生殖器疣、尖圭湿疣、阴肛湿疣或性病疣.早在1954年Barret等就证明尖锐湿疣是一种性传播疾病(STD).据临床资料统计其发病率仅次于淋病而居第二位,有逐年增长的趋势.目前治疗尖锐湿疣方法较多,有外科手术切除、电灼、激光、抗代谢和免疫等方法.1993～1995年我们应用疣萎平局部用药方法治疗尖锐湿疣32例取得满意疗效.

作者：董汉明刊期： 2001年第01期
日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因的体外扩增及克隆

为了构建日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因原核表达重组质粒pGEX-4T-1-Si16.根据曼氏血吸虫Sm16基因已知序列设计合成-对引物,用PCR技术从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA文库中扩增Sj16基因;将Sj16基因定向克隆人pGEX-4T-1,转化感受态BL21/DE3菌;用酶切、PCR扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆.结果表明,从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA文库中获取Sj16基因,重组质粒中含有Sj16基因.结果提示,成功构建日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因原核表达重组质粒pGEX-4T-1-Si16,为进一步研究Sj16基因功能打下基础.

作者：卞国武；余新炳；吴忠道；徐劲；单志新；马长玲；邵筱刊期： 2001年第01期
浅谈中医药专业医学微生物学与免疫学教学改革

目的针对中医药专业的医学微生物学与免疫学教学进行改革,以全面提高学生的综合素质,促进教学效果.方法在重视理论、内容重组及辅助实验的基础上,密切结合中医药专业和学科新进展,运用多种教学方式.结果学生不仅掌握了大量基础知识,对学科前沿也有一定了解,并能将所学知识运用到本专业的学习与科研实践中.结论在教学中结合本专业特点,激发学生主观能动性和教学互动等多种方式是全面实施素质教育、顺应我国教育事业改革和发展的客观要求.

作者：张旭刊期： 2001年第01期
华南某部队结核病危险因素的干预性研究

目的了解南方战区某部队肺结核防治效果,进一步探索适合南方部队的肺结核防治措施.方法于1999年5月～2001年6月,针对南方部队结核病发病危险因素,在南方战区某一部队采取干预措施,观察防治效果.并将该部队综合防治两年与防治前2年结核病患病情况加以比较,同时亦与另一未采取干预措施的部队同期结核病患病情况作平行比较.结果采取综合干预措施的观察部队,活动性肺结核登记率从136.09/10万下降为54.44/10万;新发结核病登记率从81.65/10万下降为27.22/10万;结核菌阳性登记率从54.44/10万下降为零;三个登记率防治前后均有统计学差异(P<0.01).而对照部队结核病患病情况无显著变化.结论只要真正贯彻落实<军队结核病防治方案>内容,军队结核病是能有效控制的.

作者：曾年华；王志斌；李兴国；黄佳亮；王珊珊刊期： 2001年第01期
广东省吴川等县市消灭丝虫病监测情况分析

为了解丝虫病防治后期的流行动态,1996～1999年在原班氏丝虫病流行区吴川等6个县市开展了病原、媒介和血清学监测;在6个县市的37个镇56个管理区共血检61889人,未检出微丝蚴血症者;解剖致倦库蚊21125只,未发现蚊体内有人体幼丝虫感染;1996年、1997年、1998年和1999年人群丝虫抗体阳性率分别为2.52%、2.12%、1.66%和1.57%,与往年比较呈下降趋势.结果提示这些地区丝虫病的传播可能已被阻断.

作者：谢雪妹；黄少玉；刘美真刊期： 2001年第01期
台山市基本消灭疟疾后期十年监测研究

台山市过去曾是疟疾高发区,1953年疟疾发病率高达5448.0/10万,1964年仍为516.4/10万,1980年开始为2.8%/10万以下.1985年经考核,发病率为0.52/10万,达到基本消灭疟疾标准.山区和丘陵区微小按蚊仍然存在,是主要的媒介;平原区媒介只有中华按蚊.为探索灭疟后期疟疾流行特点及简便有效的监测方法,从1991年至2000年连续10年分两个阶段分别采取两种病例侦查方法进行现场防治监测研究,现将结果报告如下.

作者：余发均；李晓萍；林瑞华；余大年刊期： 2001年第01期
荧光定量PCR技术在检测HCV-RNA中的应用

目的评价荧光定量PCR技术测定HCV-RNA水平的价值,探讨PBMC中检出HCV-RNA的意义.方法采用荧光定量PCR及RT-PCR技术同时检测87例血液透析患者的血清和淋巴细胞中HCV-RNA.结果血清、淋巴细胞中HCV-RNA的荧光定量PCR检出率(49.4%、69.0%),分别高于相应标本中HCV-RNA的RT-PCR阳性率(33.3%、35.6%)(P<0.05).血清、淋巴细胞中同时检出HCV-RNA的一致率,荧光定量PCR法(31.0%)显著高于RT-PCR定性法(6.9%)(P<0.001).荧光定量PCR法,淋巴细胞中HCV-RNA检出率高于血清(P<0.01).结论与RT-PCR相比,荧光定量PCR技术检测HCV-RNA敏感性较高,对PBMC内HCV-RNA检测有利于提高HCV检测的阳性率.

作者：林潮双；韦嘉；卢建溪；陈文思；彭晖；高志良刊期： 2001年第01期
恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析

目的了解恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶(GDH)基因全编码区核苷酸序列变异情况.方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)GDH基因全编码区,产物经EcoRI+Sal I酶切后,定向克隆至pGEX-4T-1质粒,采用sanger双脱氧链末端终止法测序,与其它生物GDH进行同源性分析.结果成功扩增了恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)GDH编码基因,大小为1410bp,无内含子,与Thailand株GDH基因相比,两者有2个碱基不同,推导的氨基酸序列完全相同;与蓝氏贾第鞭毛虫、克鲁氏锥虫和梭状芽孢杆菌GDH的同源性分别为57.90%(260/449)、56.51%(243/430)、42.05%(164/390);与人的GDH-1、GDH-2的同源性分别为29.02%(101/348)、28.73%(100/348).结论 FCC1/HN株与Thailand株GDH高度同源,疟原虫GDH明显不同于其它生物GDH.

作者：李林海；李明；吴英松；王萍刊期： 2001年第01期
昆虫细胞色素P450的诱导和抗药性

可诱导性是细胞色素P450酶系的重要特征,经过诱导,昆虫体内P450解毒酶含量增加解毒作用增强;而细胞色素P450参与的杀虫剂抗药性均表现为P450酶活性的增高或酶量的增加.解毒作用增强,二者的大不同在于持续的时间上.了解P450酶系的诱导机制及其与抗药性的关系,对认识P450参与的抗药性的发生发展机制具有重要意义.

作者：陈秋霞；黄炯烈刊期： 2001年第01期
生物信息学及在寄生虫学上的应用

人类基因组计划及模式生物基因组研究产生了大量的基因组信息,对如此巨大且具有高度复杂性的生物数据的管理和分析产生了生物信息学这门新的学科.生物信息学的主要研究对象是DNA及RNA序列和蛋白质序列.本文重点介绍了生物信息学的概念、研究对象、研究内容、研究方法及其在寄生虫学上的应用.

作者：吴忠道；黄静；徐劲刊期： 2001年第01期
登革病毒疫苗研究近况

本文回顾了近年来登革病毒DNA疫苗、嵌合疫苗、重组亚单位疫苗、四价减毒活疫苗等方面的研究进展,阐述了各种疫苗的动物免疫保护作用.

作者：魏惠永；江丽芳刊期： 2001年第01期
产毒性大肠杆菌(ETEC)中毒力岛分布的研究

目的了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中的分布,以便于进一步深入研究毒力岛在大肠杆菌中的结构的完整性和功能.方法PCR扩增和原位杂交及基因序列分析.结果在检测的93株产毒性大肠杆菌(ETEC)的毒力岛的检出率为32.25%(32/93),而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到asntRNA(天门冬氨酸tRNA)位点.结论产毒性大肠杆菌是致病性较强的病原菌之一,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中阳性率较高的分布,对于进一步研究产毒性大肠杆菌的毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化具有重要意义.

作者：王勇；王红；向前；孙素霞；俞守义刊期： 2001年第01期
G蛋白偶联受体和跨膜信息传递的研究现状

自从第一个GPCR(G-protejn-coupled receptor)被克隆以来,目前已知有超过1000种的GPCPs存在于生物体细胞膜上,它们构成了一个庞大的蛋白质超家族,调控着极为广泛的生物活动;同时对其研究也深入到结构与功能关系.本文总结了近年来关于GPCPs结构,配体-受体结合模式及其激活机制的研究现状以及新进展.

作者：邵筱；吴忠道；余新炳刊期： 2001年第01期
植物基因转化技术在生物制药方面中的应用

植物基因转化技术主要分为两类,无载体介导的直接转化法和有载体介导的基因转移方法.直接转化法主要介绍了电激转化、PEG介导转化、基因枪转化三种技术的主要原理;载体介导的基因转移主要介绍了脓杆菌介导转化及病毒载体介导转化.利用植物基因转化技术在生物制药方面:重组蛋白、重组疫苗及单克隆抗体方面的应用做一简要概述.

作者：高丽丽；余新炳刊期： 2001年第01期
日本血吸虫可溶性虫卵抗原38 kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断法.方法以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)38 kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病人血清,急性期37例、慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例.结果所测得的阳性率分别为94.6%、86.7%、1.9%、0%.结论以SEA 38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷,有较好的现场应用前景.

作者：周晓红；陈晓光；戴琳；胡旭初；李华；刘国章刊期： 2001年第01期
定量PCR与EIA法检测血液透析患者HCV比较

目的探讨血液透析患者丙型肝炎病毒(HCV)的检测方法.方法对79例尿毒症长期血液透析患者,采用荧光定量PCR法测定血清HCV-RNA水平,及第二代酶免疫试验(EIA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV).结果血液透析患者抗-HCV阳性率22.8%(18/79),荧光定量PCR法HCV-RNA检出率39.2%(31/79).在抗HCV阴性的患者中,HCV-RNA的检出率为42.6%(26/61).两种方法检测结果的符合率为50.6%(40/79).结论荧光定量PCR技术可弥补EIA检测的不足,在抗-HCV阴性的血液透析患者中检测HCV RNA具有重要意义.

作者：林潮双；韦嘉；卢建溪；彭晖；高志良刊期： 2001年第01期